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Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

University of California, Irvine (UCI)

Rho &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x63A7;&#x5236;&#x8303;&#x56F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x65E0;&#x6570;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86; Rac&#x3001; Cdc42 &#x548C; RhoG &#x6FC0;&#x6D3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x8D77;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; RhoA &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F74;&#x7A81;&#x9000;&#x7F29;&#x3002;&#x9E1F;&#x560C;&#x5464;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4EA4;&#x6D41;&#x56E0;&#x7D20; (GEFs) &#x901A;&#x8FC7;&#x52A0;&#x5FEB; GDP/GTP &#x4EA4;&#x6D41;&#x6FC0;&#x6D3B; Rho &#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x663E;&#x793A; Rho-&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57DF;&#xFF0C;GEFD1&#xFF0C;&#x6D3B;&#x5316; RhoA&#xFF0C;&#x884C;&#x4E8B;&#x7684; Rac &#x9014;&#x5F84;&#x901A;&#x8FC7; RhoG &#x548C; GEFD2&#xFF0C;&#x5E76;&#x5305;&#x542B;&#x8BB8;&#x591A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x56FE;&#x6848;&#x5176;&#x8D21;&#x732E;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x529F;&#x80FD;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5728;&#x679C;&#x8747;&#x548C;&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x662F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8F74;&#x7A81;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; GEFD1 &#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x6697;&#x793A;&#x5176; Rho GEFs &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E25;&#x683C;&#x7BA1;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F74;&#x7A81; PC12 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; GEFD1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8840;&#x5F71;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F; SH3 1 &#x57DF;&#x5BF9;&#x4E8E; GEFD1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56FE;&#x6848;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x51FD;&#x6570;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; RhoG&#xFF0C;&#x4EE5;&#x524D;&#x6240;&#x793A; NGF (&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;) &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; GEFD1 &#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x7A81;&#x53D8;&#x5E72;&#x6270;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A81;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD; RhoG &#x8FD9;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0A;&#x6E38;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x86CB;&#x767D;&#x79EF;&#x7D2F;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E09;&#x4EBA;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x786E;&#x5B9A; Rho-&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x53C2;&#x4E0E;&#x795E;&#x7ECF;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5206;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; Rho-&#x5168;&#x7403;&#x73AF;&#x5883;&#x57FA;&#x91D1;&#x4E09;&#x91CD;&#x594F;&#x548C;&#x5176;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D; RhoG &#x53C2;&#x4E0E; NGF &#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;

Rho-GTPases control a wide range of physiological processes by regulating actin cytoskeleton dynamics. Numerous studies on neuronal cell lines have established that Rac, Cdc42, and RhoG activate neurite extension, while RhoA mediates neurite retraction. Guanine nucleotide exchange factors (GEFs) activate Rho-GTPases by accelerating GDP/GTP exchange. Trio displays two Rho-GEF domains, GEFD1, activating the Rac pathway via RhoG, and GEFD2, acting on RhoA, and contains numerous signaling motifs whose contribution to Trio function has not yet been investigated. Genetic analyses in Drosophila and in Caenorhabditis elegans indicate that Trio is involved in axon guidance and cell motility via a GEFD1-dependent process, suggesting that the activity of its Rho-GEFs is strictly regulated. Here, we show that human Trio induces neurite outgrowth in PC12 cells in a GEFD1-dependent manner. Interestingly, the spectrin repeats and the SH3-1 domain of Trio are essential for GEFD1-mediated neurite outgrowth, revealing an unexpected role for these motifs in Trio function. Moreover, we demonstrate that Trio-induced neurite outgrowth is mediated by the GEFD1-dependent activation of RhoG, previously shown to be part of the NGF (nerve growth factor) pathway. The expression of different Trio mutants interferes with NGF-induced neurite outgrowth, suggesting that Trio may be an upstream regulator of RhoG in this pathway. In addition, we show that Trio protein accumulates under NGF stimulation. Thus, Trio is the first identified Rho-GEF involved in the NGF-differentiation signaling.

The Human Rho-GEF trio and its target GTPase RhoG are involved in the NGF pathway, leading to neurite outgrowth.

GTPases Rho contr&ocirc;ler une large gamme de processus physiologiques de r&eacute;gulation dynamique de cytosquelette d&#39;actine. De nombreuses &eacute;tudes sur des lign&eacute;es de cellules neuronales ont &eacute;tabli que Rac, Cdc42 et RhoG activent neuritique extension, tandis que RhoA m&eacute;die la r&eacute;traction des neurites. Facteurs de guanine nucleotide exchange (circulation) activent les GTPases Rho en acc&eacute;l&eacute;rant l&#39;&eacute;change GDP/GTP. Trio affiche deux domaines de Rho-FEM, GEFD1, activation de la voie Rac via RhoG et GEFD2, agissant sur RhoA et contient de nombreux motifs de signalisation dont la contribution &agrave; la fonction Trio n&#39;a pas encore &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e. Des analyses g&eacute;n&eacute;tiques chez la drosophile et chez Caenorhabditis elegans indiquent que Trio participe &agrave; axon guidance cellulaire motilit&eacute; et via un processus d&eacute;pendant du GEFD1, ce qui sugg&egrave;re que l&#39;activit&eacute; de ses Rho-elle est strictement r&eacute;glement&eacute;e. Ici, nous montrons que Trio humain induit la croissance des neurites dans les cellules PC12 de mani&egrave;re GEFD1-d&eacute;pendante. Fait int&eacute;ressant, la spectrine se r&eacute;p&egrave;te et le domaine SH3-1 du Trio sont essentiels pour la croissance des neurites induite par le GEFD1, r&eacute;v&eacute;lant un r&ocirc;le inattendu pour ces motifs, en fonction du Trio. De plus, nous d&eacute;montrons que neurites induite par le Trio est m&eacute;di&eacute;e par l&#39;activation de GEFD1 d&eacute;pendant de RhoG, d&eacute;j&agrave; montr&eacute; &agrave; faire partie de la voie de NGF (nerve growth factor). L&#39;expression de diff&eacute;rents mutants Trio interf&egrave;re avec la croissance des neurites induite par le NGF, sugg&eacute;rant que le Trio pourrait &ecirc;tre un r&eacute;gulateur en amont de RhoG dans cette voie. En outre, nous montrons que la prot&eacute;ine Trio s&#39;accumule sous stimulation NGF. Trio est donc le premier identifi&eacute; impliqu&eacute; dans la signalisation de NGF-diff&eacute;renciation Rho-FEM.

Le trio humaine Rho-GEF et sa cible GTPase RhoG sont impliqu&eacute;s dans la voie de NGF, conduisant &agrave; la croissance des neurites.

The Human Rho-GEF-Trio und seinem Ziel GTPase RhoG werden in der NGF-Signalkaskade, was zu Auswuchs Neuriten.

Rho GTPases controllare una vasta gamma di processi fisiologici che regolano la dinamica del citoscheletro di actina. Numerosi studi su linee cellulari neuronali hanno stabilito che Rac, Cdc42 e RhoG attiva dei neuriti estensione, mentre RhoA da intermediario dei neuriti retrazione. Fattori di scambio nucleotide della guanina (GEFs) attivano Rho GTPases accelerando scambio GDP/GTP. Trio Visualizza due domini Rho-GEF, GEFD1, attivando la Rac via via RhoG e GEFD2, agendo su RhoA e contiene numerosi motivi segnalazione cui contributo alla funzione Trio non &egrave; ancora stato studiato. Le analisi genetiche in drosofila ed elegans di Caenorhabditis indicano che Trio &egrave; coinvolto nella motilit&agrave; delle cellule e di orientamento di axon tramite un processo di GEFD1-dipendente, suggerendo che l&#39;attivit&agrave; del sua Rho-GEFs &egrave; strettamente regolamentato. Qui, ci mostra che Trio umano induce la crescita dei neuriti in cellule PC12 in modo GEFD1-dipendente. &Egrave; interessante notare che, ripete la spettrina e il dominio SH3-1 del Trio sono essenziali per escrescenza GEFD1-mediata dei neuriti, rivelando un ruolo inatteso per questi motivi in funzione del Trio. Inoltre, noi dimostrare che tale escrescenza dei neuriti Trio-indotta &egrave; mediata dall&#39;attivazione dipendente dalla GEFD1 del RhoG, in precedenza mostrato di essere parte della via del NGF (nerve growth factor). L&#39;espressione di diversi mutanti Trio interferisce con NGF-indotta dei neuriti escrescenza, suggerendo che il Trio pu&ograve; essere un regolatore a Monte di RhoG in questo percorso. Inoltre, ci mostra che la proteina Trio si accumula sotto stimolazione di NGF. Cos&igrave;, il Trio &egrave; il primo identificato Rho-GEF coinvolti in NGF-differenziazione di segnalazione.

Il trio di Rho-GEF umana e sua destinazione GTPase RhoG sono coinvolti nella via del NGF, che portano alla crescita dei neuriti.

&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Rho gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x6574;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x6570;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;RhoA &#x4EF2;&#x4ECB;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x304C; Rac&#x3001;Cdc42&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; RhoG &#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x306E;&#x4F38;&#x5C55;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CB;&#x30F3; &#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x56E0;&#x5B50;) &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Rho gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; GDP/GTP &#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA; 2 Rho GEF &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;GEFD1&#x3001;RhoA &#x3092;&#x6F14;&#x6280; Rac &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; RhoG&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; GEFD2&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x304C;&#x7A76;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x89E3;&#x6790;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x305D;&#x306E; Dock &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x53B3;&#x3057;&#x304F;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x306B; GEFD1 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA; GEFD1 &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684; PC12 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x3001;SH3 1 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808; GEFD1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x5C55; NGF &#xFF08;&#x795E;&#x7D4C;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;) &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F; RhoG &#x306E; GEFD1 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x304C;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E; RhoG &#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3001;NGF &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x5C55;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; NGF &#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x3067;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x3001;&#x6700;&#x521D; Rho-GEF NGF &#x5206;&#x5316;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x8B58;&#x5225;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; Rho GEF &#x30C8;&#x30EA;&#x30AA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; GTPase RhoG NGF &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7A81;&#x8D77;&#x4F38;&#x9577;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Rho GTPases &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB2E4; &#xC218;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; Rac, Cdc42, &#xBC0F; RhoG neurite &#xD655;&#xC7A5; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, RhoA neurite &#xCCA0;&#xD68C;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC124;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. Guanine &#xC5FC;&#xAE30; &#xAD50;&#xD658; &#xC694;&#xC778; (&#xC870;&#xB2EC;) GDP/GTP exchange&#xB97C; &#xAC00;&#xC18D; &#xD558; &#xC5EC;&#xB85C; Gtpases&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB450; Rho GEF &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, GEFD1, RhoA&#xC5D0; RhoG, GEFD2&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; Rac &#xD1B5;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xC2E0;&#xD638; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC544;&#xC9C1; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Caenorhabditis elegans&#xC640; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624;&#xAC00; GEFD1 &#xC885;&#xC18D; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xCD95; &#xC0AD; &#xC9C0;&#xCE68;&#xACFC; &#xC140; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xAD00;&#xC5EC;&#xB294; Rho &#xC870;&#xB2EC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xADDC;&#xC81C; &#xC81C;&#xC548; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; GEFD1 &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; PC12 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;,&#xB294; spectrin &#xBC18;&#xBCF5; &#xB418;&#xBA70; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624;&#xC758; SH3-1 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; neurite GEFD1 &#xC911;&#xC7AC; &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xC740; &#xD3EC;&#xC9C0;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xC720;&#xB3C4; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC740; NGF (&#xC2E0;&#xACBD; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;) &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; Rhog&#xC758; GEFD1 &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xBC29;&#xD574; NGF &#xC720;&#xB3C4; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624;&#xAC00;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; Rhog&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC870;&#xC815;&#xAE30;&#xB97C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; NGF &#xC790;&#xADF9; &#xC544;&#xB798; &#xCD95;&#xC801; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC2DD;&#xBCC4; Rho GEF NGF &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; Rho GEF &#xD2B8;&#xB9AC;&#xC624;&#xC640; &#xB300;&#xC0C1; GTPase RhoG NGF &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; neurite &#xD30C;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xAD00;&#xB828;.

GTPasas Rho controlan una amplia gama de procesos fisiol&oacute;gicos regulando la din&aacute;mica del citoesqueleto de actina. Numerosos estudios sobre l&iacute;neas celulares neuronales han establecido que Rac, Cdc42 y RhoG activar&aacute;n neurita extensi&oacute;n, mientras que la media de RhoA neurita retracci&oacute;n. Factores de intercambio de guanina nucle&oacute;tido (GEFs) activan GTPasas Rho acelerando el intercambio de PIB/GTP. Tr&iacute;o muestra dos dominios de Rho-GEF, GEFD1, activaci&oacute;n de la v&iacute;a del Rac v&iacute;a RhoG y GEFD2, actuando en RhoA y contiene numerosos motivos de se&ntilde;alizaci&oacute;n cuya contribuci&oacute;n a la funci&oacute;n del tr&iacute;o a&uacute;n no ha sido investigada. An&aacute;lisis gen&eacute;ticos en Drosophila y en Caenorhabditis elegans indican que tr&iacute;o est&aacute; involucrado en la motilidad de orientaci&oacute;n y de la c&eacute;lula de ax&oacute;n mediante un proceso de GEFD1-dependiente, lo que sugiere que la actividad de sus Rho-GEFs est&aacute; estrictamente regulada. Aqu&iacute;, nos muestran que el tr&iacute;o humana induce neurita consecuencia en c&eacute;lulas PC12 en una forma dependiente de GEFD1. Curiosamente, repite la Espectrina y el dominio SH3-1 del tr&iacute;o son esenciales para neurita mediada por GEFD1 consecuencia, revelando un inesperado papel de estos motivos en funci&oacute;n del tr&iacute;o. Por otra parte, demostramos que consecuencia neurita inducida por el tr&iacute;o est&aacute; mediada por la activaci&oacute;n de la GEFD1 dependiente de RhoG, demostrado previamente para ser parte de la v&iacute;a de NGF (factor de crecimiento nervioso). La expresi&oacute;n de diferentes mutantes tr&iacute;o interfiere con consecuencia inducida por NGF neurita, sugiriendo que el tr&iacute;o puede ser un regulador upstream de RhoG en esta v&iacute;a. Adem&aacute;s, demostramos que la prote&iacute;na tr&iacute;o se acumula bajo estimulaci&oacute;n de NGF. As&iacute;, el tr&iacute;o es el primero identificado Rho-FMAM implicado en la se&ntilde;alizaci&oacute;n de NGF-diferenciaci&oacute;n.

El tr&iacute;o de Rho-FMAM humana y su destino GTPase RhoG participan en la v&iacute;a de NGF, llevando a consecuencia de la neurita.

&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x5177;&#x6709;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x5DF2;&#x4EA4;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7C7B;&#x5141;&#x8BB8;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5982;&#x679C;&#x5728;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6216;&#x808C;&#x8089;&#xFF0C;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x4EE3;&#x8868;&#x9499;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6765;&#x6E90;&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9700;&#x8981;&#x627F;&#x62C5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x975E;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6301;&#x7EED;&#x7684;&#x9499;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x88AB;&#x6307;&#x51FA;&#xFF0C;&#x7EE7;&#x53D1;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; C&#x3001; IP3 &#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x8EAB;&#x4EFD;&#x7684;&#x7275;&#x8FDE;&#x5728;&#x8FD9;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4FE1;&#x4F7F;&#x9499;&#x9A71;&#x52A8;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x6765;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x7684;&#x79F0;&#x4E3A; TRP &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x4E86;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5E2E;&#x52A9;&#x4EE5;&#x83B7;&#x53D6;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7531;&#x80DE;&#x5916;&#x9499;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x975E;&#x53EF;&#x5174;&#x594B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5C06;&#x63D0;&#x51FA; TRP &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x548C;&#x5176;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0A;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

[&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#xFF1A; &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5B57;&#x7B26;&#x5E93;]&#x3002;

Calcium influxes are of fundamental importance in eukaryotic cell functions. These calcium influxes are carried by different classes of membrane proteins that allow regulated calcium entry. If in excitable cells, such as neurones or muscle, voltage-dependent calcium channels represent the main source of calcium influx, other proteins are needed to assume such a function in non-excitable cells. In these, a sustained calcium influx is observed, secondary to phospholipase C activation, IP3 synthesis and internal calcium release. The identity of proteins implicated in this second messenger calcium-driven influx, as well as the mechanisms of activation of these channels have long been debated. In recent years, genes encoding a new kind of cationic channels called TRP channels have been identified. This molecular work has set the basis for further functional studies and helped to gain crucial information on the mechanisms by which extracellular calcium can penetrate into non-excitable cells. This review will present the most recent advances obtained on the molecular diversity of TRP channels and their mode of gating.

[The TRP family of channels: a complex gallery of characters].

Influx calciques est d&#39;une importance fondamentale dans les fonctions de la cellule eucaryote. Ces influx calciques est port&eacute;es par les diff&eacute;rentes classes de prot&eacute;ines membranaires qui permettent l&#39;entr&eacute;e de calcium r&eacute;glement&eacute;s. Si dans les cellules excitables, tels que les neurones ou muscle, canaux calciques voltage-d&eacute;pendants repr&eacute;sentent la principale source de l&#39;influx calcique, autres prot&eacute;ines sont n&eacute;cessaires pour assumer une telle fonction dans les cellules non excitables. Dans ces cas, un influx de calcium soutenue est observ&eacute;, secondaire &agrave; une activation de la phospholipase C, IP3 synth&egrave;se et la lib&eacute;ration de calcium interne. L&#39;identit&eacute; des prot&eacute;ines impliqu&eacute;es dans cet influx de calcium par deuxi&egrave;me messager, ainsi que les m&eacute;canismes d&#39;activation de ces canaux ont longtemps &eacute;t&eacute; d&eacute;battues. Ces derni&egrave;res ann&eacute;es, les g&egrave;nes codant un nouveau type de canaux cationiques, appel&eacute;s canaux TRP ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Ce travail mol&eacute;culaire a d&eacute;fini les bases pour poursuivre ses &eacute;tudes fonctionnelles et a permis d&#39;obtenir des informations cruciales sur les m&eacute;canismes par lequel calcium extracellulaire peuvent p&eacute;n&eacute;trer dans les cellules non excitables. Cette revue pr&eacute;sente les avanc&eacute;es les plus r&eacute;centes obtenues sur la diversit&eacute; mol&eacute;culaire des canaux TRP et leur mode de d&eacute;clenchement.

[La famille TRP de canaux : une complexe Galerie de personnages].

[Die TRP-Familie der Kan&#xE4;le: ein komplexes Galerie von Zeichen].

Afflussi di calcio sono di importanza fondamentale per le funzioni della cellula eucariotica. Questi afflussi di calcio sono trasportati da diverse classi di proteine di membrana che permettono l&#39;entrata di calcio regolamentato. Se nelle cellule eccitabili, come neuroni o muscolo, canali calcio voltaggio-dipendenti rappresentano la fonte principale di afflusso di calcio, altre proteine sono necessari per assumere tale funzione in cellule non eccitabili. In questi, un afflusso di calcio sostenuta &egrave; osservata, secondaria ad attivazione fosfolipasi C, IP3 sintesi ed il rilascio di calcio interna. Hanno a lungo discusso, l&#39;identit&agrave; delle proteine implicate in questo afflusso di calcio-driven di secondo messaggero, come pure i meccanismi di attivazione di questi canali. Negli ultimi anni, sono stati identificati geni che codificano per un nuovo tipo di canali cationici chiamati canali TRP. Questo lavoro molecolare ha posto le basi per ulteriori studi funzionali e ha contribuito a ottenere informazioni cruciali sui meccanismi da cui calcio extracellulare pu&ograve; penetrare in cellule non eccitabili. Questa recensione presenter&agrave; i pi&ugrave; recenti progressi ottenuti su diversit&agrave; molecolare dei canali TRP e loro modalit&agrave; di gating.

[La famiglia TRP dei canali: una galleria di personaggi complessa].

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x898F;&#x5236;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5165;&#x5834;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x7B4B;&#x8089;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; C &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3001;IP3 &#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x30BB;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x99C6;&#x52D5;&#x6D41;&#x5165;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x9577;&#x3044;&#x3002;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E; TRP &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x3092;&#x52A9;&#x3051;&#x305F;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x975E;&#x8208;&#x596E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x6D78;&#x900F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F; TRP &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3068;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x6700;&#x3082;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

[&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; TRP &#x5BB6;&#x65CF;: &#x6587;&#x5B57;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30AE;&#x30E3;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;]&#x3002;

&#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;&#xC744; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC758; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;&#xC740; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB274;&#xB7F0; &#xB4F1; &#xADFC;&#xC721;, &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC140; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;, &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC140;&#xC5D0; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xAC00;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785;&#xC740; &#xAD00;&#xCC30;, phospholipase C &#xD65C;&#xC131;&#xD654;, IP3 &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xCE7C;&#xC298; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xC870;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; &#xCE7C;&#xC298; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC785;&#xC73C;&#xB85C;&#xC774; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8;&#xC758; id&#xB294; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xB17C;&#xC758; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; TRP &#xCC44;&#xB110; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC77C; &#xCD94;&#xAC00; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB193;&#xACE0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xACE0;&#xB974;&#xAE30;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xCE68;&#xD22C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xB294; TRP &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC5BB;&#xC740; &#xAC00;&#xC7A5; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xBC1C;&#xD45C;&#xD560; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4;.

[&#xCC44;&#xB110; TRP &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;: &#xCE90;&#xB9AD;&#xD130;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAC24;&#xB7EC;&#xB9AC;].

