この手順の全体的な目標は、マウスの精巣と卵巣の外科的除去を迅速、安全、かつ効果的な方法で実証することです。マウス精巣摘除術は、陰嚢への腹側正中線切開によって行われ、そこで精巣が分離されて除去され、続いて皮膚切開が閉鎖されます。マウス卵巣摘出術は、卵巣を分離して除去する腹部の背外側切開を行い、続いて皮膚切開部を閉鎖し、反対側でこの手順を繰り返して両側卵巣摘出術を行うオプションがあります。
マウス精巣摘除術を開始するには、まず雄マウスの体重を記録することから始め、施設のガイドラインに従って適切な鎮痛剤と麻酔薬を投与する準備をします。マウスに麻酔をかけたら、処置中に目が乾燥しないように、潤滑性アイジェルで目を覆います。先に進む前に、つま先をつまむ反応テストを実行して、マウスが適切な麻酔面にあることを確認してください。
次に、マウスの鼠径部と陰嚢部を剃ります。先端が綿のアプリケーターを使用して、脱毛脱毛クリームを手術部位とその周辺に薄く塗ります。30秒後、清潔なガーゼスポンジで脱毛クリームを取り除きます。
マウスを手術部位に移し、熱源があることを確認します。柔らかい粘着テープを使用して、マウスの足を手術用マットに接着します。精巣が腹部に上行している場合は、腹部に穏やかな圧力をかけて下降させます。
ベタジン溶液で皮膚をこすり、手術部位の中心から始めて、剃った部分の境界に向かって外側に向かって容易に働きかけます。.ベタジンスクラブに続いて、同様の方法でアルコールスクラブを行います。このプロセスを3回繰り返して、適切な皮膚消毒を確実にします。
マウスを外科用ドレープで覆います。皮膚をつかみ、長さ約1〜1 1/2センチの正中線切開を行います。皮膚の切断された境界をつかみ、先端が鈍い器具を使用して、皮膚を下の組織から分離します。
切開部の外側、上側、下側の境界でこれを行います。次に、皮膚切開部をスライドさせて睾丸の真上にして、1つの睾丸を分離します。一対の鉗子を使用して、睾丸を囲む薄くて透明なクレマスター筋をつかみます。
正しい組織の識別は、その透明性と、その中に含まれる下にある組織から独立して移動する能力によって確認することができます。次に、組織の頂点を切開してクレマスター筋を切開します。切断されたクレマスター筋の後縁にロッククランプを配置して、組織の張力を保持します。
一対の鉗子を使用して睾丸をつかみ、クレマスターシースから外装します。睾丸が出たら、組織を横方向に転がし、クレマスター筋を睾丸および精巣の後側の精巣上体に接続するクレマスター挿入点を局在化します。この組織をクランプして引き裂き、この接続を切断します。
鼠径部脂肪パッドをゆっくりと引き抜いて外装します。これを行う間、出血の兆候に注意し、その過程で血管を傷つけないように注意してください。次に、一対のロック止血剤を使用して、精索と血管をクランプします。
睾丸にわずかな張力をかけながら、止血クランプの遠位の精索と血管を焼灼します。止血をゆっくりと解放し、組織の断端が良好な止血を持ち、出血し続けないようにします。クレマスター筋にわずかな外向きの圧力を加えると、この組織断端が体腔内に引っ込むことができます。
クレマスター筋の両側を一緒に持ってきます。4-0または5-0の吸収性縫合糸を使用して、クレマスター筋の両端を結合する縫合糸を配置します。縫合が終わったら、縫合糸の端を1/2センチの長さにトリミングします。
皮膚切開部を反対側にスライドさせて、もう一方の睾丸に対してこのプロセスを繰り返し、最初の睾丸を取り除くのと同じ手順に従います。両方の睾丸を切除し、クレマスターの両側を縫合したら、皮膚を上向きにして、その領域に創傷クリップを適用する準備をします。縫合糸の端が創傷クリップに引っかからないように注意してください。
