저자는 조심스럽게 원고를 검토하는 WJ Looney을 인정합니다.

폐 TB 데 의심 모든 환자는 세균 시험 적어도 두 개의 가래 표본을 제출해야 결핵 관리 상태에 대한 국제 표준의 표준 2. 가래가 가장 높은 수율을 가지고이 시간에 수집으로 가능한 경우, 적어도 하나의 내일 아침 일찍 표본이 획득해야한다. 11 Xpert MTB / 리프 검정은 아르 유도하거나 expectorated sputa에서 준비 가래 샘플이나 집중 가래 퇴적물에 적용 할 수있는 . 긍정적이거나 부정적인 어느 산 빠른 bacilli (AFB)을 뛰어 넘는 6, 12, 13는 검정이가 가지고 폐 TB의 임상 혐의입니다 누구를 위해 환자의 표본과 함께 사용하기위한 것입니다 : 1) 안티 - 결핵 치료, 2를받지 못 ) &lt;7 치료의 일, 또는 3)는 지난 60 일 치료를받지 못한습니다. 이 박테리아 DNA는 항균 치료 후 계속 있기 때문에 약물 치료 7의 효과를 모니터링하기 위해 사용해서는 안됩니다 점에 유의 마십시오. <p클래스 = &quot;jove_content&quot;&gt;와 같은 전염성 에이전트를 전송할 수있는 경우에는 사용 카트리지를 포함하여 임상 표본, 다룹니다. 이러한 입고 보호 일회용 장갑, 실험실 코트와 눈 보호 등의 적절한 조치를 사용하고, 소속 기관의 안전 절차 및 지침을 따르십시오. 1. Expectorated 가래 샘플 참고 : 남아있는 프로세스는 한 번에 많은 표본으로 GeneXpert DX 시스템이 테스트를 실행할 수 있습니다 모듈! <ol><li> 해당 표본 ID 각 Xpert MTB / 리프 카트리지를 붙입니다. </li><li> 이전 1.0 ML은 살균 전송 피펫을 사용하여 원뿔형, 스크류 덮인 관에 가래를 expectorated. 또는, 전체 표본은 원래의 누출 방지 가래 수집 용기에 처리 될 수 있습니다. </li><li> 살균 전송 피펫을 사용하여 expectorated 가래에, 2.0 ML Xpert MTB / 리프 샘플 시약을 (V / V 2:1) 추가합니다. </li><li> 뚜껑을 교체하고, 힘차게 10 관을 흔들-20 번. 또는 혼합물은 (30 초) vortexed 될 수 있습니다. </li><li> 튜브 상온에서 5 분 동안 똑바로 서서 할 수 있습니다. </li><li> 힘차게 평균의 10 배에서 20 배 관을 흔들어. 또는, (30 초) 소용돌이를 사용합니다. </li><li> 튜브 상온에서 또 다른 10 분 동안 똑바로 서서 할 수 있습니다. </li><li> 표본 검사 : 샘플은 가래의 눈에 띄는 clumps와 액화해야합니다. </li></ol> 2. 집중 퇴적물 참고 : 프로세스는 GeneXpert DX 시스템이있는 한 한 번에 많은 표본으로 테스트를 실행할 수 있습니다 모듈! <ol><li> 해당 표본 ID 각 Xpert MTB / 리프 카트리지를 붙입니다. </li><li> 살균 전송 피펫을 사용하여 원뿔형, 스크류 덮인 관에 1.5 ML Xpert MTB / 리프 샘플 시약을 전송합니다. </li><li> 살균 전송 피펫을 사용하여 샘​​플 시약이 포함 된 튜브 최소 0.5 ML 집중 퇴적물을 추가합니다. </li><li> 뚜껑을 교체하고, 관 v를 흔들igorously 평균의 10 배에서 20 배. 또는, (30 초) 소용돌이를 사용합니다. </li><li> 튜브 상온에서 5 분 동안 똑바로 서서 할 수 있습니다. </li><li> 힘차게 평균의 10 배에서 20 배 관을 흔들어. 또는, (30 초) 소용돌이를 사용합니다. </li><li> 튜브 상온에서 또 다른 10 분 동안 똑바로 서서 할 수 있습니다. </li><li> 표본 검사 : 샘플은 가래의 눈에 띄는 clumps와 액화해야합니다. </li></ol> 3. Xpert MTB / 리프 카트리지로드 참고 : 카트리지에 샘플을 추가 30 분 이내에 시험을 시작! <ol><li> Xpert MTB / 리프 카트리지 및 표본 ID에 레이블을 확인하십시오. </li><li> 카트리지 뚜껑을 엽니 다. </li><li> 제공되는 무균 전송 피펫을 사용하여 초승달 모양이 최소 마르크 위까지 전송 피펫으로 액화 표본을 기음과 Xpert MTB / 리프 카트리지의 열린 포트에 샘플을 전송합니다. </li></ol> 참고 :에어로졸 형성의 위험을 최소화하기 위해 천천히 투여! <ol start="4"><li> 카트리지 뚜껑을 닫습니다. </li></ol> 4. 테스트 시작 참고 : 테스트를 시작하기 전에 GeneXpert DX 시스템은 GX2.1 소프트웨어가 구비되어 있는지 확인하고, Xpert MTB / 리프 분석이 소프트웨어로 가져 아홉주세요! <ol><li> 컴퓨터를 켠 다음 GeneXpert DX 장비를 켜십시오. </li><li> Windows 바탕 화면에서 GeneXpert DX 바로 가기 아이콘을 두 번 클릭합니다. </li><li> 사용자 이름과 암호를 사용하여 GeneXpert DX 시스템 소프트웨어에 로그온합니다. </li><li> GeneXpert DX 시스템 창에서, 테스트 만들기를 클릭합니다. 스캔 카트리지 바코드 대화 상자가 나타납니다. </li><li> 샘플 ID 상자에서 스캔하거나 샘플 ID를 입력합니다. </li><li> Xpert MTB / 리프 카트리지에있는 바코드를 스캔합니다. 작성 테스트 창이 나타납니다. </li><li> 테스트 시작을 클릭 </strong&gt; 및 나타나는 대화 상자에 암호를 입력합니다. </li><li> 깜박이는 녹색 빛으로 악기 모듈 도어를 열고 카트리지를로드합니다. </li><li> 문을 닫습니다. 시험은 시작되고 빛이 깜빡 거림을 중단하고 지속적으로 녹색 남아 있습니다. 