慢性疼痛を治療するために多くの革新的な治療法が現在研究されているため、私たちのプロトコルは、神経因性疼痛を誘発するために必要な手術の標準化のための重要な概念を提供します。部分坐骨神経結紮術(PSNL)は、神経因性疼痛のあるヒトに見られる多くの症状を再現するため、神経因性疼痛を研究するための有利なモデルです。PSNLは神経因性疼痛のあるヒトで観察される多くの症状を再現するため、このプロトコルは新しい疼痛管理療法を研究および開発するための重要な概念を提供します。
手順を実演するのは、私の研究室のMD博士課程の候補者であるケビン・チェンです。まず、マウスを試験室と同じ部屋の金網上の透明なプレキシガラスの箱に入れて、試験前に1時間フォンフライ試験装置に慣れさせます。一連の較正された微細モノフィラメントを、吊り下げられた金網ケージに保持されている動物のPSNL同側後足のプランター表面に垂直に適用します。
フィラメントのサイズに対応する刺激強度を順次増減することにより離脱閾値を決定する。反応が負の場合はフィラメントのサイズを大きくし、動物が足を引っ込めるときはフィラメントのサイズを小さくします。データシートに陰性反応と陽性反応を報告し、最初の陽性反応に続いて、異なるフィラメントで同じ足を4回テストします。
マウスをハーグリーブス試験装置に1時間慣れさせてから、試験室と同じ部屋の透明なプレキシガラスの箱に入れます。ハーグリーブス装置を使用してベースラインの足の離脱待ち時間を確立します。PSNLと同側の後足の足底面に放射熱源を集中させ、刺激を開始します。
動物が足を引っ込めたら、モーションディテクターが刺激を停止し、タイマーを停止するのを待ちます。熱源の強度を調整して、約10秒の足離脱潜時のベースラインを取得します。次に、引き出し時間を表に記録します。
ホットプレートを摂氏52度に設定します。動物を試験室に入れ、クロノメーターを始動します。侵害行動を観察し、侵害行動が観察されたらすぐにクロノメーターを停止します。
次に、チャンバーから動物を取り出し、この行動の潜伏時間を記録します。熱刺激の温度に影響を与えないように、テストした各動物間の尿を必ず装置から清掃してください。動物間の70%エタノールで試験室を洗浄し、臭いの行動への影響を減らします。
神経ガラスフックを作るには、ブンゼンバーナーをオンにします。ガラス棒の一方の端を片手で火にかざします。このガラス棒が溶けたら、もう一方の手で別のガラス棒を使用して、最初の棒の溶けているガラスをガイドして引っ張ります。
最初のガラス棒を火から取り除き、溶けた部分の端を自然に内側に転がして、2番目のガラス棒を使用して小さなボールの形を形成します。ピンセットで後ろ足のつま先をつまんで足の反射がないことを確認し、潤滑眼科用軟膏を塗布する前に角膜まばたき反射を確認します。手術を行う側を選択したら、動物の後肢を大腿部の周りに、膝蓋骨に向かって下向きに、股関節に向かって上向きに、大腿骨の上に形作ります。
次に、温かい滅菌生理食塩水と交互にした3つの別々のガーゼでクロルヘキシジンで一方向に3回拭きます。次に、10 x 10センチメートルの滅菌ドレープで作られたスリットに脚を滑り込ませて、選択した脚の周りに滅菌フィールドを作成します。細かい外科用ハサミを使用して、太ももの外側の正中線に皮膚の小さな2ミリメートルのカットを行います。
はさみを円を描くように皮膚の下にスライドさせて筋膜を突破し、隙間を作り、切開スペースを拡大します。次に、結束鉗子を使用して、太ももの筋肉に90度の角度で垂直に1センチメートルの深さの鋭い切開を作成します。次に、細い小さなハサミを同じ切開部に90度の角度で挿入し、坐骨神経が視覚化されるまでゆっくりと広げて筋肉を分離します。
股関節から膝の方向に垂直太ももと平行に走っている坐骨神経を見つけます。先に進む前に、結ぶ鉗子のはさみを体から取り外します。神経ガラスフックの極細鉗子を使用して、神経を下から隔離します。
股関節に最も近く、膝から最も遠い大腿骨の転子近くの部位で、周囲の結合組織から神経を注意深く解放します。神経をガラス棒の上に置き、棒の端が神経が転がり落ちるのを防ぐようにします。共通の腓骨神経枝、脛骨神経、腓腹神経枝に分割する前に、9本のゼロナイロン縫合糸を使用して坐骨神経の幅の3分の1を結ぶ外科的結び目を配置します。
結び目が完了したら、神経をガラス棒から慎重に滑り落ち、分離した筋肉の下のレベルで元の場所に戻します。次に、吸収性ポリグリコール五ゼロ縫合糸を用いて筋肉切開部を縫合する。別途、非吸収性ポリプロピレンシックスゼロ縫合糸を用いて皮膚を縫合する。
次に、手術と麻酔の停止時間を記録します。マウスを新しい清潔なケージに戻す前に、回復ケージでマウスを単独でウェイクアップさせます。フォンフレイ、ハーグリーブス、またはホットプレートテストを使用して、熱的および機械的過敏症とその潜在的な逆転の両方を評価します。
PSNL手術を受けたマウスは、28日間にわたって偽の動物と比較して、機械的刺激に対する閾値が低いことを示しました。熱過敏症評価でも同様の結果が得られた。PSNL動物では放射熱刺激にさらされた後の足の離脱潜時が増加し、動物を摂氏52度のプレートに置いた場合の離脱潜時も増加しました。
2つの異なる用量のモルヒネを注射されたグループは、1〜2時間続いた過敏症の逆転を示しました。.機械的過敏症は、モルヒネ注射の4時間後にベースラインに戻った。2つの異なる用量のイブプロフェンをマウスに腹腔内投与した場合、結果は生理食塩水を注射したマウスと比較して機械的過敏症の減少を示しました。.
神経への追加の損傷を制限することは、痛みの感覚閾値に影響を与える可能性があるため、不可欠です。実験者は特に注意を払い、意図しない損傷を減らすためにガラスフックを使用する必要がありますこの手順に続いて、慢性神経因性疼痛のこのモデルを使用して、新しい疼痛管理療法の開発につながる薬物の抗侵害受容効果を特定および特徴付けることができます。