Afluencias de calcio son de importancia fundamental en las funciones de la c&eacute;lula eucariota. Estos flujos de calcio son llevados por diferentes clases de prote&iacute;nas de membrana que permiten la entrada de calcio regulado. Si en c&eacute;lulas excitables, como las neuronas o m&uacute;sculo, los canales de calcio dependientes de voltaje representan la principal fuente de afluencia de calcio, se necesitan otras prote&iacute;nas para asumir dicha funci&oacute;n en c&eacute;lulas no excitables. En &eacute;stos, un influjo de calcio sostenido se observa, secundario a la activaci&oacute;n de la fosfolipasa C, IP3 s&iacute;ntesis y liberaci&oacute;n de calcio interno. La identidad de prote&iacute;nas implicadas en esta segunda afluencia de calcio impulsado por mensajero, as&iacute; como los mecanismos de activaci&oacute;n de estos canales se han debatido durante mucho tiempo. En los &uacute;ltimos a&ntilde;os, se han identificado los genes que codifican para una nueva clase de canales cati&oacute;nicos llamados canales TRP. Este trabajo molecular ha sentar las bases para estudios posteriores funcionales y ha ayudado a obtener informaci&oacute;n crucial sobre los mecanismos que calcio extracelular puede penetrar en las c&eacute;lulas no excitables. Este informe presenta los avances m&aacute;s recientes sobre la diversidad molecular de canales TRP y su modo de bloquear obtenidos.

[La familia TRP de canales: una compleja Galer&iacute;a de personajes].

&#x80DE;&#x5916; ATP &#x5C01;&#x95ED;&#x901A;&#x9053; (P2X &#x53D7;&#x4F53;&#xFF09; &#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x578B;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x90FD;&#x8868;&#x793A;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x808C;&#x8089;&#x548C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x817A;&#x3002;P2X &#x4E9A;&#x57FA;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#xFF0C;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53;&#x601D;&#x60F3;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x7531; 3 &#x4E2A;&#x4E9A;&#x57FA;&#x9F50;&#x805A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E2D; P2X &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28; C &#x603B;&#x7AD9;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x5176;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE; &#xFF1B;&#x5728;&#x6B64;&#x4E3B;&#x9898;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x56E0;&#x5FEB;&#x901F;&#x5185;&#x5316;&#x3002;&#x8F6C;&#x8BA9;&#x6BCD;&#x9898;&#x7ED9;&#x8BB0;&#x8005;&#x86CB;&#x767D; (&#x589E;&#x5F3A; CD(4)) &#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x671B;&#x6708;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x6B64;&#x4E3B;&#x9898;&#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E; P2X &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x819C;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x7684; axodendritic &#x5206;&#x5E03;&#x7684; P2X(2) &#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E5F;&#x662F;&#x80DE;&#x5185;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5982;&#x7B2C;&#x4E09;&#x80DE;&#x5185;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B; G &#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA;&#x5728;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x4E24;&#x6781;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x6781;&#x5316; P2X &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8D29;&#x8FD0;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x3002;

Extracellular ATP-gated channels (P2X receptors) define the third major family of ionotropic receptors, and they are expressed widely in nerve cells, muscles, and endocrine and exocrine glands. P2X subunits have two membrane-spanning domains, and a receptor is thought to be formed by oligomerization of three subunits. We have identified a conserved motif in the cytoplasmic C termini of P2X subunits that is necessary for their surface expression; mutations in this motif result in a marked reduction of the receptors at the plasma membrane because of a rapid internalization. Transfer of the motif to a reporter protein (CD(4)) enhances the surface expression of the chimera, indicating that this motif is likely involved in the stabilization of P2X receptor at the cell surface. In neurons, mutated P2X(2) subunits showed reduced membrane expression and an altered axodendritic distribution. This motif is also present in intracellular regions of other membrane proteins, such as in the third intracellular loop of some G protein-coupled receptors, suggesting that it might be involve in their cellular stabilization and polarization.

Identification of a trafficking motif involved in the stabilization and polarization of P2X receptors.

Extracellulaire canaux ATP (r&eacute;cepteurs P2X) d&eacute;finit la troisi&egrave;me grande famille de r&eacute;cepteurs ionotropiques et elles s&#39;expriment couramment dans les cellules nerveuses, les muscles et endocriniens et des glandes &agrave; s&eacute;cr&eacute;tion externe. P2X sous-unit&eacute;s ont deux domaines transmembranaire, et un r&eacute;cepteur semble &ecirc;tre form&eacute; par oligom&eacute;risation de trois sous-unit&eacute;s. Nous avons identifi&eacute; un motif conserv&eacute; dans les terminus C cytoplasmiques de P2X sous-unit&eacute;s qui sont n&eacute;cessaire pour leur expression superficielle ; ce motif des mutations entra&icirc;nent une nette diminution des r&eacute;cepteurs de la membrane plasmique &agrave; une internalisation rapide. Transfert du motif &agrave; une prot&eacute;ine de journaliste (CD(4)) am&eacute;liore l&#39;expression en surface de la chim&egrave;re, indiquant que ce motif est probablement impliqu&eacute; dans la stabilisation des r&eacute;cepteurs P2X &agrave; la surface cellulaire. Dans les neurones, une mutation sous-unit&eacute;s P2X(2) a montr&eacute; l&#39;expression membranaire r&eacute;duite et une distribution d&#39;axodendritiques alt&eacute;r&eacute;es. Ce motif est &eacute;galement pr&eacute;sent dans les r&eacute;gions intracellulaires d&#39;autres prot&eacute;ines de la membrane, comme dans la troisi&egrave;me boucle intracellulaire de certains r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s &agrave; la prot&eacute;ine, ce qui sugg&egrave;re qu&#39;il pourrait &ecirc;tre impliquent dans leur stabilisation cellulaire et la polarisation.

Identification d&#39;un motif de trafiquants impliqu&eacute; dans la stabilisation et la polarisation des r&eacute;cepteurs P2X.

Identifizierung eines illegalen Motiv in der Stabilisierung und Polarisation des P2X-Rezeptoren beteiligt sind.

Canali ATP-dipendente extracellulare (recettori P2X) definiscono la terza famiglia principale di recettori ionotropici, e sono ampiamente espressi nelle cellule nervose, i muscoli e sul sistema endocrino e ghiandole esocrine. P2X subunit&agrave; hanno due domini di membrana-spanning, e un recettore &egrave; pensato per essere formata da oligomerizzazione di tre subunit&agrave;. Abbiamo individuato un motivo conservato in termini C citoplasmatica della subunit&agrave; P2X che &egrave; necessario per la loro espressione superficiale; mutazioni in questo motivo provocare una marcata riduzione dei recettori di membrana del plasma a causa di una rapida internalizzazione. Trasferimento del motivo a una proteina reporter (CD(4)) migliora l&#39;espressione superficiale della chimera, che indica che questo motivo &egrave; probabilmente coinvolto nella stabilizzazione del recettore P2X alla superficie delle cellule. Nei neuroni, mutato subunit&agrave; P2X(2) ha mostrata una distribuzione axodendritic alterato e membrana ridotta espressione. Questo motivo &egrave; presente anche in regioni intracellulari di altre proteine di membrana, come nel terzo ciclo intracellulare di alcuni G recettori accoppiati a proteine, suggerendo che potrebbe essere coinvolgono nella loro stabilizzazione cellulare e polarizzazione.

Identificazione di un motivo tratta coinvolto nella stabilizzazione e nella polarizzazione di P2X recettori.

3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x30A4;&#x30AA;&#x30CE;&#x30C8;&#x30ED;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; ATP &#x30B2;&#x30FC;&#x30C8; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#xFF08;P2X &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09; &#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5E83;&#x304F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x3068;&#x5916;&#x5206;&#x6CCC;&#x817A;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P2X &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; 2 &#x3064;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; P2X &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E; C &#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x5185;&#x9762;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;(&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044; P2X &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x73FE; CD(4)) &#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x819C;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F; axodendritic &#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; P2X(2) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x5909;&#x7570;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x504F;&#x5149;&#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E; G &#x306E; 3 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5185;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x4ED6;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3067;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x504F;&#x5149; P2X &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E; id&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC678; ATP &#xBB38;&#xC774; &#xCC44;&#xB110; (P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;) ionotropic &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC8FC;&#xC694; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADFC;&#xC721;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44;&#xC640; &#xC704;&#xC758; &#xB540; &#xC0D8;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294;. P2X &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; 2 &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; oligomerization&#xC758; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;; P2X subunits&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; C &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC774; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xBA74; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560;. (CD(4))&#xC774;&#xC774; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xAE30;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;, P2X(2) subunits &#xAC10;&#xC18C; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC2DD; &#xBC0F; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; axodendritic &#xBC30;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;. &#xC774; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBA87; G&#xC758; &#xC138; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB8E8;&#xD504; &#xB420; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC640; &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC00;&#xB9E4; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; P2X &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xC640; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;.

Canales de ATP-bloqueados extracelulares (receptores P2X) definen la tercera gran familia de receptores ionotr&oacute;picos, y ampliamente, se expresan en c&eacute;lulas nerviosas, m&uacute;sculos y endocrino y las gl&aacute;ndulas exocrinas. Subunidades P2X tienen dos dominios que atraviesan la membrana, y un receptor se piensa para ser formado por Oligomerizaci&oacute;n de tres subunidades. Hemos identificado un motivo conservado en los t&eacute;rminos de C citopl&aacute;smicos de las subunidades P2X lo necesario para su expresi&oacute;n superficial; mutaciones en este motivo dan lugar a una reducci&oacute;n marcada de los receptores en la membrana plasm&aacute;tica debido a una r&aacute;pida internalizaci&oacute;n. Transferencia del motivo a una prote&iacute;na de reportero (CD(4)) mejora la expresi&oacute;n superficial de la quimera, indicando que este motivo probablemente participa en la estabilizaci&oacute;n de receptores P2X en la superficie celular. En las neuronas, mutado subunidades P2X(2) demostradas la expresi&oacute;n reducida de la membrana y una distribuci&oacute;n de sinapses alterada. Este motivo est&aacute; tambi&eacute;n presente en regiones intracelulares de otras prote&iacute;nas de membrana, como en el tercer loop intracelular de algunos G receptores acoplados a prote&iacute;na, sugiriendo que ser&iacute;a involucran en su estabilizaci&oacute;n celular y polarizaci&oacute;n.

Identificaci&oacute;n de un motivo narcotraficantes implicado en la estabilizaci&oacute;n y la polarizaci&oacute;n de los receptores P2X.

&#x8FD1;&#x51E0;&#x5E74;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5316;&#x5B66;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x8FA3;&#x6912;&#x7D20;&#x4E9A;&#x79D1; (TRPV) &#x6700;&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728;&#x6E20;&#x9053;&#x3002;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x4F8B;&#x5916;&#xFF0C;&#x5C31;&#x662F; TRPV2&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x8FD8;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x5982;&#x6781;&#x7AEF;&#x70ED;&#x6216;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;-3 &#x6FC0;&#x9176; (PI3 &#x6FC0;&#x9176;) &#x89C4;&#x7BA1;&#x819C;&#x63D2;&#x5165;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x4FC3;&#x8FDB; TRPV2 &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x96BE;&#x4EE5;&#x91CD;&#x73B0;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F62;&#x6210;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x95E8;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5728;&#x54EA;&#x4E2A; TRPV2 &#x6E20;&#x9053;&#x90FD;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; TRPV2 &#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x6536;&#x8D39;&#x66FF;&#x6362;&#x6210;&#x5B54;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x6216;&#x51CF;&#x5C11;&#x80DE;&#x5916;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x5728;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;TRPV2 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6F5C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5F55;&#x5F97;&#x7684;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x7535;&#x6D41;&#x548C;&#x9759;&#x606F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x90E8;&#x5206;&#x56E0;&#x8840;&#x6E05;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BFB;&#x51FA;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; TRPV2 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; PI3 &#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x964D;&#x4F4E; TRPV2 &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x8D29;&#x8FD0;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x5B83;&#x88AB;&#x7ED3;&#x675F; PI3 &#x6FC0;&#x9176;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x6216;&#x8C03;&#x8282;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4; TRPV2 &#x6E20;&#x9053; &#xFF1B;&#x4E0E;&#x5148;&#x524D;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B; PI3 &#x6FC0;&#x9176; TRPV2 &#x9891;&#x9053;&#x4E0D;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x901A;&#x9053;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;

PI3 &#x6FC0;&#x9176;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x72EC;&#x7ACB;&#x901A;&#x9053;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x7684; TRPV2 &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

Cellular or chemical activators for most transient receptor potential channels of the vanilloid subfamily (TRPV) have been identified in recent years. A remarkable exception to this is TRPV2, for which cellular events leading to channel activation are still a matter of debate. Diverse stimuli such as extreme heat or phosphatidylinositol-3 kinase (PI3-kinase) regulated membrane insertion have been shown to promote TRPV2 channel activity. However, some of these results have proved difficult to reproduce and may underlie different gating mechanisms depending on the cell type in which TRPV2 channels are expressed. Here, we show that expression of recombinant TRPV2 can induce cytotoxicity that is directly related to channel activity since it can be prevented by introducing a charge substitution in the pore-forming domain of the channel, or by reducing extracellular calcium. In stably transfected cells, TRPV2 expression results in an outwardly rectifying current that can be recorded at all potentials, and in an increase of resting intracellular calcium concentration that can be partly prevented by serum starvation. Using cytotoxicity as a read-out of channel activity and direct measurements of cell surface expression of TRPV2, we show that inhibition of the PI3-kinase decreases TRPV2 channel activity but does not affect the trafficking of the channel to the plasma membrane. It is concluded that PI3-kinase induces or modulates the activity of recombinant TRPV2 channels; in contrast to the previously proposed mechanism, activation of TRPV2 channels by PI3-kinase is not due to channel translocation to the plasma membrane.

PI3-kinase promotes TRPV2 activity independently of channel translocation to the plasma membrane.

Les activateurs cellulaires ou chimiques pour canaux potentiels plus transitoire des r&eacute;cepteurs de la sous-famille VANILLO&Iuml;DE (TRPV) ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s au cours des derni&egrave;res ann&eacute;es. Une exception remarquable &agrave; cette r&egrave;gle est TRPV2, pour lesquelles les &eacute;v&eacute;nements cellulaires conduisant &agrave; l&#39;activation du canal sont encore sujette &agrave; d&eacute;bat. Insertion de membrane de divers stimuli tels que de la chaleur extr&ecirc;me ou de la phosphatidylinositol 3-kinase (pi 3-kinase) r&eacute;glement&eacute;s a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute; pour promouvoir l&#39;activit&eacute; des canaux TRPV2. Cependant, certains de ces r&eacute;sultats ont &eacute;t&eacute; difficiles &agrave; reproduire et pourraient expliquer les diff&eacute;rents m&eacute;canismes de blocage selon le type de cellule dans laquelle TRPV2 canaux est exprim&eacute;es. Nous d&eacute;montrons ici que l&#39;expression de recombinaison TRPV2 peut induire cytotoxicit&eacute; qui est directement li&eacute;e &agrave; l&#39;activit&eacute; des canaux puisqu&#39;elle peut &ecirc;tre pr&eacute;venue par l&#39;introduction d&#39;une substitution de frais dans le domaine formant des pores du canal, ou en r&eacute;duisant le calcium extracellulaire. Dans les cellules transfect&eacute;es de fa&ccedil;on stable, TRPV2 expression traduit un courant ext&eacute;rieurement de rectification qui peut &ecirc;tre enregistr&eacute; &agrave; tous les potentiels et une augmentation de la concentration de calcium intracellulaire qui peut &ecirc;tre en partie &eacute;vit&eacute;e par privation de s&eacute;rum de repos. &Agrave; l&#39;aide de cytotoxicit&eacute; comme un affichage de l&#39;activit&eacute; des canaux et des mesures directes de l&#39;expression &agrave; la surface cellulaire de TRPV2, nous montrons que l&#39;inhibition de la PI 3-kinase diminue l&#39;activit&eacute; des canaux TRPV2, mais n&#39;affecte pas le trafic du canal vers la membrane plasmique. Il est conclu que pi 3-kinase induit ou module l&#39;activit&eacute; des recombinants TRPV2 canaux ; &agrave; la diff&eacute;rence du m&eacute;canisme propos&eacute; ant&eacute;rieurement, activation des canaux TRPV2 par pi 3-kinase n&#39;est pas &agrave; cause de la translocation de la cha&icirc;ne &agrave; la membrane plasmique.

Pi 3-kinase favorise l&#39;activit&eacute; TRPV2 ind&eacute;pendamment de la translocation vers la membrane plasmique de canal.

Zellul&auml;re oder chemische Aktivatoren f&uuml;r die Transienten Rezeptor m&ouml;glichen Kan&auml;le der Vanilloid-Unterfamilie (TRPV) wurden in den letzten Jahren identifiziert. Eine bemerkenswerte Ausnahme ist TRPV2, f&uuml;r die zellul&auml;re Vorg&auml;nge um Kanal-Aktivierung sind noch Gegenstand der Diskussion. Vielf&auml;ltige Reize wie extreme Hitze oder Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3-Kinase) reguliert Membran Einf&uuml;gung sind gezeigt worden, um TRPV2-Channel-Aktivit&auml;ten zu f&ouml;rdern. Allerdings erwies es sich als schwierig zu reproduzieren, haben einige dieser Ergebnisse und kann zugrunde liegen verschiedene gating Mechanismen je nach Zelle in welche TRPV2-Kan&auml;le ausgedr&uuml;ckt werden. Hier zeigen wir, dass Ausdruck der rekombinanten TRPV2 Zytotoxizit&auml;t hervorrufen kann, die direkt mit Channel-Aktivit&auml;ten zusammenh&auml;ngt, da es durch die Einf&uuml;hrung kostenlos Ersatz in der Pore-forming-Dom&auml;ne des Kanals, oder durch eine Verringerung der extrazellul&auml;re Kalzium vorgebeugt werden kann. Stabil transfizierte Zellen f&uuml;hrt TRPV2-Ausdruck in einer &auml;u&szlig;erlich Gleichrichterdiode Str&ouml;mung, die an alle Potenziale aufgezeichnet werden kann und einem Anstieg der Ruhe intrazellul&auml;ren Calcium-Konzentration, die teilweise durch Serum Hunger verhindert werden kann. Zytotoxizit&auml;t als ein Auslesen des Channel-Aktivit&auml;ten und direkte Messungen der Zelle Oberfl&auml;che Ausdruck der TRPV2 verwendet wird, zeigen wir, dass die Hemmung der PI3-Kinase verringert TRPV2-Channel-Aktivit&auml;ten w&auml;hrend des Handels mit den Kanal an die Plasmamembran nicht betroffen. Wird der Schluss gezogen, dass PI3-Kinase induziert oder die Aktivit&auml;t der rekombinanten TRPV2-Kan&auml;le moduliert; im Gegensatz zu den bisher vorgeschlagenen Mechanismus ist keine Aktivierung TRPV2-Kan&auml;le von PI3-Kinase durch Translokation der Kanal an der Plasmamembran.

PI3-Kinase f&ouml;rdert TRPV2 Aktivit&auml;t unabh&auml;ngig von Kanal-Translokation an der Plasmamembran.

Attivatori chimici o cellulari per transitori pi&ugrave; canali potenziali di recettore della sottofamiglia vanilloidi (TRV1) sono stati identificati negli ultimi anni. Una notevole eccezione a questa regola &egrave; TRPV2, per cui gli eventi cellulari che portano all&#39;attivazione del canale sono ancora materia di dibattito. Inserimento membrana diversi stimoli quali calore estremo o fosfatidilinositolo 3 chinasi (PI3 chinasi) regolamentati hanno dimostrato di promuovere le attivit&agrave; del canale TRPV2. Tuttavia, alcuni di questi risultati hanno dimostrato difficile da riprodurre e pu&ograve; essere alla base di diversi meccanismi di controllo a seconda del tipo di cellula in cui TRPV2 canali sono espressi. Mostriamo qui, che espressione di TRPV2 ricombinante pu&ograve; indurre citotossicit&agrave; che &egrave; direttamente collegata all&#39;attivit&agrave; del canale, poich&eacute; pu&ograve; essere evitata introducendo una sostituzione carica nel dominio che formano poro del canale, o riducendo il calcio extracellulare. In celle transfected stabile, espressione TRPV2 risultati in una corrente esteriormente rettifica che pu&ograve; essere registrata a tutti i potenziali e in un aumento della concentrazione di calcio intracellulare che pu&ograve; essere parzialmente prevenuta da fame siero di riposo. Utilizzando citotossicit&agrave; come un indicatore di attivit&agrave; del canale e misurazioni dirette di espressione di superficie delle cellule di TRPV2, mostriamo che l&#39;inibizione della PI3-chinasi diminuisce l&#39;attivit&agrave; del canale TRPV2 ma non influisce il traffico del canale di membrana del plasma. Si &egrave; concluso che PI3 chinasi induce o modula l&#39;attivit&agrave; dei canali TRPV2 ricombinante; in contrasto con il meccanismo proposto in precedenza, attivazione dei canali TRPV2 da PI3 chinasi non &egrave; a causa di traslocazione di canale di membrana del plasma.

PI3 chinasi promuove attivit&agrave; TRPV2 indipendentemente dalla traslocazione di canale di membrana del plasma.