테스트가 완료되면 불이 꺼집니다. </li><li> 시스템이 실행의 끝에서 문 잠금을 출시 할 때까지 기다린 후 모듈 문을 열고 카트리지를 제거합니다. </li><li> 소속 기관의 표준 관행에 따라 적절한 폐기물 용기에 사용되는 카트리지의 폐기하십시오. </li></ol> 5. 대표 결과 각 Xpert MTB / 리프 카트리지는 MTB 복잡하고 리프 저항의 검출뿐만 아니라 대상 박테리아의 적절한 처리를 위해 제어하고 PCR 반응 억제제의 존재 (들)을 모니터링하기 위해 샘플 처리 제어 (SPC)의 시약을 포함 . 프로브 검사 컨트롤 (PCC)는 PCR 튜브가 작성, 시약 rehydration를 확인카트리지는, 프로브 무결성 및 염료 안정성. Xpert MTB / 리프 검정 9 프리 머의 81 기본 쌍 &quot;핵심&quot;지역을 포함하는 rpoB 유전자의 일부를 증폭. 분자 비콘이라는 다섯 다른 색의 형광 핵산 ​​하이브리드 프로브는 전체 81-BP 코어를 심문. 14 각 분자 비콘은 대상 시퀀스 야생 형 rpoB과 다른 경우는 대상에 바인딩하지 않도록 특정 할 수 있도록 설계되었습니다 단일 염기 치환처럼 약간의 순서. 그들이 목표 즉, 야생 형 rpoB 시퀀스에 바인딩 된 경우에만 분자 비콘의 형광 때문에, 검정의 5 가지 색상 중 하나의 부재가와 관련된 핵심 지역에 보존 야생 형 순서 및 변이 구분 리프 저항 6. SPC는 제외 샘플에 긍정적이어야하며 긍정적 인 샘플에 부정적이거나 긍정적이 될 수 있습니다. 시험SPC가 제외 어 시험에서 발견되지 않을 경우 결과는 &quot;잘못된&quot;입니다. PCR 반응의 시작하기 전에 GeneXpert DX 시스템은 구슬 rehydration, 반응 관의 충전, 프로브 무결성 및 염료 안정성을 모니터링하기 위해 프로브의 형광 신호를 측정합니다. 프로브의 형광 신호가 할당 된 허용 기준을 충족하는 경우 PCC가 전달됩니다. 결과는 측정 형광 신호 및 임베디드 계산 알고리즘에서 GeneXpert DX 시스템에 의해 해석되고 결과보기 창 구에 표시됩니다, 아래에 표시 : MTB가 감지 : MTB 대상 DNA가 감지되며 두 컨트롤 SPC와 PCC는 할당 된 허용 기준을 충족합니다. 낮은 CT 값은 DNA 템플릿의 높은 농도 시작을 나타냅니다, 높은 CT 값은 DNA 템플릿의 낮은 농도를 나타냅니다. MTB 감지 결과에 &quot;리프 저항 감지&quot;(그림 1A), ( &quot;리프 저항이 발견되지&quot; <str긴 사연&gt; 그림 1B), 또는 &quot;리프 저항 불분명하다&quot;는 별도의 행에 표시됩니다. MTB가 감지되지 않음 : MTB 대상 DNA가 감지되지 않습니다, 두 컨트롤 SPC와 PCC는 할당 된 허용 기준 (그림 2)을 만나보세요. 잘못된 : MTB의 유무를 확인할 수 없습니다 SPC는 허용 기준을 충족하지 못하는, 즉 샘플이 제대로 처리되지 않았습니다, 또는 PCR이 억제되었다 (그림 3). 참고 : 추가 표본과 반복 테스트! 오류 : (실패) 실패 PCC 결과 중 하나 이상을 사용하십시오. MTB와 SPC 모두 NO 결과를 표시하지 않습니다. 참고 : 추가 표본과 반복 테스트! PCC는 (합격) 합격하면 오류는 시스템 구성 요소 오류로 인해 발생합니다. 그림 1 : MTB 대상 DNA가 감지되며 두 컨트롤 SPC와 PCC는 할당 된 허용 기준을 충족합니다. 낮은 CT 값은 높은 시작하기를 나타냅니다DNA 템플릿의 농도, 높은 CT 값은 DNA 템플릿의 낮은 농도를 나타냅니다. MTB 감지 결과에 &quot;미지의 리프 저항&quot;는 별도의 행에 표시됩니다 (그림 1B) &quot;리프 저항이 감지&quot;또는, (그림 1A) &quot;리프 저항이 발견되지&quot;. <img alt="그림 1A" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" /> . 그림 1A MTB가 감지, 리프 저항은 81-BP 리프 rpoB 유전자의 저항 - 결정 지역 (RRDR)의 예는 야생 형 핵산 시퀀스, 발견되지 존재 6. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오이</a> . <img alt="그림 1b" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1B.jpg" /> . 그림 1B MTB가 감지, 리프 저항이 감지되었습니다. 위치를 포함하는 프로브 B (화살표)으로 떨어 완료 R의 513-517<html> rpoB 유전자의 RDR. 6의 예에서, 부분적인 순서는 rpoB 유전자 돌연변이 D516V이 감지 된 것으로 나타났다. 8 <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1Blarge.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭</a> . <img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig2.jpg" /> 그림 2 MTB 대상 DNA가 발견되지 않았습니다,.. 두 컨트롤 SPC와 PCC는 할당 된 허용 기준을 만족 <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig2large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig3.jpg" /> 샘플이 제대로 처리되지 않았기 때문에, SPC는 허용 기준을 충족하지 못하는, 또는 PCR이 억제 되었기 때문에 :. MTB의 그림 3 잘못된 테스트 결과, 즉 유무를 확인할 수 없습니다.3547fig3large.jpg &quot;대상 =&quot;_blank &quot;&gt; 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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	<li>Sudre, P., Dam, t. e. n., Chan, G., C, A., Kochi, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculosis+in+the+present+time:+a+global+overview+of+the+tuberculosis+situation.">Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation.