Method Article
여기에서, 우리는 뮌헨 ChronoType 설문지, 금 표준 circadian 상 biomarkers 및 actigraphic 측정에 근거를 둔 circadian 표현형 단으로 참가자의 정확한 분류에 따라 성과에 있는 일주 리듬을 조사하는 방법을 제시합니다.
지속적으로 발전하는 '시계 주변' 사회에서 생물학, 생리학 및 심리학의 변화가 우리의 건강과 성과에 어떤 영향을 미치는지에 대한 이해를 높일 필요가 있습니다. 이 도전 안에 포함, 수 면과 circadian 리듬에 개별 차이 대 한 계정 증가 필요, 뿐만 아니라 실제 세계에서 성능에 하루 중 시간의 영향을 탐구. 객관적인 수면/각성 모니터링, 생물학적 샘플의 행동 및 분석에 주관적인 설문지 기반 방법에서 수면과 circadian 리듬을 측정하는 방법은 여러 가지가 있습니다. 이 백서는 개인을 초기, 중급 또는 후기 circadian 표현형 그룹(EPS/ICPs/LCP)으로 분류하는 여러 기술을 결합하는 프로토콜을 제안하고 현장에서 일주 성능 테스트를 수행하는 방법을 권장합니다. 대표적인 결과 actigraphy에서 파생 된 나머지 활동 패턴에 큰 차이 보여, circadian 단계 (희미한 빛 멜 라 토 닌 발병 및 코 티 솔 각성 응답의 피크 시간) circadian 표현형 사이. 또한, EMP와 LCP 사이의 일주 성능 리듬의 현저한 차이는 일주기 표현형을 고려할 필요성을 강조합니다. 요약하자면, 영향을 미치는 요인을 제어하는 데 어려움이 있음에도 불구하고, 이 프로토콜은 circadian 표현형이 성능에 미치는 영향에 대한 실제 적인 평가를 허용합니다. 이 백서는 현장에서 circadian 표현형을 평가하는 간단한 방법을 제시하고 성능 연구를 설계 할 때 하루 중 시간을 고려할 필요성을 지원합니다.
행동 수준에서, 개별 적인 휴식/활동 패턴을 평가하는 것은 손목 actigraphy를 통해 주관적인 설문지 기지를 둔 방법 또는 객관적인 감시를 사용하여 행해질 수 있습니다. 액티그래픽 데이터는 총 수면 시간, 수면 효율 및 수면 개시 후 의 기상 을 포함하는 다양한 수면 매개 변수에 대한 폴리소노그래피 (PSG)에 대해 검증되었습니다1. PSG는 수면 측정을 위한 금본위제로 알려져 있지만, 수면 실험실2밖에서 장기간 사용하는 것은 쉽지 않습니다. 따라서 actigraphs는 PSG에 대한 간단하고 비용 효율적인 대안을 제공하고 24 시간 휴식 / 활동 패턴을 모니터링 할 수 있도록하기위한 것입니다. 주관적인 자기 보고 측정은 뮌헨 크로노타입 설문지(MCTQ)3,또는 아침-저녁 설문지(MEQ)를 사용하여 일주 선호도를 사용하여 '크로노타입'을 정의할 수있습니다4. 이 스펙트럼의 어느 쪽 끝에 있는 단은 중간 circadian 표현형으로 그(것)들을 가진 초기 circadian 표현형 (EPS) 및 늦은 circadian 표현형 (LCP)로 불릴 수 있습니다.
