이 연구는 ITMO NNP (Institut Thématique Multi-Organisme Neurosciences, sciences cognitives, neurologie, psychiatrie) / AVIESAN (Alliance Nationale pour les sciences de la vie et de la santé)과 협력하여 Association Retina France, Fondation de France, FMR (Fondation Maladies Rares), BBS (Association du syndrome de Bardet-Biedl) 및 UNADEV (Union Nationale des Aveugles et Déficients Visuels)의 M.P. 보조금으로 지원되었습니다.

Xenopus의 세포 복구 전략을 조사하기 위한 망막 변성 생성

<ol>
	<li>Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#252;ller+glial+cell+reprogramming+and+retina+regeneration.">M&#252;ller glial cell reprogramming and retina regeneration.</a> Nature reviews. Neuroscience. 15 (7), 431-442 (2014).</li><li>Hamon, A., Roger, J. E., Yang, X. -. J., Perron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#252;ller+glial+cell-dependent+regeneration+of+the+neural+retina:+An+overview+across+vertebrate+model+systems.">M&#252;ller glial cell-dependent regeneration of the neural retina: An overview across vertebrate model systems.</a> Developmental Dynamics. 245 (7), 727-738 (2016).</li><li>Garc&#237;a-Garc&#237;a, D., Locker, M., Perron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+M&#252;ller+glia+regenerative+potential+for+retinal+repair.">Update on M&#252;ller glia regenerative potential for retinal repair.</a> Current Opinion in Genetics &amp; Development. 64, 52-59 (2020).</li><li>Todd, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+stimulation+of+retinal+regeneration+from+M&#252;ller+glia+in+adult+mice+using+combinations+of+proneural+bHLH+transcription+factors.">Efficient stimulation of retinal regeneration from M&#252;ller glia in adult mice using combinations of proneural bHLH transcription factors.</a> Cell Reports. 37 (3), 109857 (2021).</li><li>Hoang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+regulatory+networks+controlling+vertebrate+retinal+regeneration.">Gene regulatory networks controlling vertebrate retinal regeneration.</a> Science. 370 (6519), (2020).</li><li>Langhe, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=M&#252;ller+glial+cell+reactivation+in+Xenopus+models+of+retinal+degeneration.">M&#252;ller glial cell reactivation in Xenopus models of retinal degeneration.</a> Glia. 65 (8), 1333-1349 (2017).</li><li>Chesneau, A., Bronchain, O., Perron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+chemogenetic+ablation+of+photoreceptor+cells+in+Xenopus+retina.">Conditional chemogenetic ablation of photoreceptor cells in Xenopus retina.</a> Methods in Molecular Biology. 1865, 133-146 (2018).</li><li>Martinez-De Luna, R. I., Zuber, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod-specific+ablation+using+the+nitroreductase/metronidazole+system+to+investigate+regeneration+in+Xenopus.">Rod-specific ablation using the nitroreductase/metronidazole system to investigate regeneration in Xenopus.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2018 (12), (2018).</li><li>Zahn, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+Table+of+Xenopus+development:+a+new+graphical+resource.">Normal Table of Xenopus development: a new graphical resource.</a> Development. 149 (14), (2022).</li><li>McNamara, S., Wlizla, M., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Husbandry,+general+care,+and+transportation+of+Xenopus+laevis+and+Xenopus+tropicalis.">Husbandry, general care, and transportation of Xenopus laevis and Xenopus tropicalis.</a> Methods in Molecular Biology. 1865, 1-17 (2018).</li><li>Parain, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-mediated+models+of+retinitis+pigmentosa+reveal+differential+proliferative+response+of+M&#252;ller+cells+between+Xenopus+laevis+and+Xenopus+tropicalis.">CRISPR/Cas9-mediated models of retinitis pigmentosa reveal differential proliferative response of M&#252;ller cells between Xenopus laevis and Xenopus tropicalis.</a> Cells. 11 (5), 807 (2022).</li><li>Wlizla, M., McNamara, S., Horb, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+care+of+Xenopus+laevis+and+Xenopus+tropicalis+embryos.">Generation and care of Xenopus laevis and Xenopus tropicalis embryos.</a> Methods in Molecular Biology. 1865, 19-32 (2018).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (27), (2009).</li><li>Parain, K., Chesneau, A., Locker, M., Borday, C., Perron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+from+three+cellular+sources+and+ectopic+mini-retina+formation+upon+neurotoxic+retinal+degeneration+in+Xenopus.">Regeneration from three cellular sources and ectopic mini-retina formation upon neurotoxic retinal degeneration in Xenopus.</a> bioRxiv. , (2023).</li><li>Vergara, M. N., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+regeneration+in+the+Xenopus+laevis+tadpole:+a+new+model+system.">Retinal regeneration in the Xenopus laevis tadpole: a new model system.</a> Molecular Vision. 15, 1000-1013 (2009).</li><li>Lee, D. C., Hamm, L. M., Moritz, O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+laevis+tadpoles+can+regenerate+neural+retina+lost+after+physical+excision+but+cannot+regenerate+photoreceptors+lost+through+targeted+ablation.">Xenopus laevis tadpoles can regenerate neural retina lost after physical excision but cannot regenerate photoreceptors lost through targeted ablation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54 (3), 1859-1867 (2013).</li><li>Martinez-De Luna, R. I., Kelly, L. E., El-Hodiri, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+homeobox+(Rx)+gene+is+necessary+for+retinal+regeneration.">The retinal homeobox (Rx) gene is necessary for retinal regeneration.</a> Developmental Biology. 353 (1), 10-18 (2011).</li><li>Choi, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+degeneration+following+rod+ablation+in+a+reversible+model+of+retinal+degeneration.">Cone degeneration following rod ablation in a reversible model of retinal degeneration.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 52 (1), 364-373 (2011).</li></ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

