켄터키 대학, 생물 학부, 학부 연구과 예술 &amp; 과학 대학 사무실에서 지원됩니다.

1. 소개 크레이 피쉬 hindgut의 가장 최근의 포괄적인 개요는 serotonergic 변조 및 innervation (Musolf 외., 2009 주로 초점을 맞추고 박사 바바라 E. Musolf (2007 년, 조지아 주립 대학, 애틀랜타, 조지아, 미국)에 의해 논문으로 준수되었다 ). 갑각류의 hindguts 먼저 Alexandrowicz들이 innervation의 다양한 측면을 설명하는 비교 해부학의 선구자 (Alexandrowicz, 1909)에 의해 100여 년 전에 공부했다. 연구는 전체 동물 osmoregulation에 hindgut의 전반적인 기능을 해결하고, (Musolf, 2007 리뷰를 참조) 여러 화합물에 의해 hindgut 수축성의 modulatory 제어를 검토, 근육의 레이어와 건축의 유형을 식별, 년간 계속했다. 그것은 hindgut의 항문 부분이 대변을 추방하기 위해뿐만 아니라 osmoregulation을위한 환경에서 물을 갈뿐만 아니라 행위 점에 유의하는 흥미롭습니다. 창자의이 지역은 앞으로 받아야이나 동물의 필요에 따라 연동을 반대 수 있습니다. Alexandrowicz (1909)은 갑각류 hindgut, 내부 신경 얼기 나중에 신경 전달 물질을 식별하고 특성화에 대한 풍부한 소스 것으로 판명 외부 신경 얼기를 innervating이 신경 plexuses 확인. 1950 년대 박사 에른스트 플로리에서 크레이 피쉬 hindgut에 대한 약리 연구 시리즈를 시작하고 수축은 아세틸콜린 및 관련 화합물에 의해 또한 에피네프린과 norepinephrine (플로리 1954)에 의해 변조된 것을 보여주었다. 플로리로 알려진 억제 물질의 발견자 &quot;팩터 - I은&quot;왕새우의 GI 시스템 (플로리, 1961) 등 다양한 준비,이 물질의 효과를 공부했습니다. 팩터 - 내가 나중에 GABA로 표시되었다. 따라서, 왕새우 hindgut은 시냅스 억제의 초기 연구에 중요한 역할을했습니다. GABA의 발견에 따라 다른 putative 송신기도 hindgut의 plexuses와 관련된 것으로 표시되었으며 생리 반응을 이끌어내는 수 있습니다. 이 orcokinin의 펩티드를 (NFDEIDRSGFGFN 및 AFDEIDRSGFGFN; Bungart 외 1994;.. Dircksen 외 2000), (머시 외 1,997 RYLPG - 오.) proctolin, 이러한 트랜스 미터는 도파민 (. Elofsson 외 1968. Elekes 외 1988) 포함 , orcomyotropin (FDAFTTGFamide; Dircksen 외 2000.) 및 myosuppressin의 펩타이드 (머시 외 1997;... 대부분 pQDLDHVFLRFamide, CF Stemmler 외 2007). 이러한 물질들은 각각 자연 hindgut의 수축을 modulates하고, GABA를 제외한 모든이 흥분성의 것으로 나타납니다. hindgut는 글루 탐 산염과 quisqualate (. 존스, 1962; 외 2,003 롱)에 대응하지만, glutamatergic innervation에 대한 명확한 증거는보고되지 않았습니다. 다양한 송신기의 효과를 중재 세포내 메신저는 대부분 미개척지만, 수축 (Knotz &amp; 머시, 1995)을 향상시키기 위해 도파민의 능력에 캠프의 참여에 대한 증거가 있습니다. 갑각류의 hindgut가 denervation 다음과 같은 자발적 계약 있지만, 이러한 수축은 일반적으로 연약하고 (; Winlow &amp; 라베락, 1972a 웨일스, 1982) 비계 획 있습니다. 연동 운동은 분명히 지난 복부 신경절 (Winlow &amp; 라베락, 1972a, B, C)에서 발생, 중추 신경 시스템에서 조정 모터 출력을 필요로합니다. 크레이 피쉬에서는, 모터 출력은 세포 기관은 지난 복부 신경절 (Kondoh &amp; 히사다, 1986)에서 현지화된 아르 75 axons를 포함하는 7 일 복부 루트를 통해 hindgut으로 수행됩니다. 적어도 펩티드 중 일부는 지난 복부 신경절 (..; 머시 외 1991b; Dircksen 외 2,000 Siwicki &amp; 비숍, 1986)에서 발생하는 뉴런에서 hindgut 신경 얼기에 공급되는 나타나지만 도파민이 더의 뉴런에 의해 제공됩니다 앞쪽에 신경 (머시 외. 1991a). 7 회 복부 루트를 통해 모터 출력이 큰 조정 수축에 필요한 있기 때문에, 그것은 위에 나열된 putative 송신기의 일부 또는 전체가 연동하는 어떤 방법으로 기여할 가능성이 높습니다. 그들의 상대적인 기여도 그러나, 알려져 있지 않습니다. 어떤 통찰력은 별도로 원형과 세로 근육 (머시 &amp; 리, 2002) 그들의 효과를 연구하여 얻은 수 있습니다. 소화되지 않은 음식의 움직임을 제어뿐만 아니라, 갑각류 hindgut과 관련된 신경 얼기는 털갈이과 관련된 중요한 내분비 기능을 게임에 나타납니다. 게, Carcinus maenas의 hindgut 물의 이해에 역할을 제안하고 털갈이과 관련된 부종, 탈피 (웹스터 외. 2000) 중 갑각류의 hyperglycemic 호르몬 및 관련 전구체 펩타이드를 공개 내분비 세포가 포함되어 있습니다. 따라서, 갑각류 hindgut 몇 가지 중요한 생리 과정에 참여하고 있습니다. 이 보고서는 주로 고급 고등학교와 실험에 참가 생리 과정에 학부 학생들을위한 교육 도구입니다. 의미뿐만 아니라 hindgut 계약과 기능은 학생들이 해결될 수있는 방법을 뒤에 잠재적인 메커니즘. 