시작하려면 마이크로 슬라이드 18웰 유리 바닥 챔버를 사용하여 챔버의 각 웰에 150마이크로리터의 수산화나트륨을 넣고 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 수산화 나트륨 용액을 제거하고 탈 이온수로 우물을 3-5 번 세척 한 다음 10 밀리몰 염화칼슘을 함유 한 완충액으로 3 회 세척합니다. 다음으로, 15 밀리몰 염화칼슘이 포함된 150마이크로리터 완충액이 들어 있는 우물에 갓 준비된 SUV 15마이크로리터를 추가합니다.
실온에서 30분 배양한 후 염화칼슘이 포함되지 않은 완충액으로 SLB를 최소 7회 세척합니다. 스트렙타비딘을 사용한 비오틴화된 SLB의 기능화를 위해 스트렙타비딘 용액을 추가하십시오. 그런 다음 과도한 스트렙타비딘을 제거하기 위해 완충액으로 SLB를 최소 5회 세척합니다.
다음으로, 웰에 1 마이크로몰의 최종 농도에 b-disiLID를 추가합니다. 실온에서 30분 배양한 후 과잉 단백질을 완충액으로 최소 5회 세척합니다. 그런 다음 mOrange-Nano를 최종 농도 200 나노 몰에 첨가합니다.
샘플을 알루미늄 호일로 덮고 어두운 곳에 보관하십시오. 그런 다음 형광 현미경 아래에 마이크로슬라이드를 놓습니다. 552나노미터 레이저를 설정하여 mOrange-Nano를 시각화합니다.
형광 현미경 검사는 b-disiLID로 기능화된 SLB에 패터닝된 mOrange-Nano를 밝혀냈습니다. 사진 활성화 후, 관심 영역 내의 주황색 채널에서 형광 신호가 급격히 증가합니다. mOrange-Nano의 형광은 각 사진 활성화 후 120초 동안 포화되고 다음 120초 동안 배경 수준으로 감소한 후 증가합니다.
