HepG2 세포의 세포 내 지질 방울 축적을 시각화하기 위한 Oil Red O 염색

6 개의 웰 플레이트에서 DMEM에서 Hep G2의 하룻밤 성장 배양을 시작합니다. 섭씨 37도에서 24시간 동안 세포를 배양합니다. 배양 후 올레산을 함유한 세포 배양 배지 2ml를 각 웰에 추가합니다.

섭씨 37도에서 24시간 동안 세포를 배양합니다. 다음날 배양 배지를 제거하고 PBS로 세포를 두 번 세척합니다. 각 웰에 1ml의 오일 레드 O 정착제를 넣고 30분 동안 배양합니다.

정착제를 버리고 증류수로 세포를 두 번 씻습니다. 각 웰에 60% 이소프로판올 1밀리리터를 넣고 30초 동안 배양합니다. 이소프로판올을 버린 후 갓 준비한 오일 레드 O 염색 용액 1mL를 넣고 20분 동안 배양합니다.

이제 60% 이소프로판올 1밀리리터를 넣고 30초 동안 배양합니다. 과도한 염료를 제거하기 위해 세포를 물로 5번 씻습니다. 현미경 이미징 후 컴퓨터에서 증류수로 덮인 세포를 관찰합니다.

이미징 후 플레이트에서 물을 제거하고 건조시킵니다. 각 웰에 2ml의 이소프로판올을 넣고 오비탈 셰이커에 올려 플레이트를 10분 동안 흔듭니다. 100마이크로리터의 세포 현탁액을 각 그룹에 16웰이 있는 96웰 플레이트로 옮깁니다.

510나노미터 높이의 마이크로플레이트 리더에서 광학 밀도를 측정하여 지질 함량을 계산합니다. 대조군 세포와 비교했을 때, 올레산으로 처리된 G2 간염 세포는 적색 염색 강도가 증가하여 지질 방울 형성이 더 높았음을 나타냅니다. G2 간염 세포의 지질 방울과 지질은 올레산 농도가 증가함에 따라 증가했습니다.