EMP와 Lcp는 그들의 행동 (즉, 수면/각성 패턴)을 통해 명확하게 구별되지만, 이러한 개인의 차이는 또한 부분적으로 생리학5 및 유전 적 소인6,,7의변화에 의해 구동됩니다. 생리학적 바이오마커는 종종 개인의 circadian 단계/타이밍을 결정하는 데 사용됩니다. circadian 타이밍을 나타내는 주요 호르몬의 두 멜 라 토 닌, 한밤중에 피크에 도달 하는 저녁에 상승, 그리고 코 티 솔, 아침에 피크8. 이러한 circadian 단계 마커를 사용 하 여, 수 면-각 성 패턴에 개별 차이 식별할 수 있습니다. 예를 들어, 희미한 빛 멜라토닌 발병(DLMO)99,10 및 코티솔 각성 반응의 시간11,,12 피크는 심질에서 일찍 피크, 이는 코어 체온13의circadian 리듬에 의해 미러링된다. 타액은 이러한 호르몬이 세포 물질을 추출할 필요 없이 방사선 면역분석(RIA) 또는 효소 연계 면역흡착 분석(ELISA)으로 분석될 수 있는 쉽고 안전하며 비침습적인 수집을 가능하게 합니다. RIA 및 ELISA는 방사성 표지된 동위원소(예를 들어,요오드(125I) 또는 효소 연계 항체14)를포함하는 항원 항체 반응을 통해 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액, 혈장 또는 타액)에서 항원의 농도를 검출하는 민감하고 특이적인 세포이다.
상수 루틴(CR) 및 강제 비동기(FD)와 같은 엄격하게 통제된 실험실 프로토콜은 내인성 일주기리듬을연구하기 위한 연대기학 분야의 금본위제(15)이다. 그러나, 상황 데이터를 수집 하 고 결과의 외부 타당성을 증가 하는 인공 실험실 설정 외부 그들의 가정 환경에서 개인을 공부 하는 증가 필요가 있다. 따라서 현장에서 개인의 차이를 분류, 측정 및 평가하는 더 나은 방법이 필요합니다. 또한, 신체적(호기성 용량, 근력) 및 인지(반응 시간, 지속적인 주의력, 집행 기능) 성능의 다양한 측정에서 일주 변화는16일저녁에더 나은 성적을 거둔 ECT와17일저녁에 Lcp로 밝혀졌다. 이것은 하루 중 시간과 circadian 표현형이 연구 연구에서 성능 테스트를 수행 할 때 고려되는 요인이되어야한다는 것을 강조합니다.
실험실 연구에 사용되는 다양한 측정 및 프로토콜의 수는 고도로 통제 된 조건을 구현 할 수 있습니다. 필드 연구는 영향을 미치는 요인의 수 때문에 더 도전적인 경향이 있습니다. 따라서, 여러 기술을 결합하여 보다 전체적인 접근법을 사용하면 가정 환경에서 개인의 행동, 심리학 및 성능을 모니터링할 때 더 많은 정확도를 제공할 수 있다18. 여기서, MCTQ, 액티그래피 및 생리학적 바이오마커를 사용하여 circadian 표현형의 개별적인 차이를 식별하기 위해 현장에서 용이하게 구현될 수 있는 방법에 대해 논의한다. 우리는 이 변수가 circadian 표현형 단 사이에서 현저하게 다를 것이고 크로노타입과 유의하게 상관될 것이라는 가설을 세울 것입니다 (= MCTQ에서 수집된 자유일 (MSFsc)에중간 잠을 정정했습니다). 또한, 우리는 각 circadian 표현형 그룹에 대해 별도로 데이터를 분석 할 필요성을 강조, 일주 성능을 측정하는 방법을 제안한다. 전체 인구 수준에서만 데이터를 분석하면 일주 성능 리듬의 차이가 가려질 것이라고 가정합니다.
여기에 설명된 모든 방법은 버밍엄 대학 연구 윤리 위원회의 승인을 받았습니다.
1. 참가자 선별 및 실험 설계
2. 액티그래피 및 수면 일기
3. 생리샘플링
4. 방사선 면역 분석
5. 일주 성능 테스트
참고 : 이 프로토콜에 사용된 조치는 정신 운동 경계 작업 (PVT)21,그리고 카롤린스카 졸음 척도 (KSS)22입니다. 그러나, 다른 테스트는 연구의 목적에 따라 동일한 디자인을 유지 하는 데 사용할 수 있습니다 (예를 들어, 연구 작업 메모리에 circadian 표현형의 영향을 조사 하는 경우, 메모리 작업이 필요 합니다).
6. 분석
이러한 결과 EMP와 LLC는 이전에 Facer-Childs, Campos,외. 23에의해 간행되었습니다. 게시자로부터 모든 권한을 얻었습니다. 세 그룹 (초기, 중급 및 후기)의 조사가 필요한 연구의 경우 동일한 방법과 차단을 사용할 수 있습니다.