약리 대리인, 신경 전달 물질, 그리고 neurohormones 사용되며, 투약 - 반응 곡선은 생리 및 약리 데이터를 수집하고 해석하는 방법에 학생들을 참여되는 건설 것입니다. agonists 및 antagonists에 관한 수용체 기능의 일반적인 이해도 형성될 수 있습니다. 학생들은 또한 통계 분석을 위해 그래픽 형태의 데이터를 제시 배우게됩니다. 크레이 피쉬 hindgut에서 수축을 해부하다하고 기록하는 것은 매우 쉽습니다. 해부 준비에 창자가 쉽게 외인성 물질에 노출됩니다. 연동 활동의 변경은 시각이나 또한 수축의 힘을 확인할 수 있습니다 힘 변환기와 모니터링할 수 있습니다. 때문에 bioassay 준비로서 단순하고 신뢰성, 크레이 피쉬 hindgut 아직도 연동, 모터 출력 및 근육 수축의 변조 및 수용체 기능의 메커니즘에 대해 많은 연구 질문 조사에 매우 유용합니다. hindgut는 행동의 구체적인 메커니즘에 대한 검사 살충제, crustaceancides 및 오염 물질에도 유용합니다. 2. 방법 2.1) 자료 <ul><li> 왕새우 </li><li> 크레이 피쉬 살린 </li><li> 절개 장비 (거친 &amp; 고급 가위, 굵은 &amp; 멋진 포셉) </li><li> Sylgard 바닥 페트리 접시 </li><li> 스틸 해부 핀 </li><li> 비커 (화학 솔루션을 개최) </li><li> parafilm (솔루션을 다루는 및 믹싱을위한) </li></ul> 2.2) 해부 <ol><li> 신체 길이 크레이 피쉬 (Procambarus clarkii) 측정 6-10센티미터는 절개가 시작하기 전에 동물을 마취시킬 수 5-10분 위해 얼음에 배치해야합니다. </li><li> 한손으로 발톱 뒤에서 anesthetized 왕새우를 잡아. 신속, 눈 소켓에서 양쪽 머리의 중간에 잘라 다음 왕새우 (참고 : 준비에서 혈액이 완료되었을 때 그것이 마르면 때문에 도구를 씻어 쓰는 것입니다)을 참수 형에 처하다. <img src="/files/ftp_upload/2324/2324fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1 : 왕새우 목베기 </li><li> chelipeds 걷는 다리를 잘라. </li><li> 단지 중간 tailfin (uropod)를두고, 왼쪽과 오른쪽 tailfins를 잘라. </li><li> 왕새우 등의 측면에있는 등 지느러미 표피의 왼쪽과 오른쪽 모두에 ventrally 했네요. <img src="/files/ftp_upload/2324/2324fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2 : 도설 표피 제거 </li><li> 상처가 다음 등의 복부 표피의 아래 부분을 제거 GI 손상을 방지하기 위해 얕은되어 있는지 확인하고, 표피의 지느러미 측면에 transversely 잘라. </li><li> Sylgard 늘어선 요리로 해부 왕새우를 놓습니다. </li><li> tailfin의 끝에 접시에 왕새우를 핀. 시체를 잡아 필요에 따라 하나는 GI의 양쪽에 대한 자세한 핀을 사용할 수 있습니다. </li><li> GI 계속 피펫을 사용하여 호수로 GI 꺼 있는지 확인하십시오 커버 크레이 피쉬 호수와 함께 요리를 입력합니다. 5.3 MM KCl,, 13.5 MM CaCl 2 2 시간 2 O, 2.45 MM MgCl 2 6H 2 O, 호수가 205 MM NaCl로 만든 수정 반 Harreveld의 솔루션 (1936)입니다 5 MM의 HEPES 및 산도 7.4로 조정. 해부 크레이 피쉬는 그림 3과 같이 나타납니다. <img src="/files/ftp_upload/2324/2324fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 : 손상 GI와 해부하는 왕새우. </li></ol> 2.3) 실험 동물의 2.3.1) 진통 <ol><li> 준비 해수욕장 호수 같은 온도에서 테스트하는 화합물의 솔루션을합니다. 켜기 세로토닌의 개별 솔루션 (100 NM, 1microM), 글루 탐 산염 (1microM) 및 테스트되기 시작 물질로 크레이 피쉬 호수에서 만들어진 도파민 (1microM)을 사용할 수 있습니다. </li><li> 10 분 정도에 대한 왕새우 솔루션에 앉아 해부 왕새우 그것이 해부 및 생리 노출의 충격을 조정할 수 있도록 허용합니다. hindgut에서 느린 연동의 수축이 발생하기 시작한다. </li><li> 수축이 시작되면 30 초 (즉, 연동 유형, 또는 경련, 및 연동 파도의 방향 발생하는 수축의 종류를 참고)에서 발생하는 수축의 수를 기록합니다. 표 1 : 크레이 살린에서 진통 <table border="1"><tbody><tr><td> 수축 번호 </td><td> 진통의 종류 </td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table></li><li> PI를 사용pette은 왕새우의 노출 복부의 캐비티 내에 호수를 제거하고, hindgut에 직접 검사하는 물질을 포함하는 호수를 적용합니다. </li><li> 즉시 솔루션을 추가한 후 30 초 이후에 발생하는 수축의 수를 기록하고 (즉 연동, 또는 뇌성 마비 환자) 발생하는 수축의 종류를 확인합니다. 표 2 : 화합물에 대한 노출과 진통 <table border="1"><tbody><tr><td> 컴파 운드 테스트 </td><td> 집중 </td><td> 수축 번호 </td><td> 진통의 종류 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table></li><li> 즉시 시험 물질에 대한 응답을 녹음 후 정상 크레이 피쉬 호수와 GI 여러 번 씻어. 