&#x6700;&#x3082;&#x904E;&#x6E21;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D0;&#x30CB;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9;&#x4E9C;&#x79D1; (TRPV) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x5316;&#x5B66;&#x6D3B;&#x6027;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x8FD1;&#x5E74;&#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x4F8B;&#x5916; TRPV2 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x8B70;&#x8AD6;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x307E;&#x3060;&#x3067;&#x3059;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x6691;&#x3055;&#x3084;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30EB; 3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (PI3-&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;) &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x819C;&#x633F;&#x5165; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x518D;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3069;&#x306E; TRPV2 &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; TRPV2 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x7F6E;&#x63DB;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066; transfected &#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x3001;TRPV2 &#x5F0F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3067;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x898B;&#x4E0A;&#x6574;&#x6D41;&#x96FB;&#x6D41;&#x3068;&#x5B89;&#x9759;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x98E2;&#x9913;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x72B6;&#x6CC1;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x3068; TRPV2 &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;, PI3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PI3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x8A98;&#x5C0E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x7DE0;&#x7D50;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x63D0;&#x6848;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; PI3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8EE2;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

PI3 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306B; TRPV2 &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCD5C;&#xADFC; &#xBA87; &#xB144; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; vanilloid &#xC544; (TRPV)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB610;&#xB294; &#xD654;&#xD559; &#xD65C;&#xC131; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560; &#xB9CC;&#xD55C; &#xC608;&#xC678;&#xB294; TRPV2&#xB294; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC120;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB17C;&#xC7C1;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;. &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xC5F4; &#xB610;&#xB294; phosphatidylinositol 3 &#xD0A4; (PI3 kinase) &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC790;&#xADF9; &#xB9C9; &#xC0BD;&#xC785; TRPV2 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xC7AC;&#xD604; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xC785;&#xC99D; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; TRPV2 &#xCC44;&#xB110; &#xD45C;&#xD604; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC140; &#xC720;&#xD615;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xAE30;&#xCD08;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; trpv2&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCDA9;&#xC804; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xCE7C;&#xC298;&#xC744; &#xC904;&#xC5EC; &#xC608;&#xBC29;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC548;&#xC815;&#xC801; transfected &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; TRPV2 &#xC2DD; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC89;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xC804;&#xB958; &#xBC0F; &#xD734;&#xC2DD; &#xD608; &#xCCAD; &#xAE30;&#xC544;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xACB0;&#xACFC;. &#xCC44;&#xB110; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xC77D;&#xAE30; &#xBC0F; trpv2&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC2DD;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xACA0;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; PI3 kinase &#xC800;&#xD574; TRPV2 &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PI3 kinase &#xC720;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; TRPV2 &#xCC44;&#xB110;; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC0;&#xC870; &#xACB0;&#xB860; &#xC774;&#xB2E4; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xB2EC;&#xB9AC; PI3 kinase, TRPV2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xC804; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PI3 kinase &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCC44;&#xB110; &#xC804; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; TRPV2 &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Activadores celulares o qu&iacute;micos para m&aacute;s transitorios canales potencial del receptor de la subfamilia vaniloides (detectan) han sido identificados en los &uacute;ltimos a&ntilde;os. Una notable excepci&oacute;n a esto es TRPV2, para que conduce a la activaci&oacute;n del canal de eventos celulares son todav&iacute;a un tema de debate. Inserci&oacute;n de membrana de diversos est&iacute;mulos como el calor extremo o fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3) regulados han demostrado para promover la actividad del canal de TRPV2. Sin embargo, algunos de estos resultados han sido dif&iacute;ciles de reproducir y pueden ser la base de mecanismos bloquea diferentes dependiendo del tipo de c&eacute;lula en que TRPV2 se expresan canales. Aqu&iacute;, demostramos que la expresi&oacute;n de TRPV2 recombinante puede inducir citotoxicidad que est&aacute; directamente relacionada a la actividad del canal ya que se puede prevenir mediante la introducci&oacute;n de una substituci&oacute;n de la carga en el dominio de la formaci&oacute;n del poro del canal, o disminuyendo el calcio extracelular. En c&eacute;lulas transfected estable, TRPV2 expresi&oacute;n resulta en una corriente exterior rectificaci&oacute;n que se puede grabar en todos los potenciales y en un aumento de la concentraci&oacute;n de calcio intracelular que puede evitarse en parte por inanici&oacute;n de suero en reposo. Utilizando citotoxicidad como datos sobre la actividad del canal y mediciones directas de la expresi&oacute;n superficial de la c&eacute;lula de TRPV2, nos muestran que la inhibici&oacute;n de la cinasa PI3 disminuye la actividad del canal de TRPV2 pero no afecta el tr&aacute;fico del canal a la membrana plasm&aacute;tica. Se concluye que la cinasa PI3 induce o modula la actividad de los canales de TRPV2 recombinantes; en contraste con el mecanismo propuesto previamente, activaci&oacute;n de canales de TRPV2 por PI3-quinasa no es debido al desplazamiento del canal a la membrana plasm&aacute;tica.

Cinasa PI3 promueve actividad TRPV2 independientemente de desplazamiento del canal a la membrana plasm&aacute;tica.

&#x6700;&#x8FD1;&#x6211;&#x4EEC;&#x7EC4;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x4F34;&#x5728;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x548C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x9700;&#x548C;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x5E26;&#x504F;&#x89C1;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x679C;&#x8747; S2 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x786E;&#x5B9A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x540E;&#x5B58;&#x50A8;&#x6E05;&#x7A7A;&#x7684; thapsigargin &#x7684; 75 &#x547D;&#x4E2D;&#x3002;&#x5F53;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x547D;&#x4E2D; 11 &#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4F34;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E00;&#x3001; olf186-F&#x3001; &#x5BF9; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x6DF1;&#x523B;&#x51CF;&#x5C11; thapsigargin &#x8BF1;&#x53D1;&#x7ECF;&#x6761;&#x76EE;&#x548C;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#xFF0C;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x4E09;&#x6298;&#x6269;&#x589E;&#x540E;&#x3002;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7535;&#x6D41;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x589E;&#x52A0;&#x81F3; 8-fold &#x9AD8;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x66F4;&#x8FC5;&#x901F;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E0E;&#x4F34; cotransfected olf186 F &#x662F;&#x5F53;&#x3002;olf186-F &#x662F;&#x4ECE;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x56DB;&#x8DE8;&#x819C;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x7ECF;&#x6CF5;&#x8428;&#x5C14;-&#x4E0E; ER &#x9499; ATPase &#xFF08;SERCA&#xFF09; &#x548C;&#x5355;&#x8DE8;&#x819C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F; &#xFF08;NSF&#xFF09; &#x9644;&#x4EF6; &#xFF08;&#x9677;&#x9631;&#xFF09; &#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Syntaxin5 &#x4E5F;&#x662F;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F34;&#x611F;&#x5B98;&#x7ECF;&#x6D88;&#x8017;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x5185;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;translocates &#x548C; olf186-F &#x5230;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x7ECF;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x6807;&#x8BC6;&#x89C4;&#x8303;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Recent studies by our group and others demonstrated a required and conserved role of Stim in store-operated Ca(2+) influx and Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC) channel activity. By using an unbiased genome-wide RNA interference screen in Drosophila S2 cells, we now identify 75 hits that strongly inhibited Ca(2+) influx upon store emptying by thapsigargin. Among these hits are 11 predicted transmembrane proteins, including Stim, and one, olf186-F, that upon RNA interference-mediated knockdown exhibited a profound reduction of thapsigargin-evoked Ca(2+) entry and CRAC current, and upon overexpression a 3-fold augmentation of CRAC current. CRAC currents were further increased to 8-fold higher than control and developed more rapidly when olf186-F was cotransfected with Stim. olf186-F is a member of a highly conserved family of four-transmembrane spanning proteins with homologs from Caenorhabditis elegans to human. The endoplasmic reticulum (ER) Ca(2+) pump sarco-/ER calcium ATPase (SERCA) and the single transmembrane-soluble N-ethylmaleimide-sensitive (NSF) attachment receptor (SNARE) protein Syntaxin5 also were required for CRAC channel activity, consistent with a signaling pathway in which Stim senses Ca(2+) depletion within the ER, translocates to the plasma membrane, and interacts with olf186-F to trigger CRAC channel activity.

Genome-wide RNAi screen of Ca(2+) influx identifies genes that regulate Ca(2+) release-activated Ca(2+) channel activity.

Des &#xE9;tudes r&#xE9;centes de notre groupe et d&#x26;#39;autres ont d&#xE9;montr&#xE9; un r&#xF4;le n&#xE9;cessaire et conserv&#xE9;e de Stim en magasin exploit&#xE9; Ca (2 +) et l&#x26;#39;afflux de Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal (CRAC). En utilisant un impartiale l&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome &#xE9;cran interf&#xE9;rence de l&#x26;#39;ARN dans les cellules S2 de drosophile, nous avons maintenant d&#x26;#39;identifier 75 hits qui a fortement inhib&#xE9; Ca (2 +) sur l&#x26;#39;afflux de vidange magasin par thapsigargine. Parmi ces visites sont des prot&#xE9;ines transmembranaires 11 pr&#xE9;dit, y compris Stim, et un, olf186-F, que lors de l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN m&#xE9;di&#xE9;e par effet de choc ont pr&#xE9;sent&#xE9; une r&#xE9;duction profonde de thapsigargine-&#xE9;voqu&#xE9; Ca (2 +) entr&#xE9;e et le CRAC actuelle, et la surexpression de 3 - l&#x26;#39;augmentation du courant CRAC fois. Courants ont &#xE9;t&#xE9; CRAC encore augment&#xE9; &#xE0; 8 fois plus &#xE9;lev&#xE9; que le contr&#xF4;le et s&#x26;#39;est d&#xE9;velopp&#xE9; plus rapidement quand olf186-F a &#xE9;t&#xE9; co-transfect&#xE9;es avec Stim. olf186-F est un membre d&#x26;#39;une famille hautement conserv&#xE9;e de quatre-transmembranaire s&#x26;#39;&#xE9;tendant prot&#xE9;ines homologues avec de Caenorhabditis elegans &#xE0; humaine. Le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) Ca (2 +) pompe &#xE0; calcium ATPase sarco-/ER (SERCA) et le single transmembranaire soluble N-&#xE9;thylmal&#xE9;imide sensible du r&#xE9;cepteur de fixation (NSF) (SNARE) prot&#xE9;ine Syntaxin5 ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; requis pour l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC, compatible avec une voie de signalisation dans lequel Stim sens Ca (2 +) au sein de l&#x26;#39;appauvrissement de la couche ER, une translocation vers la membrane plasmique, et interagit avec olf186-F pour d&#xE9;clencher l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC.

L&#x26;#39;&#xE9;chelle du g&#xE9;nome &#xE9;cran ARNi de Ca (2 +) Afflux d&#x26;#39;identifier les g&#xE8;nes qui r&#xE9;gulent Ca (2 +) de sortie activ&#xE9; par Ca (2 +) Activit&#xE9; du Chan

Neue Studien von unserer Fraktion und anderen gezeigt eine erforderliche und konservierte Rolle der Stim im Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Zustrom und Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) (CRAC) Channel-Aktivit&auml;ten. Einen unvoreingenommenen genomweiten RNA Interferenz-Bildschirm in Drosophila S2-Zellen verwenden, identifizieren wir jetzt 75 Treffer, die stark Ca(2+) Zustrom auf Speicher leeren von Thapsigargin gehemmt. Unter diese Treffer sind 11 vorhergesagten Transmembranproteine, einschlie&szlig;lich Stim, und eins, olf186-F, dass bei der RNA Interferenz-vermittelte Niederschlag eine profunde Verringerung der Thapsigargin hervorgerufen Ca(2+) Eintrag und CRAC current und auf eine &Uuml;berexpression eines 3-Band Vermehrung des CRAC aktuelle ausgestellt. CRAC Str&ouml;mungen wurden verst&auml;rkt mit 8-fach h&ouml;her als Kontrolle und schneller entwickelt, als olf186-F mit Stim cotransfected war. olf186-F ist Mitglied einer stark konservierten Familie von vier-spannender Transmembranproteine mit UCP1 von Caenorhabditis Elegans zu Human. Dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) Ca(2+) pump Sarco- / ER Kalzium ATPase (SERCA) und das einzelne Transmembran-l&ouml;slichen N-Ethylmaleimid-Sensitive (NSF)-Anlage-Rezeptor (SNARE)-Protein Syntaxin5 waren auch erforderlich f&uuml;r CRAC Channel-Aktivit&auml;ten, mit einem Signalweg in dem Sinne Stim Ca(2+) Ersch&ouml;pfung innerhalb der ER auf der Plasmamembran zeigten und mit olf186-F, um Trigger CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten interagiert.

Genomweiten RNAi-Bildschirm Ca(2+) Zustrom identifiziert Gene, die Ca(2+) Version aktivierte Ca(2+) Channel-Aktivit&auml;ten zu regulieren.

Recenti studi dal nostro gruppo e altri hanno dimostrato un ruolo richiesto e conservato di Stim nel negozio gestito Ca(2+) afflusso e attivit&agrave; del canale Ca(2+) (CRAC) attivato dal rilascio Ca(2+). Utilizzando un imparziale schermo di interferenza del RNA genome-wide in cellule di Drosophila S2, identifichiamo ora 75 hits che fortemente inibito Ca(2+) afflusso al negozio lo svuotamento da thapsigargin. Tra questi successi sono 11 proteine transmembrana predetta, tra cui Stim e uno, olf186-F, che su RNA interferenza-mediata atterramento esposto una profonda riduzione delle thapsigargin evocato Ca(2+) voce e CRAC corrente e su sovraespressione un triplice aumento del CRAC corrente. CRAC correnti sono state ulteriormente aumentate a ad superiori di controllo e si &egrave; sviluppato pi&ugrave; velocemente quando era cotransfected olf186-F con Stim. olf186-F &egrave; un membro di una famiglia altamente conservata del quattro-transmembrane spanning proteine con omologhi da Caenorhabditis elegans di umani. Il reticolo endoplasmatico (ER) Ca(2+) pompa sarco- / ER Calcio ATPasi (SERCA) e la proteina recettore (rullante) allegato N-ethylmaleimide-sensibili (NSF) transmembrana solubile singola Syntaxin5 inoltre erano necessari per attivit&agrave; del canale CRAC, coerente con una via di segnalazione in cui Stim i sensi Ca(2+) esaurimento entro l&#39;ER, trasloca a membrana del plasma e interagisce con olf186-F a trigger CRAC canale attivit&agrave;.

Genome-wide screen RNAi di afflusso Ca(2+) identifica i geni che regolano l&#39;attivit&agrave; del canale Ca(2+) Ca(2+) attivato dal rilascio.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x6D41;&#x5165;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;S2&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x516C;&#x5E73;&#x306A;&#x30B2;&#x200B;&#x200B;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7A7A;&#x5E97;&#x8217;&#x306B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;75&#x306E;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; - &#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D2;&#x30C3;&#x30C8;&#x66F2;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B;&#x8CAB;&#x901A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x30BF;&#x30D7;&#x30B7;&#x30AC;&#x30EB;&#x30AE;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3068;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x6DF1;&#x9060;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x6642;3 1&#x3064;&#x3001;olf186-F&#x3092;11&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x5F37;&#x3002; olf186-F&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x30B3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5236;&#x5FA1;&#x3088;&#x308A;&#x3082;8&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x8FC5;&#x901F;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; olf186-F&#x306F;&#x3001;4&#x3064;&#x306E;&#x8CAB;&#x901A;&#x306F;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C4;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;sarco-/ER&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;SERCA&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;N-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#xFF08;NSF&#xFF09;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;SNARE&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Syntaxin5&#x3082;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;ER&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3078;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;olf186-F&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;Ca&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;RNAi&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;2 +&#xFF09;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD5C;&#xADFC; &#xD559;&#xBB38; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xB9E4;&#xC7A5; &#xC6B4;&#xC601; &#xBC0F; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; Stim&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; S2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3B8;&#xACAC;&#xB41C; &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xAE08; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xBE44;&#xC6B0;&#xAE30; thapsigargin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB530;&#xB77C; Ca(2+) &#xC720;&#xC785; 75 &#xC548;&#xD0C0;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xD68C; &#xC218; &#xC911; Stim, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD558;&#xB098;, olf186 F, RNA&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC04;&#xC12D; &#xC911;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC804;&#xC2DC; thapsigargin &#xAC16;&#xB294; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xBC0F; CRAC &#xC804;&#xB958;, overexpression &#xD604;&#xC7AC; CRAC&#xC758; 35.56 &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAE4A;&#xC740; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; 11 &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xB294;. CRAC &#xC804;&#xB958; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xB2E4; 8-fold &#xB192;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; olf186 F Stim&#xC640; cotransfected&#xB294; &#xB54C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;. olf186-F &#xC778;&#xAC04; Caenorhabditis elegans&#xC5D0;&#xC11C; homologs&#xC640; &#xD655;&#xC7A5; 4 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;) Ca(2+) &#xD38C;&#xD504; sarco-/ &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xCE7C;&#xC298; ATPase (SERCA)&#xACFC; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; N ethylmaleimide &#xAD6C;&#xBD84; (NSF) &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C; (&#xC62C; &#xBB34;) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Syntaxin5 &#xB610;&#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; Stim &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;, &#xB0B4; Ca(2+) &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; translocates &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; olf186-F &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;.

Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; RNAi &#xD654;&#xBA74; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Estudios recientes realizados por nuestro grupo y otros demostraron una funci&#xF3;n necesaria y conservada de Stim en la tienda que funciona con Ca (2 +) y el influjo de Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) la actividad del canal. Mediante el uso de un imparcial en todo el genoma pantalla de interferencia de ARN en las c&#xE9;lulas S2 de Drosophila, ahora identificamos 75 &#xE9;xitos que intensamente inhibidos Ca (2 +) influjo sobre el vaciamiento tienda por thapsigargin. Entre estos &#xE9;xitos se predijo 11 prote&#xED;nas transmembrana, incluyendo Stim, y uno, olf186-F, que al ARN de interferencia mediada por ca&#xED;da mostraron una reducci&#xF3;n profunda de thapsigargin-evoc&#xF3; Ca (2 +) de entrada y CRAC actual, y sobre la sobreexpresi&#xF3;n de un 3 - El aumento de la corriente veces CRAC. CRAC corrientes se incrementaron en m&#xE1;s de ocho veces mayor que el control y se desarroll&#xF3; m&#xE1;s r&#xE1;pidamente cuando se olf186-F se cotransfectaron con Stim. olf186-F es un miembro de una familia altamente conservada de cuatro prote&#xED;nas transmembrana con hom&#xF3;logos de Caenorhabditis elegans a humano. El ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE) Ca (2 +) de la bomba de calcio ATPasa sarco-/ER (SERCA) y la &#xFA;nica transmembrana soluble N-etilmaleimida sensible (NSF) de los receptores de fijaci&#xF3;n (SNARE) Syntaxin5 prote&#xED;nas tambi&#xE9;n se requiere para la actividad del canal CRAC, coherente con una v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en la que Stim sentidos Ca (2 +) el agotamiento dentro de la sala de emergencia, se transloca a la membrana plasm&#xE1;tica, e interact&#xFA;a con olf186-F para activar la actividad de los canales CRAC.

Genoma toda la pantalla de RNAi de Ca (2 +) Afluencia identifica los genes que regulan la Ca (2 +) Publicaci&#xF3;n activado por Ca (2 +) la actividad del canal

&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x7834;&#x574F;&#x8868;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6D88;&#x9664;&#x662F;&#x9632;&#x6B62;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x548C;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x81F4;&#x764C;&#x6F5C;&#x529B;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x662F;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#x56E0;&#x7D20;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x5145;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7D2B;&#x5916;&#x8F90;&#x5C04;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x51CB;&#x4EA1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;AIF&#xFF09; &#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x76AE;&#x80A4;&#x7684;&#x6838;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x5934;&#x72B6;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2; (HPV) E6 &#x86CB;&#x767D;&#x963B;&#x6B62;&#x91CA;&#x653E; AIF &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4ECE;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x7834;&#x574F;&#x4E3B;&#x8868;&#x76AE;&#x89D2;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; c &#x548C; Omi &#x7B49;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FDD;&#x7559;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;shRNA &#x6C89;&#x9ED8;&#x7684; Bak&#xFF0C;&#x76EE;&#x6807;&#x4E3A; E6 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5BF9;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8BF1;&#x5BFC; AIF &#x91CA;&#x653E;&#x548C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x5206;&#x88C2; Bak &#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7B5B;&#x9009;&#x975E;&#x9ED1;&#x7D20;&#x7624;&#x76AE;&#x80A4;&#x764C;&#x75C7;&#x6D3B;&#x68C0;&#x663E;&#x793A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x5934;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2;&#x72B6;&#x6001;&#x4E0E; AIF &#x6838;&#x6613;&#x4F4D;&#x9006;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5BF9; Bak E6 &#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x5934;&#x7624;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

HPV E6 &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9632;&#x6B62; UVB &#x8BF1;&#x5BFC;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4FC3;&#x51CB;&#x4EA1;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Apoptotic elimination of UV-damaged cells from the epidermis is an important step in preventing both the emergence and expansion of cells with carcinogenic potential. A pivotal event in apoptosis is the release of apoptogenic factors from the mitochondria, although the mechanisms by which the different proteins are released are not fully understood. Here we demonstrate that UV radiation induced the mitochondrial to nuclear translocation of apoptosis inducing factor (AIF) in normal skin. The human papillomavirus (HPV) E6 protein prevented release of AIF and other apoptotic factors such as cytochrome c and Omi from mitochondria of UV-damaged primary epidermal keratinocytes and preserved mitochondrial integrity. shRNA silencing of Bak, a target for E6-mediated proteolysis, demonstrated the requirement of Bak for UV-induced AIF release and mitochondrial fragmentation. Furthermore, screening non-melanoma skin cancer biopsies revealed an inverse correlation between HPV status and AIF nuclear translocation. Our results indicate that the E6 activity towards Bak is a key factor that promotes survival of HPV-infected cells that facilitates tumor development.

Role of HPV E6 proteins in preventing UVB-induced release of pro-apoptotic factors from the mitochondria.

&Eacute;limination apoptotique des cellules endommag&eacute;es par UV de l&#39;&eacute;piderme est une &eacute;tape importante dans la pr&eacute;vention fois l&#39;&eacute;mergence et l&#39;expansion des cellules ayant un potentiel canc&eacute;rig&egrave;ne. Un &eacute;v&eacute;nement marquant dans l&#39;apoptose est la lib&eacute;ration de facteurs apoptog&egrave;nes de la mitochondrie, bien que les m&eacute;canismes par lesquels les diff&eacute;rentes prot&eacute;ines sont lib&eacute;r&eacute;s ne sont pas totalement comprises. Nous d&eacute;montrons que le rayonnement UV induite mitochondriales de translocation nucl&eacute;aire de l&#39;apoptosis inducing factor (AIF) dans la peau normale. Virus du papillome humain (VPH) E6 prot&eacute;ine emp&ecirc;ch&eacute; lib&eacute;rer AIF et autre apoptotic facteurs tels que le cytochrome c et l&#39;Omi des mitochondries de k&eacute;ratinocytes &eacute;pidermiques primaires endommag&eacute;s par UV et pr&eacute;serv&eacute; l&#39;int&eacute;grit&eacute; mitochondriale. shARN silen&ccedil;age de Bak, une cible pour E6 m&eacute;di&eacute;e par prot&eacute;olyse, d&eacute;montr&eacute; l&#39;exigence de Bak pour le communiqu&eacute; de la FIA par les rayons UV et fragmentation mitochondriale. En outre, d&eacute;pistage des biopsies de la peau non m&eacute;lanique du cancer a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une corr&eacute;lation inverse entre le statut HPV et de translocation nucl&eacute;aire AIF. Nos r&eacute;sultats indiquent que l&#39;activit&eacute; de la E6 vers Bak est un facteur cl&eacute; qui favorise la survie des cellules infect&eacute;es par le VPH qui facilite le d&eacute;veloppement de tumeurs.

