SNSFのJ.H.N.への助成金310030_219210は、この原稿の出版を制限なく支援しました。 図 1 は、BioRender.com の助けを借りて作成されました。

この手続きは、北西および中央スイスの倫理委員会(EKNZ;Project-ID 2019-00273)。すべての患者は、内視鏡検査の前に生検の実験的使用について書面によるインフォームドコンセントを提供しました。この試験で使用された試薬および機器は、 材料表に記載されています。
1. 患者由来の食道オルガノイドの細胞単離
注:ヒト食道オルガノイドを培養するための培地成分のリストを 表1に示します。
<ol><li>生検を取得します。 注: 本研究では、2.8 mm のワーキング チャネルを備えた胃鏡を使用して、生検鉗子を使用した食道胃十二指腸内視鏡検査中に、1 つの食道セグメントから 2 つの生検が取得されます。</li>
	<li>生検を市販のケラチノサイト無血清培地(KSFM;Ca2+ 0.09 mM、1 ng/mL EGF、50 μg/mL BPE)。 注:生検は、使用まで数時間氷上に保存できます。</li>
	<li>KSFM培地を1 mLのディスパーゼI(10 U/mL)と交換し、生検を室温で10分間インキュベートします。</li>
	<li>生検を室温で300 x g で2分間遠心分離します。</li>
	<li>1000 μLピペットを使用して、生検や細胞破片ペレットに触れずにディスパーゼを吸引します。</li>
	<li>生検を1mLのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)ですすいでください。</li>
	<li>生検を室温で300 x g で2分間遠心分離します。</li>
	<li>1000 μLピペットを使用して上清を吸引します。</li>
	<li>800 rpmで振とうしながら、500 μLのトリプシン-EDTA(0.05%)と37°Cで10分間、生検をインキュベートします。</li>
	<li>単一細胞懸濁液が得られるまで、ピペッティングの上下を繰り返すことにより、機械的な破壊を行います。</li>
	<li>ツベルクリンシリンジのゴム製プランジャーヘッドを使用して、70 μmのセルストレーナーで細胞をろ過します。</li>
	<li>ストレーナーを2〜4 mLの大豆トリプシン阻害剤(250 μg / mL)で洗浄します。.</li>
	<li>5 mLの丸底ポリスチレンチューブにスナップオンキャップを取り付けた35 μmセルストレーナーで細胞をろ過します。</li>
	<li>シングルセル溶液を15 mLのコニカルチューブに移します。</li>
	<li>300 x g で4°Cで5分間遠心分離します。</li>
	<li>1000 μLピペットを使用して上清を吸引します。</li>
	<li>細胞を100 μLのKSFM培地に再懸濁します。</li>
	<li>10 μLのトリパンブルーと10 μLの細胞懸濁液を混合します。</li>
	<li>自動セルカウンターを使用してセルをカウントします。</li>
</ol>2. 患者由来のオルガノイド培養
<ol><li>カウント後、1〜2 mLのKSFMを細胞懸濁液に加えます。</li>
	<li>300 x g で4°Cで5分間遠心分離します。</li>
	<li>細胞ペレットを乱さずに1000μLピペットで上清を吸引します。</li>
	<li>細胞ペレットを基底膜抽出物(BME)ハイドロゲルマトリックス(20,000細胞あたり40μLのBME)に再懸濁します。 注:BMEを追加した後は、BMEの早期固化を防ぐために、セルを氷上に保ちます。</li>
	<li>200 μLのピペットチップを切り取り、粘性のあるBME細胞懸濁液混合物を吸引します。</li>
	<li>予熱した(37°C)浮遊細胞培養プレートで40μLの液滴を形成します。</li>
	<li>培地なしでプレートを37°Cで20〜30分間インキュベートし、BME液滴が固まるようにします。</li>
	<li>培養の最初の2日間、10 μMのY27632(ROCK阻害剤)を添加した予熱したKSFM-C培地を添加します。</li>
