난소 조직 처리 및 Z-Score 난포 밀도 분석을 통한 젊은 여성의 난소 예비력 측정

먼저, 생검 후 수술실에서 난소 조직을 5밀리리터의 보충된 1X DPBS가 들어 있는 튜브에 채취합니다. 멸균 메스를 사용하여 난소 표면에서 약 2mm 입방체의 작은 난소 조직 조각을 자릅니다. 그런 다음 조직을 350 마이크로 리터의 Bouin의 용액에 실온에서 2 시간 동안 담그십시오.

배양 후 70% 에탄올로 조직을 세 번 세척합니다. 조직을 포매하고 절편한 후 헤마톡실린 및 에오신 염색을 수행하고 분석을 위한 디지털 이미지를 획득합니다. QuPath와 같은 적절한 소프트웨어를 사용하여 파일을 엽니다.

파일을 QuPath의 기본 창으로 드래그하고 이미지 유형을 Brightfield H&E로 설정합니다. 스케일 바를 사용하여 표면 상피에서 1mm를 정의합니다. 타원 도구를 클릭하고 모낭에 주석을 추가합니다.

원시에서 1차 성숙 단계까지 이 1mm 영역 내에 있는 난포의 수를 세십시오. Follicle Z-Score Calculator Excel 파일의 Follicle in millimeter cube라는 시트에 샘플 ID, 연령, 각 슬라이드의 모낭 수, 단면 두께 및 계산된 N 섹션을 입력합니다. 계수된 각 섹션에서 난포의 가장 큰 10%를 식별한 후 선 도구를 클릭하고 난모세포막을 통해 두 개의 수직선을 그립니다.

Measure(측정)를 선택한 다음 Show annotation measurements(주석 측정 표시)를 클릭하여 이러한 난모세포의 평균 직경을 확인합니다. 길이라고 표시된 열 아래에 측정값을 기록합니다(마이크로미터 단위). Follicle Z-Score Calculator Excel 파일의 각 슬라이드에 대해 가장 큰 10% 난포의 평균 난모세포 직경을 마이크로미터 단위로 입력합니다.

QuPath의 화면 중앙에 이미지를 배치하고 ImageJ 아이콘을 클릭합니다. 그런 다음 ImageJ로 스냅샷 보내기를 선택합니다. ImageJ에서 브러시 도구를 사용하여 테두리에서 1mm의 경계를 설정하고 이미지, 유형을 차례로 클릭하고 8비트를 선택합니다.

그런 다음 선 도구를 클릭하고 눈금 막대에 선을 그립니다. Analyze(분석)를 선택한 다음 Set Scale(스케일 설정)을 선택하고 Known distance(알려진 거리) 필드에 스케일 막대에 표시된 길이를 입력하고 OK(확인)를 클릭합니다. 그런 다음 이미지를 클릭한 다음 밝기/대비를 조정하고 자동을 선택합니다. 이제 Image(이미지)를 클릭한 다음 Threshold(임계값)를 조정하고 Auto(자동)를 선택합니다.

지팡이 도구를 클릭하고 영역을 선택한 다음 Ctrl M을 눌러 면적 값을 Follicle Z-Score Calculator Excel 파일에 입력합니다. Follicle Z-Score Calculator Excel 파일에서 모든 데이터를 표로 작성한 후 동일한 Excel 파일에서 Z-Score Follicle Per Millimeter Cube라는 시트로 이동하여 난소 예비력이 감소했는지 확인합니다. 아이의 난소의 표면 상피는 염색 절차 후에 그 아래에 있는 난소 예비력과 함께 명확하게 볼 수 있었습니다.

난소 밀도는 난소 예비력 Z-점수를 계산하는 데 사용되었으며, Z-점수가 음수 1.7 미만이면 난소 예비력이 감소했음을 나타냅니다.