Method Article
We present a protocol for the application of Brillouin light scattering spectroscopy to elastin and trypsin-purified type I collagen fibers of the extracellular matrix to extract their full elastic properties.
Brillouin spectroscopy is an emerging technique in the biomedical field. It probes the mechanical properties of a sample through the interaction of visible light with thermally induced acoustic waves or phonons propagating at a speed of a few km/sec. Information on the elasticity and structure of the material is obtained in a nondestructive contactless manner, hence opening the way to in vivo applications and potential diagnosis of pathology. This work describes the application of Brillouin spectroscopy to the study of biomechanics in elastin and trypsin-digested type I collagen fibers of the extracellular matrix. Fibrous proteins of the extracellular matrix are the building blocks of biological tissues and investigating their mechanical and physical behavior is key to establishing structure-function relationships in normal tissues and the changes which occur in disease. The procedures of sample preparation followed by measurement of Brillouin spectra using a reflective substrate are presented together with details of the optical system and methods of spectral data analysis.
브릴 루앙 광 산란 (BLS) 효과는 그것은 재료의 열적으로 활성화 음향 포논에 의해 가시 광선의 비탄성 산란으로 구성되어 1922 년 1 레옹 브릴 리언에 의해 발견됐다. 고체 물리학에서, 음향 포논은 격자의 모든 원자의 일관된 진동이다. 격자 내의 원자 개의 교번 종류의 일차원 체인 IR 흡수 및 라만 산란 (도 1)에 의해 프로브 BLS 계시 음향 포논, 광학 포논의 차이를 나타내는 단순 모델이다. 광학 포논은 원자의 반대 위상 운동이다 동안 음향 포논는 (길이 음향 포논) 또는 전파 방향 (횡 음향 포논)에 수직 전파 방향을 따라 변위 사슬 원자의 위상 이동되어 진동 전기 쌍극자 모멘트를 생산하는 (세로 또는 가로 모드).
BLS의 분광SCOPY은 1920 년대 이후 분석 과학 분야에서 사용되어왔다; 하지만, 1980 년대 이후에만 높은 콘트라스트 측정은 탠덤 멀티 패브리 페롯 분광계를 사용하여 수 있었다. 그 이후로, 2-4 및 자성 재료 (광자-인 Magnon의 상호 작용을 통해) (광자 - 포논 상호 작용이 이용된다) 응집 물질의 분석 애플리케이션을위한 BLS의 발전의 증가 (5)가 초래되고있다. 생물 의학 응용 6-8에 정액 작품 여기서 적용된 하나의 탄성 텐서의 완전한 설명을 달성하기 위해 혈소판 형으로 반사 기판을 사용하여 이전에 9 기재된 것을 포함하여, 다양한 방법의 발전 경로를 마련했다 샘플.
본 연구에서, 우리는 섬유 단백질 엘라스틴 결합 조직의 세포 외 기질의 기본 구성 요소에 BLS 분광법을 적용하고 I-콜라겐을 입력합니다. 티I 콜라겐 YPE하는 등의 힘줄과 같은 조직에서 기본적으로 단단한 섬유를 형성하기 위해 광범위한 교차 연결 측 방향 및 세로 방향으로 조립 강성, 삼중 나선 분자이다. 콜라겐 네트워크는 종종 엘라스틴의 네트워크와, 비정상적 엔트로피와 환경과의 소수성 상호 작용의 조합을 통해 장거리 탄성을 생성 및 폐 및 피부와 같은 조직의 기능에 필수적인 단백질을 공존. 모두 섬유가 현재 연구 육방 모델을 이용하여 모델링된다. (9) 1 부에서는, 동물 조직으로부터 섬유를 추출하고, 분광 측정을위한 샘플을 제조하는 프로토콜을 기술한다. Part 2에서는 브릴 루앙 장치를 설정하고 섬유로부터 스펙트럼을 획득하기위한 절차가 제공된다. 3 부 내부에 포함 된 관련 기계적 정보를 추출하는 브릴 루앙 스펙트럼에 적용된 데이터 분석의 상세를 제공한다. 그런 다음, 대표적인 결과 제시 및 discusse된다디.
주의 : 생물 안전 프로토콜을 사용하기 전에 모든 관련 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하십시오. 이 실험에 사용 된 레이저 클래스 3B 레이저이다 시스템의 안전한 사용을위한 현지 법률 준수가 필요합니다. 개인 보호 장비 (안전 고글)의 사용을 포함 레이저 분광 측정을 수행 할 때 모든 적절한 안전 방법을 사용하십시오.