R&ocirc;le des prot&eacute;ines du VPH E6 en emp&ecirc;chant la lib&eacute;ration de pro-apoptotic facteurs induite sur les UVB, de la mitochondrie.

Apoptotic Beseitigung von UV-gesch&auml;digte Zellen aus der Epidermis ist ein wichtiger Schritt die Entstehung und die Erweiterung der Zellen mit karzinogene Potenzial zu verhindern. Eine zentrale Veranstaltung in Apoptose ist die Freisetzung von Apoptogenic Faktoren aus den Mitochondrien, obwohl die Mechanismen, mit denen die verschiedenen Proteine freigesetzt werden, nicht voll verstanden werden. Hier zeigen wir, dass UV-Strahlung mitochondriale zu nuklearen Translokation der Apoptose induzierte-induzierende Faktor (AIF) in normale Haut. Die humanen Papillomavirus (HPV) E6 Protein verhindert Ver&ouml;ffentlichung von AIF und andere Apoptotic Faktoren wie Cytochrom c und Omi von Mitochondrien der UV-Gesch&auml;digte prim&auml;re epidermalen Keratinozyten und mitochondriale Integrit&auml;t bewahrt. ShRNA Unterdr&uuml;ckender von Bak, ein Ziel f&uuml;r E6-vermittelte Proteolyse, demonstrierte das Erfordernis der Bak UV-induzierte AIF Freilassung und mitochondriale Fragmentierung. Dar&uuml;ber hinaus ergab die screening nach aktuellen Haut Krebs Biopsien eine inverse Korrelation zwischen HPV-Status und AIF nukleare Translokation. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Aktivit&auml;t der E6 in Richtung Bak ein entscheidender Faktor ist, der &Uuml;berleben der HPV-infizierten Zellen f&ouml;rdert, die Tumor-Entwicklung erleichtert.

Rolle der HPV E6 Proteine UVB-induzierte Freisetzung von Pro-Apoptotic Faktoren aus den Mitochondrien zu verhindern.

Eliminazione di apoptotic delle cellule danneggiate da UV dall&#39;epidermide &egrave; un passo importante nel prevenire l&#39;emergere e l&#39;espansione delle cellule con potenziale cancerogeno. Un evento cruciale nell&#39;apoptosi &egrave; il rilascio di fattori apoptogenic dai mitocondri, anche se i meccanismi con cui vengono rilasciate le proteine differenti non sono pienamente compresi. Qui dimostriamo che radiazioni UV indotta mitocondriale di traslocazione nucleare di apoptosi inducendo fattore (AIF) in pelle normale. Il papillomavirus umano (HPV) E6 proteina impedito rilascio di AIF e altri apoptotic fattori quali il citocromo c e Omi da mitocondri dei cheratinociti epidermici primari UV-danneggiato e conservata integrit&agrave; mitocondriale. shRNA silenziamento del Bak, un bersaglio per proteolisi E6-mediata, hanno dimostrato il requisito di Bak per rilascio AIF UV-indotta e frammentazione mitocondriale. Inoltre, lo screening biopsie di cancro della pelle non melanoma hanno rivelato una correlazione inversa tra status HPV e traslocazione nucleare AIF. I nostri risultati indicano che l&#39;attivit&agrave; di E6 verso Bak &egrave; un fattore chiave che promuove la sopravvivenza delle cellule infettate da HPV che facilita lo sviluppo del tumore.

Ruolo delle proteine E6 di HPV nella prevenzione di UVB-indotto rilascio di pro-apoptotic fattori dai mitocondri.

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x9664;&#x53BB;&#x8868;&#x76AE;&#x304B;&#x3089;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x640D;&#x50B7;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3068;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x304C;&#x3093;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x9632;&#x6B62;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x304C;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x56E0;&#x5B50; (AIF) &#x3067;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x76AE;&#x819A;&#x306E;&#x6838;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;AIF &#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x30D1;&#x30D4; &#x30ED;&#x30FC;&#x30DE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#xFF08;HPV&#xFF09; E6 &#x9632;&#x6B62;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9; &#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; c &#x3068;&#x8FD1;&#x6C5F;&#x306A;&#x3069;&#x7D2B;&#x5916;&#x7DDA;&#x640D;&#x50B7;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x8868;&#x76AE;&#x89D2;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x8981;&#x56E0;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;shRNA Bak E6 &#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; UV &#x8A98;&#x8D77; AIF &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x306E; Bak &#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x975E;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x76AE;&#x819A;&#x764C;&#x751F;&#x691C;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x9006;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E; HPV &#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3068; AIF &#x6838;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x9593;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;E6 &#x6D3B;&#x52D5; Bak &#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B; HPV &#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

UVB &#x8A98;&#x767A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306E; HPV E6 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

Apoptotic &#xC81C;&#xAC70; &#xC790;&#xC678;&#xC120;&#xC5D0; &#xC190;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD45C; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xC554; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC140;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xC608;&#xBC29;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xB85D; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD574;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; apoptosis&#xC5D0; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xD589;&#xC0AC;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; apoptogenic &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xC720;&#xBC1C; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC694;&#xC778; (AIF) &#xC815;&#xC0C1; &#xD53C;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC758; &#xD575; &#xC804; &#xD558; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. AIF&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; apoptotic &#xC778;&#xAC04; &#xC720; &#xB450; &#xC885; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (HPV) E6 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC744; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0C1;&#xD53C; keratinocytes &#xC790;&#xC678;&#xC120; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; c &#xB4F1; &#xC624;&#xBBF8; &#xC694;&#xC778; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;. shRNA &#xC774;&#xBA85;&#xBC15;, E6-&#xC911;&#xC7AC; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xBC15; UV &#xC720;&#xB3C4; AIF &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC870;&#xAC01;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC2EC;&#xC0AC; &#xBE44; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xD53C;&#xBD80; &#xC554; biopsies HPV &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC0F; AIF &#xD575; &#xC804; &#xC0AC;&#xC774; &#xC5ED; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xBA85;&#xBC15;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; E6 &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; HPV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xD575;&#xC2EC; &#xC694;&#xC18C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;-apoptotic &#xC694;&#xC778;&#xC758; UVB &#xC720;&#xB3C4; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBC29;&#xC9C0; HPV E6 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Eliminaci&oacute;n de apoptosis de c&eacute;lulas da&ntilde;adas UV de la epidermis es un paso importante en la prevenci&oacute;n de la aparici&oacute;n y la expansi&oacute;n de las c&eacute;lulas con potencial cancer&iacute;geno. Un acontecimiento crucial en la apoptosis es la liberaci&oacute;n de factores de apoptogenic de la mitocondria, aunque los mecanismos por los que se lanzan las diferentes prote&iacute;nas no se entienden completamente. Aqu&iacute; demostramos que la radiaci&oacute;n UV induce la mitocondrial a translocaci&oacute;n nuclear de apoptosis induciendo factor (AIF) en piel normal. La liberaci&oacute;n de prote&iacute;na prevenida de E6 de virus del papiloma humano (HPV) de AIF y otro apoptotic factores tales como el citocromo c y Omi de las mitocondrias de los queratinocitos epid&eacute;rmicos primaria UV-da&ntilde;ado y conserva la integridad mitocondrial. shRNA silenciamiento de Bak, un objetivo para la prote&oacute;lisis mediada por E6, demostr&oacute; el requisito de Bak para liberaci&oacute;n de UV-inducida de la AIF y fragmentaci&oacute;n mitocondrial. Adem&aacute;s, proyecci&oacute;n de biopsias de c&aacute;ncer de piel no melanoma revel&oacute; una correlaci&oacute;n inversa entre el estado de VPH y translocaci&oacute;n nuclear AIF. Nuestros resultados indican que la actividad de la E6 hacia Bak es un factor clave que promueve la supervivencia de las c&eacute;lulas infectadas por VPH que facilita el desarrollo del tumor.

Papel de prote&iacute;nas de HPV E6 en la prevenci&oacute;n de UVB inducida por la liberaci&oacute;n de factores favorables-apoptotic de la mitocondria.

&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x6F5C;&#x5728; V2 (TRPV2) &#x662F;&#x4ECD;&#x662F;&#x6700;&#x795E;&#x79D8;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x7684; TRPV &#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x787C;&#x9178;&#x76D0; 2-Aminoethoxydiphenyl (2APB) &#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x5171;&#x540C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242;&#x7684; TRPV1&#x3001; TRPV2 &#x548C; TRPV3&#xFF0C;&#x4F46;&#x89E6;&#x53D1; 2APB TRPV2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4ECD;&#x5F7B;&#x5E95;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x9F20;&#x6807; TRPV2 &#x6E20;&#x9053;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6267;&#x884C;&#x901A;&#x9053;&#x836F;&#x7406;&#x5206;&#x6790;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;&#x82EF;&#x57FA;&#x787C;&#x9178;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x9F20;&#x6807; TRPV2 &#x4E0E;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6548;&#x529B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x5C4F;&#x5E55;&#x9762;&#x677F;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x7ECF;&#x5178;&#x8DE8;&#x56FD;&#x6FC0;&#x8FDB;&#x515A;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x948C;&#x7EA2; (RR) &#x548C; 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) &#x78FA;&#x9170;&#x80FA;&#x57FA;]-4-methoxyphenethyl&#xFF09;-1 H-&#x54AA;&#x5511;&#x76D0;&#x9178;&#x76D0; (SKF96365)&#x3001; &#x4E24;&#x79CD;&#x94BE;&#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x3001; &#x4E59;&#x57FA; (&#x8336;) &#x548C; 4-&#x6C28;&#x57FA;&#x5421;&#x5576;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x5BB9;&#x91CF;&#x9499;&#x6761;&#x76EE;&#xFF0C;1-(2-(trifluoromethyl) &#x82EF;&#x57FA;) &#x54AA;&#x5511; (TRIM)&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x7531; 100 microM 2APB &#x6291;&#x5236; TRPV2 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531; 300 microM 2APB&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EA;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236;&#x7531; RR &#x548C;&#x4FEE;&#x526A;&#x3002;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x8BB0;&#x5F55;&#x8868;&#x660E;&#x8336;&#x6291;&#x5236;&#x4F7F;&#x7528;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; 2APB &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x6E10;&#x8FDB;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x3002;TRPV2 orthologs &#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x8868;&#x660E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#x5411; 2APB &#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5927;&#x5C0F;&#x5199;&#x3002;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; TRPV2 &#x6E20;&#x9053;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5230;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x548C;&#x7FA7;&#x57FA;&#x57DF;&#x672C;&#x5730;&#x5316; 2APB &#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x8868;&#x60C5;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; hTRPV2 &#x65BD;&#x52A0;&#x5BF9; 2APB &#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x556E;&#x9F7F;&#x52A8;&#x7269; TRPV2 &#x6E20;&#x9053;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684; TRPV2 &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x77AC;&#x65F6;&#x53D7;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728; V2 &#x9891;&#x9053; orthologs 2 aminoethoxydiphenyl &#x787C;&#x9178;&#x76D0;&#x5206;&#x5B50;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Despite its expression in different cell types, transient receptor potential V2 (TRPV2) is still the most cryptic members of the TRPV channel family. 2-Aminoethoxydiphenyl borate (2APB) has been shown to be a common activator of TRPV1, TRPV2, and TRPV3, but 2APB-triggered TRPV2 activation remains to be thoroughly characterized. In this study, we have developed an assay based on cell lines stably expressing mouse TRPV2 channels and intracellular calcium measurements to perform a pharmacological profiling of the channel. Phenyl borate derivatives were found to activate mouse TRPV2 with similar potencies and thus were used to screen a panel of channel blockers. Besides the classic TRP inhibitors ruthenium red (RR) and 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) propoxy]-4-methoxyphenethyl)-1H-imidazole hydrochloride (SKF96365), two potassium channel blockers, tetraethylammonium (TEA) and 4-aminopyridine, and an inhibitor of capacitative calcium entry, 1-(2-(trifluoromethyl) phenyl) imidazole (TRIM), were found to inhibit TRPV2 activation by 100 microM 2APB. Activation by 300 microM 2APB, however, could only be inhibited by RR and TRIM. Electrophysiological recordings demonstrated that TEA inhibition was use-dependent, suggesting that high concentrations of 2APB might induce a progressive conformational change of the channel. Comparison of TRPV2 orthologs revealed that the human channel was insensitive to 2APB. Analysis of chimeric constructs of mouse and human TRPV2 channels showed that the molecular determinants of 2APB sensitivity could be localized to the intracellular amino and carboxyl domains. Finally, using lentiviral-driven expression, we demonstrate that hTRPV2 exerts a dominant-negative effect on 2APB activation of native rodent TRPV2 channels and thus may provide an interesting tool to investigate cellular functions of TRPV2 channels.

Pharmacological characterization and molecular determinants of the activation of transient receptor potential V2 channel orthologs by 2-aminoethoxydiphenyl borate.

Malgr&eacute; son expression dans diff&eacute;rents types de cellules, transient receptor potentiel V2 (TRPV2) est toujours le plus cryptiques membres de la famille de canal TRPV. Borate de 2-Aminoethoxydiphenyl (2APB) s&#39;est av&eacute;r&eacute; &ecirc;tre un activateur commun de TRPV1, TRPV2 et TRPV3, mais 2APB-d&eacute;clench&eacute;e TRPV2 activation reste bien caract&eacute;ris&eacute;es. Dans cette &eacute;tude, nous avons d&eacute;velopp&eacute; une analyse bas&eacute;e sur des lign&eacute;es de cellules exprimant de mani&egrave;re stable canaux TRPV2 souris et mesures de calcium intracellulaire pour effectuer un profilage pharmacologique du canal. D&eacute;riv&eacute;s de borate de ph&eacute;nyle trouv&eacute;es pour activer la souris TRPV2 avec des puissances semblables et donc ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour d&eacute;pister un panel d&#39;inhibiteurs des canaux calciques. Outre les classique TRP inhibiteurs rouge de ruth&eacute;nium (RR) et la 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) propoxy] -4-methoxyphenethyl) chlorhydrate-1 H-imidazole (SKF96365), bloqueurs de canaux potassiques deux t&eacute;tra&eacute;thylammonium (TEA) et 4-aminopyridine et un inhibiteur de l&#39;entr&eacute;e de calcium capacitive, 1-(2-(trifluoromethyl) de ph&eacute;nyle) imidazole (TRIM), estimant qu&#39;elles inhibent l&#39;activation TRPV2 de 100 microM 2APB. Activation par 300 microM 2APB, cependant, seulement pouvait &ecirc;tre inhib&eacute;e par RR et TRIM. Des enregistrements &eacute;lectrophysiologiques ont d&eacute;montr&eacute; que l&#39;inhibition de th&eacute; &eacute;tait d&eacute;pendant de l&#39;utilisation, ce qui sugg&egrave;re que des concentrations &eacute;lev&eacute;es de 2APB pourraient induire un changement de conformation progressif du canal. Comparaison des orthologues TRPV2 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la cha&icirc;ne humaine a &eacute;t&eacute; insensible &agrave; la 2APB. Analyse des constructions chim&eacute;riques de souris et humains TRPV2 canaux a montr&eacute; que les d&eacute;terminants mol&eacute;culaires de 2APB sensibilit&eacute; pourraient &ecirc;tre localis&eacute;es aux domaines intracellulaires amin&eacute;s et carboxyle. Enfin, &agrave; l&#39;aide d&#39;expression ax&eacute;e sur des g&egrave;nes, nous d&eacute;montrons que hTRPV2 exerce un effet dominant n&eacute;gatif sur 2APB d&#39;activation des canaux de TRPV2 rongeurs indig&egrave;nes et donc peut fournir un outil int&eacute;ressant pour &eacute;tudier les fonctions cellulaires des canaux TRPV2.

Caract&eacute;risation pharmacologique et les d&eacute;terminants mol&eacute;culaires de l&#39;activation du r&eacute;cepteur transitoire potentiel V2 canal orthologues de borate de 2-aminoethoxydiphenyl.

Trotz seinen Ausdruck in verschiedenen Zelltypen, Transienten Rezeptor potenzielle V2 (TRPV2) ist immer noch die kryptischen Mitglieder aus der Familie der TRPV-Kanal. 2-Aminoethoxydiphenyl-Borat (2APB) ist gezeigt worden, um eine gemeinsame Aktivator der TRPV1, TRPV2 und TRPV3 werden, aber 2APB ausgel&ouml;ste TRPV2-Aktivierung bleibt gr&uuml;ndlich charakterisiert werden. In dieser Studie entwickelten wir basiert auf Zelllinien, die Maus TRPV2-Kan&auml;le und intrazellul&auml;re Kalzium Messungen durchf&uuml;hren, eine pharmakologische Profilerstellung des Kanals stabil auszudr&uuml;cken. Phenyl-Borat-Derivate wurden gefunden, um die Maus TRPV2 mit &auml;hnlichen Potenzen zu aktivieren und somit wurden verwendet, um ein Panel von Kanalblocker Bildschirm. Neben den klassischen TRP Hemmer Ruthenium rot (RR) und 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl)-Propoxy]-4-Methoxyphenethyl)-1 H-Imidazol-Hydrochlorid (SKF96365), zwei Kalium-Kanal-Blocker, Tetraethylammonium (Tee) und 4-Pyridinamin und ein Inhibitor der kapazitiven Kalzium-Eintrag, 1-(2-(trifluoromethyl) Phenyl) Imidazol (TRIM), wurden von 100 MicroM 2APB TRPV2-Aktivierung zu hemmen gefunden. Aktivierung von 300 MicroM 2APB, konnte jedoch nur durch RR und TRIM gehemmt werden. Elektrophysiologische Aufnahmen gezeigt, dass TEA Hemmung Verwendung abh&auml;ngig, was darauf hindeutet, dass hohe Konzentrationen von 2APB eine progressive Konformations&auml;nderungen &Auml;nderung des Kanals veranlassen k&ouml;nnte. Vergleich der TRPV2 Orthologen ergab, dass der menschliche Kanal unempfindlich gegen 2APB. Analyse von Chim&auml;ren Konstrukten aus menschlichen TRPV2-Kan&auml;le und Maus zeigte, dass die molekularen Determinanten der 2APB Empfindlichkeit zu den intrazellul&auml;ren Dom&auml;nen amino und Karboxyl-lokalisiert werden konnte. Schlie&szlig;lich zeigen mit Lentivirale-gesteuerte Ausdruck, wir dieses hTRPV2 &uuml;bt einen Dominant-negativer Effekt auf 2APB Aktivierung der native Nagetier TRPV2-Kan&auml;le und daher kann schaffen ein interessantes Tool um Zellfunktionen TRPV2-Kan&auml;le zu untersuchen.

Pharmakologische Charakterisierung und Molekulare Determinanten der Aktivierung von Transienten Rezeptor potenzielle V2 Kanal Orthologe von 2-Aminoethoxydiphenyl-Borat.

Nonostante la sua espressione in diversi tipi di cellule, transient receptor potenziale V2 (TRPV2) &egrave; ancora il pi&ugrave; criptici membri della famiglia canale TRV1. Borato di Aminoethoxydiphenyl 2 (2APB) ha dimostrato di essere un comune attivatore di TRPV1, TRPV2 e TRPV3, ma 2APB-innescato TRPV2 attivazione rimane completamente essere caratterizzato. In questo studio, abbiamo sviluppato un test basato su linee cellulari che esprimono stabilmente mouse TRPV2 canali e misurazioni di calcio intracellulare per eseguire un&#39;analisi farmacologica del canale. Fenil borato derivati sono stati trovati per attivare il mouse TRPV2 con potenze simili e cos&igrave; sono stati utilizzati per lo screening di un pannello di bloccanti dei canali del. Oltre al classico TRP inibitori rutenio rosso (RR) e 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) propossi] -4-methoxyphenethyl) - 1 H - cloridrato di imidazolo (SKF96365), bloccanti del canale del potassio due, tetraetilammonio (t&egrave;) e 4-aminopiridina e un inibitore della voce calcio capacitivo, 1-(2-(trifluoromethyl) fenil) imidazolo (TRIM), sono stati trovati per inibire l&#39;attivazione TRPV2 da 100 microM 2APB. Attivazione di 300 microM 2APB, tuttavia, potrebbe solo essere inibito da RR e TRIM. Registrazioni elettrofisiologiche ha dimostrato che l&#39;inibizione di t&egrave; era uso-dipendente, suggerendo che alte concentrazioni di 2APB potrebbero indurre un progressivo cambiamento conformazionale del canale. Confronto di TRPV2 orthologs ha rivelato che il canale umano era insensibile a 2APB. L&#39;analisi dei costrutti chimerici di topo e umane TRPV2 canali ha mostrato che i determinanti molecolari della sensibilit&agrave; 2APB potrebbero essere localizzati ai domini amminici e carbossilico intracellulari. Infine, utilizzando l&#39;espressione lentivirali-driven, dimostrare che hTRPV2 esercita un effetto dominante negativo sul 2APB attivazione del roditore TRPV2 nativi canali e quindi pu&ograve; fornire un interessante strumento per indagare le funzioni cellulari di TRPV2 canali.

Caratterizzazione farmacologica e determinanti molecolari dell&#39;attivazione transient receptor potenziale V2 canale orthologs da borato di aminoethoxydiphenyl 2.