크레이 피쉬 식염수에 30 초마다 약 rinsing 동안 준비가 5 분 동안 서 보자. </li><li> 피펫을 사용하여 검사 또는 마지막으로 물질의 다양한 농도가 hindgut에 직접 테스트하기 위해 다음 화합물을 포함하는 식염수를 넣으십시오. 그것은 낮은 농도와 높은 농도하기 위해 노력하다의 방법으로 시작하는 것이 좋습니다. </li><li> 바로 각각의 새로운 물질이나 새로운 각 농도를 삽입한 후 30 초 이후에 발생하는 수축의 수를 기록하고 수축의 종류를 확인합니다. </li></ol> 2.3.2) excised 준비에 수축의 기록 세력 <img src="/files/ftp_upload/2324/2324fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 : 설정 <ol><li> 다리 포드에 변환기를 부착합니다. </li><li> PowerLab 26T에 다리 포드를 연결합니다. </li><li> 컴퓨터의 USB 포트에 PowerLab의 26T를 연결합니다. </li><li> 바탕 화면에 labchart7 아이콘을 클릭하여 엽니다 LabChart7. <ul><li> LabChart 웰컴 센터 상자가 열립니다 나타납니다. 그것을 닫습니다. </li><li> 설정을 클릭하십시오 </li><li> 채널 설정을 클릭합니다. 확인을 누르면 1 (상자의 왼쪽 하단)에 채널 번호를 변경합니다. </li><li> 차트의 맨 왼쪽에 2K 약 초당 사이클로 설정합니다. 500 또는 200 뮤직 비디오에 볼트 (Y 축)을 설정합니다. </li><li> 차트의 오른쪽에 채널 1을 클릭합니다. 입력 앰프를 클릭하십시오. 않도록 설정 : AC 결합, 단일 종단, 그리고 반전 (필요한 경우 신호를 전도), 그리고 안티 - 별칭, 확인합니다. </li><li> 기록 프레스 시작를 시작합니다. </li></ul></li><li> 준비를 선택하고 흉부와 복부 사이의 시점에서 GI 트랙트를 잘라. 그런 다음 조심스럽게 꼬리 텔슨 부분 주위 컷. 해부 크레이 피쉬에서 GI 트랙트를 제거하고 Sylgard 요리에 넣습니다. GI 트랙트의 지느러미 부분을 따라 실행하는 혈관이 있습니다. 조심스럽게 GI 트랙트 멀리 이것을 가져옵니다. 준비에 신선한 크레이 피쉬 호수 붓고. </li><li> 해부 크레이 피쉬 근처 클램프의 힘 변환기를 배치합니다. </li><li> 그림 5에 표시된 왕새우 GI의 힘 변환기를 연결. <img src="/files/ftp_upload/2324/2324fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5 : 힘 변환기의 갈고리에 연결된 호수에서 왕새우 절연 hindgut </li><li> LabChart7에서 시작 GI가 계약에 시작할 때까지 기다려, 그리고 밀고. </li><li> 약 20 초 동안 실행 프로그램을 보자. &quot;오직 살린&quot;, &quot;그만&quot;와라는 코멘트를 추가하십시오. 푸시 표 4를 입력하십시오. 표 4 : 관심의 화합물로 진통 <table border="1"><tbody><tr><td> 수축 번호 </td><td> 수축 진폭 (MV) </td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table></li><li> 관심의 테스트 화합물을 추가하고, 즉시 LabChart7에서 &quot;시작&quot;푸시. </li><li> 약 20 초 동안 실행 프로그램을 보자. &quot;중지&quot;를 눌러 직접 차트 파일을 추가했던 물질과 그 농도로 코멘트를 추가하십시오. 아래의 테이블을 작성하십시오. 표 5 : _________ 화합물과 진통 <table border="1"><tbody><tr><td> 수축 번호 </td><td> 수축 진폭 (MV) </td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table></li><li> 피펫을 사용하여 크레이 피쉬 호수와 준비를 씻어 내 버리지. </li><li> 비슷한 방법으로 다른 물질이나 여러 가지 농도를 추가합니다. 바로 LabChart7에서 &quot;시작&quot;푸시. </li><li> 약 20 초 동안 실행 프로그램을 보자. 푸시는 &quot;중지&quot;및 C를 나타내는 직접 차트 파일에 주석 및 레이블을 추가사용 농도 ompound. </li></ol> 3. 데이터 분석 <ol><li> 실험 그래프 각 솔루션 (호수, 세로토닌, 글루 탐 산염) 대부터 수축의 수를 2.3.1에서. 어떤 경향을 설명합니다. </li><li> 실험, 그래프의 각 솔루션의 수축의 수를 (호수, 세로토닌, 글루 탐 산염) 대 뮤직 비디오에서 수축의 진폭의 2.3.2에서. 어떤 경향을 설명합니다. </li></ol> 3.1) 수축의 속도와 힘을 측정 인덱스에 수축의 속도 한 편향의 처음부터 다음의 시작 시간을 측정하거나 분만을 통해 총 deflections을 계산합니다. 값은 다음 그들이 발생하는 방법에 따라 신속하게 분 당 초당 수축의 관점에서 넣어 수 있습니다. 색인에 ​​수축의 힘이 상대적인 조치는 여러 조건을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 저장된 파일을 하나 마커 &quot;M&quot;을 사용할 수 있으며 그 선에로 이동합니다. 그러면 커서를 사용하여 이동 편향의 정상과 델타 값 (정상에 M의 차이)와 같은 화면의 오른쪽 상단에 나와있는 값을 기록해 둡니다. 커서가 변화의 측정을위한 정지 보관해야합니다. 그렇다면 관심의 다음 물결 양식으로 M을 이동하고 조치를 반복합니다.

