HepG2 세포 상층액의 총 트리글리세리드 수치에 대한 올레산 농도의 효과

시작하려면 총 트리글리세라이드 키트를 실온에서 20분 동안 평형화합니다. 하룻밤 동안 성장한 Hep G2 세포의 상층액을 수집하고 1, 570G에서 10분 동안 원심분리합니다. 표준물질을 설정하고 표본 웰을 테스트합니다.

50 마이크로리터의 올레산을 표준 라벨이 부착된 웰에 추가합니다. 블랭크 웰 및 표준 웰 외에도 10마이크로리터의 세포 배양을 샘플 웰에 추가합니다. 그런 다음 각 웰에 40마이크로리터의 샘플 희석제를 추가합니다.

이제 각 우물에 100 마이크로리터의 검출 항체인 horse radish peroxidase를 추가합니다. 플레이트 멤브레인으로 밀봉하고 섭씨 37도에서 항온의 오븐에서 배양합니다. 1시간 후 상층액을 버리고 먼지가 없는 종이에 물기를 닦아냅니다.

각 웰에 세척액을 넣고 실온에서 1분 동안 배양합니다. 이제 50마이크로리터의 기판 A와 50마이크로리터의 기판 B를 각 웰에 추가합니다. 부드럽게 섞고 섭씨 37도에서 15분 동안 배양합니다.

50마이크로리터의 터미네이션 용액을 추가하고 15분 이내에 450나노미터에서 광학 밀도를 측정합니다. x축을 따라 표준물질의 농도를 플로팅하고 Y축을 따라 대응되는 흡광도 값을 플로팅합니다. 선형 회귀를 수행하고 곡선 방정식을 도출하여 각 샘플의 농도 값을 계산합니다.

대조군과 비교했을 때, 다양한 농도의 올레산으로 Hep G2 세포를 처리한 결과, 세포 상층액의 총 트리글리세라이드 함량이 유의하게 증가했습니다.