&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3001;&#x904E;&#x6E21;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A; V2 (TRPV2) &#x306F;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x3082;&#x4E0D;&#x53EF;&#x89E3;&#x306A;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E; TRPV &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;2 Aminoethoxydiphenyl &#x30DB;&#x30A6;&#x9178;&#x5869; &#xFF08;2APB&#xFF09; &#x306F; TRPV1, TRPV2, &#x304A;&#x3088;&#x3073; TRPV3 &#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x5FB9;&#x5E95;&#x7684;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B; 2APB &#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC; TRPV2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x884C;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB; &#x30DB;&#x30A6;&#x9178;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; TRPV2 &#x985E;&#x4F3C;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x3067;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B7;&#x30C3;&#x30AF; TRP &#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x30EB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0;&#x8D64; (RR) &#x304A;&#x3088;&#x3073; 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) &#x30D7;&#x30ED;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B7;] &#x307B;&#x304B;-4-methoxyphenethyl) - 1 H - &#x30A4;&#x30DF;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB;&#x5869;&#x9178;&#x5869; &#xFF08;SKF96365&#xFF09; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30AB;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x906E;&#x65AD;&#x85AC;&#x3001;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CB;&#x30A6;&#x30E0; &#xFF08;&#x8336;&#xFF09; &#x3068; 4-&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x30D4;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x3001;&#x5BB9;&#x91CF;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3001;1-(2-(trifluoromethyl) &#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF09; &#x30A4;&#x30DF;&#x30C0;&#x30BE;&#x30FC;&#x30EB; (&#x30C8;&#x30EA;&#x30E0;) &#x306F;&#x3001;100 &#x306E; microM 2APB &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; TRPV2 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;300 MicroM 2APB &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;RR &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3060;&#x3051;&#x6291;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x9332;&#x97F3;&#x8336;&#x963B;&#x5BB3;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3001;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6; 2APB &#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x7684;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;TRPV2 &#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C; 2APB &#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x6790; 2APB &#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x57FA;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x99C6;&#x52D5;&#x5F0F;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E; hTRPV2 &#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x9F67;&#x6B6F;&#x985E; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E; 2APB &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8; &#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; TRPV2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x904E;&#x6E21;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A; V2 &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0; 2 aminoethoxydiphenyl &#x30DB;&#x30A6;&#x9178;&#x5869;&#x3067;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3002;

&#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615;, &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; V2 (TRPV2)&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC560;&#xB9E4; &#xD55C; TRPV &#xCC44;&#xB110; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;. 2 Aminoethoxydiphenyl &#xBD95; &#xC0B0; &#xC5FC; (2APB) TRPV1, TRPV2, &#xBC0F; TRPV3, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xAE30;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; 2APB &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; TRPV2 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCCA0;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C;&#xC774; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; TRPV2 &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xCE21;&#xC815; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD398; &#xB2D0; borate &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; TRPV2 &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; potencies &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD654;&#xBA74; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;&#xC758; &#xD328;&#xB110;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB2E4;&#xAC00; &#xB8E8; &#xD14C; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; TRP &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB284; &#xBE68;&#xAC15; (RR) 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) propoxy]-4-methoxyphenethyl)-1 H &#xC774;&#xBBF8; &#xC5FC; (SKF96365), 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xCE7C;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8;&#xC81C;, tetraethylammonium (&#xCC28;) &#xBC0F; 4-aminopyridine, &#xBC0F; capacitative &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xBAA9;, 1-(2-(trifluoromethyl) &#xD398; &#xB2D0;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;) &#xC774;&#xBBF8; (&#xD2B8;&#xB9BC;), TRPV2 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; 100 microM 2apb&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; 300 microM 2apb&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB9CC; RR &#xBC0F; &#xD2B8;&#xB9BC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Electrophysiological &#xB179;&#xC74C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xCC28; &#xC800;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC885;&#xC18D;, 2apb&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC9C4;&#xBCF4;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. TRPV2 orthologs&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCC44;&#xB110; 2apb&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;&#xACE0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; TRPV2 &#xCC44;&#xB110; chimeric &#xAD6C;&#xBB38; &#xBD84;&#xC11D; 2APB &#xAC10;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xBC0F; carboxyl &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, lentiviral &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xADF8; hTRPV2 &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC124;&#xCE58;&#xB958; TRPV2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; 2APB &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; TRPV2 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC7AC;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC57D;&#xB9AC; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; v 2 &#xCC44;&#xB110; orthologs 2 aminoethoxydiphenyl borate&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;.

A pesar de su expresi&oacute;n en diferentes tipos celulares, transitorio del receptor V2 potencial (TRPV2) es a&uacute;n m&aacute;s cr&iacute;pticos miembros de la familia de canal detectan. 2-Aminoetoxidifenil borato (2APB) ha demostrado ser un activador com&uacute;n de TRPV1, TRPV2 y TRPV3, pero 2APB-desencadena la activaci&oacute;n de TRPV2 sigue siendo ser caracterizado completamente. En este estudio, hemos desarrollado un ensayo basado en l&iacute;neas celulares estable expresando rat&oacute;n TRPV2 canales y las mediciones del calcio intracelular para realizar un perfil farmacol&oacute;gico del canal. Fenil borato derivados fueron encontrados para activar el rat&oacute;n TRPV2 con potencias similares y as&iacute; se utilizaron para un panel de bloqueadores de los canales de la pantalla. Adem&aacute;s del cl&aacute;sico TRP inhibidores rutenio rojo (RR) y 1-(beta-[3-(4-methoxyphenyl) propoxy] -4-methoxyphenethyl)-1 H-imidazole clorhidrato (SKF96365), los bloqueadores de los canales de potasio dos, Tetraetilamonio (TEA) y 4-aminopiridina y un inhibidor de la entrada capacitativa de calcio, 1-(2-(trifluoromethyl) fenil) imidazol (TRIM), fueron encontrados para inhibir la activaci&oacute;n de TRPV2 por 100 microM 2APB. Activaci&oacute;n por 300 microM 2APB, sin embargo, podr&iacute;a ser inhibida s&oacute;lo por RR y TRIM. Las grabaciones electrofisiol&oacute;gicas demostraron que la inhibici&oacute;n de t&eacute; era utilizar-dependiente, lo que sugiere que las altas concentraciones de 2APB podr&iacute;an inducir un cambio conformacional progresivo del canal. Comparaci&oacute;n de TRPV2 ort&oacute;logos revel&oacute; que el canal humano era insensible a 2APB. An&aacute;lisis de construcciones quim&eacute;ricas de rat&oacute;n y canales de TRPV2 humanos mostr&oacute; que los determinantes moleculares de sensibilidad 2APB podr&iacute;an localizarse en los dominios amino&aacute;cidos y carboxilo intracelulares. Finalmente, utilizando la expresi&oacute;n basadas en lentivirales, demostramos hTRPV2 ejerce un efecto negativo dominante en 2APB la activaci&oacute;n de canales de TRPV2 roedores nativos y as&iacute; pueden proporcionar una herramienta interesante para investigar las funciones celulares de canales TRPV2.

Caracterizaci&oacute;n farmacol&oacute;gica y determinantes moleculares de la activaci&oacute;n de receptores transitoria potencial V2 canal ort&oacute;logos por 2-aminoetoxidifenil borato.

&#x9AD8;&#x6548;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9700;&#x8981;&#x957F;&#x6548;&#x9499;&#x6D8C;&#x5165;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x6D3B;&#x6027;&#x9499; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x548C; (IS) &#x4E0E;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE; (APC) &#x7A33;&#x5B9A;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; RNAi &#x5C4F;&#x5E55;&#x5DF2;&#x67E5;&#x660E;&#x4F34;&#x548C;&#x679C;&#x8747;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x548C;&#x5176;&#x76F8;&#x5E94;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; STIM1 &#x548C; Orai1 &#x88AB;&#x5F81;&#x8058;&#x5230;&#x4E3B;&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x81EA;&#x4F53;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x3002;&#x5728;&#x4F11;&#x606F;&#x6216; super-antigen &#xFF08;SEB&#xFF09; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x65B9;&#x9762;&#x79EF;&#x7D2F;&#x4E86; STIM1 &#x548C; Orai1-&#x9884;&#x5904;&#x7406; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; SEB &#x8109;&#x51B2;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x88AB; colocalized &#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x6EE1;&#x8F7D; EGTA T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x6210;&#x50CF;&#x5927;&#x5927;&#x900F;&#x9732;&#x9AD8; Ca2 + &#x6D53;&#x5EA6;&#x9644;&#x8FD1;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;/&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x79EF;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x3002;Orai1 &#x663E;&#x6027;&#x8D1F;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x963B;&#x6B62; T &#x7EC6;&#x80DE; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5E72;&#x6D89;&#x7684; STIM1&#x3001; Orai1 &#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x533A; CD3 &#x521D;&#x59CB;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x7206;&#x70B8;&#x9020;&#x6210;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; STIM1 &#x548C;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6; Ca2 + &#x901A;&#x8FC7;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6E20;&#x9053;&#x6D41;&#x5165;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x521D;&#x59CB; TCR &#x4FE1;&#x53F7;&#x770B;&#x597D; STIM1 &#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x968F;&#x540E;&#x6297;&#x539F;&#x671F;&#x95F4;&#x9047;&#x5230;&#x3002;

Orai1 &#x548C; STIM1 &#x79FB;&#x52A8;&#x5230;&#x514D;&#x75AB;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#xFF0C;&#x4E0A;&#x8C03;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

For efficient development of an immune response, T lymphocytes require long-lasting calcium influx through calcium release-activated calcium (CRAC) channels and the formation of a stable immunological synapse (IS) with the antigen-presenting cell (APC). Recent RNAi screens have identified Stim and Orai in Drosophila cells, and their corresponding mammalian homologs STIM1 and Orai1 in T cells, as essential for CRAC channel activation. Here, we show that STIM1 and Orai1 are recruited to the immunological synapse between primary human T cells and autologous dendritic cells. Both STIM1 and Orai1 accumulated in the area of contact between either resting or super-antigen (SEB)-pretreated T cells and SEB-pulsed dendritic cells, where they were colocalized with T cell receptor (TCR) and costimulatory molecules. In addition, imaging of intracellular calcium signaling in T cells loaded with EGTA revealed significantly higher Ca2+ concentration near the interface, indicating Ca2+ influx localized at the T cell/dendritic cell contact area. Expression of a dominant-negative Orai1 mutant blocked T cell Ca2+ signaling but did not interfere with the initial accumulation of STIM1, Orai1, and CD3 in the contact zone. In activated T cell blasts, mRNA expression for endogenous STIM1 and all three human homologs of Orai was up-regulated, accompanied by a marked increase in Ca2+ influx through CRAC channels. These results imply a positive feedback loop in which an initial TCR signal favors up-regulation of STIM1 and Orai proteins that would augment Ca2+ signaling during subsequent antigen encounter.

Orai1 and STIM1 move to the immunological synapse and are up-regulated during T cell activation.

Pour un d&#xE9;veloppement efficace d&#x26;#39;une r&#xE9;ponse immunitaire, les lymphocytes T n&#xE9;cessite l&#x26;#39;influx de calcium de longue dur&#xE9;e par le biais de calcium lib&#xE9;ration de calcium activ&#xE9;s (CRAC) des canaux et la formation d&#x26;#39;une synapse immunologique stable (IS) avec la cellule pr&#xE9;sentatrice d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (APC). Derni&#xE8;res &#xE9;crans ARNi ont identifi&#xE9; Stim et Orai dans les cellules de drosophile, et leurs correspondants homologues mammif&#xE8;res STIM1 et Orai1 dans les cellules T, comme essentiels pour l&#x26;#39;activation du canal CRAC. Ici, nous montrons que STIM1 et Orai1 sont recrut&#xE9;s &#xE0; la synapse immunologique entre les lymphocytes T primaires humains et des cellules dendritiques autologues. Les deux STIM1 et Orai1 accumul&#xE9;e dans la zone de contact entre deux repos ou super-antig&#xE8;ne (SEB) pr&#xE9;trait&#xE9;s cellules T et SEB-cellules dendritiques puls&#xE9;es, o&#xF9; ils ont &#xE9;t&#xE9; colocalis&#xE9;s avec le r&#xE9;cepteur des cellules T (TCR) et les mol&#xE9;cules co-stimulatrices. En outre, l&#x26;#39;imagerie du calcium intracellulaire de signalisation dans les cellules T charg&#xE9;s de l&#x26;#39;EGTA a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; significativement plus &#xE9;lev&#xE9; Ca2 + de concentration pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface, indiquant Ca2 + influx localis&#xE9;e &#xE0; la cellule T / dendritique zone de contact cellulaire. Expression d&#x26;#39;un mutant dominant n&#xE9;gatif Orai1 bloqu&#xE9; cellules T Ca2 + de signalisation, mais ne pas interf&#xE9;rer avec l&#x26;#39;accumulation initiale de STIM1, Orai1, et CD3 dans la zone de contact. En activ&#xE9;s explosions des cellules T, expression de l&#x26;#39;ARNm pour STIM1 endog&#xE8;ne et tous les trois homologues de l&#x26;#39;homme des Orai &#xE9;tait r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la hausse, accompagn&#xE9;e d&#x26;#39;une augmentation marqu&#xE9;e de Ca2 + influx par les canaux CRAC. Ces r&#xE9;sultats impliquent une boucle de r&#xE9;troaction positive dans laquelle un signal initial TCR favorise la r&#xE9;gulation positive des prot&#xE9;ines STIM1 et Orai qui renforceraient Ca2 + de signalisation lors de la rencontre antig&#xE8;ne ult&#xE9;rieure.

Orai1 et STIM1 D&#xE9;placer vers la synapse immunologique et sont r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse lors de l&#x26;#39;activation des lymphocytes T

F&uuml;r die effiziente Entwicklung einer Immunantwort erfordern die T-Lymphozyten langlebige Kalzium Zustrom durch Kalzium aktivierte Version Kalzium (CRAC) Kan&auml;le und die Bildung einer stabilen immunologische Synapse (IS) mit der Antigen-pr&auml;sentierenden Zelle (APC). Den letzten RNAi-Bildschirme haben Stim und Orai in Drosophila-Zellen und ihre entsprechenden S&auml;ugetier-UCP1 STIM1 und Orai1 in T-Zellen, als wesentlich f&uuml;r die CRAC Kanal Aktivierung identifiziert. Hier zeigen wir, dass STIM1 und Orai1 f&uuml;r die immunologische Synapse zwischen prim&auml;ren menschlichen T-Zellen und autologen dendritischen Zellen angeworben werden. STIM1 und Orai1 gesammelt im Bereich der Kontakt zwischen Ruhe- oder Super-antigen (SEB)-T-Zellen und SEB-gepulsten dendritischen Zellen, wo sie mit T-Zell-Rezeptor (TCR) und kostimulatorischen Molek&uuml;len colocalized waren vorbehandelt. Dar&uuml;ber hinaus ergab Bildgebung von intrazellul&auml;ren Calcium signalisieren in T-Zellen geladen mit EGTA deutlich h&ouml;herer Ca2 + Konzentration in der N&auml;he der Schnittstelle angibt, Ca2 + Zustrom an die T-Zelle/Dendritische Zelle Kontaktfl&auml;che lokalisiert. Ausdruck der Dominant-negativen Orai1 Mutanten blockiert T-Zelle Ca2 + signalisieren jedoch die erste Ansammlung von STIM1, Orai1 und CD3 in der Kontaktzone nicht st&ouml;ren. Aktivierte T-Zelle Blasten war mRNA Ausdruck f&uuml;r endogene STIM1 und alle drei menschlichen UCP1 von Orai oben-geregelt, begleitet von einem deutlichen Anstieg der Ca2 + Zustrom durch CRAC-Kan&auml;le. Diese Ergebnisse bedeuten eine positive Feedback-Schleife, in der ein Ausgangssignal von TCR bevorzugt bis-Regelung der STIM1 und Orai Proteine, die Ca2 + Signalisierung w&auml;hrend nachfolgende Antigen erg&auml;nzen w&uuml;rde zu begegnen.

Orai1 und STIM1 in der immunologischen Synapse verschieben und w&auml;hrend der T-Zell-Aktivierung sind oben-geregelt.

Per uno sviluppo efficiente di una risposta immunitaria, i linfociti T richiedono duraturo afflusso di calcio attraverso i canali di calcio calcio attivato dal rilascio (CRAC) e la formazione di una sinapsi immunologica stabile (IS) con le cellule presentanti l&#39;antigene (APC). Schermi RNAi recenti hanno identificato Stim e Orai nelle cellule di Drosophila e loro corrispondenti omologhi dei mammiferi STIM1 e Orai1 in cellule T, come essenziale per l&#39;attivazione del canale CRAC. Qui, ci mostra che STIM1 e Orai1 sono reclutati per la sinapsi immunologica tra primarie umane delle cellule T e cellule dendritiche autologhe. STIM1 sia Orai1 accumulato nella zona di contatto tra riposo o super-antigen (SEB)-pretrattati cellule T e cellule dendritiche SEB-pulsato, dove essi erano colocalized con il recettore delle cellule T (TCR) e molecole di costimolazione. Inoltre, imaging del calcio intracellulare segnalazione in cellule T caricate con EGTA ha rivelato significativamente superiore Ca2 + concentrazione vicino l&#39;interfaccia, che indica Ca2 + afflusso localizzata presso l&#39;area di contatto delle cellule dendritiche/T cell. Espressione di un mutante Orai1 dominante-negativo bloccato T cell Ca2 + segnalazione ma non ha interferito con l&#39;accumulazione iniziale di STIM1, Orai1 e CD3 nella zona di Contatta. Nelle cellule T attivate blasti, espressione del mRNA per STIM1 endogeni e tutti i tre umani omologhi di Orai era up-regolato, accompagnato da un marcato aumento nell&#39;afflusso Ca2 + attraverso i canali CRAC. Questi risultati implicano un ciclo di feedback positivo, in cui un segnale iniziale TCR favorisce la up-regulation di STIM1 e Orai proteine che vuoi aumentare Ca2 + segnalazione durante successive antigene incontro.

Orai1 e STIM1 spostare la sinapsi immunologica e sono up-regolate durante l&#39;attivazione delle cellule T.

&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;APC&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#xFF08;IS&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;RNAi&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;STIM1&#x3068;Orai1&#x3092;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai1&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C8;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x52D5;&#x54E1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; STIM1&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4F11;&#x6B62;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;SEB&#xFF09;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;T&#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;TCR&#xFF09;&#x3068;&#x5171;&#x523A;&#x6FC0;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x305F;SEB-&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;Orai1&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EGTA&#x3092;&#x642D;&#x8F09;&#x3057;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;/&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x9762;&#x7A4D;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;Ca2 +&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;Ca2 +&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x8FD1;&#x508D;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;Orai1&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x906E;&#x65AD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x63A5;&#x89E6;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;STIM1&#x3001;Orai1&#x3068;&#x3001;CD3&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;T&#x7D30;&#x80DE;&#x82BD;&#x7403;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;STIM1&#x306E;mRNA&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;TCR&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3068;&#x306E;&#x906D;&#x9047;&#x306E;Ca2 +&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;STIM1&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Orai1&#x3068;STIM1 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; (CRAC) &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xCE7C;&#xC298; &#xC720;&#xC785; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC; (APC)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5; (IS)&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; RNAi &#xD654;&#xBA74; Stim&#xC640; &#xCD08;&#xD30C;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD574;&#xB2F9; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologs STIM1 &#xBC0F; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Orai1 CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; stim1&#xC640; orai1&#xB294; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD5CC; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xB0C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD734;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; super-antigen (SEB) &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCD09; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; STIM1 &#xBC0F; Orai1-pretreated T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC149; &#xD384;&#xC2A4; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR)&#xC640; costimulatory &#xBD84;&#xC790; colocalized &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; EGTA&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB85C;&#xB4DC; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCD09; &#xBA74;&#xC801;&#xC5D0; &#xB192;&#xC740; Ca2 + &#xB18D;&#xB3C4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; Ca2 + &#xC720;&#xC785; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Orai1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; T &#xC140; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; STIM1, Orai1, CD3 &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0B4; STIM1 mRNA &#xC2DD;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; &#xD1B5;&#xC81C; CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; TCR &#xC2E0;&#xD638; &#xD638;&#xC758; stim1&#xC758; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBC0F; &#xD6C4;&#xC18D; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC911; Ca2 + &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xC644;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC758;&#xBBF8;.

Orai1 &#xBC0F; STIM1 &#xBA74;&#xC5ED;&#xD559; &#xB0C5; &#xC774;&#xB3D9;&#xD55C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC704;&#xB85C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Para el desarrollo eficiente de una respuesta inmune, los linfocitos T de larga duraci&#xF3;n requieren la entrada de calcio a trav&#xE9;s de calcio activados por la liberaci&#xF3;n de calcio (CRAC) de canales y la formaci&#xF3;n de la sinapsis inmunol&#xF3;gica estable (IS) con la c&#xE9;lula presentadora de ant&#xED;geno (APC). Recientes pantallas de RNAi han identificado Stim y ORAI en las c&#xE9;lulas de Drosophila, y sus hom&#xF3;logos correspondientes de mam&#xED;feros y STIM1 Orai1 en las c&#xE9;lulas T, como esenciales para la activaci&#xF3;n de canales CRAC. Aqu&#xED;, mostramos que STIM1 y Orai1 son reclutados a la sinapsis inmunol&#xF3;gica entre las c&#xE9;lulas T humanas primarias y c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas aut&#xF3;logas. Tanto STIM1 y Orai1 acumulado en el &#xE1;rea de contacto entre cualquiera de reposo o super ant&#xED;geno-(SEB)-pretratados c&#xE9;lulas T y de SEB-pulsado c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas, donde fueron colocalized con receptor de c&#xE9;lulas T (TCR) y mol&#xE9;culas co-estimuladoras. Adem&#xE1;s, las im&#xE1;genes de calcio intracelular de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas T cargadas con EGTA revel&#xF3; Ca2 + significativamente mayor concentraci&#xF3;n cerca de la interfase, lo que indica Ca2 + afluencia localizada en la c&#xE9;lula T / &#xE1;rea dendr&#xED;tica contacto c&#xE9;lula. Expresi&#xF3;n de un mutante dominante negativo Orai1 bloqueado c&#xE9;lulas T Ca2 + se&#xF1;alizaci&#xF3;n, pero no interfieren con la acumulaci&#xF3;n inicial de STIM1, Orai1, y CD3 en la zona de contacto. En blastos de c&#xE9;lulas T activadas, la expresi&#xF3;n del mRNA de STIM1 end&#xF3;gena y los tres hom&#xF3;logos humanos de ORAI fue hasta reguladas, acompa&#xF1;ado por un marcado aumento en influjo de Ca2 + a trav&#xE9;s de los canales CRAC. Estos resultados implican un bucle de retroalimentaci&#xF3;n positiva en la que una primera se&#xF1;al de TCR favorece la regulaci&#xF3;n de prote&#xED;nas y STIM1 ORAI que aumentan Ca2 + de se&#xF1;alizaci&#xF3;n durante el encuentro de ant&#xED;geno posterior.