Xenopus 올챙이의 다양한 망막 손상 패러다임의 장점과 단점
기계적 망막 손상 신경 망막의 다양한 외과적 손상은 Xenopus 올챙이에서 발생했습니다. 신경 망막은 완전히 제거되거나 15,16 부분적으로만 절제될 수 있다16,17. 여기에 제시된 기계적 손상?...

전 세계 수백만 명의 사람들이 색소성 망막염, 당뇨병성 망막병증 또는 연령 관련 황반 변성(AMD)과 같은 실명으로 이어지는 다양한 망막 퇴행성 질환으로 고통받고 있습니다. 현재까지 이러한 질환은 대부분 치료가 불가능한 상태로 남아 있습니다. 현재 평가 중인 치료 접근법에는 유전자 치료, 세포 또는 조직 이식, 신경 보호 치료, 광유전학 및 보철 장치가 포함됩니다. 또 다른 새로운 전략은 줄기 세포 잠재력을 가진 내인성 세포의 활성화를 통한 자가 재생을 기반으로 합니다. 망막의 주요 신경교세포(glial cell) 유형인 뮐러(Müller) 신경교세포(glial cell)는 이러한 맥락에서 관심의 세포 공급원 중 하나입니다. 손상을 입으면 분화, 증식 및 뉴런 1,2,3을 생성할 수 있습니다. 이 과정은 제브라피시나 제노푸스에서는 매우 효과적이지만 포유류에서는 대체로 비효율적입니다.
그럼에도 불구하고, 유사분열 단백질을 사용한 적절한 치료 또는 다양한 요인의 과발현이 포유류 뮐러 신경교세포 세포 주기 재진입을 유도할 수 있고, 어떤 경우에는 후속 신경 발생 헌신 1,2,3,4,5를 유발할 수 있는 것으로 나타났습니다. 그러나 이것은 치료에 크게 불충분하다. 따라서 재생의 기초가 되는 분자 메커니즘에 대한 지식을 늘리는 것은 Müller 줄기 유사 세포 특성을 새로운 세포 치료 전략으로 효율적으로 전환할 수 있는 분자를 식별하는 데 필요합니다.
이 목표를 가지고 우리는 Xenopus에서 망막 세포 퇴화를 유발하는 몇 가지 손상 패러다임을 개발했습니다. 여기서는 (1) 세포 유형에 특이적이지 않은 기계적 망막 손상, (2) 간상 세포를 표적으로 하는 NTR-MTZ 시스템을 이용한 조건부 및 가역적 세포 절제 모델, (3) 진행성 간상 세포 퇴화를 유발하는 색소성 망막염 모델인 CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃, (4) CoCl2를 제시합니다-용량에 따라 원추세포를 특이적으로 표적으로 삼거나 더 넓은 망막 세포 변성을 유발할 수 있는 유도 세포독성 모델. 각 패러다임의 특징, 장점 및 단점을 강조합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-Propanediol (propyl&#232;ne glycol)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>398039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol &#8805;99.8%</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>20821-365</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cleaved Caspase 3 antibody (rabbit)</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>9661S</td>
			<td>Dilution 1/300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody (chicken)</td>
			<td>Aveslabs</td>
			<td>GFP-1020</td>
			<td>Dilution 1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-M-Opsin antibody (rabbit)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AB5405</td>
			<td>Dilution 1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse secondary antibody, Alexa Fluor 594 (goat)</td>
			<td>Invitrogen Thermo Scientific</td>
			<td>A11005</td>
			<td>Dilution 1/1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Otx2 antibody (rabbit)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab183951</td>
			<td>Dilution 1/100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit secondary antibody, Alexa Fluor 488 (goat)</td>
			<td>Invitrogen Thermo Scientific</td>
			<td>A11008</td>
			<td>Dilution 1/1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit secondary antibody, Alexa Fluor 594 (goat)</td>
			<td>Invitrogen Thermo Scientific</td>
			<td>A11012</td>
			<td>Dilution 1/1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Recoverin antibody (rabbit)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AB5585</td>
			<td>Dilution 1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Rhodopsin antibody (mouse)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MABN15</td>
			<td>Dilution 1/1,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-S-Opsin antibody (rabbit)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>AB5407</td>
			<td>Dilution 1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apoptotis detection kit (Dead end fluorimetric TUNEL system)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzocaine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1501</td>
			<td>Stock solution 10%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bisBenzimide H 33258 (Hoechst)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B2883</td>
			<td>Stock solution 10 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butanol-1 &#8805;99.5%</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>20810.298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2, 2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td>
			<td>1.02382</td>
			<td>Use at 0.1 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 (EnGen Spy Cas9 NLS)</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0646T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clark Capillary Glass model GC100TF-10</td>
			<td>Warner Instruments (Harvard Apparatus)</td>
			<td>30-0038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cobalt(II) chloride hexahydrate (CoCl2, 6H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8661</td>
			<td>Stock solution 100 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip 24 x 60 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>631-1575</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako REAL ab diluent&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>S202230-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Rotary Microtome</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>Microm HM 340E&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin 1% aqueous</td>
			<td>RAL Diagnostics</td>
			<td>312740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein lysine dextran&#160;&#160;</td>
			<td>Invitrogen Thermo Scientific</td>
