ゼブラフィッシュの幼生を潜在的な放射線増感剤またはプロテクターを評価するためのモデルとして

このプロトコルでは、ゼブラフィッシュの胚を放射線ベースのスクリーニング実験に使用する詳細な手順と、さまざまな薬物や放射線の治療を評価するためのいくつかの観察アプローチについて説明します。これは、ゼブラフィッシュの胚を用いたX線曝露を含むセミハイスループットの薬物スクリーニングを設定するのに役立ち、放射線毒性の評価と使用されるさまざまな薬物の有効性の評価に役立ちます。この手順は、潜在的な放射線増感剤またはプロテクターとしてさまざまな薬物をスクリーニングおよび検証または評価するために使用でき、がん放射線療法または放射線生物学の分野でさらに調査または使用できます。

まず、解剖顕微鏡で成長する胚を観察します。適切な段階を特定し、死んだ胚や不健康な胚を取り除きます。適切な胚の病期分類が放射線であり、特定の原腸形成段階で薬物投与が行われることを確認します。

実験を開始する前に、パスツールピペットの助けを借りて、実験プレートに健康な胚を慎重に分配します。実験グループごとに、15〜20個の胚を採取します。放射線実験を設定する際には、非照射群と放射線のみの対照群を含めます。

放射線遮蔽体が余分なウェルを覆い、放射線から保護し、他のウェルが特定の放射線量に曝されている場合は、ウェルプレートに胚を分配します。それ以外の場合は、個々のプレートまたはディスクを使用して、放射線量ごとの胚を確認します。X線照射装置の電源を入れ、装置の初期化とウォームアップを開始します。

実験プレートを中央の装置内部の照射器の下に置き、プレートがX線源の真下にあることを確認します。そして、線量を設定し、X線を開始します。照射終了後、プレートを取り出し、マシンプログラムをシャットダウンし、マシンの電源を切り、照射直後に顕微鏡でプレートを確認してください。

死んだ胚を取り除き、解剖顕微鏡で評価した後、その数を記録します。プレートを摂氏28.5度のインキュベーターに戻します。放射線照射後、所定の時間間隔でデータを収集します。

生存率、孵化効率、発達段階、心拍数、体と尾の湾曲、心膜浮腫、卵黄嚢の伸展、小頭症、水泳嚢の発達、一般的な運動性または活動など、考えられるすべての観察を記録します。画像をキャプチャするには、きれいなスライドで代表的な胚を選択します。顕微鏡で胚を確認し、特定の方向に向けます。

受精後6時間で放射線照射された胚の生存曲線は、対照群および2グレイおよび5グレイに曝露された胚において、胚に有意な死亡はなかったことを示している。1分あたりの心拍数は、X線照射量の増加に伴って心拍数が大幅に減少することを示唆していた。対照群では、24時間間隔で心拍数が増加するのが見られました。

心拍が大幅に低下したため、15グレイと20グレイの放射線に曝露された胚では、重度の心血管奇形が疑われます。異なる表現型および発生上の欠陥が描かれ、異なる時点で異なる線量の放射線に被曝した胚について評価される。脊椎や尾の曲がり、頭部奇形や小頭症、発達の欠陥、心膜浮腫、卵黄嚢の変形、水泳膀胱の変形、眼の構造の変化などの形態学的観察も行われました 私たちが実証したプロトコルでは、健康な胚の選択、照射器内の胚の適切な配置、交差異常の適切な評価がこの手順の鍵です。