Orai1 y STIM1 Mover a la sinapsis inmunol&#xF3;gica y est&#xE1;n regulados durante la activaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T

&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7535;&#x6D41;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E0E; STIM1 &#x5728;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x5F53; co-expressed &#x4E0E; STIM1&#xFF0C;Orai1 &#x611F;&#x5E94;&#x7535;&#x6D41;&#x5927;&#x5185;&#x5FC3;&#x6574;&#x6D41; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E0E; Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6162;&#x706D;&#x6D3B;&#x3002;Orai1 &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8; &#xFF08;E106D&#xFF09; &#x6539;&#x53D8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7ECF; (&#x7CFB;&#x7EDF;)-&#x50CF;&#x540C;&#x65F6;&#x4FDD;&#x7559;&#x5185;&#x5FC3;&#x7EA0;&#x6B63;&#x6211;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;-V &#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; STIM1 &#x4E0E; Orai1 &#x7684; C &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x751F;&#x6210;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5F53;&#x524D;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5927;&#x7535;&#x6D41;&#x5728; STIM1 &#x548C; Orai3 &#x8F6C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x4E5F;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165; Orai3 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216; STIM1 &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x8BF1;&#x5BFC; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x5C55;&#x51FA;&#x5916;&#x5411;&#x6574;&#x6D41;&#x548C;&#x4EE3;&#x8868;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x9499;&#x548C;&#x5355;&#x4EF7;&#x5F53;&#x524D;&#x5916;&#x6765;&#x6210;&#x5206;&#x3002;Orai3 &#x5B54;&#x7A81;&#x53D8;&#x6291;&#x5236;&#x5E97;&#x9762;&#x5F0F;&#x7ECF;&#x8425;&#x7ECF;&#x5165;&#x5883;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x54CD;&#x5E94;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216;&#x589E;&#x52A0; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x643A;&#x5E26;&#x5927;&#x91CF;&#x7535;&#x6D41;&#x3002;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684; Orai1-3 &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8D1F;&#x8D23; 2-&#x5EFA;&#x4E1A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F53;&#x524D;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x4ECE;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x5230;&#x7B2C;&#x4E09;&#x8DE8;&#x819C;&#x6BB5;&#x7684; Orai3 &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x81F4; 2 &#x5EFA;&#x4E1A; Orai3 &#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x6253;&#x5F00;&#x76F8;&#x5BF9;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5B54;&#x9699;&#x7684;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x5B58;&#x50A8;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

&#x5B58;&#x50A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x548C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8C03;&#x8282; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Orai1 &#x548C; Orai3&#x3002;

We evaluated currents induced by expression of human homologs of Orai together with STIM1 in human embryonic kidney cells. When co-expressed with STIM1, Orai1 induced a large inwardly rectifying Ca(2+)-selective current with Ca(2+)-induced slow inactivation. A point mutation of Orai1 (E106D) altered the ion selectivity of the induced Ca(2+) release-activated Ca(2+) (CRAC)-like current while retaining an inwardly rectifying I-V characteristic. Expression of the C-terminal portion of STIM1 with Orai1 was sufficient to generate CRAC current without store depletion. 2-APB activated a large relatively nonselective current in STIM1 and Orai3 co-expressing cells. 2-APB also induced Ca(2+) influx in Orai3-expressing cells without store depletion or co-expression of STIM1. The Orai3 current induced by 2-APB exhibited outward rectification and an inward component representing a mixed calcium and monovalent current. A pore mutant of Orai3 inhibited store-operated Ca(2+) entry and did not carry significant current in response to either store depletion or addition of 2-APB. Analysis of a series of Orai1-3 chimeras revealed the structural determinant responsible for 2-APB-induced current within the sequence from the second to third transmembrane segment of Orai3. The Orai3 current induced by 2-APB may reflect a store-independent mode of CRAC channel activation that opens a relatively nonselective cation pore.

Store-dependent and -independent modes regulating Ca2+ release-activated Ca2+ channel activity of human Orai1 and Orai3.

On &#xE9;valu&#xE9;e courants induits par l&#x26;#39;expression d&#x26;#39;homologues humains de Orai avec STIM1 dans cellules r&#xE9;nales embryonnaires humaines. En cas de co-exprim&#xE9; avec STIM1, Orai1 induit une grande Ca vers l&#x26;#39;int&#xE9;rieur de redressement (2 +)-s&#xE9;lective courant avec Ca (2 +)-induite inactivation lente. Un mutation ponctuelle d&#x26;#39;Orai1 (E106D) modifi&#xE9; de la s&#xE9;lectivit&#xE9; ionique de l&#x26;#39;induit Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) (CRAC) en forme de courant tout en conservant une caract&#xE9;ristique rectification entrante IV. Expression de la partie C-terminale de STIM1 avec Orai1 est suffisante pour g&#xE9;n&#xE9;rer du courant CRAC sans d&#xE9;pl&#xE9;tion magasin. 2-APB a activ&#xE9; un courant relativement important non s&#xE9;lectif dans STIM1 et Orai3 co-exprimant les cellules. 2-APB a &#xE9;galement induit Ca (2 +) dans l&#x26;#39;afflux Orai3 cellules exprimant sans &#xE9;puisement magasin ou co-expression de STIM1. Le courant induit par Orai3 2-APB expos&#xE9; de rectification vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur et une composante int&#xE9;rieure repr&#xE9;sentant un mixte de calcium et monovalent actuelle. Un mutant de pores de Orai3 inhib&#xE9;e magasin exploit&#xE9; Ca (2 +) d&#x26;#39;entr&#xE9;e et n&#x26;#39;a pas transporter le courant important dans la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;appauvrissement de magasin ou l&#x26;#39;autre ou plus de 2-APB. Analyse d&#x26;#39;une s&#xE9;rie de Orai1-3 chim&#xE8;res r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; l&#x26;#39;d&#xE9;terminant structurel charg&#xE9; de 2-APB-courant induit au sein de la s&#xE9;quence de la deuxi&#xE8;me &#xE0; troisi&#xE8;me segment transmembranaire Orai3. Le courant induit par Orai3 2-APB refl&#xE8;te peut-&#xEA;tre un mode de magasin ind&#xE9;pendant de l&#x26;#39;activation du canal CRAC qui ouvre un pore cation relativement non s&#xE9;lectif.

Modes Store-d&#xE9;pendants et ind&#xE9;pendants de r&#xE9;gulation lib&#xE9;ration de Ca2 + activ&#xE9; par Ca 2 + canaliser l&#x26;#39;activit&#xE9; de l&#x26;#39;homme et Orai1 Orai3

Wir evaluieren Str&ouml;me induziert durch Ausdruck der menschlichen UCP1 von Orai zusammen mit STIM1 in menschlichen embryonalen Nierenzellen. Wenn co-expressed mit STIM1, Orai1 induziert einen gro&szlig;en einw&auml;rtsgleichrichtenden Ca(2+)-selektive Strom mit Ca(2+)-induzierten langsamen Inaktivierung. Der Punkt-Mutation des Orai1 (E106D) ver&auml;ndert die Ion-Selektivit&auml;t des induzierten Ca(2+) aktivierte Version V Ca(2+) (CRAC) - wie aktuell unter Beibehaltung einer Berichtigung ich innerlich - Merkmals. Ausdruck der C-terminalen Teil des STIM1 mit Orai1 war ausreichend, CRAC aktuelle ohne Speicher Ersch&ouml;pfung zu generieren. 2-APB aktiviert einen gro&szlig;en relativ unselektiv Strom in STIM1 und Orai3 co-expressing Zellen. 2-APB auch induzierte Ca(2+) Zustrom in Zellen ohne Speicher Ersch&ouml;pfung oder Koexpression von STIM1 Orai3 zum Ausdruck bringen. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB ausgestellt nach au&szlig;en Berichtigung und eine nach innen-Komponente, eine gemischte Kalzium und monovalenten Strom darstellt. Eine Pore-Mutante der Orai3 gehemmt Speicher zu bet&auml;tigende Ca(2+) Eintrag und nicht mit erheblichen Strom als Reaktion auf Speicher Ersch&ouml;pfung oder Zusatz von 2-APB. Analyse einer Reihe von Orai1-3 Chim&auml;ren offenbart strukturelle Determinanten f&uuml;r 2-APB-induzierte Strom innerhalb der Sequenz aus dem zweiten bis dritten Transmembran-Segment des Orai3 verantwortlich. Der Orai3 Strom induziert durch 2-APB kann einen Shop-unabh&auml;ngigen Modus des CRAC Kanal Aktivierung wider, die eine relativ unselektiv kation Pore &ouml;ffnet.

Shop-abh&auml;ngige und -unabh&auml;ngige-Modi, die Regulierung von Ca2 + Freigabe aktiviert Ca2 + Kanal Aktivit&auml;t des menschlichen Orai1 und Orai3.

Abbiamo valutato le correnti indotte dall&#39;espressione di umane omologhi di Orai insieme STIM1 in cellule renali embrionali umane. Quando co-expressed con STIM1, Orai1 indotta da una grande corrente interiormente rettifica Ca(2+)-selettiva con inattivazione lenta Ca(2+)-indotta. Una mutazione puntiforme del Orai1 (E106D) alterato la selettivit&agrave; dello ione di indotta Ca(2+) attivato dal rilascio caratteristica di Ca(2+) (CRAC) - come corrente mantenendo un interiormente che rettifica I - V. Espressione della porzione C-terminale del STIM1 con Orai1 era sufficiente per generare corrente senza negozio deplezione CRAC. 2-APB attivato una grande corrente relativamente selettivo nelle cellule co-expressing STIM1 e Orai3. 2-APB Ca(2+) afflusso anche indotta in cellule che esprimono Orai3 senza negozio deplezione o co-expression di STIM1. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB esposto rettifica verso l&#39;esterno e una componente interiore che rappresenta un misto di calcio e monovalente corrente. Un mutante del poro di Orai3 inibito operati dal negozio Ca(2+) voce e non ha fatto trasportare corrente significativo in risposta a negozio di esaurimento o aggiunta di 2-APB. Analisi di una serie di Orai1-3 chimere rivelato determinante strutturale responsabile della corrente 2-APB-indotta all&#39;interno della sequenza dal secondo al terzo segmento transmembrana di Orai3. La corrente di Orai3 indotta da 2-APB potrebbe riflettere una modalit&agrave; indipendente dal negozio di attivazione canale CRAC che apre un poro cazione relativamente non selettivi.

Modalit&agrave; store-dipendente e - indipendenti che regolano Ca2 + attivato dal rilascio Ca2 + canale attivit&agrave; di Orai1 umano e Orai3.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80CE;&#x5150;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;STIM1&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002; STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;Orai1&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9045;&#x3044;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5185;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x6027;&#x306E;IV&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;Orai1&#xFF08;E106D&#xFF09;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; Orai1&#x3068;STIM1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x67AF;&#x6E07;&#x305B;&#x305A;&#x306B;CRAC&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;Orai3&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2-APB&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;STIM1&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;Orai3&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x306F;&#x5916;&#x5411;&#x304D;&#x6574;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6DF7;&#x5408;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3068;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4E00;&#x4FA1;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x5185;&#x90E8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Orai3&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x6027;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x307E;&#x305F;&#x306F;2-APB&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x904B;&#x3070;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Orai1-3&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;Orai3&#x306E;&#x7B2C;&#x4E09;&#x306E;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;2&#x756A;&#x76EE;&#x304B;&#x3089;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5185;&#x306E;2-APB-&#x8A98;&#x5C0E;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 2-APB&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Orai3&#x96FB;&#x6D41;&#x304C;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A7A;&#x5B54;&#x3092;&#x958B;&#x304D;&#x3001;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;Orai1&#x3068;Orai3&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Ca2 +&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; STIM1 &#xD568;&#xAED8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC778;&#xAC04; homologs&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; stim1&#xC640; co-expressed, Orai1 Ca(2+) &#xC720;&#xB3C4; &#xB290;&#xB9B0; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD070; &#xC18D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orai1&#xC758; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (E106D) &#xBCC0;&#xACBD; &#xC720;&#xB3C4; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC)-&#xAC19;&#xC740; &#xD55C; &#xB098;&#xB97C; &#xC815;&#xB958; &#xC548;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC804;&#xB958;-V &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4;. Orai1&#xC640; stim1&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CRAC &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xACE0;&#xAC08; &#xC5C6;&#xC774; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; STIM1 Orai3 co-expressing &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD070; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD604;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xB610;&#xD55C; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; stim1&#xC758; co-expression &#xC5C6;&#xC774; orai3&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xD604;&#xC7AC; &#xC804;&#xC2DC; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB958; &#xBC0F; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xCE7C;&#xC298;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC;&#xCC28;&#xB840; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC548;&#xCABD; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;. Orai3&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Ca(2+) &#xD56D;&#xBAA9; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601;&#xC744; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8; &#xB610;&#xB294; 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xD734;&#xB300; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Orai1 3 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C;&#xC758; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xAD6C;&#xC870; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; orai3&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC81C; 3 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xC720;&#xB3C4; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. 2 &#xC9C0;&#xBA85;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; Orai3 &#xC804;&#xB958;&#xB294; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xAE30; &#xACF5; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBC18;&#xC601; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC870;&#xC808; Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xAC04; Orai1 &#xBC0F; orai3&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;.

Se evaluaron las corrientes inducidas por la expresi&#xF3;n de hom&#xF3;logos humanos de ORAI junto con STIM1 en c&#xE9;lulas renales embrionarias humanas. Cuando se co-expresada con STIM1, Orai1 indujo una gran Ca interiormente rectificar (2 +)-selectiva actual con Ca (2 +) inducida por inactivaci&#xF3;n lenta. Una mutaci&#xF3;n puntual de Orai1 (E106D) modific&#xF3; la selectividad i&#xF3;nica del Ca inducida (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC)-como la actual, mientras que la retenci&#xF3;n de un interior rectificar caracter&#xED;stica IV. Expresi&#xF3;n de la porci&#xF3;n C-terminal de STIM1 con Orai1 era suficiente para generar corriente CRAC sin agotamiento tienda. 2-APB activa una corriente relativamente grande y no selectivo en STIM1 Orai3 compa&#xF1;eros de las c&#xE9;lulas que expresan. 2-APB tambi&#xE9;n indujo Ca (2 +) en el flujo Orai3 c&#xE9;lulas que expresan el agotamiento de la tienda o sin co-expresi&#xF3;n de la STIM1. La corriente Orai3 inducido por 2-APB exhibi&#xF3; rectificaci&#xF3;n hacia afuera y hacia adentro un componente que representa una mixta de calcio y monovalente actual. Un mutante de poro de Orai3 inhibe la tienda que funciona con Ca (2 +) de entrada y no llevan corriente significativa en respuesta al agotamiento del almac&#xE9;n de uno o adici&#xF3;n de 2-APB. El an&#xE1;lisis de una serie de Orai1-3 quimeras revel&#xF3; el determinante estructural responsable de 2-APB-corriente inducida dentro de la secuencia de la segunda a tercera segmento transmembrana de Orai3. La corriente inducida por Orai3 2-APB puede reflejar un modo de tienda independiente de la activaci&#xF3;n de los canales CRAC que se abre un poro de cationes relativamente selectivo.

Modos dependientes de almacenamiento y regulaci&#xF3;n independiente de Ca2 + Lanzamiento activado por Ca2 + actividad en el canal de los Derechos Humanos y Orai1 Orai3

Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF; (&#x88C2;&#x7EB9;) &#x6E20;&#x9053;&#x57FA;&#x7840;&#x6301;&#x7EED;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65E0;&#x6570;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x4ECE;&#x89E3;&#x653E;&#x540E;&#x7ECF;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6270;&#x6280;&#x672F;&#x7B5B;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#xFF0C;&#x5171;&#x540C;&#x5F62;&#x6210;&#x6052;&#x6E29;&#x6052;&#x6E7F;&#x7A7A;&#x8C03;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;&#x4F34;&#x611F;&#x5B98; ER &#x7ECF;&#x5B58;&#x50A8;&#x6D88;&#x8017;&#x548C;&#x7269;&#x7406;&#x65B9;&#x5F0F;&#x5C06;&#x6B64;&#x4FE1;&#x606F;&#x4E2D;&#x7EE7;&#x7531;&#x4ECE;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x5230;&#x8DEF;&#x53E3;&#x6BD7;&#x90BB;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x3001; &#x8F6C;&#x8FD0;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#x4F53;&#x73B0;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x9499;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54;&#x3002;&#x4F34;&#x548C;&#x53E3;&#x8BED;&#xFF0C;co &#x6C89;&#x6DC0;&#x548C; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x4E92;&#x52A8;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7531;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053;&#x5F00;&#x653E;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x662F;&#x4E32;&#x8054;&#x4F53;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x5F62;&#x6210;&#x56F4;&#x7ED5;&#x4E2D;&#x592E;&#x7684;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x4E2D;&#x9884;&#x88C5;&#x548C;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF0C;&#x5176;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x5BF9;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EA4;&#x8054;&#x5728;&#x5B8C;&#x597D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x540E;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x4E0D;&#x4EA4;&#x8054;&#x3001; &#x53E3;&#x8BED;&#x4E3B;&#x8981;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5728;&#x9759;&#x606F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x53D8;&#x6027;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP)-&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x8868;&#x660E;&#x4E24;&#x6B65;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#xFF0C;&#x518D;&#x6B21;&#x7B26;&#x5408;&#x4E8C;&#x805A;&#x57FA;&#x5E95;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F34;&#x80DE;&#x6D46;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53E3;&#x8BED;&#x901A;&#x9053;&#x65E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x5B58;&#x50A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x6216;&#x6210; punctae &#x805A;&#x7C7B;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x4E0E;&#x5171;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x5927;&#x591A;&#x662F;&#x56DB;&#x6B65;&#x6F02;&#x767D;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408; tetrameric &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x7684;&#x53E3;&#x8BED;&#x6D3B;&#x52A8;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x4F34; C &#x603B;&#x7AD9;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECE;&#x800C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#xFF0C;dimerize&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x72B6;&#x6001;&#x6784;&#x6210; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x89E6;&#x53D1;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;

&#x5143;&#x4FE1;&#x9053;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F34;&#x53E3;&#x8BED;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Ca(2+)-release-activated Ca(2+) (CRAC) channels underlie sustained Ca(2+) signalling in lymphocytes and numerous other cells after Ca(2+) liberation from the endoplasmic reticulum (ER). RNA interference screening approaches identified two proteins, Stim and Orai, that together form the molecular basis for CRAC channel activity. Stim senses depletion of the ER Ca(2+) store and physically relays this information by translocating from the ER to junctions adjacent to the plasma membrane, and Orai embodies the pore of the plasma membrane calcium channel. A close interaction between Stim and Orai, identified by co-immunoprecipitation and by FÃ¶rster resonance energy transfer, is involved in the opening of the Ca(2+) channel formed by Orai subunits. Most ion channels are multimers of pore-forming subunits surrounding a central channel, which are preassembled in the ER and transported in their final stoichiometry to the plasma membrane. Here we show, by biochemical analysis after cross-linking in cell lysates and intact cells and by using non-denaturing gel electrophoresis without cross-linking, that Orai is predominantly a dimer in the plasma membrane under resting conditions. Moreover, single-molecule imaging of green fluorescent protein (GFP)-tagged Orai expressed in Xenopus oocytes showed predominantly two-step photobleaching, again consistent with a dimeric basal state. In contrast, co-expression of GFP-tagged Orai with the carboxy terminus of Stim as a cytosolic protein to activate the Orai channel without inducing Ca(2+) store depletion or clustering of Orai into punctae yielded mostly four-step photobleaching, consistent with a tetrameric stoichiometry of the active Orai channel. Interaction with the C terminus of Stim thus induces Orai dimers to dimerize, forming tetramers that constitute the Ca(2+)-selective pore. This represents a new mechanism in which assembly and activation of the functional ion channel are mediated by the same triggering molecule.

The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.

Ca (2 +)-release-activated Ca (2 +) (CRAC) des canaux sous-tendent soutenue Ca (2 +) de signalisation dans les lymphocytes et les cellules de nombreux autres, apr&#xE8;s Ca (2 +) la lib&#xE9;ration par le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE). Le d&#xE9;pistage se rapproche de l&#x26;#39;interf&#xE9;rence ARN a identifi&#xE9; deux prot&#xE9;ines, la STIM et Orai, qui, ensemble, forment la base mol&#xE9;culaire de l&#x26;#39;activit&#xE9; du canal CRAC. Stim sens appauvrissement de la Ca ER (2 +) et des relais magasin physiquement cette information par la translocation du RE vers jonctions adjacentes &#xE0; la membrane plasmique, et Orai incarne le pore du canal &#xE0; plasma de calcium membrane. Une interaction &#xE9;troite entre Stim et Orai, identifi&#xE9;s par co-immunopr&#xE9;cipitation et par le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance F&#xF6;rster, est impliqu&#xE9; dans l&#x26;#39;ouverture de la Ca (2 +) canal form&#xE9; par les sous-unit&#xE9;s Orai. La plupart des canaux ioniques sont des multim&#xE8;res de porog&#xE8;nes sous-unit&#xE9;s entourant un canal central, qui sont pr&#xE9;-assembl&#xE9;s dans le RE et transport&#xE9;s dans leur stoechiom&#xE9;trie finale &#xE0; la membrane plasmique. Ici, nous montrons, par analyse biochimique apr&#xE8;s r&#xE9;ticulation dans les lysats cellulaires et des cellules intactes et en utilisant l&#x26;#39;&#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel non d&#xE9;naturant sans r&#xE9;ticulation, qui est principalement Orai un dim&#xE8;re dans la membrane plasmique dans des conditions de repos. Par ailleurs, une seule mol&#xE9;cule d&#x26;#39;imagerie de la prot&#xE9;ine fluorescente verte (GFP)-&#xE9;tiquet&#xE9; Orai exprim&#xE9; dans des ovocytes de Xenopus a montr&#xE9; principalement en deux &#xE9;tapes photoblanchiment, encore une fois compatible avec un &#xE9;tat dim&#xE9;rique basale. En revanche, la co-expression de la GFP-tagged Orai avec l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; carboxy de Stim comme une prot&#xE9;ine cytosolique pour activer le canal Orai sans induire Ca (2 +) l&#x26;#39;&#xE9;puisement magasin ou le regroupement des Orai en punctae c&#xE9;d&#xE9; la plupart du temps en quatre &#xE9;tapes photoblanchiment, compatible avec une stoechiom&#xE9;trie t&#xE9;tram&#xE9;rique de la voie active Orai. Interaction avec l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de Stim induit donc les dim&#xE8;res Orai &#xE0; dim&#xE9;riser, des t&#xE9;tram&#xE8;res formant constituant le Ca (2 +)-s&#xE9;lective des pores. Cela repr&#xE9;sente un nouveau m&#xE9;canisme dans lequel l&#x26;#39;assemblage et l&#x26;#39;activation du canal ionique fonctionnelle sont m&#xE9;di&#xE9;s par la m&#xEA;me mol&#xE9;cule de d&#xE9;clenchement.