			<td>D1822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent stereomicroscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX 200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamycin</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>EU0410-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerin albumin acc. Mallory</td>
			<td>Diapath</td>
			<td>E0012</td>
			<td>Use at 3% in water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin (Mayer&#39;s Hemalun)</td>
			<td>RAL Diagnostics</td>
			<td>320550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES potassium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H0527</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human chorionic gonadotropin hormone</td>
			<td>MSD Animal Health</td>
			<td>Chorulon 1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid fuming, 37% (HCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (SAFC)</td>
			<td>1.00314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C7880</td>
			<td>Use at 2% in 0.1x MBS (pH 7.8 - 8.0)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate Heptahydrate (MgSO4, 7H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td>
			<td>1.05886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metronidazole&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td>
			<td>M3761</td>
			<td>Use at 10 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller (P-97 Flaming/Brown)</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td>Program : Heat 700 / Pull 100 / Vel 75 / Time 90 / Unlocked p = 500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium to preserve fluorescence, FluorSave Reagent</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium, Eukitt</td>
			<td>Chem-Lab</td>
			<td>CL04.0503.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX35 Ultra Microtome blade</td>
			<td>Epredia</td>
			<td>3053835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Agani 25 G x 5/8&#39;&#39;</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>AN*2516R1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickel Plated Pin Holder</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26016-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon filtration tissue (sifting fabric) NITEX, mesh opening 1,000 &#181;m</td>
			<td>Sefar</td>
			<td>06-1000/44</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin histowax without DMSO</td>
			<td>Histolab</td>
			<td>00403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde solution (32%)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>EM-15714-S</td>
			<td>Use at 4% in 1x PBS pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peel-A-Way Disposable Embedding Molds</td>
			<td>Epredia</td>
			<td>2219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pestle</td>
			<td>VWR</td>
			<td>431-0094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 100 mm</td>
			<td>Corning Gosselin</td>
			<td>SB93-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 55 mm</td>
			<td>Corning Gosselin</td>
			<td>BP53-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Saline Solution (PBS) 10x</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>ET330-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PicoSpritzer Microinjection system</td>
			<td>Parker Instrumentation Products</td>
			<td>PicoSpritzer III</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pins&#160;</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysucrose (Ficoll PM 400 )</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4375</td>
			<td>Use at 3% in 0.1x MBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powdered fry food : sera Micron Nature</td>
			<td>sera</td>
			<td>45475 (00720)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors dissection</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide Superfrost&#160;</td>
			<td>&#160;KNITTEL Glass</td>
			<td>VS11171076FKA&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide warmer</td>
			<td>Kunz instruments</td>
			<td>HP-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate trisodium salt dihydrate (C6H5Na3O7, 2H2O)</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>27833.294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (Supelco)</td>
			<td>1.06329</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide 30% aqueous solution (NaOH)</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>28217-292</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes Omnifix-F Solo Single-use Syringes 1 mL</td>
			<td>B-BRAUN</td>
			<td>9161406V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trans-activating crRNA (tracrRNA)</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>1072533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Cite 200DC Fluorescence Illuminator</td>
			<td>X-Cite&#160;</td>
			<td>200DC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene &#8805;98.5%&#160;</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>28975-325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generating retinal injury models in xenopus tadpoles