	<li>1日おきに、培地を新しいKSFM-C培地(Y27632および目的の+/-サイトカインを含まない)と交換してください。</li>
	<li>培地を吸引し、ピペットチップで液滴を掻き取りながら、1 mLのディスパーゼII(1.5 U/mL)をウェルに連続的に加えます。</li>
	<li>BMEディスパーゼ混合物を15 mLの遠心分離チューブに移し、37°Cで20分間インキュベートし、BMEを消化します。</li>
	<li>250 x g で4°Cで3分間遠心分離し、ディスパーゼIIを吸引します。</li>
	<li>目的の読み出しのプロトコルに従って進行します(例:RNA単離、タンパク質単離、または組織学のための4%PFAによる固定)。</li>
</ol>3. 患者由来の気液界面(ALI)培養のための細胞単離
<ol><li>生検を取得します。2.8 mm のワーキング チャネルを備えた胃鏡を使用した食道胃十二指腸内視鏡検査では、生検鉗子を使用して 1 つの食道セグメントから 2 つの生検が行われます。</li>
	<li>生検を市販のケラチノサイト無血清培地(KSFM;Ca2+ 0.09 mM、1 ng/mL EGF、50 μg/mL BPE)を使用し、使用するまで数時間氷上に保存します。</li>
	<li>KSFMを1 mLのディスパーゼ(10 U/mL)と交換します。その後、生検を室温で10分間インキュベートします。</li>
	<li>生検を室温で300 x gで2分間遠心分離します。</li>
	<li>1000 μLピペットを使用して、生検や細胞破片ペレットに触れずにディスパーゼを取り出します。</li>
	<li>生検を1mLのDPBSで洗浄します。</li>
	<li>室温で、生検を300 x g で2分間スピンダウンします。</li>
	<li>上清を1000μLのピペットで吸引します。</li>
	<li>生検を500 μLのトリプシン-EDTA(0.05%)で37°Cで10分間インキュベートし、インキュベーション中に800 rpmで連続的に混合します。</li>
	<li>単一細胞懸濁液が得られるまで、ピペッティングを繰り返して生検を機械的に中断します。</li>
	<li>解離した細胞を、ツベルクリンシリンジのゴム製プランジャーヘッドを備えた70μmのセルストレーナーに通し、細胞を50mLのコニカルチューブに集めます。</li>
	<li>ストレーナーを2〜4mLの大豆トリプシン阻害剤(250μg / mL)で洗浄し、残りの細胞をストレーナーから取り出します。</li>
	<li>35 μmのセルストレーナースナップキャップで細胞を5 mLの丸底ポリスチレンチューブにろ過します。</li>
	<li>細胞を15mLのコニカルチューブに移します。</li>
	<li>300 x g 、4°C、5分間遠心分離します。</li>
	<li>1,000 μLのピペットで上清を取り除きます。</li>
	<li>細胞ペレットを10 μM Y27632を含む4 mLのKSFM培地(Ca2+ 0.09 mM)に再懸濁します。</li>
	<li>細胞をT25細胞培養フラスコに移します。</li>
	<li>初代ケラチノサイトを増殖させるために、細胞を60%〜80%のコンフルエント度になるまで約1週間培養します。 注:継代(P)0は膵島様の細胞コングロマリットを形成し、単層ではありません。初代ケラチノサイトは、P1以降に単層を形成します。</li>
	<li>60%-80%のコンフルエントで継代し、2-3 T25または1-2 T75細胞培養フラスコでP1を再播種します。</li>
	<li>ケラチノサイトが60%〜80%のコンフルエントで単層を形成するときに、再びP1を通過します。</li>
</ol>4. 患者由来の気液界面(ALI)培養
<ol><li>P2初代ケラチノサイトをALI培養用のトランズウェルインサートに播種します。 注:500 μLのKSFM(Ca2+ 0.09 mM、1 ng / mL EGF、50 μg / mL BPE)中の12ウェルインサート(0.6 cm2あたり200,000ケラチノサイト)に400,000細胞を播種します。<ol><li>100 μL の KSFM (Ca2+ 0.09 mM、1 ng/mL EGF、50 μg/mL BPE) 中の 24 ウェルインサート (0.5 cm2 あたり 155,000 ケラチノサイト) に 150,000 個の細胞を播種します。</li>