</a> World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).</li><li>World Health Organisation. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+tuberculosis+control:+epidemiology,+strategy,+financing.">Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing.</a> WHO report 2010. , (2010).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The global plan to stop TB, 2006-2015. , (2006).</li><li>Morris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+multiple+drug+resistance+in+clinical+isolates+of+Mycobacterium+tuberculosis.">Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).</li><li>Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+isolates+from+diverse+countries+by+a+commercial+line+probe+assay+as+aninitial+indicator+of+multidrug+resistance.">Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance.</a> Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).</li><li>Helb, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Rifampin+Resistance+by+Use+of+On-Demand+Near-Patient+Technology.">Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).</li><li>Blakemore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Analytical+Performance+of+the+Xpert+MTB/RIF.">Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF.</a> Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).</li><li>Telenti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampicin-resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis.">Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis.</a> Lancet. 341, 647-650 (1993).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GeneXpert Dx System Operator Manual. , (2011).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> International Standards for Tuberculosis Care (ISTC). , (2009).</li><li>Boehme, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+Molecular+Detection+of+Tuberculosis+and+Rifampin+Resistance.">Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).</li><li>Marlowe, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Cepheid+Xpert+MTB/RIF+assay+for+the+Direct+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+from+Respiratory+Specimens.">Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).</li><li>El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+rifampin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+in+a+single+tube+with+molecular+beacons.">Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).</li><li>Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+molecular+detection+of+extrapulmonary+tuberculosis+by+automated+GeneXpert+MTB/RIF+system.">Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