망막 신경 퇴행성 질환은 실명의 주요 원인입니다. 연구되고 있는 수많은 치료 전략 중에서, 자가 회복을 자극하는 것이 최근 특히 매력적인 것으로 떠올랐다. 망막 복구를 위한 세포의 관심 원천은 뮐러 신경교세포(Müller glial cell)로, 줄기세포의 잠재력과 아남니오트의 놀라운 재생 능력을 가지고 있습니다. 그러나 이 잠재력은 포유류에서 매우 제한적입니다. 재생 능력이 있는 동물 모델에서 망막 재생의 기저에 있는 분자 메커니즘을 연구하면 포유류 뮐러 세포의 망막 재생 잠재 능력을 잠금 해제하는 방법에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 이는 재생 의학의 치료 전략 개발을 위한 핵심 단계입니다. 이를 위해 우리는 Xenopus에서 기계적 망막 손상, 니트로환원효소 매개 광수용체 조건부 절제를 허용하는 형질전환 라인, CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃을 기반으로 하는 색소성 망막염 모델, 안구 내 CoCl2 주입에 의한 세포독성 모델 등 여러 망막 손상 패러다임을 개발했습니다. 장점과 단점을 강조하면서 다양한 퇴행성 조건을 생성하고 Xenopus의 망막 재생을 연구할 수 있는 이 일련의 프로토콜에 대해 설명합니다.

Millions of people worldwide are afflicted with various retinal degenerative diseases leading to blindness, such as retinitis pigmentosa, diabetic retinopathy, or age-related macular degeneration (AMD). To date, these conditions remain largely untreatable. Current therapeutic approaches under evaluation include gene therapy, cell or tissue transplantations, neuroprotective treatments, optogenetics, and prosthetic devices. Another emerging strategy is based on self-regeneration through the activation of endogenous cells with stem cell potential. M&#252;ller glial cells, the major glial cell type of the retina, are among cellular sources of interest in this context. Upon injury, they can dedifferentiate, proliferate, and generate neurons1,2,3. Although this process is very effective in zebrafish or Xenopus, it is largely inefficient in mammals.
Nonetheless, it has been shown that appropriate treatments with mitogenic proteins or overexpression of various factors can induce mammalian M&#252;ller glia cell-cycle re-entry and, in some cases, trigger their subsequent&#160;neurogenesis commitment1,2,3,4,5. This remains, however, largely insufficient for treatments. Hence, increasing our knowledge of the molecular mechanisms underlying regeneration is necessary to identify molecules able to efficiently turn M&#252;ller stem-like cell properties into new cellular therapeutic strategies.
With this aim, we developed several injury paradigms in Xenopus that trigger retinal cell degeneration. Here, we present (1) a mechanical retinal injury that is not cell type-specific, (2) a conditional and reversible cell ablation model using the NTR-MTZ system that targets rod cells, (3) a CRISPR/Cas9-mediated rhodopsin knockout, a model of retinitis pigmentosa that triggers progressive rod cell degeneration, and (4) a CoCl2-induced cytotoxic model that according to the dose can specifically target cones or lead to broader retinal cell degeneration. We highlight the particularities, advantages, and disadvantages of each paradigm.

저자 스포트라이트: Xenopus Frog의 망막 재생 메커니즘 탐구 

Xenopus 올챙이에서 망막 손상 모델 생성

기계적 망막 손상 프로토콜 섹션 1에 설명된 기계적 손상을 입은 올챙이의 망막 절편은 망막 병변이 천자 부위에 국한된 상태로 유지되는 동안 조직의 모든 층을 포함한다는 것을 보여줍니다(그림 2A, B).
NTR-MTZ 시스템을 이용한 조건부 간상세포 절제 프로토콜 섹션 2에 설명된 대로 MTZ 처리로 처리된 마취된 Tg...

