시작하려면 갓 수확한 GUV 튜브를 가져 가십시오. 스트렙타비딘 용액을 넣고 실온에서 30분 동안 그대로 두십시오. 그런 다음 b-disiLID의 마이크로몰 1개를 GUV 용액에 추가합니다.
샘플을 알루미늄 호일로 덮고 어두운 곳에 보관하십시오. 마이크로 슬라이드 18웰 유리 바닥 챔버를 150마이크로리터의 BSA 용액으로 10분 동안 전처리합니다. 그런 다음 BSA 용액을 제거하고 150마이크로리터의 물로 우물을 세 번 씻습니다.
다음으로, 완충액에 145 마이크로 리터의 200 나노 몰 mOrange-nano를 추가합니다. b-disiLID로 장식된 5마이크로리터의 GUV를 용액에 추가합니다. 샘플을 알루미늄 호일로 덮고 소포가 가라앉을 때까지 약 15분 동안 기다립니다.
그런 다음 마이크로 슬라이드를 컨포칼 현미경 아래에 놓습니다. mOrange 시각화를 위해 552나노미터에서 샘플을 여기시킵니다. 그리고 GUV 멤브레인에서 DID의 경우 638나노미터입니다.
mOrange-nano GUV는 어둠 속에서 형광을 나타내지 못했습니다. GUV 멤브레인에서 정량화된 mOrange 강도는 완전한 가역성으로 빠르고 효과적인 단백질 모집을 보여주었습니다.