Circadian Phenotyping (표 1, 표 2 및 그림 1)
이 논문에 제시된 첫번째 가설은 단이 잠과 circadian 변수에서 현저하게 다를 것이라는 것입니다. 본 연구에 참여한 참가자들(n=22)으로부터, EMP로 분류된 사람들은 0-1과 8-10 사이의 모든 LCP(표 1에주어진 컷오프)의 점수를 가졌다. 이러한 결과를 확인하기 위해 각 변수에 대해 그룹 평균을 비교했습니다. MSFsc는 LPM에서 06:52±00:17 h에 비해 EMP에 대한 02:24±00:10 시간이었다(t(t(36) = 12.2, p< 0.0001). 생리학적 마커는 또한 두 그룹 사이에서 유의히 달랐다. DLMO는 EMP에서 20:27±00:16 h및 LCPS에서 23:55±00:26 h에서 발생하였다(t(t(30) = 6.8, p< 0.0001). 코티솔 각성의 피크 시간은 EMP에서 07:04 ±00:16 h및 11:13±00:23 시간 LCP에서 발생하였다(t(t(36) = 8.0, p< 0.0001). 동일한 관계는 EMP에서 22:57 ±00:10 h및 LCP에서 02:27±00:19 h에서 발생하는 평균 수면 발병과 함께 수면 개시 및 기상 타이밍에 대한 액티그래픽 변수로 관찰되었다(t(34) = 8.9, p< 0.0001) 및 절충제에서 06:33±0.10 h 및 10:13±00:18 시간 LCP에서 일어나는 시간 (t(t(34) = 9.9, p< 0.0001). 지속 시간, 효율성 및 대기 시간을 포함하는 다른 수면 변수는 그룹 간에 유의한 차이가없었다(표 2).
두 번째 가설은 MCTQ로부터 수집된 MSFsc가 금 표준 액티그래픽 및 일주기 상 바이오마커와 유의히 상관관계가 있다는 것이다. 그림 1은 MSFsc가 DLMO(R22 = 0.65) 및 크게 상관관계가 있음을 보여줍니다. p < 0.0001), 코티솔 각성 반응의 피크 시간 (R2 = 0.75, p & 0.0001), 수면 발병 (R2 = 0.80, p & 0.0001) 및 웨이크 업 시간 (R2 = 0.86, p & 0.0001).
이 대표적인 결과는 다른 circadian 표현형 단이 생리적인 변수에서(DLMO 및 아침 코티솔의 피크 시간)에서 뿐만 아니라 잠 개시/상쇄 (즉, 깨우기 시간)에 있는 명확한 다름이 있다는 것을 보여줍니다.
대각선 테스트(그림 2)
그것은 하루 의 과정을 통해 여러 번 테스트 하 여, 주관적인 졸음과 성능에 일주 리듬 각 그룹에서 식별 될 수 있을 것 이라고 가설 (EPS/LCPs). 또한 circadian 표현형을 고려하지 않고 전체 그룹 수준에서만 데이터를 분석하면 일주 변화가 잘못 표현될 것이라고 가정했습니다.
PVT 및 KSS에 대한 전체 그룹 수준에서 상당한 일주 변화가 발견되었다. 08:00 h 시험 세션에서 PVT 성능은 주관적인 졸음(p=0.024)과 마찬가지로 14:00p h 시험(p=0.027)보다 현저히 느렸다.p 08:00 h와 20:00h(p = 0.041) 사이에서도 PVT 성능이 현저히 느려진 것으로 나타났다.
각 그룹을 개별적으로 분석했을 때, PVT 성능의 상당한 일주 변화는 LLP에서 발견되었지만 EMP에서는 발견되지 않았습니다. Lcp는 14:00 h(p = 0.0079)에 비해 08:00 h에서 현저히 나빠졌고 08:00 h(p = 0.0006)에 비해 20:00 h에서 더 나빴습니다. 주관적인 졸음은 각 그룹 내의 중요한 일주 변화를 보였다. EMP는 08:00 h(p = 0.0054)에 비해 20:00 h에서 더 높은 졸음을 보고했습니다. 반대는 08:00 h에 가장 높은 졸음을 보고 하는 LCP에서 관찰 되었다 그리고 가장 낮은 20:00 h. 졸음 08:00 h보다 상당히 높았다 14:00 h 와 20:00 LCP에서 시간 (모두 p & 0.0001).