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우리는 Xenopus laevis 올챙이의 망막 손상 또는 망막 변성을 유도하기 위한 몇 가지 프로토콜을 개발했습니다. 이 모델은 망막 재생 메커니즘을 연구할 수 있는 가능성을 제공합니다.

Retinal neurodegenerative diseases are the leading causes of blindness. Among numerous therapeutic strategies being explored, stimulating self-repair ...

제 연구실은 망막 재생을 연구하고 있습니다. 우리는 Xenopus 개구리를 모델 시스템으로 사용하고 있습니다. 이 양서류는 우리와 같은 포유류와 달리 부상 시 망막을 매우 효율적으로 재생할 수 있기 때문에 실제로 매우 매력적입니다.그리고 우리는 미래에 망막 신경 퇴행성 질환을 앓고 있는 인간 환자의 망막 재생을 유발하는 데 유용할 수 있기 때문에 근본적인 메커니즘을 연구하고 있습니다. 최근에는 망막 주변부의 줄기세포와 망막 색소 상피 외에도 신경교세포가 손상 시 망막 재생을 위해 동원될 수 있다는 사실을 발견했습니다. 그래서 우리는 현재 신경염증과 이 세포의 재생 능력 사이의 연관성을 연구하고 있습니다.실제로, 신경 염증성 틈새는 망막 재생 조절의 핵심 역할을 하는 것으로 보입니다. 망막 재생과 관련된 세포 및 분자 메커니즘을 연구하기 위해 Xenopus에서 몇 가지 망막 손상 패러다임을 개발했습니다. 첫 번째는 기계적 망막 손상입니다.두 번째는 nitroreductase-mediated photoreceptor conditional ablation을 허용하는 형질전환 라인입니다. 세 번째는 CRISPR/Cas9 매개 로돕신 녹아웃을 기반으로 하는 색소성 망막염 모델이며, 마지막으로 염화코발트 또는 CoCl2의 안구 내 주입에 의한 세포독성 모델입니다. 내 호스트 실험실은 Xenopus가 망막을 재생할 수 있지만 효율성은 매우 다양하며 올챙이의 단계나 종(Xenopus laevis 또는 tropicalis)에 따라 달라진다는 것을 보여주었습니다.따라서 Xenopus는 망막 재생을 유발하거나 제한하는 분자 메커니즘을 설명하기 위한 환상적인 모델입니다.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generating Retinal Injury Models in Xenopus Tadpoles

903 조회수.  Université Paris-Saclay. 제 연구실은 망막 재생을 연구하고 있습니다. 우리는 Xenopus 개구리를 모델 시스템으로 사용하고 있습니다. 이 양서류는 우리와 같은 포유류와 달리 부상 시 망막을 매우 효율적으로 재생할 수 있기 때문에 실제로 매우 매력적입니다.그리고 우리는 미래에 망막 신경 퇴행성 질환을 앓고 있는 인간 환자의 망막 재생을 유발하는 데 유용할 수 있기 때문에 근본적인 메커니?...

비디오: 저자 스포트라이트: Xenopus Frog의 망막 재생 메커니즘 탐구 

Retinal neurodegenerative diseases are the leading causes of blindness. Among numerous therapeutic strategies being explored, stimulating self-repair recently emerged as particularly appealing. A cellular source of interest for retinal repair is the M&#252;ller glial cell, which harbors stem cell potential and an extraordinary regenerative capacity in anamniotes. This potential is, however, very limited in mammals. Studying the molecular mechanisms underlying retinal regeneration in animal models with regenerative capabilities should provide insights into how to unlock the latent ability of mammalian M&#252;ller cells to regenerate the retina. This is a key step for the development of therapeutic strategies in regenerative medicine. To this aim, we developed several retinal injury paradigms in Xenopus: a mechanical retinal injury, a transgenic line allowing for nitroreductase-mediated photoreceptor conditional ablation, a retinitis pigmentosa model based on CRISPR/Cas9-mediated rhodopsin knockout, and a cytotoxic model driven by intraocular CoCl2 injections. Highlighting their advantages and disadvantages, we describe here this series of protocols that generate various degenerative conditions and allow the study of retinal regeneration in Xenopus.

We have developed several protocols to induce retinal damage or retinal degeneration in Xenopus laevis tadpoles. These models offer the possibility of studying retinal regeneration mechanisms.