꼬리 힘줄은 EU 규정 2,009분의 1,099 따라와 동물의 복지 (도축 또는 살인) 1995 년 소 목덜미 인대가 로컬 도살장에서 얻었다 규정에 다른 목적을 위해 안락사 7~8주 된 위 스타 쥐에서 얻었다.
샘플 섬유의 제조 1
주 : 세포 외 기질 단백질 섬유는 다양한 방법을 사용하여, 다양한 조직으로부터 추출 될 수있다. 프로토콜은 널리 적용 절차에 따라 정제 하였다.
2. 브릴 루앙 실험 설정 및 섬유 스펙트럼 획득
브릴 루앙 스펙트럼 3. 분석
주 : 루앙 피크 맞는 다양한 기능 분석을 사용하여 수행 될 수있다. 이 점탄성 미디어 감쇠 음향 모드에서 발생하는 피크에 대한 유효한 모델이 같이 감쇠 조화 진동자 (DHO) 함수 4,13가 선정되었다.
이러한 실험 (도 SI-1A)에 사용되는 브릴 루앙 분광 장치는 이전에 설명 하였다.도 9는 단일 모드 샘플 76 mW의 출력 전력과 532 nm의 고체 레이저를 사용한다. 20cm 색지움 렌즈 시료에 레이저 광을 집중 및 산란 형상의 샘플로부터 산란 광을 수집한다. 탠덤 멀티 패브리 - 페로 간섭 현상은 저잡음 광 다이오드 검출기에 의해 검출되는 산란 광을 필터링하기 위해 사용된다. 이 방법은 매우 탈론의 자기 정렬 압전 스캐닝을 통해 높은 콘트라스트 (약 120dB)과 안정성을 제공합니다. 편광판 및 분석기는 입사와 산란광의 편광을 선택하기 위해 도입된다. 스펙트럼은 일반적으로 O 편광자는 입사광의 편광을 수직 (V) 방향으로 선택적으로 수직 (V)을 선택 분석기를 선택 상태로 유지 고정하여 얻어진산란 된 빛의 편광의 연구 수평 (H) 방향. 이 구성에서, 종 방향 및 횡 방향의 음향 모드가 각각 검출된다.
전형적인 브릴 리언 스펙트럼 인해 탄성 산란 샘플의 역학 특성이다 동등 피크 시프트 또는 브릴 루앙 이중선, 하나 이상의 세트에 강한 중심 피크를 갖는다. 이러한 측정에서는, 산란광은 표면 (PS 모드)에 평행하게 이동하는 벌크 포논로부터 샘플 - 기판 계면에서의 입사광의 반사 후, 샘플을 준 직교 주행 벌크 포논에서 모두 기인 할 수있다. (9)
도 2는 30 GHz의 자유 스펙트럼 범위, 0.2 GHz의 해상도 VV 편광 얻어진 건조한 수화 된 트립신 분해 콜라겐 섬유의 BLS 스펙트럼을 나타내고, 약 10 분 콜렉션 시간스펙트럼 당. 각 스펙트럼을 θ 회전의 특정 각도에 대응 (그림 SI-1C). 의 PS 모드 (9.85 ± 0.03) GHz의 (그림 2A)에있을 동안 θ = 0 °에서 건조 콜라겐 섬유에서, 세로 모드 (18.92 ± 0.02) GHz에서 벌크 피크에 상승을 제공합니다. 같은 범위에서 θ 변경에 따라 낮은 주파수에 PS 피크 이동 θ가 90 ° (포논 반경 방향을 프로빙) 0 ° (섬유의 축 방향을 프로빙 포논)에서 간다, 벌크 피크 반면 약간 붉은 변화 (포논은 회전에 걸쳐 준 반경 방향을 프로빙). 젖은 콜라겐 섬유에 의한 종 방향 포논에 두 개의 피크는 약 10.5 GHz에서 대량 최대 4.9 GHz의 (그림 2B)에서 PS 피크와 실험을 통해 본질적으로 변경되지 않습니다. 이것은 18.92의 데이터에 대해 첨두 주파수의 80 내지 100 % 감소 (나타내고및 9.85 GHz의 각각), 따라서 수화에 의한 재료의 강성의. 수화 콜라겐의 벌크 및 PS 모드는 탄성 정수 물에 의해 연주 지배적 인 역할과, 물과 섬유 공헌의 조합 것을 제안, 순수의 모드에 주파수에 가까운 거짓말을합니다.