これで、マウスは術後のモニタリングを継続する準備が整いました。マウス卵巣摘出術の準備をするには、雌マウスの体重を量り、施設のガイドラインに従って鎮痛剤と麻酔を投与します。潤滑アイジェルを投与し、マウスがつま先をつまんで反応しないことを確認します。
マウスの背中の背外側領域を剃って、手術部位を準備します。先端が綿のアプリケーターを使用して、毛を剃った部分に脱毛脱毛クリームの層を塗ります。30秒後、清潔なガーゼスポンジでクリームを取り除きます。
マウスを手術用マットに移し、熱源が利用できることを確認します。ベタジン溶液で皮膚をこすり、中心から始めて、剃った部分の境界に向かって外側に向かって容易に働きかけます。.これに続いて、同様の方法で塗布された70%アルコール溶液で皮膚をこすります。
このプロセスを合計3回繰り返して、適切な皮膚消毒を確実にします。書面によるプロトコルに詳述されているように外科的切開を計画します。マウスの手術部位に外科用ドレープを置きます。
鉗子で皮膚をつかみ、1センチの切開で皮膚を切開します。先端が鈍い器具またはプレーンな止血剤を使用して、皮膚を下の組織から分離します。切開部の外側、上側、下側の境界でこれを行います。
腹壁をつかみ、1/2センチの切開で切開します。一対の鉗子を使用して、切開部内の卵巣の位置を特定し、引っ張って外在化します。組織が特定されたら、一対の止血剤を使用して遠位子宮角をクランプして押しつぶします。
2組目の止血剤または1対の鉗子を使用して、1組目のクランプのすぐ遠位をクランプします。下部止血部を静止させたまま、上部クランプを引き上げて体から離し、遠位子宮角の押しつぶし引き裂きを行います。止血をゆっくりと解放し、手術部位から過度の出血がないことを確認します。
腹壁の両側を一緒に持ってきて、4-0の吸収性縫合糸材料を使用した単一の縫合糸を使用して、切開部を閉じて縫合します。縫合糸が固定されたら、縫合糸の端を長さ1/2センチメートルになるようにトリミングします。皮膚の両側を元に戻し、創傷クリップを配置する準備をします。
皮膚を剥がしながら、切開部位に創傷クリップを置きます。これで、マウスは術後のモニタリングを継続する準備が整いました。手順の日時と鎮痛剤の投与を施設のガイドラインに従って文書化します。
マウスが外科的精巣摘出術または卵巣摘出術を受けたら、清潔で加熱されたケージに移します。マウスが胸骨臥位を取り戻したら、清潔なケージに入れ、湿った餌と水を与えます。回復中は、マウスの手術部位を頻繁にチェックし、感染や出血の兆候がないか探します。
創傷クリップの損傷を防ぐために、手術後1週間、卵巣摘出術マウスのケージからげっ歯類のイグルーの生息地をすべて取り除きます。14日後、マウスの皮膚から傷口クリップを取り外します。実証されたプロトコルは、性ホルモンが枯渇したモデルを生成するためにマウスで精巣摘出術と卵巣摘出術を行う方法を詳述しています。
これは、陰嚢の正中線切開から睾丸を切除し、続いて睾丸を外部化し、血管内の精索を切断し、睾丸、精巣上体、および鼠径部脂肪パッドを除去することを含みます。外科的卵巣摘出術は、背外側を切開し、卵巣、卵管、および遠位子宮角を外部化することによって行うことができます。その後、遠位子宮角を切断し、卵巣と卵管を切除します。
慎重な手術手技と適切な術後ケアにより、手術部位は十分に治癒します。これらの外科的処置は、精巣摘除術の1週間後にマウス血清サンプル中のホルモンレベルを分析することによってさらに検証することができます。卵巣摘出術は、卵巣摘出後の子宮萎縮の観察によって確認することができる。
このプロトコルは、マウスから卵巣と精巣を迅速かつ効果的に外科的に除去し、性ホルモンが枯渇したモデルを生成することを可能にします。これは、これらのホルモンの枯渇がさまざまな臓器や生理学的プロセスにどのように影響するかを研究するために多くの用途があります。