<ol>
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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonergic+modulation+of+crayfish+hindgut.+Biol+Bull.+217(1),+50-64+(2009).">Serotonergic modulation of crayfish hindgut. Biol Bull. 217(1), 50-64 (2009).</a> Biol Bull. 217, 50-64 (2009).</li><li>Shuranova, Z. P., Burmistrov, Y. M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hundred+years+ago+and+now:+A+short+essay+on+the+study+of+the+crustacean+hindgut.+(Vor+hundert+Jahren+und+nun:+Eine+kurze+Geschichte+von+die+Forschung+des+Hinterdarmes+der+Crustaceen.">A hundred years ago and now: A short essay on the study of the crustacean hindgut. (Vor hundert Jahren und nun: Eine kurze Geschichte von die Forschung des Hinterdarmes der Crustaceen.</a> Crustaceana. 76, 755-670 (2003).</li><li>Shuranova, Z. P., Burmistrov, Y. M., Strawn, J. R., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+Autonomic+Nervous+System+in+Decapod+Crustaceans.">Evidence for an Autonomic Nervous System in Decapod Crustaceans.</a> International Journal of Zoological Research. 2 (3), 242-283 (2006).</li><li>Siwicki, K. K., Bishop, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+proctolinlike+immunoreactivity+in+the+nervsou+systems+of+lobster+and.">Mapping of proctolinlike immunoreactivity in the nervsou systems of lobster and.</a> 243, 435-435 (1986).</li><li>Stemmler, E. A., Cashman, C. R., Messinger, D. I., Gardner, N. P., Dickinson, P. S., Christie, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-mass-resolution+direct-tissue+MALDI-FTMS+reveals+broad+conservation+of+three+neuropeptides+(APSGFLGMRamide,+GYRKPPFNGSIFamide+and+pQDLDHVFLRFamide)+across+members+of+seven+decapod+crustaean+infraorders.">High-mass-resolution direct-tissue MALDI-FTMS reveals broad conservation of three neuropeptides (APSGFLGMRamide, GYRKPPFNGSIFamide and pQDLDHVFLRFamide) across members of seven decapod crustaean infraorders.</a> Peptides. 28, 2104-2115 (2007).</li><li>Wales, W., Sandeman, D. C., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+mouthparts+and+gut.">Control of mouthparts and gut.</a> The Biology of Crustacea. 4, 165-191 (1982).</li><li>Webster, S. G., Dircksen, H., Chung, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+cells+in+the+gut+of+the+shore+crab+Carcinus+maenas+immunoreactive+to+crustacean+hyperglycaemic+hormone+and+its+precursor-related+peptide.">Endocrine cells in the gut of the shore crab Carcinus maenas immunoreactive to crustacean hyperglycaemic hormone and its precursor-related peptide.</a> J. Exp. Biol. 300, 193-205 (2000).</li><li>Winlow, W., Laverack, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+of+hindgut+motility+in+the+lobster+Homarus+gammarus+(L.).+1.+Analysis+of+hindgut+movements+and+receptor+activity.">The control of hindgut motility in the lobster Homarus gammarus (L.). 1. Analysis of hindgut movements and receptor activity.</a> Mar. Behav. Physiol. 1, 1-28 (1972).</li><li>Winlow, W., Laverack, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+of+hindgut+motility+in+the+lobster+Homarus+gammarus+(L.).+2.+Motor+output.">The control of hindgut motility in the lobster Homarus gammarus (L.). 2. Motor output.</a> Mar. Behav. Physiol. 1, 29-47 (1972).</li><li>Winlow, W., Laverack, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+control+of+hindgut+motility+in+the+lobster+Homarus+gammarus+(L.).+3.+Structure+of+the+sixth+abdominal+ganglion+(6+A.G.)+and+associated+ablation+and+microelectrode+studies.">The control of hindgut motility in the lobster Homarus gammarus (L.). 3. Structure of the sixth abdominal ganglion (6 A.G.) and associated ablation and microelectrode studies.</a> Mar. Behav. Physiol. 1, 93-121 (1972).</li><li>Wrong, A. D., Sammahin, M., Richardson, R., Mercier, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+properties+of+glutamate+receptors+associated+with+the+crayfish+hindgut.">Pharmacological properties of glutamate receptors associated with the crayfish hindgut.</a> J. Comp. Physiol. 189, 371-378 (2003).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

