これは、リポ多糖注射と結紮糸の配置を組み合わせた実験的歯周炎のラットモデルであり、病気の進行を研究し、歯周炎の治療を評価するための効果的な方法を提供します。両方の技術を個々の方法と組み合わせると、急速な疾患誘発、破壊的な炎症反応の増幅、結合組織の喪失と歯槽骨吸収の増加につながります。この方法は、歯周炎治療の影響を評価する貴重な機会を提供します。
手順を実演するのはオスカーヴィラ博士です。 手術前にすべての手術器具を滅菌することから始めます。PBSまたは生理食塩水で希釈した1.6ミリリットルのケタミンと1ミリリットルのキシラジンを混合して、ケタミンとキシラジンの混合物を準備し、ストックを摂氏4度で保管します。
アチパメゾールをPBSまたは生理食塩水で1ミリリットルあたり0.25ミリグラムの最終濃度に希釈し、ブプレノルフィンをミリリットルあたり0.03ミリグラムの最終濃度に希釈し、ストックを摂氏4度で保管します。.1ミリリットルのPG-LPSを滅菌生理食塩水に調製し、マイナス20°Cで保管します。実験には雌と雄のWistarラットを使用してください。
動物を適切な環境下でグループで飼育し、餌と標準的な水を自由に提供します。ラットを麻酔した後、動物を加熱された手術台の上に仰向けに置きます。熱損失を防ぐために、手順中に動物の体を覆います。
小さなノーズコーンを使用して100%酸素を投与し、パルスオキシメトリによって脈拍数と酸素飽和度を監視します。次に、切歯の周りにアルミニウムの口ギャグを使用してラットの口を開きます。それで舌を引っ込め、上顎と下顎骨を開いた快適な作業位置に安定させ、下顎大臼歯へのアクセスを可能にします。
ポイント番号30の合計4つの吸収紙を使用してGCFを収集し、わずかな抵抗になるまでM1の中口蓋の周りの歯肉の隙間に挿入します。用紙ポイントを同じ位置に30秒間保持してから、すぐに取り外します。採取後、すぐにペーパーポイントをプラスチックバイアルに移し、アッセイ性能が出るまでマイナス80°Cで保管します。
縫合糸の遠位尾部を歯列の口蓋側に配置し、M1と第2上顎大臼歯の接触の間に近位セグメントを挿入します。骨膜顕微手術エレベータを使用して、溝内に縫合糸を挿入します。このレベルの組織は付着した歯肉の狭い領域を提示するため、M1の頬面の周りに結紮糸を非常に慎重に巻き付けます。
縫合糸が歯肉溝に打ち込まれるように両端で締められていることを確認してください。次に、縫合糸の端を外科医の結び目で結び、尾をできるだけ短くトリミングします。溝に結び目を挿入します。
結紮ポジショニング後、滅菌生理食塩水中の40マイクロリットルのPG-LPSをM1の中口蓋側の歯肉縁下組織に両側に注入します。結紮糸を検査して調整するには、麻酔をかけた動物を背中に置き、動物の麻酔を維持するために1%イソフルランと100%酸素を含む手順中に小さなノーズコーンを使用します。切歯の周りにアルミニウム製の口ギャグを使用してラップ口を開き、舌を引っ込め、上顎骨と下顎骨を開いた快適な作業位置に安定させ、結紮糸にアクセスできるようにします。
骨膜顕微手術エレベーターを使用して歯肉に対して結紮糸を締め、結紮糸の縫合糸が挿入されていることを確認し、歯肉の周りに炎症を引き起こします。結紮糸調整後、前に示したように、M1の中口蓋側の歯肉縁下組織に40マイクロリットルのPG-LPSを両側に注入します。14日目に動物を犠牲にした後、前に示したようにGCFを収集します。
ペーパーポイントをすぐにプラスチックバイアルに移し、アッセイ性能が出るまでマイナス80°Cで保管します。上顎大臼歯の歯槽骨の二次元画像は、歯周炎を発症した後、基底制御におけるより多くの骨体積とより高い歯槽骨量減少を示しています。矢状画像の分析は、基礎対照群と比較して、歯周炎確立後のM1およびM2の根間骨領域におけるより有意な歯槽骨減少を強調しています。
犠牲後、口蓋は異なるグループ間でM1の歯肉退縮の違いを示しました。歯周炎群は、基底対照群と比較して、上顎大臼歯周辺の歯肉の移動と炎症がより顕著です。また、歯周炎群は対照群よりも有意に高いGCFからの炎症誘発性サイトカイン1L-1βの放出を示した。
手順の重要なステップは、溝への縫合糸と結び目の正しい配置、結紮糸の適切な調整、および14日間のプロトコル中の正確なリポ多糖注入です。