		<li>あるいは、KSFM培地(Ca2+ 0.09 mM + 10% DMSO)で-80°Cで24時間凍結し、凍結した細胞を液体窒素に移して後で使用します。 注:凍結バイアルを使用する場合は、解凍後にもう一度継代してから、ALI培養用の細胞を使用してください。</li>
	</ol></li>
	<li>トランズウェル培養プレートのインサートの下の下部ウェルに培地を加えます。 注:12ウェルプレートの場合:1.5 mLのKSFM(Ca2 + 0.09 mM、1 ng / mL EGF、50 μg / mL BPE)。24ウェルプレートの場合:600 μLのKSFM(Ca2+ 0.09 mM、1 ng/mL EGF、50 μg/mL BPE)。</li>
	<li>2日後に中程度から高カルシウムKSFM(Ca2+ 1.8 mM、1 ng / mL EGF、50 μg / mL BPE)を交換します。.</li>
	<li>高カルシウムKSFM培地は、7日目まで隔日で交換してください。</li>
	<li>7日目に上部チャンバーから培地を吸引し、下部チャンバー内の培地を10 ng/mL KGF(= FGF7)、75 μg/mL アスコルビン酸(AA)を含む高カルシウムKSFM(Ca2+ 1.8 mM、1 ng / mL EGF、50 μg / mL BPE)に交換して空輸を行います。<ol><li>オプション:目的のサイトカインを目的の濃度で培地に加えます。</li>
	</ol></li>
	<li>14日目まで2日おきに媒体を交換してください。</li>
</ol>5. 経上皮電気抵抗(TEER)測定
<ol><li>TEERメーターの電極を5%次亜塩素酸ナトリウムを入れた24ウェルプレートのウェルに10〜15分間浸して滅菌します。</li>
	<li>滅菌ddH2Oで電極を4つのサブシーケンシャルウェルに浸し、電極を空気乾燥させて、5%次亜塩素酸ナトリウムを洗い流します。</li>
	<li>1つの電極をウェルに、もう1つの電極をトランズウェルインサートに配置し、PBSを充填してTEERを測定して、ブランクをセットします。 注:TEER測定の推奨容量:12ウェルプレートの場合(ウェルに1900μL、インサートに900μL)。24ウェルプレート用(ウェルに750-1000μL、インサートに250μL)。</li>
	<li>ALI培養液を室温滅菌PBSと交換します。 注:培地を下のウェルから取り出し、2番目のステップでトランズウェルインサートから取り出します。同様に、最初にPBSをインサートに加え、次に下部ウェルにPBSを添加して、ALI培養物がトランズウェル膜から剥離するのを防ぎます。</li>
	<li>ALI培養物を用いた実験井戸にTEERメーター電極を配置し、TEER測定1を行います。 注意: 媒体を交換する前に、2日おきにTEER測定を実行してください。</li>
</ol>6. 高分子フラックス
<ol><li>FITC-デキストラン(3-5 kDa)ストック溶液を1 mg/mLの濃度に希釈します。 注:FITC-Dextranは常に光にさらされないように保護してください。.</li>
	<li>読み出しの標準試料として、FITC濃度を減少させる(1000 μg/mL〜0.25 μg/mL)希釈列を調製します。</li>
	<li>500 μL の FITC-デキストラン溶液 (1 mg/mL) をトランズウェルの上部チャンバーに加え、1.5 mL の培地 (+/- 目的のサイトカイン) を下部コンパートメントに加え、プレートをインキュベーターに入れます。</li>
	<li>下部コンパートメントからそれぞれの時点(0分、15分、30分、60分、90分、120分、150分、180分など)で120μLの培地を回収します。</li>
	<li>ピペットは、各タイムポイントを黒色の96ウェル透明平底プレートに複製(50 μL/ウェル)します。</li>
	<li>FITC-デキストランを490 nmで励起し、プレートリーダーを使用して520 nmの波長で発光を読み取ります。</li>
	<li>標準に従って高分子フラックスの量を計算します。</li>
</ol>