관련 동영상과 텍스트로 제공되는 세부 사항은 현장에서뿐만 아니라 체외에서 왕새우 hindgut의 활동을 기록하는 데 필요한 주요 단계를 설명합니다. 우리의 보고서 중 하나 목표는 생리학과 약리학의 기본 개념을 가르쳐 조사 연구소를 학생 실행이 준비의 잠재력에 대한 인식을 높일 수 있습니다. 이러한 준비는 hindgut의 생리 기능의 더 나은 이해를 이끌 실험 질문 숫자를 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 연동 파도와 그 반전의 규정을 기본 메커니즘은 아직 알려져 있지 않습니다. 전체 GI 트랙트 높은 제어를위한 메커니즘도 완전히 이해되지 않습니다. 높은 센터 직접 GI 시스템을 제어하는 자율 출력 그들의 활동을 통합하는 방법의 문제는 조사의 빈 공간 (Shuranova 외., 2006) 남아 있습니다. 또한, 갑각류 hindgut과 털갈이 및 환경 스트레스 동안 osmoregulation의 기능의 osmoregulatory 기능을 완전히 elucidated되지 않았습니다. 이 준비 답변을 기다리는 많은 질문이있을 수 있습니다.

<ol><li> 크레이 피쉬 (Procambarus clarkii). 아차 팔 라야 생물학 공급 주식 레이스 랜드, LA. 미국. </li><li> 표준 크레이 피쉬 호수 : 반 Harreveld의 ​​솔루션 (1936)에서 수정. (MM)를 205 NaCl, 5.3 KCl, CaCl 2 13.5 2 시간 2 O, 2.45 MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES 및 산도 7.4로 조정. 세로토닌, 글루 탐 산염과 도파민은 크레이 피쉬 호수에서 만들어집니다. 모든 화학 물질은 시그마 화학 회사 (세인트 루이스, MO)에서 얻을 수 있습니다. </li><li> 해부 도구 : 좋아요 # 5 핀셋, 고급 가위, 나이프 블레이드 홀더, # 26002-20 곤충 핀 (모든 파인 과학 도구 (미국), 주식 회사, 373 - G 빈티지 파크 드라이브, 포스터 시티, CA 94404-1139에서 얻은) </li><li> Sylgard 바닥 페트리 접시 </li><li> 비커 (화학 솔루션을 개최) </li><li> 전기 신호는 컴퓨터 (ADInstruments, 콜로라도 스프링스, CO, 미국)에 PowerLab 26T 인터페이스 라인에 기록됩니다. 우리는 차트 또는 범위 이름을 ADInstruments에서 표준 소프트웨어를 사용합니다. <li> 힘 변환기 (다른 브릿지 포드가 강제로 트랜스 듀서의 다른 유형을 위해 필요합니다)에 대한 브릿지 포드. </li><li> MLT0402 (2g) 힘 변환기는 동영상에 나타난 연구 등급입니다. MLT 0210 / D (10 MG - 25g) 및 MLT 500 / A (0~500그램) 교육 성적의 트랜스 듀서 (ADInstruments)입니다. </li></ol>

