Alors qu’une pléthore de thérapies innovantes sont actuellement à l’étude pour traiter la douleur chronique, notre protocole fournit des concepts cruciaux pour la normalisation des chirurgies nécessaires pour induire une douleur neuropathique. La ligature partielle du nerf sciatique, ou PSNL, est un modèle avantageux pour étudier la douleur neuropathique car elle reproduit de nombreux symptômes observés chez les humains souffrant de douleur neuropathique. Comme la PSNL reproduit de nombreux symptômes observés chez les humains souffrant de douleur neuropathique, ce protocole fournit des concepts cruciaux pour étudier et développer de nouvelles thérapies de gestion de la douleur.
La démonstration de la procédure sera Kevin Cheng, un candidat au doctorat en médecine dans mon laboratoire. Pour commencer, habituez les souris à l’appareil de test Von Frey pendant une heure avant le test en les plaçant dans des boîtes en plexiglas transparent sur un treillis métallique dans la même pièce que la salle de test. Appliquer une série de filaments mono fins étalonnés perpendiculairement à la surface de la jardinière de la patte postérieure ipsilatérale PSNL des animaux maintenus dans des cages suspendues en treillis métallique.
Déterminer le seuil de retrait en augmentant ou en diminuant séquentiellement la force de stimulus correspondant à la taille du filament. Augmentez la taille du filament lorsque la réponse est négative et diminuez la taille du filament lorsque l’animal retire sa patte. Signalez les réponses négatives et positives dans la fiche technique et testez la même patte quatre fois avec des filaments différents après la première réponse positive.
Habituez les souris à l’appareil de test Hargreaves pendant une heure avant le test en les plaçant dans des boîtes en plexiglas transparent dans la même pièce que la salle d’essai. Établir les latences de retrait des pattes de base à l’aide de l’appareil Hargreaves. Concentrez une source de chaleur rayonnante sur la surface de la jardinière de la patte postérieure ipsilatérale au PSNL et commencez la stimulation.
Lorsque l’animal retire sa patte, attendez qu’un détecteur de mouvement arrête le stimulus et arrête la minuterie. Ajustez l’intensité de la source de chaleur pour obtenir une latence de retrait de la patte de base d’environ 10 secondes. Ensuite, enregistrez le temps de retrait dans un tableau.
Réglez la plaque chauffante à 52 degrés Celsius. Placez l’animal dans la chambre d’essai et démarrez un chronomètre. Observez les comportements nocifensifs et arrêtez le chronomètre dès que le comportement nocifensif est observé.
Ensuite, retirez l’animal de la chambre et enregistrez la latence de ce comportement. Assurez-vous de nettoyer l’appareil de toute urine entre chaque animal testé pour éviter d’affecter la température du stimulus thermique. Nettoyez la chambre d’essai avec 70% d’éthanol entre les animaux pour réduire l’impact comportemental des odeurs.
Pour fabriquer un crochet en verre nerveux, allumez le brûleur bunsen. Tenez une extrémité de la tige de verre au feu dans une main. Au fur et à mesure que cette tige de verre fond, utilisez une autre tige de verre dans l’autre main pour guider et tirer sur le verre fondu sur la première tige.
Retirez la première tige de verre du feu et laissez l’extrémité de la partie fondue rouler naturellement vers l’intérieur pour former une petite boule à l’aide de la deuxième tige de verre. Pincez les orteils sur une patte postérieure avec une pince à épiler pour vous assurer de l’absence de réflexe de patte et vérifiez le réflexe de clignement cornéen avant d’appliquer une pommade ophtalmique lubrifiante. Après avoir choisi le côté où effectuer la chirurgie, façonnez la patte postérieure de l’animal autour de la région de la cuisse, vers le bas vers la rotule, plus haut vers la hanche et au-dessus du fémur.
Ensuite, essuyez trois fois avec de la chlorhexidine dans une direction avec trois gazes séparées alternées avec une solution saline stérile chaude. Ensuite, glissez la jambe à travers une fente faite dans un champ stérile de 10 par 10 centimètres pour créer un champ stérile autour de la jambe de choix. À l’aide de fins ciseaux chirurgicaux, faites une petite coupe de deux millimètres de la peau dans la ligne médiane de l’aspect latéral de la cuisse.
Faites glisser les ciseaux sous la peau dans un mouvement circulaire pour percer le fascia et créer un dégagement, en agrandissant l’espace d’incision. Ensuite, à l’aide de pinces à attacher, créez une incision nette d’un centimètre de profondeur verticalement à un angle de 90 degrés dans les muscles de la cuisse. Ensuite, insérez les petits ciseaux fins dans la même incision également à un angle de 90 degrés et ouvrez-les doucement pour séparer les muscles jusqu’à ce que le nerf sciatique soit visualisé.
Localisez le nerf sciatique parallèle à la cuisse verticale dans la direction de la hanche au genou. Retirez les ciseaux dans la pince à attacher du corps avant de continuer. Utilisez la pince extra fine dans le crochet en verre nerveux pour isoler le nerf du dessous.
Libérez soigneusement les nerfs des tissus conjonctifs environnants à un endroit près du trochanter du fémur qui est le plus proche de la hanche et le plus éloigné du genou. Laissez le nerf reposer sur la tige de verre et assurez-vous que l’extrémité de la tige empêche le nerf de rouler. Placez un nœud chirurgical pour attacher un tiers de la largeur du nerf sciatique en utilisant une suture en nylon neuf zéro avant qu’il ne se divise en branches communes des nerfs péronier, tibial et sural.
Glissez soigneusement le nerf de la tige de verre une fois le nœud terminé et remettez-le à l’emplacement d’origine au niveau inférieur aux muscles séparés. Ensuite, suturez l’incision musculaire à l’aide d’une suture polyglycolique résorbable à cinq zéros. Séparément, suturez la peau à l’aide d’une suture en polypropylène six zéro non résorbable.
Ensuite, notez le temps d’arrêt de la chirurgie et de l’anesthésie. Laissez la souris se réveiller seule dans une cage de récupération avant de la remettre dans une nouvelle cage propre. Utilisez le test de Von Frey, Hargreaves ou la plaque chauffante pour évaluer l’hypersensibilité thermique et mécanique et son inversion potentielle.
Les souris qui ont subi une chirurgie PSNL ont démontré des seuils de stimuli mécaniques inférieurs à ceux des animaux fictifs pendant 28 jours. Des résultats similaires ont été obtenus avec l’évaluation de l’hypersensibilité thermique. Les latences de retrait des pattes après exposition à un stimulus thermique radiant ont augmenté chez les animaux PSNL ainsi que les latences de retrait lorsque les animaux ont été placés sur une plaque de 52 degrés Celsius.
Les groupes injectés avec deux doses différentes de morphine ont montré une inversion de l’hypersensibilité qui a duré d’une à deux heures. L’hypersensibilité mécanique est revenue à la ligne de base quatre heures après l’injection de morphine. Lorsque deux doses différentes d’ibuprofène ont été administrées par voie intrapéritonéale aux souris, les résultats ont démontré une diminution de l’hypersensibilité mécanique par rapport aux souris injectées de solution saline.
Il est essentiel de limiter les dommages supplémentaires au nerf car cela peut affecter les seuils sensoriels de la douleur. L’expérimentateur doit porter une attention particulière et utiliser le crochet en verre pour réduire les dommages involontaires Suite à cette procédure, ce modèle de douleur neuropathique chronique peut être utilisé pour identifier et caractériser l’effet antinociceptif des médicaments menant au développement de nouvelles thérapies de gestion de la douleur.
