Se trata de un modelo de rata de periodontitis experimental, basado en las técnicas de inyecciones de lipopolisacáridos combinadas con la colocación de ligaduras, que ofrece un método eficaz para estudiar la progresión de la enfermedad y evaluar los tratamientos para la periodontitis. La combinación de ambas técnicas con métodos individuales culmina en una rápida inducción de la enfermedad, amplificando la respuesta inflamatoria destructiva y aumentando la pérdida de tejido conectivo y la resorción ósea alveolar. Este método proporciona una valiosa oportunidad para evaluar el impacto de los tratamientos de periodontitis.
Demostrando el procedimiento estará el Dr. Oscar Villa, PhD. Comience esterilizando todos los instrumentos quirúrgicos antes de la cirugía. Prepare una mezcla de ketamina y xilazina mezclando 1,6 mililitros de ketamina con un mililitro de xilazina, diluida en PBS o solución salina, y almacene el caldo a cuatro grados centígrados.
Diluir atipamezol a una concentración final de 0,25 miligramos por mililitro y buprenorfina a una concentración final de 0,03 miligramos por mililitro en PBS o solución salina, y almacenar las existencias a cuatro grados centígrados. Prepare un mililitro de PG-LPS en solución salina estéril y almacene el caldo a menos 20 grados centígrados. Use ratas Wistar hembras y machos para el experimento.
Mantenga a los animales alojados en grupos bajo el ambiente apropiado, con alimentos y agua estándar ofrecidos ad libitum. Después de anestesiar a la rata, coloque al animal boca arriba en una plataforma quirúrgica calentada. Cubra el cuerpo del animal durante el procedimiento para evitar la pérdida de calor.
Administre oxígeno al 100% utilizando un pequeño cono nasal y controle la frecuencia del pulso y la saturación de oxígeno mediante oximetría de pulso. Ahora, abra la boca de la rata usando una mordaza bucal de aluminio alrededor de los incisivos. Retraiga la lengua con ella y estabilice el maxilar y la mandíbula en una posición de trabajo abierta y cómoda, permitiendo el acceso a los molares mandibulares.
Recolectar GCF usando un total de cuatro papel absorbente punto número 30, insertándolo en la grieta gingival alrededor del mesiopalatal del M1 hasta una ligera resistencia. Mantenga el punto del papel en la misma posición durante 30 segundos antes de retirarlo inmediatamente. Después de la recolección, transfiera el punto de papel inmediatamente a un vial de plástico y guárdelo a menos 80 grados centígrados hasta el rendimiento del ensayo.
Coloque la cola distal de la sutura en el lado palatino de la dentición e inserte el segmento proximal entre el contacto de M1 y los segundos molares maxilares. Use el elevador microquirúrgico perióstico para insertar la sutura dentro del surco. Envuelva la ligadura alrededor de la superficie bucal de la M1 con mucho cuidado, ya que los tejidos en este nivel presentan una zona estrecha de encía adherida.
Asegúrese de que la sutura esté apretada en ambos extremos para ser introducida en el surco gingival. Luego, ate los extremos de la sutura con el nudo de un cirujano y recorte las colas lo más cortas posible. Inserte el nudo en el surco.
Después del posicionamiento de la ligadura, inyecte 40 microlitros de PG-LPS en solución salina estéril en el tejido subgingival en el lado mesiopalatal del M1 bilateralmente. Para examinar y ajustar la ligadura, coloque al animal anestesiado sobre su espalda y use un pequeño cono nasal durante el procedimiento con 1% de isoflurano y 100% de oxígeno para el mantenimiento de la anestesia animal. Abra la boca de la envoltura con la mordaza bucal de aluminio alrededor de los incisivos, retrayendo la lengua con ella y estabilizando el maxilar y la mandíbula en una posición de trabajo abierta y cómoda, permitiendo el acceso a las ligaduras.
Apriete las ligaduras contra la encía con la ayuda de un elevador microquirúrgico perióstico y asegúrese de que se inserte la sutura de las ligaduras, creando inflamación alrededor de la encía. Después del ajuste de la ligadura, inyecte bilateralmente 40 microlitros de PG-LPS en el tejido subgingival en el lado mesiopalatino del M1, como se demostró anteriormente. Después de sacrificar al animal en el día 14, recoge GCF como se muestra anteriormente.
Transfiera el punto de papel inmediatamente a un vial de plástico y guárdelo a menos 80 grados centígrados hasta el rendimiento del ensayo. Las imágenes bidimensionales del hueso alveolar de los molares maxilares muestran más volumen óseo en el control basal y mayor pérdida ósea alveolar después de establecer periodontitis. El análisis de las imágenes sagitales destaca una pérdida ósea alveolar más significativa en el área ósea interradicular de M1 y M2 después del establecimiento de la periodontitis, en comparación con el grupo de control basal.
Después del sacrificio, el paladar presentó diferencias en la recesión gingival en el M1 entre los diferentes grupos. El grupo de periodontitis muestra una migración gingival apical más notable y la inflamación de la encía alrededor de los molares maxilares en comparación con el grupo de control basal. Además, el grupo de periodontitis mostró una liberación significativamente mayor de citoquinas proinflamatorias 1L-1 beta del GCF que el grupo de control.
Los pasos cruciales en el procedimiento son la colocación correcta de la sutura y el nudo en el surco, el ajuste adecuado de la ligadura y la inyección precisa de lipopolisacáridos durante el protocolo de 14 días.