physiological experimentation with the crayfish hindgut: a student laboratory exercise

보고서의 목적은 크레이 피쉬 hindgut 준비를위한 해부 기술을 설명하고 수축의 강도를 모니터하는 힘 변환기와 생리 녹음을하는 방법을 보여줍니다하는 것입니다. 또한, 우리는 시각적으로 다양한 펩티드, biogenic 아민과 신경 전달 물질의 bioassay로 사용할 수있는 연동 활동을 모니터하는 방법을 보여줍니다. 이 준비는 생리학과 학생들에게 약리 개념을 보여주는 학생의 실험실 의무가 있습니다. 이 준비는 100 년 이상 사용되고 있으며, 그것은 여전히​​ 연동 리듬의 생성 및 규정을 조사 및 자신의 변조를 기본 메커니즘을 설명하기위한 모델로 많이 제공합니다. 약리 assays과 수용체 hindgut에 50 년 전에 시작되었다 서브 타이핑은 오늘날에도 연구에 기여하고 있습니다. 이 강력한 준비가 잘 생리학과 약리학의 교육 학생들에게 적합합니다.

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Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

이 보고서에서 우리는 크레이 피쉬 hindgut의 생물을 조사하는 데 사용할 수있는 기법을 보여줍니다. 우리는 가재의 복부를 절개하다와 관련된 해부학, 생리학 활동의 변조를 연구하는 방법을 보여줍니다. 수축의 연동 활동과 강도는 강제 변환기를 사용하여 측정하고 있습니다.

크레이 피쉬 Hindgut와 생리 실험 : 학생 실험실 연습

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings ...

physiological-experimentation-with-crayfish-hindgut-student

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.7K 조회수.  University of Kentucky. 이 보고서에서 우리는 크레이 피쉬 hindgut의 생물을 조사하는 데 사용할 수있는 기법을 보여줍니다. 우리는 가재의 복부를 절개하다와 관련된 해부학, 생리학 활동의 변조를 연구하는 방법을 보여줍니다. 수축의 연동 활동과 강도는 강제 변환기를 사용하여 측정하고 있습니다.

비디오: Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

Recording Behavioral Responses to Reflection in Crayfish

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems. One important issue concerns the relative roles of each sensory modality in guiding behavior. The role of visual inputs has been examined by isolating visual stimuli from mechanical and chemosensory stimuli. In some studies (Bruski &amp; Dunham, 1987: Delgado-Morales et al., 2004) visual inputs have been removed with blindfolds or low light intensity, and effects of remaining sensory modalities have been elucidated. An alternative approach is to study the effects of visual inputs in the absence of any appropriate mechanical and chemosensory cues. This approach aims to identify the exclusive role of visual inputs. 
We have used two methods to provide visual stimuli to crayfish without providing chemical and mechanical cues. In one method, crayfish are videotaped in an aquarium where half of the walls are covered in mirrors to provide a reflective environment, and the other half are covered in a non-reflective (matte finish) plastic. This gives the crayfish a choice between reflective and non-reflective environments. The reflective environment provides visual cues in the form of reflected images of the crayfish as it moves throughout half of the tank; these visual cues are missing from the non-reflective half of the tank. An alternative method is to videotape the behavior of crayfish in an aquarium separated by a smaller chamber at each end, with a crayfish in one small chamber providing visual cues and an inert object in the opposite small chamber providing visual input from a non-moving, non-crayfish source. 
Our published results indicate that responses of crayfish to the reflective environment depend on socialization and dominance rank. Socialized crayfish spent more time in the reflective environment and exhibited certain behaviors more frequently there than in the non-reflective environment; isolated crayfish showed no such differences. Crayfish that were housed in same-sex pairs developed a social rank of either dominant or subordinate. Responses to reflection differed between dominant and subordinate crayfish (May &amp; Mercier, 2006; May &amp; Mercier, 2007). Dominant crayfish spent more time on the reflective side, entered reflective corners more frequently and spent more time in reflective corners compared to the non-reflective side. Subordinate crayfish walked in reverse more often on the reflective side than on the non-reflective side. Preliminary data suggest similar effects from visual cues provided by a crayfish in a small adjoining chamber (May et al., 2008).