Xpert MTB / 리프 검정은 단일에 expectorated 가래 또는 집중 퇴적물에서 직접 MTB와 리프 저항의 동시 검출을위한 샘플 정화, 핸즈프리 작동, 온보드 샘플 처리 및 매우 민감한 헤미 중첩 된 PCR을 통합 시스템을 사용하기 쉬운. 탐지 분석의 분석 한도는 131 CFU / 가래의 ML로 발견되었다. 6 CT 값과 MTB 세포의 수 사이의 로그 선형 관계가 10월 2일부터 10월 7일까지 CFU / 가래의 ML에서 마찬가지 제시한다. 임상 관련 MTB 농도 분석의 선형 범위 내의 모든 가을 같이, 검정은 박테리아 부하의 반 정량적 추정치를 제공합니다. 7 검정은 중간 실험실 인프라와 교육이 필요합니다. 감지의 한도는 기존 현미경의보다 크기 이하의 적어도 두 개의 주문을 자리 잡고 있습니다. 6 특이성이 우수합니다. 또한, 리프 - resistan의 동시 검출t MTB는 약물 내성 TB의 시대에 포인트의 케어 테스트의 설정에 큰 혜택입니다. 3 임상 설정에서 폐 결핵 진단을위한 분석의 성능에 제한된 게시 된 데이터와 데이트를하려면 사용할 수 있습니다 12, 13. 문화에 비해 의심되는 폐 TB 환자의 가래에서 MTB를 검출 Xpert MTB / 리프 분석의 전체 임상 감도는 97.6 %였다 참조 있습니다. 그리고 1462 환자의 총이 다섯 학습 사이트를 (; 바쿠, 아제르바이잔,, 케이프 타운 (Cape Town) 및 더반, 남아프리카 공화국 인도 뭄바이 페루 리마) 관련 유망 멀티 센터 연구의 결과이었다. 연구 인구의 문화 - 확인 TB의 전반적인 사전 검사 확률은 50.7 %이었다. 감도는 비방과 문화 긍정적 인 경우에 99.8 % 및 비방 - 제외 어, 문화 긍정적 인 경우에 90.2 %이었다. 폐 TB있는 HIV 양성 환자 중, MTB / 리프 시험의 감도는 98.4 %에 비해 93.9 %였다. 문화에 비해 HIV-음성 환자 낮은 결핵 유행의 설정에서 12, MTB를 검출하기위한 전체 계약 89 %이다, 감도는 각각, 비방 - 제외 어 표본에 대한 비방 - 긍정적, 72 %를 98%이었고, 특이성이 우수했다. 13 치료 가래에 테스트 및 농축 퇴적물에있는 사이에 감도에 큰 차이가 없었습니다. 12 같은 연구에서는 MTB / 리프 테스트가 올바르게 209 211의 환자 (99.1 % 감도)과의 리프 저항을 감지 시퀀싱 결과가 고려 된 리프의 민감도 모든 506 환자 (100 % 특이성), 12. 저자는 연구 결과가 가능성이 제안, 케이스 감지 및 리프 저항의 차별, 모두 성능이 다양한 사이트에 유사한 것으로 나타났습니다 광범위하게 적용. 또한 12 일에는 야생마 - 폐포 세척 및 bronchia 같은 가래가 아닌 다른 호흡기 표본의 집중 퇴적물,난 분비물은 비교 감성과 특이성 테스트되었습니다. 분석의 성능에 13 데이터 추가 - 폐 TB 테스트를 대두되고 있습니다. 15 글로벌 TB 컨트롤은 급하게 포인트의 케어 설정. MTB를 검색하는 데 사용 3 현재 핵산 증폭 방법은 노동 집약적 인 복잡 빠른 새로운 TB의 경우 진단과 보편적 접속의 리프 방지 MTB의 검출을 허용 효과적인 도구가 필요합니다 및 기술적 요구. Xpert MTB / 리프 검정은 그럴 형편이 할 수 한해 설정 TB 및 약물에 저항, 모두, 표준화 민감하고 매우 구체적인 진단 테스트를 가져올 수있는 가능성이 있습니다. 접근을 용이하게하기 위해, 혁신적인 새로운 진단 (발견)을위한 재단은 Xpert MTB / 리프 시험에 상당한 가격 인하 협상을하고 있습니다. 할인을받을 국가의 목록과 함께 현재 발견 - 협상 가격은, 웹에서 사용할 수 있습니다. 10 </suP&gt;

