교모세포종 마우스 모델의 Two-Photon Intravital Microscopy

C6 신경교종 세포를 생쥐의 뇌 표재성 부위에 주입하여 교모세포종의 생쥐 모델을 만드는 것으로 시작합니다. 그런 다음 두개골 창에 헤드 바를 고정하고 쥐가 회복할 수 있도록 합니다. 그 후, 형광 표지된 나노 입자를 마우스에 정맥 주사하여 뇌에서 두 개의 광자 이미징을 수행합니다.

즉시 Ti:sapphire 레이저와 메인 시스템 스위치를 켭니다. 그런 다음 prairie view 소프트웨어를 실행합니다. 이제 사용자 지정 스테이지의 두 광자 현미경 아래에 마우스를 고정합니다.

가열된 패드에 동물을 엎드린 자세로 놓고 흉부를 조이지 않고 테이프로 고정합니다. 두개골 창에 물 한 방울을 넣고 초점을 조정합니다. 동물의 심박수와 혈중 산소 공급을 모니터링하려면 센서를 뒷발에 놓습니다.

헤드 위치를 조정합니다. RFP 필터를 사용하여 원하는 이미징 필드를 찾습니다. 샘플 방향과 시야를 확인하면 현미경을 광시야 모드에서 광학 주사 현미경 모드로 전환합니다.

Ti:sapphire 레이저가 920나노미터에서 모드로 잠겨 있는지 확인하고 모든 셔터를 엽니다. 가스프 PMT 전압을 500-600V로 조정합니다. 소프트웨어에서 라이브 이미지를 눌러 이미징을 시작합니다.

선명한 이미지를 얻은 후 소프트웨어와 전동 스테이지를 사용하여 소프트웨어에서 이미지 스택의 상단과 하단을 설정합니다. 포켈 또는 PMT 게인을 천천히 증가시켜 증가하는 깊이에서 어둠을 보정합니다. 저장 경로를 설정하고 Z 시리즈를 시작합니다.

스택이 완료되면 재생을 사용하여 스택의 품질을 검토합니다. 영상 촬영이 끝나면 동물을 회복 케이지로 옮깁니다. Prairie view를 종료하고 모든 데이터가 저장 및 전송되었는지 확인한 다음 컴퓨터와 모든 하드웨어를 종료합니다.

제한된 수의 입자가 외래 혈관을 거쳤으며 나노 입자 투여 후 10분 후에 종양 세포 근처에서 볼 수 있습니다. 그러나 나노 입자 투여 후 24시간이 지나면 교모세포종에서 많은 입자가 관찰되어 외래 증세를 시사합니다.