We have developed two methods for studying effects of visual cues on behavior in the absence of tactile and chemical cues. One method involves videotaping responses of crayfish to reflective walls in an aquarium; the other examines effects of visual inputs provided by a live crayfish behind a transparent partition.

크레이 피쉬에 리플렉션하는 행동 응답 녹음

Social behavior depends on sensory input from the visual, mechanical and olfactory systems.  One important issue concerns the relative roles of each ...

연구

신경과학

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

We explain in detail how to expose and conduct electrophysiological recordings of synaptic responses for high (phasic) and low (tonic) output motor neurons innervating the extensor muscle in the walking leg of a crayfish. Distinct differences are present in the physiology and morphology of the phasic and tonic nerve terminals. The tonic axon contains many more mitochondria, enabling it to take a vital stain more intensely than the phasic axon. The tonic terminals have varicosities, and the phasic terminal is filiform. The tonic terminals are low in synaptic efficacy but show dramatic facilitated responses. In contrast, the phasic terminals are high in quantal efficacy but show synaptic depression with high frequency stimulation. The quantal output is measured with a focal macropatch electrode placed directly over the visualized nerve terminals. Both phasic and tonic terminals innervate the same muscle fibers, which suggests that inherent differences in the neurons, rather than differential retrograde feedback from the muscle, account for the morphological and physiological differentiation.

This article demonstrates how to conduct electrophysiological recordings of synaptic responses on the extensor muscle in the walking leg of a crayfish and how the nerve terminals are visualized to show the gross morphological differences of high- and low-output nerve terminals.

크레이 레그 신근 근육에 높은 및 낮은 출력 NMJs의 생리 레코딩

We explain in detail how to expose and conduct electrophysiological recordings of synaptic responses for high (phasic) and low (tonic) output motor ...

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that influence a cell's membrane potential and which we address in these experiments are: (1) Ion concentration of K+ on the outside of the membrane, and (2) the permeability of the membrane to specific ions. The crayfish abdominal extensor muscles are in groupings with some being tonic (slow) and others phasic (fast) in their biochemical and physiological phenotypes, as well as in their structure; the motor neurons that innervate these muscles are correspondingly different in functional characteristics. We use these muscles as well as the superficial, tonic abdominal flexor muscle to demonstrate properties in synaptic transmission. In addition, we introduce a sensory-CNS-motor neuron-muscle circuit to demonstrate the effect of cuticular sensory stimulation as well as the influence of neuromodulators on certain aspects of the circuit. With the techniques obtained in this exercise, one can begin to answer many questions remaining in other experimental preparations as well as in physiological applications related to medicine and health. We have demonstrated the usefulness of model invertebrate preparations to address fundamental questions pertinent to all animals.

The experiments demonstrate an easy approach for students to gain experience in examining muscle structure, synaptic responses, the effects of ion gradients and permeability on membrane potentials. Also, a sensory-CNS-motor-muscle circuit is presented to show a means to test effects of compounds on a neuronal circuit.

멤브레인 후보, 시냅틱 응답,의 연결 회로, Neuromodulation과 크레이를 사용하여 근육 조직학 : 학생 실험실 연습

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

크레이 피쉬 복부 근육 수용체 기관 : Proprioception에서 학생 실험실 연습

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

VisualEyes: A Modular Software System for Oculomotor Experimentation

Eye movement studies have provided a strong foundation forming an understanding of how the brain acquires visual information in both the normal and dysfunctional brain.1 However, development of a platform to stimulate and store eye movements can require substantial programming, time and costs. Many systems do not offer the flexibility to program numerous stimuli for a variety of experimental needs. However, the VisualEyes System has a flexible architecture, allowing the operator to choose any background and foreground stimulus, program one or two screens for tandem or opposing eye movements and stimulate the left and right eye independently. This system can significantly reduce the programming development time needed to conduct an oculomotor study. The VisualEyes System will be discussed in three parts: 1) the oculomotor recording device to acquire eye movement responses, 2) the VisualEyes software written in LabView, to generate an array of stimuli and store responses as text files and 3) offline data analysis. Eye movements can be recorded by several types of instrumentation such as: a limbus tracking system, a sclera search coil, or a video image system. Typical eye movement stimuli such as saccadic steps, vergent ramps and vergent steps with the corresponding responses will be shown. In this video report, we demonstrate the flexibility of a system to create numerous visual stimuli and record eye movements that can be utilized by basic scientists and clinicians to study healthy as well as clinical populations.