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 장비 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Xpert MTB / 리프 테스트 </td><td> Cepheid </td><td> GXMTB/RIF-10 </td></tr><tr><td> 전송 피펫 </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1172.001 </td></tr><tr><td> 원뿔 튜브, 15 ML, 120 X 17mm, PS </td><td> Sarstedt </td><td> 62.553.542 </td></tr></tbody></table>

diagnosing pulmonary tuberculosis with the xpert mtb/rif test

Mycobacterium 결핵 (MTB)로 인해 결핵 (TB)는 주요 공중 보건 문제 남아 감염은 세계 인구 1의 3 분의 1까지 영향을 거의 이백만명는 매년 TB에 의해 사망 고품질 2 유니버설 액세스 할 수 있습니다. 모든 결핵 환자 환자 중심의 치료를 중지 결핵 전략 WHO에 의해 강조된다. 3 신뢰할 수있는 약물 저항 테스트 결과에 따라 호흡 표본 및 약물 요법의 MTB의 급속한 탐지는이 전략의 성공적인 실행을위한 전제 조건입니다. 그러나 세계의 많은 지역에서 결핵 진단은 여전히​​ 문자를 구분, 제대로 표준화 가래 현미경 방법에 의존하고 있습니다. 효과 TB 감지 및 약제 내성 MTB의 변종의 출현 및 전송은 점점 세계 결핵 퇴치 활동을 위험 2. 글로벌 규모의 - - 스탠드의 폐 TB의 효과적인 진단 가용성을 필요로ardized, MTB 복잡하고 rifampicin (리프) 등 주요 항생제에 저항 모두의 직접 감지를 허용 사용하기 쉬운, 그리고 강력한 진단 도구를 제공합니다. 후자의 결과 multidrug 방지 MTB (MDR의 TB)에 대한 마커 역할을 할 수 있으며 신뢰할 수있는 시험 결과의 급속한 현황&gt; MDR-TB의 분리의 95 %. 4, 5에보고되었습니다 것은 바로 사운드 환자 관리로 번역 할 가능성이 궁극적으로 개별 환자를 치료하고 지역 사회의 TB 전송의 사슬을 깰 것으로 결정 2. Cepheid의 (서니 베일, CA, USA) Xpert MTB / 리프 검정 6, 7은 놀라운 방식으로 위에 설명 된 요구 사항을 충족합니다. 이) 가래 또는 집중 가래 퇴적물의 MTB 복잡한 DNA의 검출 1에 대한 핵산 - 산 증폭 테스트 및 2) rpoB 유전자의 리프 저항 - 관련 변이의 검출 8은 Cepheid의 GeneXpert DX와 함께 사용하도록 설계되어 있습니다. 시스템 일에서는 통합 및 샘플 처리, 핵산 증폭 및 실시간 PCR 및 역방향 transcriptase PCR을 사용하여 대상 시퀀스의 확인을 자동화합니다. 이 시스템은 악기로 구성되어, 개인용 컴퓨터, 바코드 스캐너, 및 테스트를 실행하고 결과를 볼 수 사전로드 소프트웨어. 9은 PCR 시약을 보유하고 PCR 과정을 개최 일회용 Xpert MTB / 리프 카트리지를 하나의 사용을 고용하고 있습니다. 카트리지가 독립적이기 때문에, 샘플 간의 교차 오염이 제거됩니다. MTB를 검색하는 데 사용 6 현재 핵산 증폭 방법은 복잡한 노동 집약적, 그리고 기술적 요구합니다. Xpert MTB / 리프 검정은 그럴 형편이 할 수있는 한 보편적 인 액세스 포인트의 케어 설정 3에 TB 및 약물 저항 모두를 위해 표준화 민감하고 매우 구체적인 진단 테스트를 가져올 수있는 가능성이 있습니다. 접근을 용이하게하기 위해, 혁신적인 새로운 진단을위한 재단 (찾기) signifi 협상을했습니다캔트 가격 인하. 할인을받을 국가의 목록과 함께 현재 발견 - 협상 가격은, 웹에서 사용할 수 있습니다. 10