그림 1: 선형 회귀 분석은 액티그래피 및 생리학적 바이오마커를 사용하여 수면/항적 변수 간의 관계를 보여줍니다. 자유일(MSFsc)에서수정된 중간 절전 모드는 x축에 시간(h)으로 표시됩니다. 초기 circadian 표현형 (EMP)는 빨간 상자에 파란 상자, 늦은 circadian 표현형 (LCP)에 도시됩니다. (a)코티솔 각성 반응의 피크 시간 (h),(b)깨어 있는 시간 (h),(c)희미한 빛 멜 라 토 닌 발병 (DLMO) (h),(d)수 면 발병 시간 (h). R2 값은 오른쪽 하단 모서리에 표시되며 유의 수준은 **** = p < 0.0001로 표시됩니다. 이 그림은 Facer-Childs, 외23. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 카롤린스카 졸음 척도 및 정신 운동 경계 작업(PVT) 성능의 일주 변형 곡선. 시간(h)은 x축에 표시됩니다. 전체 그룹 결과는 제 1 열, 두 번째 열의 초기 circadian 표현형 (EPS) 및 세 번째 열에서 후기 circadian 표현형 (LCP)에 표시됩니다. (a)주관적인 졸음 (KSS) 점수,(b)PVT (들)에서 반응 시간. 2차 다항식 비선형 회귀 곡선이 장착되었습니다. 유의 수준은 ns (중요하지 않음), *(p < 0.05), **(p < 0.01), ***(p < 0.001) 및 ****(p < 0.0001)로 표시됩니다.p 이 그림은 Facer-Childs, 외23. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
가변 측정 | ECP 카테고리 | ICP 카테고리 | LCP 카테고리 |
액티그래픽 웨이크업 시간 | < 07:30 h | 07:31 - 08:29 h | > 08:30 h |
아침 코티솔의 피크 시간 | lt; 08:00 | 08:01 - 08:59 h | > 09:00 h |
희미한 빛 멜 라 토 닌 발병 (DLMO) | lt; 21:30 h | 21:31 - 22:29 h | > 22.30 시간 |
액티그래픽 수면 개시 | lt; 23:30 h | 23:31 - 00:29 h | > 00:30 h |
무료 일 (MSFsc)에중간 수면수정 | < 04:00 h | 04:01 - 04:59 h | > 05:00 h |
변수당 점수 | 0 | 1 | 2 |
총 점수 | 0 - 3 | 4 - 6 | 7 - 10 |
하위 범주 | 0 = 극단적인 ECP 1 = 명확한 ECP 2 = 보통 ECP 3 = 마일드 ECP | 4 = 초기 ICP 5 = ICP 6 = 늦은 ICP | 7 = 경미한 LCP 8 = 보통 LCP 9 = 명확한 LCP 10 = 극한 LCP |
표 1: 초기(ECP), 중간(ICP) 및 후기(LCP) 그룹으로 의한 circadian 자형질 에 대한 분류 차단. 각 변수는 결과에 따라 참가자당 점수가 할당되며 총 점수(0-10)는 각 그룹 및 각 하위 범주로 분류할 수 있도록 합니다.