도 3은 θ = VH 편광을 30 °에서 측정 된 드라이 트립신 분해 콜라겐 섬유의 스펙트럼을 도시; VV 편광의 누설은 PS 및 대량 피크가 여전히 관찰 할 수 있습니다. 가로 모드 (4.1 ± 0.2) GHz의 (θ = 0 °) 0 ° ~ 90 °에서 θ 변화에 따라 약간 블루 변화에서 피크를 차지하고있다. 가로와 PS 봉우리 모두를위한 맞춤 결과도 표시됩니다. 피크 파라미터 추출 및 탄성파 속도는 V의 L = V의 λ / √2로 도출 된 V 곡선 맞춤 피크 분석 및 λ에 의해 얻어진 모드의 주파수가 여기 파장 532 나노 미터이다. 즉,이 구조에서, 물질의 굴절률의 지식 음향 모드 속도를 얻기 위해 필요하지 않습니다 (산란 기하학으로 인해, Q, S = 2 K 난 (Φ) 죄도 SI-1B, c), 따라서 이 방법은 특히 유리하게.
도 4는 각도 θ의 함수로서 종횡 모드로부터 획득 된 음향 파의 속도 (PS 및 T 피크)의 플롯이다 . 아래의 식 A1 및 A2 - - 육각형 대칭 탄성체 (7)의 모델에 맞추기 분석은 건조 트립신 소화 타입의 탄성 텐서의 다섯 가지 구성 요소 나 섬유 (표 1) 콜라겐을 제공합니다.
종 방향 및 횡 탄성파 속도 9 주어진다 =
(A1)
(A2)
ρ는 물질의 밀도, C 11, C 33, 44 C와 C (13)이고 육각형 대칭으로 시스템의 특성을 다섯 탄성 상수의 네 가지입니다. 다섯 번째 정수는 12 C를 12 ~ C 11 C 근사 관계로부터 유도 될 수있다 -. C 2 44 7
계수는 이전에 정제되지 않은 콜라겐 fibe에서 얻은 것과 유사하다RS. 9 두드러진 차이점은 탄성 계수의 E ǁ와 E의 유사한 값으로 반영 13 C 계수 발생 정제 된 콜라겐 (약 7.2 및 7.7 GPA).
도 5는 습윤 대 θ 콜라겐 길이 음속의 플롯 . 이 경우, 주파수의주기적인 변화는 오차 내 등속주는 관찰되지 않는다. (6)는 θ = 0 °에서 측정하고 건조한 수화 엘라스틴 섬유의 스펙트럼을 나타낸다. 가로 모드는 이러한 샘플 검출되지 않았다. 건조 엘라스틴에서 벌크 피크가 8.2 기가 헤르쯔 (9) (13 건조 콜라겐의 대응하는 피크보다도 낮은 20 %)의 PS 모드 동안 16.8 GHz에서 일어난다. 젖은 엘라스틴 섬유 벌크 P 제시eak에서 (12.30 ± 0.01) GHz의 (건조 엘라스틴의 대부분 피크 이상의 주파수에서 37 % 이하). 습식 엘라스틴의 PS 모드가 있기 때문에 그 주파수에서의 탄성 피크의 강렬한 꼬리의 스펙트럼에서 명백하지 않다. 한편, 약 7.5 GHz에서 피크가 대량의 물에 기인한다.
그림 7은 θ에 건조 엘라스틴 섬유의 탄성파 속도의 의존성을 보여줍니다. 이들 데이터로부터, 탄성 텐서 성분 (기계적 계수)는 습식 콜라겐으로서 (표 1). (9)을 수득하고, 수화 엘라스틴 섬유의 기계적 모듈러스 등방성의 증거가있다. 이러한 결과는 브릴 루앙 분광법은 강성, 구성 및 재료의 구조적 측면에 대한 관련 정보를 제공하는 방법을 나타냅니다.
