먼저, 날카롭게 다듬어진 모세관을 가져다가 마이크로 로더 팁을 사용하여 2-10 마이크로리터의 CRISPR Cas9 리보핵단백질 복합체 또는 대조 용액을 로드합니다. 그런 다음 채워진 모세관을 마이크로 인젝터 핸들러에 넣습니다. 미세한 집게로 모세관 팁을 떼어내어 배출량을 10나노리터로 조정합니다.
3% 폴리자당 용액이 있는 100mm 페트리 접시에 접착된 격자 위에 하나의 세포 단계 배아를 놓습니다. 마이크로 인젝터를 사용하고 실체 현미경으로 10 나노 리터의 용액을 피질 영역, 특히 세포질 막 아래의 동물 극 수준에 주입합니다. 24시간 후 형광 실체 현미경으로 플루오레세인, 라이신, 덱스트린을 시각화하고 잘 주입된 rho crispant 배아를 선택합니다.
rho crispant 올챙이 망막의 Caspase 3 표지는 일부 간상체가 세포 사멸을 겪는다는 것을 보여주었습니다. 조직학적 염색은 핵층의 전반적인 보존을 보여주었지만 광수용체 외부 세그먼트의 심각한 단축을 보여주었습니다. 광수용체 마커를 사용한 추가 면역 염색 분석은 막대 외부 세그먼트의 변성을 보여주었습니다.