가변 측정 | EMP | Lcp | 중요성 |
샘플 크기 | N = 16 | N = 22 | 해당 /a |
남성/여성 수 | M = 7 | M = 7 | p = 0.51c |
F = 9 | F = 15 | ||
연령(년) | 24.69 ± 4.60 | 21.32 ± 3.27 년 | p = 0.028a |
높이(cm) | 171.30 ± 1.97 | 171.10 ± 2.38 | p = 0.97a |
무게 (kg) | 66.44 ± 2.78 | 67.05 ± 2.10 | p = 0.88a |
국경 (hh:mm) | 02:24 ± 00:10 | 06:52 ± 00:17 | p< 0.0001a |
수면 개시 (hh:mm) | 22:57 ± 00:10 | 02:27 ± 00:19 | p< 0.0001a |
웨이크 업 시간(hh:mm) | 06:33 ± 0.10 | 10:13 ± 00:18 | p< 0.0001a |
수면 시간(h) | 7.59 ± 0.18 | 7.70 ± 0.14 | p = 0.72a |
수면 효율 (%) | 79.29 ± 1.96 | 77.23 ± 1.14 | p = 0.46a |
수면 발병 대기 시간(hh:mm) | 00:25 ± 00:06 | 00:25 ± 00:03 | p = 0.30b |
위상 각도(hh:mm) | 02:28 ± 00:16 | 02:34 ± 00:18 | p = 0.84a |
희미한 빛 멜라토닌 발병 (hh:mm) | 20:27 ± 00:16 | 23:55 ± 00:26 | p< 0.0001a |
코티솔 피크 시간 (hh:mm) | 07:04 ± 00:16 | 11:13 ± 00:23 | p< 0.0001a |
표 2: 일주기 표현형 그룹에 대한 연구 변수; 조기(EP) 및 후기(LP) 값은 MCTQ로부터 계산되는 자유일(MSFsc)에 평균 ±SD로 도시되는 나이를 제외한 평균 ±SEM으로 도시된다. 사용되는 통계 테스트의 유형은 수퍼 스크립트에 표시됩니다. 파라메트릭 테스트a,비파라메트릭 테스트b 및 Fisher의 정확한 테스트c. 위상 각도 차이에 의해 결정 된다 (h) 희미한 빛 멜 라 토 닌 발병 사이 (DLMO) 그리고 수 면 발병. 모든 p 값은 FDR이 24로수정됩니다. 이 표는 Facer-Childs, 외23.
행동에 circadian- 및 수면 의존적인 영향의 복잡한 상호 작용 때문에, 각각의 상대적인 기여를 탐구하는 것은 도전적입니다. 실험실 기반 프로토콜은 크게 비현실적이고 비용이 많이 들기 때문에 결과를 일상적인 기능25와관련시 더 가난한 외부 타당성을 유지합니다. 따라서, 실제 상황에 일반화를 촉진하기 위해 자신의 가정 환경에서 개인을 공부하는 필요성이 증가하고있다. 현장 연구는 외인성 영향의 통제를 허용하지 않지만, 통합 된 접근 방식은 생물학적 및 환경 적 요인이 건강, 생리학 및 성능에 미치는 영향을 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다23,,26,,27. 이 프로토콜은 습관적인 루틴을 따르는 동안 가정 환경에서 개인을 모니터링 할 수 있도록 특별히 설계되었습니다. 이러한 타액 샘플링 프로토콜은 Amazon28 및 남극29와 같은 까다로운 환경에서 성공적으로 수행되어 이 프로토콜을 쉽게 수행할 수 있습니다.
설문지는 광범위한 정보를 빠르고 간단하게 수집할 수 있는 수면 및 일주기 연구에 유용한 도구입니다. 그러나 주관적인 조치와 객관적인 조치 사이의 불일치는 개인의 차이를 연구하려고 할 때 어려움을 초래할 수 있습니다. 따라서, 여러 주관적이고 객관적인 측정을 수집할 수 있다는 것은 circadian 표현형 그룹의 분류를 강화할 수 있다. MCTQ, actigraphy, 생리 샘플링 및 성능 테스트 - 방법의 이 조합은 circadian 표현형에 있는 개별적인 다름이 고려되지 않는 경우에 결과가 어떻게 잘못 해석될 수 있는지 강조했습니다. 이러한 모든 변수를 측정하면 circadian 표현형 그룹의 가장 신뢰할 수 있는 분류가 제공되지만 요구 사항을 줄이도록 이 방법을 추가로 개발할 가능성이 있습니다. 예를 들면, 신뢰성은 조사될 남아 있더라도, 비용을 감소시키기 위하여, 연구원은 코티솔 샘플링 단계를 제거하거나 다른 설문지를 사용할 수 있었습니다. 그러나 DLMO는 circadian 타이밍에 대한 현재 의 황금 표준 마커이기 때문에 휴식 / 활동 패턴을 모니터링하기위한 표준 방법이기 때문에 평가에 포함시키는 필수 변수가 될 것입니다.