Le canal CRAC compose d&#x26;#39;un t&#xE9;tram&#xE8;re Form&#xE9; par Stim-induite dim&#xE9;risation des Orai dim&#xE8;res

Ca(2+) Freigabe-aktivierte Ca(2+) (CRAC) Kan&auml;le zugrunde liegen, nachhaltig Ca(2+) Signalisierung in Lymphozyten und zahlreiche andere Zellen nach Ca(2+) Befreiung aus dem Endoplasmatischen Retikulum (ER). RNA-Interferenz screening Ans&auml;tze identifiziert zwei Proteine, Stim und Orai, diese bilden zusammen die molekulare Grundlage f&uuml;r CRAC-Channel-Aktivit&auml;ten. STIM sp&uuml;rt Ersch&ouml;pfung des Speichers ER Ca(2+) und physisch leitet diese Informationen von translocating aus dem ER zu Kreuzungen angrenzend an die Plasmamembran und Orai verk&ouml;rpert die Poren von der Plasmamembran-Kalzium-Kanal. Eine enge Interaktion zwischen Stim und Orai, identifiziert durch co-Immunopr&auml;zipitation und F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer, engagiert sich bei der &Ouml;ffnung des Ca(2+) Kanals durch Orai Untereinheiten gebildet. Die meisten Ionenkan&auml;le sind Multimere Pore bilden Untereinheiten, die rund um einen zentralen Kanal, die in der Notaufnahme vormontiert und in ihrer endg&uuml;ltigen St&ouml;chiometrie um die Plasmamembran transportiert. Hier zeigen wir, durch biochemische Analysen nach Vernetzung im Zelllysate und intakten Zellen und mithilfe nicht-Denaturierung Gelelektrophorese ohne Vernetzung, dass Orai &uuml;berwiegend ein Dimer in der Plasmamembran ist unter Ruhe-Bedingungen. Dar&uuml;ber hinaus Einzelmolek&uuml;l-Bildgebung des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins (GFP)-markierte Orai ausgedr&uuml;ckt in Xenopus Oocytes zeigten &uuml;berwiegend zweistufigen Photobleaching, mit einem dimeren basale Zustand wieder konsistent. Im Gegensatz dazu hat Koexpression von GFP-getaggten Orai mit das Carboxy-Terminus der Stim als ein Cytosolisches Protein, Orai-Kanal zu aktivieren, ohne ausl&ouml;sende Ca(2+) Speicher Ersch&ouml;pfung oder clustering von Orai in Punctae meist vier Schritten Photobleaching, mit einem tetrameren St&ouml;chiometrie des aktiven Kanals Orai ergeben. Interaktion mit der Carboxyl-Terminus der Stim induziert somit Orai Dimere zu Mitgliedern bilden, bilden tetrameren, die die Ca(2+)-selektiven Poren bilden. Dies stellt einen neuen Mechanismus, der in dem Versammlung und der Aktivierung der funktionalen Ionenkanal durch das gleiche ausl&ouml;sende Molek&uuml;l vermittelt werden.

Der CRAC-Kanal besteht aus einem Tetramer von Stim-induzierte Dimerisierung des Orai Dimer gebildet.

CA(2+)-rilascio-attivato canali Ca(2+) (CRAC) sottostanno sostenuta Ca(2+) segnalazione nei linfociti e numerose altre cellule dopo la liberazione di Ca(2+) dal reticolo endoplasmatico (ER). RNA interference approcci di screening identificato due proteine, Stim e Orai, che insieme formano la base molecolare per attivit&agrave; del canale CRAC. Stim senses deplezione del negozio ER Ca(2+) e fisicamente inoltra questa informazione da translocating da ER per giunzioni adiacente alla membrana del plasma, e Orai incarna il poro del canale del calcio della membrana plasmatica. Una stretta interazione tra Stim e Orai, identificato da co-immunoprecipitazione e dal trasferimento di energia per risonanza, &egrave; coinvolto nell&#39;apertura del canale Ca(2+) formato da subunit&agrave; Orai. La maggior parte dei canali ionici sono multimeri di poro-formazione delle subunit&agrave; che circondano un canale centrale, che sono preassemblati in ER e trasportati nella loro stechiometria finale alla membrana del plasma. Qui vi mostriamo, da analisi biochimica dopo cross-linking in cellule intatte e lisati cellulari e tramite elettroforesi su gel non denaturante senza cross-linking, che Orai &egrave; principalmente un dimero nella membrana del plasma in condizioni di riposo. Inoltre, imaging di singola molecola della proteina fluorescente verde (GFP)-tagged Orai espressa in ovociti di Xenopus ha mostrato principalmente in due fasi photobleaching, ancora una volta coerente con uno stato basale dimerica. Al contrario, co-expression di Orai GFP-etichettato con il capolinea di carboxy della Stim come una proteina citosolica per attivare il canale Orai senza indurre deplezione negozio Ca(2+) o clustering di Orai in punctae ceduto principalmente quattro fasi photobleaching, coerente con una stechiometria tetramerica del canale attivo Orai. Interazione con il C-terminale di Stim induce cos&igrave; Orai dimeri a dimerize, formando tetrameri che costituiscono il poro Ca(2+)-selettivo. Questo rappresenta un nuovo meccanismo in cui montaggio e attivazione del canale ionico funzionali sono mediati dalla stessa molecola scatenante.

Il canale CRAC &egrave; costituito da un tetramero formato da Stim-indotta di dimerizzazione di dimeri Orai.

&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#xFF08;CRAC&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x89E3;&#x653E;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x306E;&#x5F8C;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x6301;&#x7D9A;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3002; RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x57FA;&#x76E4;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306B;&#x8FD1;&#x3065;&#x304F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x63A5;&#x5408;&#x306B;ER&#x304B;&#x3089;&#x8EE2;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;ER&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x3068;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30EC;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30DD;&#x30A2;&#x3092;&#x4F53;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3055;&#x3068;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x200B;&#x200B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3067;&#x8F38;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x3001;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5F80;&#x6765;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x67B6;&#x6A4B;&#x5F8C;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x975E;&#x5909;&#x6027;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;1&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;GFP&#xFF09;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x5F80;&#x6765;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x518D;&#x3073;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x9000;&#x8272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;punctae&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3084;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x5F80;&#x6765;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BE;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;GFP&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x5F80;&#x6765;&#x306E;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;4&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x5149;&#x9000;&#x8272;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x5F80;&#x6765;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3001;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x5F80;&#x6765;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x3058;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CRAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x5F80;&#x6765;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30E9;&#x30B9;&#x8A98;&#x8D77;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;

Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131; Ca(2+) (CRAC) &#xCC44;&#xB110; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; Ca(2+) endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (&#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;)&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xD574;&#xBC29; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558;&#xB294; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Stim &#xACE0; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;, &#xD568;&#xAED8; &#xC591;&#xC2DD; CRAC &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Stim ER Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C;&#xC758; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC811;&#xD569; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; translocating&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xB9B4;&#xB808;&#xC774; &#xBC0F; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xAD6C;&#xD604; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xCE7C;&#xC298; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAE30; &#xACF5;. Stim &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;, &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC624;&#xD504;&#xB2DD;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC740; multimers&#xC758; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; subunits &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; preassembled&#xC640; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; stoichiometry&#xC5D0; &#xC774;&#xC1A1; &#xC911;&#xC559; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC140; lysates&#xC640; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xCC28; &#xD55C; &#xD6C4; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0; &#xAD50;&#xAC00; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD734;&#xC2DD; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; dimer &#xC5C6;&#xC774; &#xBE44; &#xBCC0;&#xC131; &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;-&#xD0DC;&#xADF8; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; Xenopus oocytes &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB85C; 2 &#xB2E8;&#xACC4; photobleaching &#xB144; &#xB2E4;&#xC2DC; dimeric &#xAE30;&#xC800; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; GFP &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; co-expression Ca(2+) &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC18C;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; punctae&#xB85C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB9C1; &#xC5C6;&#xC774; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; cytosolic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; Stim carboxy &#xC885;&#xC810;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; 4 &#xB2E8;&#xACC4; photobleaching, tetrameric stoichiometry &#xD65C;&#xC131; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; Stim&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xAE30; &#xACF5;&#xC744; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; tetramers&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; dimerize&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC640; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAC19;&#xC740; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Stim &#xC720;&#xBC1C; &#xD560;&#xAE4C;&#xC694; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; dimerization&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xC131; &#xB41C; tetramer CRAC &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;.

Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) (CRAC) subyacen a los canales de Ca sostenida (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en los linfocitos y numerosas otras c&#xE9;lulas despu&#xE9;s de Ca (2 +) la liberaci&#xF3;n desde el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico (RE). Detecci&#xF3;n se acerca a la interferencia de ARN identificaron dos prote&#xED;nas, Stim y ORAI, que en conjunto forman la base molecular de la actividad del canal CRAC. Stim sentidos agotamiento de la sala de emergencia de Ca (2 +) y la tienda de rel&#xE9;s f&#xED;sicamente esta informaci&#xF3;n por la translocaci&#xF3;n de la sala de emergencia a los cruces adyacentes a la membrana plasm&#xE1;tica, y ORAI encarna el poro del canal de calcio de la membrana plasm&#xE1;tica. Una estrecha interacci&#xF3;n entre Stim y ORAI, identificado por la co-inmunoprecipitaci&#xF3;n y una transferencia de energ&#xED;a de resonancia de F&#xF6;rster, est&#xE1; involucrado en la apertura de la Ca (2 +) de canales formados por las subunidades ORAI. La mayor&#xED;a de los canales i&#xF3;nicos son los mult&#xED;meros de formadores de poros subunidades que rodean un canal central, que se preensamblan en el RE y transportado en su estequiometr&#xED;a final a la membrana plasm&#xE1;tica. Aqu&#xED; nos muestran, por el an&#xE1;lisis bioqu&#xED;mico despu&#xE9;s de la reticulaci&#xF3;n en lisados &#x200B;&#x200B;de c&#xE9;lulas y c&#xE9;lulas intactas y mediante el uso de no desnaturalizaci&#xF3;n electroforesis en gel sin reticulaci&#xF3;n, que es predominantemente ORAI un d&#xED;mero en la membrana plasm&#xE1;tica en condiciones de reposo. Por otra parte, una sola mol&#xE9;cula de im&#xE1;genes de la prote&#xED;na verde fluorescente (GFP)-etiquetados ORAI expresado en ovocitos de Xenopus mostr&#xF3; predominantemente en dos etapas photobleaching, una vez m&#xE1;s coherente con un estado basal dim&#xE9;rica. En contraste, la co-expresi&#xF3;n de GFP-etiquetados ORAI con el extremo carboxi de Stim como una prote&#xED;na citos&#xF3;lica para activar el canal ORAI sin inducir Ca (2 +) agotamiento tienda o agrupaci&#xF3;n de ORAI en punctae producido principalmente de cuatro pasos fotoblanqueo, consistente con una estequiometr&#xED;a tetram&#xE9;rica de la actividad del canal ORAI. La interacci&#xF3;n con el terminal C de Stim tanto induce d&#xED;meros ORAI a tetr&#xE1;meros dimerizarse, formadoras de que constituyen el Ca (2 +)-selectiva de los poros. Esto representa un nuevo mecanismo en el que est&#xE1;n mediadas montaje y la activaci&#xF3;n del canal i&#xF3;nico funcional por la misma mol&#xE9;cula de activaci&#xF3;n.

El canal CRAC Consta de un tetr&#xE1;mero formado por STIM inducida por dimerizaci&#xF3;n de d&#xED;meros ORAI

&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x7528;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x8C03;&#x67E5;&#x4EBA;&#x7C7B; Orai1 &#x548C; Orai3 &#x7684;&#x6E20;&#x9053;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F11;&#x606F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x548C;&#x56DB;&#x805A;&#x7269;&#x72B6;&#x6001;&#x65F6;&#x4E0E; C-STIM1 &#x8981;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165; coexpressed &#x4E3B;&#x8981;&#x68C0;&#x6D4B; Orai1&#x3002;Orai1 &#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F; tetrameric coexpressed &#x4E0E; STIM1 &#x548C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x540E;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x65F6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x56FA;&#x5B9A;&#x8FC5;&#x901F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7ECF;&#xFF0C;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x7684; STIM1 &#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x548C; STIM1/Orai1 puncta &#x5F62;&#x6210;&#x3001; &#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x5BFC;&#x81F4;&#x901A;&#x9053;&#x5904;&#x4E8E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#xFF0C;Orai1 &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x65F6;&#x4E0E;&#x4F11;&#x606F;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x751F;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; STIM1 coexpressed&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; Orai3&#xFF0C;Orai1&#xFF0C;&#x50CF;&#x662F;&#x4E8C;&#x805A;&#x5728;&#x4F11;&#x606F;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F; tetrameric C STIM1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x65F6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E8C;&#x805A; Orai3 &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x671F;&#x95F4;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5728;&#x5176; STIM1 &#x72EC;&#x7ACB;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0B;&#x7684;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7535;&#x5BFC; 2 aminoethyldiphenyl &#x787C;&#x9178; &#xFF08;2-&#x5EFA;&#x4E1A;) &#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; Orai1 &#x548C; Orai3 &#x6E20;&#x9053;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x8FC7;&#x6E21;&#x671F;&#x95F4;&#x5546;&#x5E97;&#x7ECF;&#x8425;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x4E8C;&#x805A;&#x7684;&#x975E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x5B54;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x7684; Orai3 &#x5F62;&#x5F0F;&#x5F62;&#x6210; Ca(2+) &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x3002;

&#x4E9A;&#x57FA;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6BD4;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684; Orai1 &#x548C; Orai3 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5C01;&#x95ED;&#x4E0E;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;

We applied single-molecule photobleaching to investigate the stoichiometry of human Orai1 and Orai3 channels tagged with eGFP and expressed in mammalian cells. Orai1 was detected predominantly as dimers under resting conditions and as tetramers when coexpressed with C-STIM1 to activate Ca(2+) influx. Orai1 was also found to be tetrameric when coexpressed with STIM1 and evaluated following fixation. We show that fixation rapidly causes release of Ca(2+), redistribution of STIM1 to the plasma membrane, and STIM1/Orai1 puncta formation, and may cause the channel to be in the activated state. Consistent with this possibility, Orai1 was found predominantly as a dimer when coexpressed with STIM1 in living cells under resting conditions. We further show that Orai3, like Orai1, is dimeric under resting conditions and is predominantly tetrameric when activated by C-STIM1. Interestingly, a dimeric Orai3 stoichiometry was found both before and during application of 2-aminoethyldiphenyl borate (2-APB) to activate a nonselective cation conductance in its STIM1-independent mode. We conclude that the human Orai1 and Orai3 channels undergo a dimer-to-tetramer transition to form a Ca(2+)-selective pore during store-operated activation and that Orai3 forms a dimeric nonselective cation pore upon activation by 2-APB.

Subunit stoichiometry of human Orai1 and Orai3 channels in closed and open states.

Nous avons appliqu&#xE9; une seule mol&#xE9;cule de photoblanchiment pour enqu&#xEA;ter sur la stoechiom&#xE9;trie de l&#x26;#39;homme et Orai1 Orai3 canaux tagg&#xE9;s avec eGFP et exprim&#xE9; dans les cellules de mammif&#xE8;res. Orai1 a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9; principalement sous forme de dim&#xE8;res dans des conditions de repos et en tant que co-exprim&#xE9; avec t&#xE9;tram&#xE8;res lorsque C-STIM1 pour activer Ca (2 +) afflux. Orai1 a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;galement constat&#xE9; que lorsque t&#xE9;tram&#xE9;rique co-exprim&#xE9; avec STIM1 et &#xE9;valu&#xE9;s suivant une fixation. Nous montrons que la fixation provoque rapidement la lib&#xE9;ration de Ca (2 +), la redistribution des STIM1 &#xE0; la membrane plasmique, et la formation STIM1/Orai1 puncta, et peut causer la cha&#xEE;ne &#xE0; &#xEA;tre dans l&#x26;#39;&#xE9;tat activ&#xE9;. Conform&#xE9;ment &#xE0; cette possibilit&#xE9;, a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; principalement Orai1 sous forme de dim&#xE8;re lorsque co-exprim&#xE9;es avec STIM1 dans les cellules vivantes dans des conditions de repos. Nous montrons en outre que Orai3, comme Orai1, est dim&#xE9;rique dans des conditions de repos et est principalement t&#xE9;tram&#xE9;rique lorsqu&#x26;#39;il est activ&#xE9; par C-STIM1. Fait int&#xE9;ressant, un dim&#xE8;re Orai3 stoechiom&#xE9;trie a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; &#xE0; la fois avant et pendant l&#x26;#39;application de la 2-aminoethyldiphenyl borate (2-APB) pour activer une conductance cationique non s&#xE9;lectif dans son mode de STIM1 ind&#xE9;pendant. Nous concluons que les Orai1 et Orai3 homme canaux subissent une transition de dim&#xE8;re-&#xE0;-t&#xE9;tram&#xE8;re pour former un Ca (2 +)-s&#xE9;lective des pores lors de la m&#xE9;morisation &#xE0; commande d&#x26;#39;activation et que Orai3 formes un pore cation dim&#xE8;re non s&#xE9;lectif lors de l&#x26;#39;activation par le 2-APB.

Stoechiom&#xE9;trie sous-unit&#xE9; de canaux Orai1 et Orai3 homme dans les &#xC9;tats ferm&#xE9;s et ouverts

Wir angewendet Einzelmolek&uuml;l-Photobleaching um die St&ouml;chiometrie der menschlichen Orai1 und Orai3 Kan&auml;le mit eGFP markiert und ausgedr&uuml;ckt in den S&auml;ugetier-Zellen zu untersuchen. Orai1 wurde &uuml;berwiegend als Dimere unter Ruhe-Bedingungen sowie tetrameren wenn mit C-STIM1, Ca(2+) Zustrom zu aktivieren coexpressed erkannt. Ferner ergab die Orai1 tetrameren beim coexpressed mit STIM1 und nach Fixierung ausgewertet werden. Wir zeigen diese Fixierung schnell verursacht die Freisetzung von Ca(2+), Umverteilung der STIM1 an der Plasmamembran und STIM1/Orai1 Puncta Bildung und kann dazu f&uuml;hren, dass den Kanal in den aktivierten Zustand sein. In &Uuml;bereinstimmung mit dieser M&ouml;glichkeit, wurde Orai1 &uuml;berwiegend als ein Dimer, wenn coexpressed mit STIM1 in lebenden Zellen unter Bedingungen Ruhe gefunden. Weiter zeigen wir, dass Orai3, wie Orai1, Dimere unter Ruhe-Bedingungen und &uuml;berwiegend tetrameren ist wenn durch C-STIM1 aktiviert. Interessanterweise ergab eine dimeren Orai3-St&ouml;chiometrie sowohl vor als auch w&auml;hrend der Anwendung von 2-Aminoethyldiphenyl-Borat (2-APB), eine unselektiv kation Leitwert in seinem STIM1-unabh&auml;ngig-Modus zu aktivieren. Wir schlie&szlig;en, dass die menschliche Orai1 und Orai3-Kan&auml;le einen Dimer-zu-Tetramer-&Uuml;bergang durchlaufen, um eine Ca(2+)-selektive Pore w&auml;hrend Aktivierung Shop-betrieben und die Orai3 Formen eine Dimere unselektive kation pore bei der Aktivierung von 2-APB bilden.

Untereinheit St&ouml;chiometrie des menschlichen Orai1 und Orai3 in geschlossenen und offenen Staaten.

Abbiamo applicato la singola molecola photobleaching per studiare la stechiometria dei canali Orai1 e Orai3 umani taggati con eGFP ed espresso in cellule di mammifero. Orai1 &egrave; stato rilevato prevalentemente come dimeri in condizioni di riposo e tetrameri quando coespressi con C-STIM1 per attivare Ca(2+) afflusso. Orai1 &egrave; stato anche trovato per essere tetramerica quando coespressi con STIM1 e valutata a seguito di fissazione. Mostriamo che fissazione rapidamente provoca il rilascio di Ca(2+), ridistribuzione di STIM1 alla membrana plasmatica e formazione puncta STIM1/Orai1 e pu&ograve; causare il canale di essere nello stato attivato. Coerente con questa possibilit&agrave;, Orai1 &egrave; stato trovato principalmente come un dimero quando coespressi con STIM1 in cellule viventi in condizioni di riposo. Mostriamo ulteriormente che Orai3, come Orai1, &egrave; dimerica sotto condizioni di riposo ed &egrave; prevalentemente tetramerica quando attivato dal C-STIM1. Interessante, una stechiometria Orai3 dimerica &egrave; stato trovato prima e durante l&#39;applicazione del borato 2-aminoethyldiphenyl (2-APB) per attivare una conduttanza catione non selettivi in modalit&agrave; indipendente STIM1. Possiamo concludere che i canali Orai1 e Orai3 umani subiscono una transizione di dimero-tetramero per formare un poro Ca(2+) selettivo durante attivazione negozio-operati e che Orai3 forma un catione non selettivo dimerica poro dopo l&#39;attivazione di 2-APB.