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Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Xpert MTB / 리프 테스트의 동시 검출을위한 샘플 정화, 핸즈프리 작동, 온보드 샘플 처리 및 매우 민감한 헤미 중첩 된 PCR을 통합<em&gt; Mycobacterium 결핵</em약 2 시간 expectorated 가래 또는 가래 집중 퇴적물의 하나&gt;와 rifampicin 저항,. 테스트 표준화되어 만 중간 실험실 인프라와 교육이 필요합니다.

Xpert MTB / 리프 시험과 폐 결핵 진단

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

79.8K 조회수.  University of Bern. Xpert MTB / 리프 테스트의 동시 검출을위한 샘플 정화, 핸즈프리 작동, 온보드 샘플 처리 및 매우 민감한 헤미 중첩 된 PCR을 통합 Mycobacterium 결핵와 rifampicin 저항,. 테스트 표준화되어 만 중간 실험실 인프라와 교육이 필요합니다.

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Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including antibiotics. Although stress tolerance of M. tuberculosis is one of the likely contributors to the 6-month long chemotherapy of tuberculosis 1, the molecular mechanisms underlying this characteristic phenotype of the pathogen remain unclear. Many microbial species have evolved to survive in stressful environments by self-assembling in highly organized, surface attached, and matrix encapsulated structures called biofilms 2-4. Growth in communities appears to be a preferred survival strategy of microbes, and is achieved through genetic components that regulate surface attachment, intercellular communications, and synthesis of extracellular polymeric substances (EPS) 5,6. The tolerance to environmental stress is likely facilitated by EPS, and perhaps by the physiological adaptation of individual bacilli to heterogeneous microenvironments within the complex architecture of biofilms 7.
In a series of recent papers we established that M. tuberculosis and Mycobacterium smegmatis have a strong propensity to grow in organized multicellular structures, called biofilms, which can tolerate more than 50 times the minimal inhibitory concentrations of the anti-tuberculosis drugs isoniazid and rifampicin 8-10. M. tuberculosis, however, intriguingly requires specific conditions to form mature biofilms, in particular 9:1 ratio of headspace: media as well as limited exchange of air with the atmosphere 9. Requirements of specialized environmental conditions could possibly be linked to the fact that M. tuberculosis is an obligate human pathogen and thus has adapted to tissue environments. In this publication we demonstrate methods for culturing M. tuberculosis biofilms in a bottle and a 12-well plate format, which is convenient for bacteriological as well as genetic studies. We have described the protocol for an attenuated strain of M. tuberculosis, mc27000, with deletion in the two loci, panCD and RD1, that are critical for in vivo growth of the pathogen 9. This strain can be safely used in a BSL-2 containment for understanding the basic biology of the tuberculosis pathogen thus avoiding the requirement of an expensive BSL-3 facility. The method can be extended, with appropriate modification in media, to grow biofilm of other culturable mycobacterial species.
Overall, a uniform protocol of culturing mycobacterial biofilms will help the investigators interested in studying the basic resilient characteristics of mycobacteria. In addition, a clear and concise method of growing mycobacterial biofilms will also help the clinical and pharmaceutical investigators to test the efficacy of a potential drug.