Human Esophageal Organoids and Air-Liquid Interface Culture Protocols

著者は何も開示していません。

提供される手順により、患者由来のオルガノイドとALI培養の培養が可能になり、成功の見込みが高いです。オルガノイドプロトコルは、ヒト食道オルガノイド26の生成を報告した最初に公開されたプロトコルから、および最近発表されたプロトコル32から適応された。Sherill氏らは、ALIモデル22について説明しました。オルガノイドとALI培養...

食道の炎症は、Th2優位の食道の慢性炎症性疾患である好酸球性食道炎(EoE)で観察されるように、上皮バリアの完全性1,2,3,4,5を損なう6。EoEは1990年代に初めて報告され7,8、主に食物抗原9,10,11,12,13によって誘導されます。成人集団で最も頻繁に発生するEoEの症状は、嚥下障害と食物宿便です14。小児では、EoEは通常、成長の失敗、食物拒否、嘔吐、および腹痛を伴って現れます15。ゲノムワイド関連解析(GWAS)により、上皮バリアの完全性に関与するEoEリスク遺伝子が特定され、上皮がEoE研究の焦点となっている16,17,18。さらに、EoEトランスクリプトミクスは、分化過程の障害と反応性基底帯過形成が食道上皮のバリア機能の低下を引き起こすことを明らかにしました3,5,19,20,21,22。EoEがTh2媒介性疾患であるという初期の理解6は、上皮の完全性を乱すことによる駆動メディエーターとしてのIL-13の発見につながった3,4,21,23。遺伝的素因を通じて、内因性バリア障害から上皮の完全性に対するサイトカイン媒介性の影響を解剖できる実験システムは、EoEにおける免疫細胞と上皮との間の複雑な相互作用を研究する可能性を提供します。ヒト食道オルガノイドと気液界面(ALI)培養物は、サイトカイン刺激が上皮完全性に及ぼす影響を分析するための貴重なツールとして提案されています5。
成体組織特異的幹細胞(ASC)由来の食道オルガノイドを作製するための最初のプロトコルは、2009年に腸オルガノイドの最初の発表報告から5年後に確立され、腸内Lgr5+ ASCを使用して小腸の上皮コンパートメントを再現した24。DeWardらは、マウスの食道上皮細胞からオルガノイドを作製する先駆者となった25。2018年、笠木らは、不死化ヒト食道扁平上皮細胞株EPC2-hTERTおよび初代患者由来細胞からヒト食道オルガノイドを作製した26。同年、Zhangらは人工多能性幹細胞(iPSC)由来の食道オルガノイドの作製に成功しました。彼らは、食道前駆細胞(EPC)の発生に対するTGFβおよび骨形態形成タンパク質(BMP)阻害の重要性と、層状扁平上皮の分化におけるNotchシグナル伝達の重要な役割を描写しました26,27。Trisnoらは、Sox2を、発生の運命を食道分化に導くWnt阻害剤として同定することで、これらの知見を補完した28。その後のプロトコル、培地組成、および培養条件の改良により、オルガノイドの形成速度が増加し、凍結保存後のオルガノイドの継代および回収が可能になりました26,29,30,31,32。これらのオルガノイドは、サイトカインによる刺激後の組織構造と潜在的な標的遺伝子の発現を研究するための強力なツールですが、食道オルガノイドは、バリア完全性の直接的な尺度として経上皮耐性(TEER)または高分子フラックスを測定する可能性を提供しません。Sherrillら22が以前に述べたように、上皮分化をモデル化するALI培養4は、上皮の完全性を直接評価することを可能にする。患者由来オルガノイドとALI培養物を組み合わせることは、EoEにおける組織構造と上皮バリアの完全性を研究するための強力なツールです。
ここでは、食道生検から生存細胞を単離し、サイトカインがバリアインテグリティに及ぼす影響をさらに研究するために使用できる食道オルガノイドおよびALI培養を確立するための手順を示します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1250 &#181;L Griptip - Filter</td>
			<td>Integra</td>
			<td>4445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300 &#181;L Griptip - Filter</td>
			<td>Integra</td>
			<td>4435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#181;M cell strainer</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3945.070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ascorbic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine pituitary extract</td>
			<td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td>
			<td>3700015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>21115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Multiwell Plates CELLSTAR for suspension cultures</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>7.657 185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Basement Membrane Extract (BME), Type 2, Pathclear</td>
			<td>R&#38;D Systems (Bio-Techne)</td>
			<td>3532-010-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO), >99,5% BioScience Grade</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>A994</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase I</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>D4693</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbeccos Phosphate Buffered Saline&#160; (DPBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVE Automated Cell Counter</td>
			<td>NanoEntek</td>
			<td>EVE-MC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVE Cell counting slide</td>
			<td>NanoEntek</td>
			<td>EVS-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 5 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, with Cell Strainer Snap Cap</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescin isothiocyanate (FITC)-dextran</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>FD4</td>
			<td>average mol wt 3000-5000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heraeus - Megafuge&#160; 40R&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>75004518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human recombinant epidermal growth factor</td>
			<td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td>
			<td>3700015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Keratinocyte-SFM</td>
			<td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td>
			<td>17005042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco (Thermo Fischer Scientific)</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human KGF/FGF-7 Protein</td>
			<td>R&amp;D Systems (Bio-Techne)</td>
			<td>251-KG-010/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw cap tube, 15 mL</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>62.554.502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Channel EVOLVE 100-1000 &#181;L&#160;</td>
			<td>Integra</td>
			<td>3018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Channel EVOLVE 20-200 &#181;L&#160;</td>
			<td>Integra</td>
			<td>3016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1 mL</td>
			<td></td>
			<td>1134950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoMixer C</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5382000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin inhibitor from Glycine max (soybean)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Merck)</td>
			<td>T9128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>SAFC Biosciences (Merck)</td>
			<td>59418C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y27632 dihydrochloride</td>
			<td>Tocris (Bio-Techne)</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional cell culture models to investigate the epithelial barrier in eosinophilic esophagitis 