개별(내부 생물학적 시간)에 대한 타이밍을 기반으로 하는 대신 클럭 시간을 기반으로 성능 테스트를 예약하면 타당성이 향상되고 프로토콜을 실제 설정에 적용할 수 있습니다. 그러나 이 디자인의 한계는 주기시스템과 시간주의적 영향의 영향을 결정할 수 없다는 것입니다. 결과에 기여하는 특정 메커니즘을 확인할 방법이 없기 때문에 이것은 도전이됩니다. 그러나 이 프로토콜의 목적은 실제 시나리오에서 이러한 그룹을 조사하는 것이기 때문에 수면 종속 메커니즘을 줄이면 결과의 외부 유효성이 최소화됩니다. 따라서 통합 된 방법을 사용하는 것이 현장 연구에 더 적합하고 더 가능하다고 주장 할 수 있습니다.
성과의 직접적인 측정은 사회와 높게 관련이 있습니다, 그러나 다중 영향 요인, 특히 그들의 circadian 표현형 및 수면 압력에 따라 개별을 분류하는 필요를 고려하지 않고, 연구 결과는 중요한 결과를 놓칠 수 있었다는 것을 보입니다.
논의된 바와 같이, PVT와 KSS는 많은 연구 분야에서 널리 사용되고 있다. PVT의 단순성과 작업 지속 시간의 유연성은 여러 번의 테스트 시간을 요구하는 circadian 및 수면 제한 연구에서 사용하기에 매력적인 테스트이며, 수면부족30,,31의민감한 마커인 것으로 나타났다. 테스트 정확도와 전반적인 반응 시간은 작업 지속 시간에 따라 증가하지만, 2 분, 5 분 및 10 분 PVT 작업은 모두 하루 관계의 유사한 시간을 보여줍니다32.
당사의 프로토콜 설계는 다양한 성능 작업을 사용하여 구현할 수 있으며 필요한 경우 더 빈번한 시점에서 구현할 수 있습니다. 이전 연구는 에어로빅 용량15 및 집행 기능25와같은 물리적 및 인지 성능 메트릭 모두에서 하루 중 시간 효과를 보여 주었다. 이 프로토콜을 구현하고 개인의 차이를 고려하면 특히 엘리트 스포츠와 같은 틈새 환경에서 성능에 기여하는 메커니즘을 연구하는 방법에 대한 이해가 증가합니다. 요약하면, 이 프로토콜은 circadian 표현형의 실제 평가를 허용하고 성능에 하루 중 시간의 영향을 측정하는 방법에 대한 통찰력을 제공합니다.
B.M.과 D.J.S.는 스톡그랜드 주식회사의 공동 이사입니다. 저자는 다른 경쟁 적인 금융 이익을 선언 하지 않습니다.
이 작품은 생명 공학 및 생물 과학 연구 위원회 (BBSRC, BB/ J014532/1)와 엔지니어링 및 물리 과학 연구 위원회 (EPSRC, EP/ J002909/1)의 자금 지원으로 지원되었습니다. E.R.F.C는 웰컴 트러스트 기관 전략 지원 기금(ISSF) 계획 가속기 펠로우십(Wellcome 204846/Z/16/Z)과 호주 정부, 산업 혁신 및 과학 보조금(ICG000899/19/0602)의 지원을 받았습니다. 우리의 진심으로 감사는 분석 시약을위한 모든 참가자와 Stockgrand 주식 회사에 있습니다.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Actiwatch Light | Cambridge Neurotech Ltd | Various different validated actigraph devices can be used depending on what is required | |
Sleep Analysis 7 Software | Cambridge Neurotech Ltd | Various different validated software can be used depending on what is required | |
7 ml plastic bijous | Various different tubes or salivettes can be used depending on what is required | ||
DQ67OW, Intel Core i7-2600 processor, 4GB RAM, 32-bit Windows 7 | Various different devices can be used depending on what is required |
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