Growth of Mycobacterium tuberculosis Biofilms

Mycobacterium tuberculosis forms drug tolerant biofilms when cultured in certain conditions. Here we describe methods for culturing M. tuberculosis biofilms and determining the frequency of drug tolerant persisters. These protocols will be useful for further studies into the mechanisms of drug tolerance in M. tuberculosis.

의 성장 결핵은 Mycobacterium Biofilms

Mycobacterium tuberculosis, the etiologic agent of human tuberculosis, has an extraordinary ability to survive against environmental stresses including ...

연구

면역학 및 감염병학

Right Ventricular Systolic Pressure Measurements in Combination with Harvest of Lung and Immune Tissue Samples in Mice

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is a common modifier of heart and lung function, by elaborating cellular infiltration, production of cytokines and growth factors, and by initiating remodeling processes 1.
Compared to the left ventricle, the right ventricle is a low-pressure pump that operates in a relatively narrow zone of pressure changes. Increased pulmonary artery pressures are associated with increased pressure in the lung vascular bed and pulmonary hypertension 2. Pulmonary hypertension is often associated with inflammatory lung diseases, for example chronic obstructive pulmonary disease, or autoimmune diseases 3. Because pulmonary hypertension confers a bad prognosis for quality of life and life expectancy, much research is directed towards understanding the mechanisms that might be targets for pharmaceutical intervention 4. The main challenge for the development of effective management tools for pulmonary hypertension remains the complexity of the simultaneous understanding of molecular and cellular changes in the right heart, the lungs and the immune system.
Here, we present a procedural workflow for the rapid and precise measurement of pressure changes in the right heart of mice and the simultaneous harvest of samples from heart, lungs and immune tissues. The method is based on the direct catheterization of the right ventricle via the jugular vein in close-chested mice, first developed in the late 1990s as surrogate measure of pressures in the pulmonary artery5-13. The organized team-approach facilitates a very rapid right heart catheterization technique. This makes it possible to perform the measurements in mice that spontaneously breathe room air. The organization of the work-flow in distinct work-areas reduces time delay and opens the possibility to simultaneously perform physiology experiments and harvest immune, heart and lung tissues.
The procedural workflow outlined here can be adapted for a wide variety of laboratory settings and study designs, from small, targeted experiments, to large drug screening assays. The simultaneous acquisition of cardiac physiology data that can be expanded to include echocardiography5,14-17 and harvest of heart, lung and immune tissues reduces the number of animals needed to obtain data that move the scientific knowledge basis forward. The procedural workflow presented here also provides an ideal basis for gaining knowledge of the networks that link immune, lung and heart function. The same principles outlined here can be adapted to study other or additional organs as needed.

A specific and rapid protocol to simultaneously investigate right heart function, lung inflammation, and the immune response is described as a learning tool. Video and figures describe physiology and microdissection techniques in an organized team-approach that is adaptable to be used for small to large sized studies.

폐 마우스의 면역 조직 샘플의 수확과 함께 오른쪽 심실 수축기 압력 측정

The function of the right heart is to pump blood through the lungs, thus linking right heart physiology and pulmonary vascular physiology. Inflammation is ...

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the respective immune response to each single pathogen and may thereby affect pathogenesis and disease outcome. Coinfected patients may also respond differentially to anti-infective interventions. Coinfection between tuberculosis as caused by mycobacteria and the malaria parasite Plasmodium, both of which are coendemic in many parts of sub-Saharan Africa, has not been studied in detail. In order to approach the challenging but scientifically and clinically highly relevant question how malaria-tuberculosis coinfection modulate host immunity and the course of each disease, we established an experimental mouse model that allows us to dissect the elicited immune responses to both pathogens in the coinfected host. Of note, in order to most precisely mimic naturally acquired human infections, we perform experimental infections of mice with both pathogens by their natural routes of infection, i.e. aerosol and mosquito bite, respectively.