인터넷gure 1. 음향 및 원자 일차원 체인 광학 포논. 일차원 이원자 체인 음향 광학 진동 개략도. 원자 질량 m (1)과 m (2)를 가지고 교대. 화살표는 원자의 변위를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
트립신 정제 형태의 그림 2 브릴 루앙 스펙트럼 나는 쥐의 꼬리 건에서 섬유 콜라겐. (A) 건조 섬유와 (B)의 스펙트럼은도에서, 섬유 축 θ에 다른 각도에서 VV 측정에서 섬유를 수화. 순수한 증류수의 스펙트럼도 도시되어있다. 스펙트럼은 벌크 피크의 강도 (높이)로 표준화 하였다. 라벨 B 및 PS 각각 벌크 및 병렬 - 표면 형태에 관련된 피크를 나타낸다. 오차 막대는 표준 오류 (카운트 수의 제곱근)를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
건조 트립신 정제 형태의 그림 3. 브릴 리언 스펙트럼 나는 쥐의 꼬리 건에서 섬유 콜라겐. 스펙트럼을 θ에서 VH 측정에서 = 30 °. 라벨 T, PS 및 B는 각각, 병렬로 표면 및 벌크 모드를 횡단 관련 피크를 나타낸다. 모두 T와 PS 모드에 대한 감쇠 조화 진동자 (DHO) 모델을 사용하여 착용감 분석 결과도 표시됩니다. 오차 막대는 표준 오류 (카운트 수의 제곱근)를 나타냅니다./54648fig3large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 섬유 축 각도 대 건조 트립신 정제 콜라겐 탄성파 속도 4. 플롯. 브릴 루앙 피크 적합 분석으로부터 유도 건조 콜라겐 섬유의 종 방향 및 횡 탄성파 속도. 데이터는 육각형 대칭 탄성체의 모델에 장착되어 있습니다. 레드 라인 : 식 A1 (R 2 = 0.99); 블루 라인 : 식 A2 (R = 0.36 2). 오차 막대는 브릴 루앙 스펙트럼의 끼움 개의 Levenberg-마르카토 비선형 최소 제곱 후 공분산 행렬의 대각선 요소의 제곱근에서 얻은 표준 오차를 나타냅니다. 더 큰 versi을 보려면 여기를 클릭하십시오 이 그림의에.
섬유 축 각도 VS 습식 트립신 정제 콜라겐 길이 음속도 5의 플롯. 브릴 루앙 피크 적합 분석으로부터 유도 수화 된 콜라겐 섬유의 종 음속. 도시 된 라인은 눈에 대한 가이드는이 범위에서 음속의 평균 값을 제공한다. 오차 막대는 브릴 루앙 스펙트럼의 끼움 개의 Levenberg-마르카토 비선형 최소 제곱 후 공분산 행렬의 대각선 요소의 제곱근에서 얻은 표준 오차를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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소 목덜미 인대에서 엘라스틴 섬유의 그림 6. 브릴 루앙 스펙트럼. θ에서 건조하고 수화 섬유의 스펙트럼 = 0 °. 스펙트럼은 벌크 피크의 강도 (높이)로 표준화 하였다. 라벨 B 및 PS 각각 벌크 및 병렬 - 표면 형태에 관련된 피크를 나타낸다. B F와 B W는 각각 섬유와 물을 대량 봉우리를 참조하십시오. 오차 막대는 표준 오류 (카운트 수의 제곱근)를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
섬유 축 각도 대 건조 엘라스틴의 길이 탄성파 속도도 7 플롯. 건조 엘라스틴 FIB의 종 음속어 브릴 루앙 피크의 맞춤 분석에서 파생. 데이터는 육각형 대칭 탄성체의 모델에 장착되어 있습니다. 레드 라인 : 식 A1 9 (R = 0.74 2). 오차 막대는 브릴 루앙 스펙트럼의 끼움 개의 Levenberg-마르카토 비선형 최소 제곱 후 공분산 행렬의 대각선 요소의 제곱근에서 얻은 표준 오차를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 SI-1. 브릴 루앙 설정 및 BLS 산란 기하학의 회로도. (A)가 고체 레이저에 의해 방출되는 입사광 아크로매틱 렌즈를 통해 샘플로 전송된다. 벌크 음향 포논에 의해 REFL의 결과들에 의해 산란 된 빛샘플과 접촉하는 기판 표면에서, 광 ection는 광전자 증 배관에 의해 탠덤 멀티 패브리 - 페로 간섭 현상에 의해 여과하고, 검출 렌즈에 의해 수집된다. FP1과 FP2는 탠덤 설정을 구성하는 두 개의 간섭계를 나타냅니다. 