食道の扁平上皮は環境に直接さらされ、食物抗原や微生物などの外来抗原に絶えず直面しています。上皮バリアの完全性を維持することは、感染を予防し、無害な食品由来抗原によって引き起こされる炎症を避けるために重要です。この記事では、患者の生検からヒト食道オルガノイドおよび気液界面培養物を生成するための簡略化されたプロトコルを提供し、組織の恒常性と疾患の文脈で食道の上皮コンパートメントを研究します。これらのプロトコルは、過去10年間で重要な科学的マイルストーンであり、患者由来の初代細胞、オルガノイド、および気液界面培養からの3次元臓器様構造を記述しています。彼らは、ドナーの表現型および遺伝的特性を維持しながら、食道上皮における特定のサイトカイン、成長因子、およびシグナル伝達経路の機能を三次元フレームワーク内で調査する可能性を提供します。オルガノイドは、サイトカイン刺激後のトランスクリプトームとプロテオームを評価することにより、組織の微細構造に関する情報を提供します。対照的に、気液界面培養では、経上皮抵抗性(TEER)または高分子フラックス測定を通じて上皮バリアの完全性を評価できます。これらのオルガノイドと気液界面培養を組み合わせることで、食道上皮バリア障害疾患の研究を進めるための強力なツールとなります。