Stechiometria subunit&agrave; dei canali Orai1 e Orai3 umane negli stati aperti e chiusi.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;EGFP&#x3067;&#x30BF;&#x30B0;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;Orai1&#x3068;Orai3&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9000;&#x8272;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Orai1&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;C-STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Orai1&#x306F;&#x3001;STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x304C;&#x6025;&#x901F;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306B;STIM1&#x306E;&#x518D;&#x914D;&#x5E03;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;STIM1/Orai1&#x6D99;&#x70B9;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3001;Orai1&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;STIM1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;Orai3&#x306F;&#x3001;Orai1&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5B89;&#x9759;&#x6642;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;C-STIM1&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x4E3B;&#x306B;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;Orai3&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;STIM1&#x72EC;&#x7ACB;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x306E;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2 aminoethyldiphenyl&#x30DB;&#x30A6;&#x9178;&#xFF08;2-APB&#xFF09;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x524D;&#x3068;&#x4E2D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;Orai1&#x3068;Orai3&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;2-APB&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x6642;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x975E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7A7A;&#x5B54;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x4F5C;&#x52D5;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6642;&#x3068;Orai3&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09; - &#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x304B;&#x3089;&#x56DB;&#x91CF;&#x4F53;&#x9077;&#x79FB;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x958B;&#x3044;&#x305F;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;Orai1&#x3068;Orai3&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; photobleaching eGFP &#xD0DC;&#xADF8;&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04; Orai1 &#xBC0F; Orai3 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; stoichiometry&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC801;&#xC6A9;. Orai1 tetramers Ca(2+) &#xC720;&#xC785; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; C-stim1&#xC640; coexpressed &#xB54C;&#xC640; &#xD734;&#xC2DD; &#xC870;&#xAC74; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orai1 &#xB610;&#xD55C; tetrameric stim1&#xC640; coexpressed &#xBC0F; &#xACE0;&#xC815; &#xB2E4;&#xC74C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB54C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xACE0;&#xC815; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; Ca(2+), stim1&#xC758; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC0F; STIM1/Orai1 puncta &#xD615;&#xC131;, &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC;&#xC758; &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xC6D0;&#xC778;&#xACFC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, Orai1 &#xD734;&#xC2DD; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; stim1&#xC640; coexpressed &#xB54C; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; Orai3, Orai1, &#xAC19;&#xC740; &#xC870;&#xAC74; &#xD734;&#xC2DD; &#xC544;&#xB798; dimeric &#xC774;&#xBA70; &#xC8FC;&#xB85C; tetrameric C stim1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, dimeric Orai3 stoichiometry &#xC55E;&#xACFC; &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; STIM1-&#xB3C5;&#xB9BD; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; 2 aminoethyldiphenyl borate (2 &#xC9C0;&#xBA85;)&#xC758; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; Orai1 &#xBC0F; Orai3 &#xCC44;&#xB110; &#xC800;&#xC7A5;&#xC18C; &#xC6B4;&#xC601; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; dimeric &#xBE44;&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC591;&#xC774;&#xC628; 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xD558; &#xC5EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC; &#xAE30; &#xACF5; Orai3 &#xC591;&#xC2DD; &#xADF8; &#xC911; Ca(2+) &#xC120;&#xD0DD; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; dimer tetramer &#xC804;&#xD658; &#xBC1B;&#xC744; &#xACB0;&#xB860;.

&#xD3D0;&#xC1C4; &#xBC0F; &#xC624;&#xD508; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; orai1&#xC640; Orai3 &#xCC44;&#xB110; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; stoichiometry.

Se aplic&#xF3; una sola mol&#xE9;cula photobleaching para investigar la estequiometr&#xED;a de humanos y Orai1 Orai3 canales etiquetados con eGFP y expresado en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. Orai1 se detect&#xF3; predominantemente como d&#xED;meros bajo condiciones de reposo y como tetr&#xE1;meros cuando coexpressed con C-STIM1 para activar Ca (2 +) afluencia. Orai1 se encontr&#xF3; tambi&#xE9;n que cuando tetram&#xE9;rica coexpresan con STIM1 y evaluados posterior a la fijaci&#xF3;n. Se demuestra que la fijaci&#xF3;n r&#xE1;pida provoca la liberaci&#xF3;n de Ca (2 +), la redistribuci&#xF3;n de STIM1 a la membrana plasm&#xE1;tica, y STIM1/Orai1 formaci&#xF3;n puncta, y puede causar el canal para estar en el estado activado. De acuerdo con esta posibilidad, Orai1 se encuentra predominantemente como un d&#xED;mero cuando coexpressed con STIM1 en las c&#xE9;lulas vivas en condiciones de reposo. Adem&#xE1;s, muestran que Orai3, como Orai1, es dim&#xE9;rica en condiciones de reposo y es predominantemente tetram&#xE9;rica cuando se activa por C-STIM1. Curiosamente, un d&#xED;mero Orai3 estequiometr&#xED;a se encontr&#xF3; tanto antes como durante la aplicaci&#xF3;n de 2-aminoethyldiphenyl borato (2-APB) para activar una conductancia cati&#xF3;n no selectivo en su STIM1 independiente de modo. Se concluye que los humanos y Orai1 Orai3 canales experimentar una transici&#xF3;n d&#xED;mero a tetr&#xE1;mero para formar una Ca (2 +)-selectiva de los poros durante tienda operada por activaci&#xF3;n y que Orai3 formas d&#xED;meras un poro cati&#xF3;nico no selectivo a la activaci&#xF3;n por 2-APB.

Subunidad Estequiometr&#xED;a de Canales Orai1 Humanos y en los Estados Orai3 cerradas y abiertas

CD95 &#x6B7B;&#x4EA1;&#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x76D1;&#x89C6;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x8010;&#x53D7;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E3E;&#x8DB3;&#x8F7B;&#x91CD;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;CD95L &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; Fas &#x76F8;&#x5173;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D; (FADD) &#x62DB;&#x8058; CD95 &#x5BFC;&#x81F4;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6210;&#x4E3A;&#x805A;&#x5408;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 8 &#x548C;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-10&#x3002;&#x9AD8;&#x6548;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; CD95/FADD/&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742; &#xFF08;&#x5149;&#x76D8;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x8FBE;&#x6210;&#x5728;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; CD95L &#x7ECF;&#x8FC7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7ECF;&#x901A;&#x9053; Orai1 &#x548C;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x9A7B;&#x5730;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5206;&#x5B50; 1 colocalize &#x4E0E; CD95 &#x6210;&#x5FAE;&#x7C73;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x901A;&#x9053;&#x5F15;&#x8D77;&#x9499;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x6761;&#x76EE;&#x3002;Orai1 &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x6784;&#x9020; (Orai1E106A) &#x8868;&#x660E; CD95 &#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#xFF0C;&#x5BF9; Orai1 &#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x62DB;&#x8058;&#x5230;&#x5149;&#x76D8;&#x7684; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &beta; 2&#x3002;PKC&beta;2 &#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#x6682;&#x6001;&#x6301;&#x6709;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x9632;&#x6B62;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x548C;&#x51CB;&#x4EA1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x6807;&#x8BC6;&#x7ECF;&#x548C;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x77AC;&#x6001;&#x8D1F;&#x53CD;&#x9988;&#x56DE;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5F15;&#x5165; CD95 &#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x6B65;&#x9AA4;&#x4E2D;&#x7684;&#x6EDE;&#x540E;&#x671F;&#x7684; Orai1 &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;

CD95 &#x89E6;&#x53D1; Orai1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; Ca2 + &#x9879;&#x3001; &#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC) &beta; 2&#xFF0C;&#x62DB;&#x8058;&#x548C;&#x9632;&#x6B62;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x3002;

The death receptor CD95 plays a pivotal role in immune surveillance and immune tolerance. Binding of CD95L to CD95 leads to recruitment of the adaptor protein Fas-associated death domain protein (FADD), which in turn aggregates caspase-8 and caspase-10. Efficient formation of the CD95/FADD/caspase complex, known as the death-inducing signaling complex (DISC), culminates in the induction of apoptosis. We show that cells exposed to CD95L undergo a reorganization of the plasma membrane in which the Ca(2+) release-activated Ca(2+) channel Orai1 and the endoplasmic reticulum-resident activator stromal interaction molecule 1 colocalize with CD95 into a micrometer-sized cluster in which the channel elicits a polarized entry of calcium. Orai1 knockdown and expression of a dominant negative construct (Orai1E106A) reveal that on CD95 engagement, the Orai1-driven localized Ca(2+) influx is fundamental to recruiting the Ca(2+)-dependent protein kinase C (PKC) Î²2 to the DISC. PKCÎ²2 in turn transiently holds the complex in an inactive status, preventing caspase activation and transmission of the apoptotic signal. This study identifies a biological role of Ca(2+) and the Orai1 channel that drives a transient negative feedback loop, introducing a lag phase in the early steps of the CD95 signal. We suggest that these localized events provide a time of decision to prevent accidental cell death.

CD95 triggers Orai1-mediated localized Ca2+ entry, regulates recruitment of protein kinase C (PKC) Î²2, and prevents death-inducing signaling complex formation.

Le r&#xE9;cepteur CD95 mort joue un r&#xF4;le central dans la surveillance immunitaire et la tol&#xE9;rance immunitaire. La liaison de CD95L &#xE0; CD95 conduit &#xE0; recrutement de la prot&#xE9;ine adaptateur associ&#xE9; &#xE0; Fas prot&#xE9;ine de mort de domaine (FADD), qui &#xE0; son tour agr&#xE9;gats caspase-8 et la caspase-10. Formation efficace du complexe CD95/FADD/caspase, connu sous le nom de signalisation complexe mortif&#xE8;re (DISC), culmine dans l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;apoptose. Nous montrons que les cellules expos&#xE9;es &#xE0; CD95L objet d&#x26;#39;une r&#xE9;organisation de la membrane plasmique dans laquelle le Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration activ&#xE9; Ca (2 +) et le canal de Orai1 r&#xE9;ticulum endoplasmique-r&#xE9;sident mol&#xE9;cule activatrice interaction stroma une colocalis&#xE9;es avec CD95 dans un microm&#xE8;tre grappe taille dans lequel le canal provoque une entr&#xE9;e polaris&#xE9;e de calcium. Orai1 knockdown et d&#x26;#39;expression d&#x26;#39;une construction dominant n&#xE9;gatif (Orai1E106A) r&#xE9;v&#xE8;lent que le CD95 engagement, la Orai1 ax&#xE9;e localis&#xE9;e Ca (2 +) afflux est fondamentale pour le recrutement du Ca (2 +) d&#xE9;pendant de la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) &#x3B2;2 &#xE0; l&#x26;#39; DISQUE. PKC&#x3B2;2 &#xE0; son tour contient transitoirement les complexes dans un &#xE9;tat inactif, ce qui emp&#xEA;che l&#x26;#39;activation des caspases et la transmission du signal d&#x26;#39;apoptose. Cette &#xE9;tude identifie un r&#xF4;le biologique de Ca (2 +) et le canal Orai1 qui entra&#xEE;ne une boucle de r&#xE9;troaction n&#xE9;gative transitoire, l&#x26;#39;introduction d&#x26;#39;une phase de latence dans les &#xE9;tapes pr&#xE9;coces du signal CD95. Nous sugg&#xE9;rons que ces &#xE9;v&#xE9;nements localis&#xE9;s fournir un temps de la d&#xE9;cision d&#x26;#39;emp&#xEA;cher la mort cellulaire accidentelle.

CD95 d&#xE9;clencheurs Orai1 m&#xE9;diation localis&#xE9;e entr&#xE9;e de Ca2 +, r&#xE9;glemente le recrutement de la prot&#xE9;ine kinase C (PKC) &#x3B2;2, et emp&#xEA;che la mort de signalisation induisant la formation complexe

Der Tod-Rezeptor CD95 spielt eine zentrale Rolle im Immunsystem &Uuml;berwachung und immun-Toleranz. Binden von CD95L an CD95 f&uuml;hrt zur Rekrutierung von Adapterprotein Fas-assoziierte Tod Gebietsprotein (Triathlonmeisterschaft), wiederum die Aggregate Caspase-8 und Caspase-10. Effiziente Bildung der CD95/Triathlonmeisterschaft/Caspase komplexe, bekannt als der Tod-induzierende komplexen Signalisierung (DISC), gipfelt in der Induktion von Apoptose. Wir zeigen, dass Zellen ausgesetzt CD95L durchmachen eine Reorganisation der Plasmamembran in dem Kanal der Ca(2+) Freigabe aktiviert Ca(2+) Orai1 und das Endoplasmatisches Reticulum-Resident Aktivator stromal Interaktion Molek&uuml;l 1 colocalize mit CD95 einen Mikrometer Gr&ouml;&szlig;e Cluster, in dem der Kanal einen polarisierten Eintrag von Kalzium entlockt. Orai1-Niederschlag und Ausdruck eines dominierenden negativen Konstrukts (Orai1E106A) zeigen, dass auf CD95 Engagement, der Zustrom Orai1-gesteuerte lokalisierte Ca(2+) zur Einstellung der Ca(2+)-abh&auml;ngigen Proteinkinase C (PKC) &beta;2 zur Scheibe von grundlegender Bedeutung ist. PKC&beta;2 h&auml;lt die Anlage in einen inaktiven Status wiederum vor&uuml;bergehend Caspase Aktivierung und &Uuml;bertragung des apoptotischen Signals zu verhindern. Diese Studie identifiziert eine biologische Rolle des Ca(2+) und der Orai1-Kanal, der eine vor&uuml;bergehende negativen R&uuml;ckkopplung, Einf&uuml;hrung einer Verz&ouml;gerung-Phase in den fr&uuml;hen Stufen des CD95-Signal steuert. Wir schlagen vor, da&szlig; diese lokalisierte Ereignisse eine Zeit der Entscheidung stellen um versehentliche Zelltod zu verhindern.

CD95 l&ouml;st Orai1-vermittelte lokalisierten Ca2 + Eintrag, regelt die Rekrutierung von Proteinkinase C (PKC) &szlig;2 und Tod-induzierende Signalling Komplexbildung verhindert.

Il recettore di morte CD95 svolge un ruolo cruciale nella sorveglianza immunitaria e tolleranza immunologica. Associazione di CD95L a CD95 conduce al reclutamento della proteina adattatore proteina Fas-associated death (FADD), che a sua volta aggregati caspase-8 e caspasi-10. Efficiente formazione di CD95/FADD/caspase complesso, noto come la morte-indurre segnali complessi (disco), culmina nell&#39;induzione di apoptosi. Mostriamo che le cellule esposte a CD95L subiscono una riorganizzazione della membrana del plasma in cui il Ca(2+) attivato dal rilascio Ca(2+) canale Orai1 e la molecola di interazione stromale residente in reticolo endoplasmatico attivatore 1 colocalize con CD95 in un cluster di dimensioni micrometriche in cui il canale suscita una voce polarizzata di calcio. Orai1 atterramento e l&#39;espressione di un costrutto negativo dominante (Orai1E106A) rivelano che sull&#39;impegno di CD95, l&#39;afflusso di Ca(2+) localizzata Orai1-driven &egrave; fondamentale per la chinasi di proteina Ca(2+)-dipendente &beta;2 C (PKC) per il disco di reclutamento. PKC&beta;2 a sua volta transitoriamente detiene il complesso in uno stato inattivo, impedendo l&#39;attivazione di caspase e trasmissione del segnale apoptotico. Questo studio identifica un ruolo biologico di Ca(2+) e il canale Orai1 che spinge un ciclo di feedback negativo transitoria, introducendo una fase di ritardo nei primi passi del segnale CD95. Suggeriamo che questi eventi localizzati forniscono un tempo di decisione per prevenire la morte cellulare accidentale.

CD95 innesca Orai1-mediata localizzata Ca2 + voce, regola il reclutamento della chinasi di proteina C (PKC) &beta;2 e previene la formazione di complessi segnalazione induttori di morte.

&#x6B7B;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;CD95&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x76E3;&#x8996;&#x3084;&#x514D;&#x75AB;&#x5BDB;&#x5BB9;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x96C6;&#x7D04;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-8&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-10&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Fas&#x95A2;&#x9023;&#x30C7;&#x30B9;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;FADD&#xFF09;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306B;CD95&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;CD95L&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3002;&#x6B7B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;DISC&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;CD95/FADD/caspase&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3067;&#x6700;&#x9AD8;&#x6F6E;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;CD95L&#x306B;&#x66DD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;Orai1&#x3068;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x5E38;&#x99D0;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x9593;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;1&#x306B;CD95&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x504F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x3002;&#x30C9;&#x30DF;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x69CB;&#x7BC9;&#x7269;&#xFF08;Orai1E106A&#xFF09;&#x306E;Orai1&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x5F0F;&#xFF08;2 +&#xFF09;CD95&#x5A5A;&#x7D04;&#x3001;Orai1&#x30C9;&#x30EA;&#x30D6;&#x30F3;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x306F;Ca&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x306E;&#x3B2;2 DISC&#x3002;&#x9806;&#x756A;&#x306B;PKC&#x3B2;2&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;CD95&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x9045;&#x308C;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x3001;Ca&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3068;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x8CA0;&#x5E30;&#x9084;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;Orai1&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5076;&#x767A;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x610F;&#x601D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD95&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;Orai1&#x5A92;&#x4ECB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Ca2 +&#x6D41;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x3B2;2&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;&#x6B7B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;

&#xC8FD;&#xC74C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; CD95 &#xBA74;&#xC5ED; &#xAC10;&#xC2DC; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAD00;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. CD95 &#xB9AC;&#xB4DC; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Fas &#xAD00;&#xB828; &#xC8FD;&#xC74C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (FADD)&#xC758; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; cd95l&#xC758;&#xB97C; &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC9D1;&#xACC4; caspase 8 &#xBC0F; caspase-10. CD95/FADD/caspase &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xC131;&#xC740; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; (&#xB514;&#xC2A4;&#xD06C;)&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC774; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; cd95l&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xC140; &#xBC1B; &#xB2E4;&#xB294; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; Ca(2+) &#xCC44;&#xB110; Orai1 &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC758; &#xAC1C;&#xD3B8; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; &#xC0C1;&#xC8FC; &#xD65C;&#xC131;&#xAE30; stromal &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBD84;&#xC790; 1 &#xCC44;&#xB110; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xD3B8;&#xAD11;&#xB41C; &#xC5D4;&#xD2B8;&#xB9AC;&#xB97C; elicits &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xBBF8;&#xD130; &#xD06C;&#xAE30;&#xC758; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xB85C; cd95&#xC640; colocalize &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Orai1 &#xCD5C;&#xC800;&#xC640; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xBB38; (Orai1E106A)&#xC758; &#xD45C;&#xD604; CD95 &#xC57D;&#xD63C;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; Ca(2+) Orai1 &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC720;&#xC785; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C;&#xC5D0; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinase C (PKC) &beta;2 &#xBAA8;&#xC9D1; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC740; &#xACF5;&#xAC1C;. PKC&beta;2 &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; transiently &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC; caspase &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; apoptotic &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; Ca(2+) &#xBC0F; Orai1 &#xCC44;&#xB110;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; CD95 &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB798;&#xADF8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31; &#xB8E8;&#xD504; &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC2E4;&#xC218;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CD95 Orai1 &#xC911;&#xC7AC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C; Ca2 + &#xD56D;&#xBAA9;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &beta;2&#xC758; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xBC29;&#xC9C0;.

La muerte del receptor CD95 juega un papel fundamental en la vigilancia inmune y la tolerancia inmunol&#xF3;gica. La uni&#xF3;n de CD95L CD95 que conduce a la contrataci&#xF3;n de la prote&#xED;na Fas adaptador de la prote&#xED;na asociada a la muerte de dominio (FADD), que a su vez, los agregados de la caspasa-8 y la caspasa-10. La formaci&#xF3;n eficiente del complejo CD95/FADD/caspase, conocido como el complejo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n induce a la muerte (DISC), culmina en la inducci&#xF3;n de la apoptosis. Se demuestra que las c&#xE9;lulas expuestas a CD95L someterse a una reorganizaci&#xF3;n de la membrana plasm&#xE1;tica en la que el Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n activados por Ca (2 +) y el canal de Orai1 ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico residente activador de mol&#xE9;cula de la interacci&#xF3;n del estroma 1 colocalize con CD95 en un micr&#xF3;metro- racimo de tama&#xF1;o en el que el canal provoca una entrada polarizada de calcio. Orai1 ca&#xED;da y la expresi&#xF3;n de un constructo dominante negativo (Orai1E106A) revelan que el CD95 compromiso, el Orai1 impulsada localizada Ca (2 +) flujo es fundamental para la contrataci&#xF3;n del Ca (2 +)-dependiente de la prote&#xED;na quinasa C (PKC) &#x3B2;2 a la DISC. PKC&#x3B2;2 transitoriamente a su vez tiene el complejo en un estado inactivo, la prevenci&#xF3;n de activaci&#xF3;n de las caspasas y la transmisi&#xF3;n de la se&#xF1;al apopt&#xF3;tica. Este estudio identifica un papel biol&#xF3;gico de Ca (2 +) y el canal Orai1 que impulsa un bucle de retroalimentaci&#xF3;n negativa transitoria, la introducci&#xF3;n de una fase de latencia en los primeros pasos de la se&#xF1;al de CD95. Se sugiere que estos eventos localizados ofrecer un momento de decisi&#xF3;n para evitar la muerte celular accidental.

CD95 desencadenantes Orai1 mediada localizada entrada de Ca2 +, regula el reclutamiento de la prote&#xED;na quinasa C (PKC) &#x3B2;2, y previene la muerte de se&#xF1;alizaci&#xF3;n para inducir formaci&#xF3;n de complejos

Aubin Penna

Department of Physiology and Biophysics

University of California, Irvine (UCI)

Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

Aubin Penna

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Physiology and Biophysics

University of California, Irvine (UCI)

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Department of Physiology and Biophysics