편광자는 입사광의 편광을 선택하고, 분석기가 산란되는 빛의 편광을 선택하는 데 사용된다. 반사 형 실리콘 기판의 표면과 접촉하는 시험편 (B) BLS 형상. 유리 슬라이드 (도시하지 않음)를 밀봉 함 시험편 위에 위치되고 부드럽게 압력은 상기 기판의 모서리에 패드를 통해인가된다. 입사광 (케이 i)는 렌즈를 통해 공기 샘플 인터페이스 (K 'I)에서 굴절되고, 샘플 기판 계면에 집중 전달한다. 같은 렌즈에 의해 수집 된 산란광 대량 포논 모두와의 상호 작용의 결과 (Q (의 케이)b) 시료 (Q (S)의 해당 이동 PS). . 빛의 방향 및 표면에 대한 법선 사이의 각도 Φ 및 Φ '로 표시되는 (C) 샘플 및 채택 된 좌표 시스템의 개략도; Z는 섬유의 방향에 대해 특별한 평행 한 축선을 정의한다. 각도 θ 및 α는 z는 각각시킴으로써 행한다에 B 포논의 Q의 방향 및 q 사이의 것들이다의 'K, K, S, 난'을, 케이 난 케이 :. 사건의 파수와 빛 산란, Q의 B, Q 의 각각 벌크 및 PS 모드의 웨이브 벡터. (심판 9.에서 재판) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
표 탄성파 속도의 맞춤 분석에서 파생 1. 탄성 텐서 계수 나는 섬유 콜라겐 건조 트립신 정제 형태의 탄성 텐서 계수 (. 이 작업)과 엘라스틴 섬유 (REF 9).견본 | 탄성 계수 (GPA) | |
트립신 분해 콜라겐 | C (33) | 18.7 ± 0.1 |
C (11) | 14.4 ± 0.2 | |
C (44) | 3.4 ± 0.1 | |
C (12) | 7.2 ± 0.2 | |
C (13) | 11.2 ± 0.3 | |
엘라스틴 | C (33) | 11.5 ± 0.2 |
C (11) | 10.4 ± 0.1 | |
C (44) | 1.9 ± 0.2 | |
C (12) | 6.6 ± 0.2 | |
C (13) | 6.8 ± 0.3 |
브릴 루앙 산란 분광법 단백질 섬유의 탄성 텐서의 각 구성 요소가 상세히 전례 특징으로 할 수있는 유일한 수단이다. 또한, 측정은 미세 규모에 이루어질 수함으로써 복잡성의 중요성 기계적, 아마도 기능을 이해하기 처음 우릴 수 생물학적 구조의 마이크로 스케일 역학에 신규 한 통찰력을 우리에게 제공 할 매트릭스 구조와 생화학에 최근 공개 된.
이 기술은 GHz 주파수 범위에서, 기계적 성질을 측정한다. 이 도메인 구조 생체 고분자에 대한 이전 탐험 적이 그것은 모두 상승 탄력의 분자 메커니즘에 대한 근본적인 질문에 대답 할 수있는 수단을 제공한다.
우리는 동물 조직에서 콜라겐과 엘라스틴 섬유를 추출 및 브릴 루앙 scatteri를 측정하는 단계를 설명광 역학의 완전한 설명을 달성하기 위해 반사성 기판을 사용 NG 스펙트럼. 프로토콜 내에서 중요한 단계는 정제 된 섬유가 얻어진다 적절한 실험 조건은 섬유 성 단백질의 재현성 측정 장소에 있는지 확인 것들이다. 그러나, 추출 절차는 섬유의 기계적 특성을 수정할 수 유념해야한다.
기술의 수정은 microfocused 브릴 루앙 산란 및 매핑을위한 광학 현미경과 함께 커플 링 (13)에 접근 포함 보완 기술로 가능한 조합 (예를 들어, 라만 산란). 기술의 현재 응용 프로그램은 주로 적출 생물학적 물질에 초점을 맞추고있다,하지만 중요한 발전은, 예를 들면, 여러 VIPA 탈론 (14)에 따라 사람들은 이미 응용 프로그램의 범위 악마와 함께 침대 옆에 벤치 탑에서이 기술의 번역을 가능하게하는생체 내 응용 프로그램에서 잠재력을 포함하여 15, 16 strated. VIPA 접근 방식은 우리가 무엇을 설명에 대한 대안이다 이것은 빠른 획득 시간을 가지고 있지만, 이러한 여기 분석 것과 반드시 불투명 한 시료의 경우에는 적절하지 않다. 그 콘트라스트 준 탄성 광을 거부하기에 충분하지 않기 때문에 또한, 반사성 기재의 사용은 VIPA에 탈론을 사용하여 셋업에서 실용적이지 않다. 스펙트럼 데이터 집합 및 재료의 본래 약한 산란 단면적의 인수 속도와 관련된 제한 동적 생물학적 시스템과 깊은 조직 내에서 데이터의 취득 프로그램을 제한 할 수 있지만, 기술적 인 개선은 현재의 성능이 개선 될 수있다.