Esophageal inflammation compromises the epithelial barrier integrity1,2,3,4,5, as observed in eosinophilic esophagitis (EoE), a Th2-dominated chronic inflammatory disease of the esophagus6. EoE was first described in the 1990s7,8 and is predominantly induced by food antigens9,10,11,12,13. The most frequently occurring symptoms of EoE in the adult population are dysphagia and food impaction14. In children, EoE typically manifests with failure to thrive, food refusal, vomiting, and abdominal pain15. Genome-wide association studies (GWAS) have identified EoE risk genes involved in epithelial barrier integrity, moving the epithelium into the focus of EoE research16,17,18. EoE transcriptomics further revealed that an impaired differentiation process and a reactive basal zone hyperplasia cause the compromised barrier function of the esophageal epithelium3,5,19,20,21,22. The early understanding of EoE being a Th2-mediated disease6 led to the discovery of IL-13 as a driving mediator by disturbing epithelial integrity3,4,21,23. Experimental systems allowing the dissection of cytokine-mediated effects on epithelial integrity from intrinsic barrier impairment through genetic predisposition provide the possibility to study the complex interplay between immune cells and the epithelium in EoE. Human esophageal organoids and air-liquid interface (ALI) cultures have been proposed as valuable tools to analyze the consequence of cytokine stimulation on epithelial integrity5.
The first protocol for generating adult tissue-specific stem cell (ASC)-derived esophageal organoids was established five years after the first published reports of intestinal organoids in 2009 using intestinal Lgr5+ ASCs recapitulating the epithelial compartment of the small intestine24. DeWard et al. pioneered generating organoids from murine esophageal epithelial cells25. In 2018, Kasagi et al. generated human esophageal organoids from the immortalized human esophageal squamous epithelium cell line EPC2-hTERT and primary patient-derived cells26. In the same year, Zhang et al. successfully generated induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived esophageal organoids. They delineated the significance of TGF&#946; and bone morphogenetic protein (BMP) inhibition for esophageal progenitor cell (EPC) development and the crucial role of Notch signaling in the differentiation of the stratified squamous epithelium26,27. Trisno and colleagues complemented these findings by identifying Sox2 as a Wnt inhibitor that directs the developmental fate towards esophageal differentiation28. The subsequent refinements of protocols, medium composition, and culture conditions increased the organoid formation rate and made subculturing and recovering organoids after cryopreservation possible26,29,30,31,32. Although these organoids are powerful tools for studying tissue architecture and expression of potential target genes after stimulation with cytokines, esophageal organoids will not offer the possibility to measure transepithelial resistance (TEER) or macromolecule flux as direct measures for barrier integrity. As previously described by Sherrill and colleagues22, ALI cultures modeling epithelial differentiation4&#160;allow direct assessments of epithelial integrity. Combining patient-derived organoids and ALI cultures is a powerful tool for investigating tissue architecture and epithelial barrier integrity in EoE.
Here are procedures with instructions for isolating viable cells from esophageal biopsies and establishing esophageal organoid and ALI cultures that can further be used to study the effects of cytokines on barrier integrity.

Author Spotlight: Investigating the Pathophysiology of Eosinophilic Esophagitis

好酸球性食道炎における上皮バリアを調べるための三次元細胞培養モデル 

食道オルガノイドは、倒立明視野顕微鏡で文書化されたように、提供されたプロトコルの指示に従って、患者の生検から抽出された初代細胞から増殖します(図1)。上皮ASCは、単離された細胞を基底膜抽出物に播種した後、培養の最初の2日以内に自己組織化的に細胞クラスターを形成し始め、足場として機能します。細胞クラスターのサイズと数は、倒立明視野顕微鏡で...

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ここでは、ヒト食道オルガノイドの培養と気液界面培養のプロトコールを提供します。食道オルガノイドの気液界面培養は、サイトカインが食道上皮バリアに及ぼす影響を研究するために使用できます。

The squamous epithelium of the esophagus is directly exposed to the environment, continuously facing foreign antigens, including food antigens and ...

好酸球性食道炎の病態生理学を調査し、EOEの慢性炎症過程を誘発・促進する炎症カスケードの解明を試みています。疾患の病因に寄与する新しい免疫メディエーターの同定は、上皮バリアの障害と、その免疫メディエーターに対する治療用抗体の承認を中心に行われました。IL-20亜科サイトカインは、上皮の分化と角質化を損ない、MAPキナーゼ経路を介して上皮バリア障害を引き起こす炎症性メディエーターとして同定しました。

three-dimensional-cell-culture-models-to-investigate-epithelial

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Anatomy and Physiology

Immunology and Infection

Three-Dimensional Cell Culture Models to Investigate the Epithelial Barrier in Eosinophilic Esophagitis 

Unit 1

Digestive System

SCIENTISTS IN ACTION

422 ビュー.  University of Basel. 好酸球性食道炎の病態生理学を調査し、EOEの慢性炎症過程を誘発・促進する炎症カスケードの解明を試みています。疾患の病因に寄与する新しい免疫メディエーターの同定は、上皮バリアの障害と、その免疫メディエーターに対する治療用抗体の承認を中心に行われました。IL-20亜科サイトカインは、上皮の分化と角質化を損ない、MAPキナーゼ経路を介して上皮バリア障...