Neural control and cognitive processes can be studied through eye movements. The VisualEyes software allows an operator to program stimuli on two computer screens independently using a simple, custom scripting language. The system can stimulate tandem eye movements (saccades and smooth pursuit) or opposing eye movements (vergence) or any combination.

VisualEyes : 안구 운동 실험을위한 모듈 형 소프트웨어 시스템

Eye movement studies have provided a strong foundation forming an understanding of how the brain acquires visual information in both the normal and ...

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex behaviors such as food choice, predator, conspecific and mate recognition and other socially relevant cues. Olfactory receptor neurons (ORNs) are located in the dorsal part of the nasal cavity embedded in the olfactory epithelium. These bipolar neurons send an axon to the olfactory bulb (see Fig. 1, Reisert &amp; Zhao1, originally published in the Journal of General Physiology) and extend a single dendrite to the epithelial border from where cilia radiate into the mucus that covers the olfactory epithelium. The cilia contain the signal transduction machinery that ultimately leads to excitatory current influx through the ciliary transduction channels, a cyclic nucleotide-gated (CNG) channel and a Ca2+-activated Cl- channel (Fig. 1). The ensuing depolarization triggers action potential generation at the cell body2-4.
In this video we describe the use of the "suction pipette technique" to record odorant-induced responses from ORNs. This method was originally developed to record from rod photoreceptors5 and a variant of this method can be found at jove.com modified to record from mouse cone photoreceptors6. The suction pipette technique was later adapted to also record from ORNs7,8. Briefly, following dissociation of the olfactory epithelium and cell isolation, the entire cell body of an ORN is sucked into the tip of a recording pipette. The dendrite and the cilia remain exposed to the bath solution and thus accessible to solution changes to enable e.g. odorant or pharmacological blocker application. In this configuration, no access to the intracellular environment is gained (no whole-cell voltage clamp) and the intracellular voltage remains free to vary. This allows the simultaneous recording of the slow receptor current that originates at the cilia and fast action potentials fired by the cell body9. The difference in kinetics between these two signals allows them to be separated using different filter settings. This technique can be used on any wild type or knockout mouse or to record selectively from ORNs that also express GFP to label specific subsets of ORNs, e.g. expressing a given odorant receptor or ion channel.

Olfactory receptor neurons (ORNs) convert odor signals first into a receptor current that in turn triggers action potentials that are conveyed to second order neurons in the olfactory bulb. Here we describe the suction pipette technique to record simultaneously the odorant-induced receptor current and action potentials from mouse ORNs.

흡입 피펫 기법을 사용하여 강한 수용체 뉴런에서 기록 Odorant 유발 응답

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons responsible for proprioception as they are detecting joint position and movement, and muscle tension. Electrical activity from crustacean proprioceptors and tension receptors is recorded by basic neurophysiological instrumentation, and a transducer is used to simultaneously measure force that is generated by stimulating a motor nerve. In addition, we demonstrate how to stain the neurons for a quick assessment of their anatomical arrangement or for permanent fixation. Staining reveals anatomical organization that is representative of chordotonal organs in most crustaceans. Comparing the tension nerve responses to the proprioceptive responses is an effective teaching tool in determining how these sensory neurons are defined functionally and how the anatomy is correlated to the function. Three staining techniques are presented allowing researchers and instructors to choose a method that is ideal for their laboratory.

Physiological and anatomical techniques are demonstrated to address function and structure for joint proprioceptors and muscle tension receptors in crustacean walking limbs.

게 사지에서 고유 감각과 긴장 수용체 : 학생 실험실 연습

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of critical importance during the development of the circuit. Using the functional output of the circuit, feeding, changes in the neuronal architecture of the stomatogastric system can be visualized. Feeding behavior can be recorded by observing the rate of retraction of the mouth hooks, which receive innervation from the brain. Locomotor behavior is used as a physiological control for feeding, since larvae use their mouth hooks to traverse across an agar substrate. Changes in feeding behavior can be correlated with the axonal architecture of the neurites innervating the gut. Using immunohistochemistry it is possible to visualize and quantitate these changes. Improper handling of the larvae during behavior paradigms can alter data as they are very sensitive to manipulations. Proper imaging of the neurite architecture innervating the gut is critical for precise quantitation of number and size of varicosities as well as the extent of branch nodes. Analysis of most circuits allow only for visualization of neurite architecture or behavioral effects; however, this model allows one to correlate the functional output of the circuit with the impairments in neuronal architecture.

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae serves a simple yet powerful model that allows changes in feeding rate to be correlated with alterations in the stomatogastric neural circuitry. This circuit is composed of central serotonergic neurons that send projections to the mouth hooks as well as the foregut.

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The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

구강 지방산 임계 값, 지방 지각, 지방 음식을 좋아하고, 인간의 용의자 밀도 측정

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...