BLS는 세포 외 기질에 기초 생물 물리학 연구에 중요한 도구가 될 것을 약속함으로써 새로운 매트릭스 성장하는 동안 기계적 특성의 진화에 대한 통찰력과 병리학에서의 손실을 생산하는퇴화. 그러나, 측정은 비 침습적이며, 따라서 생체 내에서 수행 될 수 있다는 것을 기억하는 것이 중요하다. 실제로, 이것은 이미 각막 (16)에 달성 된 그러한 작업은 결합 조직 장애의 다양한 새로운 진단 도구의 개발을위한 플랫폼을 제공 할 수있다.
초음파 탄성 영상 및 원자 힘 현미경 (AFM)는 마이크로 기계식 측정 대체 방법 있지만 BLS 기술은 AFM 달리, 전자 및 이상 (a 세포 내 규모)보다 공간 해상도를 제공 시험편에 기계적인 힘을 부과하지 않고 한정되지 않는다 오직 표면 특징의 분석. 거시적 인 균주에서 영의 계수는 MPa의 순서 (자세한 내용은 다른 곳에서보고됩니다)의 수 있습니다 동안 콜라겐과 엘라스틴의 브릴 루앙 계수는 GPa의 범위에 있습니다. 이 결과에 의해, 여기 주파수에 강한 의존성 차동 탄성률을 나타낸다섬유의 점탄성 거동. BLS는 의치 과학 문제 광범위한 물질에 적용 할 수있다. 그것은 생리학 및 생물 학적 조직의 병리에 대한 질문에 대답하는 데 도움이뿐만 아니라 분자 수준에서 물질과의 상호 작용의 기본적인 이해를위한 물리적 도구를 제공 할 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the Engineering and Physical Sciences Research Council [grant number EP/M028739/1]. RSE was supported by a Santander Postgraduate Research Award 2015.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Chondroitinase ABC | Sigma-Aldrich | C2905 | |
Tris Buffer | Fluka | 93358 | |
Sodium Acetate | Fisher Scientific | S608-500 | |
PBS | Sigma-Aldrich | P4417 | |
Sodium Azide | Fisher Scientific | S2002 | |
Streptomyces Hyaluronidase | Sigma-Aldrich | H1136-1AMP | |
Sodium Chloride | Fisher Scientific | S7653 | |
Trypsin | Sigma-Aldrich | T4665 | |
Sodium Phosphate | Sigma-Aldrich | S9638 | |
Sodium Hydroxide | Fisher Scientific | S320-500 | |
Pure Water | Millipore | ZRQS0P3WW | Produced in-house |
Distilled Water | Bibby Scientific Limited | D4000 | Produced in-house from water still |
Euthatal | Merial | J01601A | |
Tandem Interferometer TFP-1 | JRS Scientific Instruments | ||
Freezer | Lec | TU55144 | |
Refrigerator | Zanussi | ZBA15021SA | |
Hot Plate | Fisher Scientific | SP88857206 | |
Clamps | VWR | 241-7311 & 241-7201 | |
Clamp Stand | VWR | 241-0093 | |
Thermometer | Fisher Scientific | 13-201-401 | |
Cling Film | Sainsbury's | 7650540 | |
Parafilm | Sigma-Aldrich | P7793-1EA | |
Silicone | IDB Technologies | N/A | No catalogue number. Order upon request. |
Cover Glass | VWR | 631-1571 | |
Conical Flask | VWR | 214-1175 | |
Beaker | VWR | 213-0469 | |
Measuring Cylinder | VWR | 612-3838 | |
Vial | VWR | 548-0051 & 548-0863 | |
Petri Dish | VWR | 391-0441 | |
Scalpel | Swann Morton Ltd | 0914 & 0308 | |
Diamond Scribe | RS Instruments | 394-217 | |
Soldering Iron | RS Instruments | 231-5332 | |
Fine Forceps | VWR | 232-0188 | |
Double Micro-Spatula | VWR | Various Sizes | |
pH Meter | Hanna Instruments | HI-2210-02 | |
Orbital Shaker | IKA | 0002819000 |
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