An Experimental Model to Study Tuberculosis-Malaria Coinfection upon Natural Transmission of Mycobacterium tuberculosis and Plasmodium berghei

Tuberculosis and malaria are two of the most prevalent infections in humans and major causes of morbidity and mortality in impoverished populations in the tropics. We established an experimental model system to study outcome of malaria-tuberculosis coinfection in mice after challenge with both pathogens via their natural route of infection.

자연의 전송에 결핵 말라리아 동시 감염을 연구하는 실험 모델 결핵균와 변형체 berghei</i

Coinfections naturally occur due to the geographic overlap of distinct types of pathogenic organisms. Concurrent infections most likely modulate the ...

Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading microorganisms. In addition, neutrophils play a central role in the immune surveillance of tumor cells. They have the ability to recognize tumor cells and induce tumor cell death either through a cell contact-dependent mechanism involving hydrogen peroxide or through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC). Neutrophils with anti-tumor activity can be isolated from peripheral blood of cancer patients and of tumor-bearing mice. These neutrophils are termed tumor-entrained neutrophils (TEN) to distinguish them from neutrophils of healthy subjects or na&#239;ve mice that show no significant tumor cytotoxic activity. Compared with other white blood cells, neutrophils show different buoyancy making it feasible to obtain a &#62; 98% pure neutrophil population when subjected to a density gradient. However, in addition to the normal high-density neutrophil population (HDN), in cancer patients, in tumor-bearing mice, as well as under chronic inflammatory conditions, distinct low-density neutrophil populations (LDN) appear in the circulation. LDN co-purify with the mononuclear fraction and can be separated from mononuclear cells using either positive or negative selection strategies. Once the purity of the isolated neutrophils is determined by flow cytometry, they can be used for in vitro and in vivo functional assays. We describe techniques for monitoring the anti-tumor activity of neutrophils, their ability to migrate and to produce reactive oxygen species, as well as monitoring their phagocytic capacity ex vivo. We further describe techniques to label the neutrophils for in vivo tracking, and to determine their anti-metastatic capacity in vivo. All these techniques are essential for understanding how to obtain and characterize neutrophils with anti-tumor function.

Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.

항 종양 특성을 가진 분리 및 호중구의 특성

Neutrophils, the most abundant of all white blood cells in the human circulation, play an important role in the host defense against invading ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte extravasation might result in pathophysiological changes in the CNS. Thus, investigation of lymphocyte migration into the CNS is important to understand inflammatory CNS diseases and to develop new therapy approaches. Here we present an in vitro model of the human blood-brain barrier to study lymphocyte extravasation. Human brain microvascular endothelial cells (HBMEC) are confluently grown on a porous polyethylene terephthalate transwell insert to mimic the endothelium of the blood-brain barrier. Barrier function is validated by zonula occludens immunohistochemistry, transendothelial electrical resistance (TEER) measurements as well as analysis of evans blue permeation. This model allows investigation of the diapedesis of rare lymphocyte subsets such as CD56brightCD16dim/- NK cells. Furthermore, the effects of other cells, cytokines and chemokines, disease-related alterations, and distinct treatment regimens on the migratory capacity of lymphocytes can be studied. Finally, the impact of inflammatory stimuli as well as different treatment regimens on the endothelial barrier can be analyzed.

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Here, we describe a human blood-brain barrier model enabling to investigate lymphocyte transmigration into the central nervous system in vitro.

를 사용하여 림프구 혈관 외로 유출 분석<em&gt; 체외</em&gt; 인간의 혈액 - 뇌 장벽의 모델

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in the caseous cores of cavities and lesions is especially crucial because they harbor subpopulations of drug-tolerant bacteria also commonly referred to as persisters. Existing methods for the measurement of drug penetration in tuberculosis lesions involve costly and time-consuming in vivo pharmacokinetic studies coupled to bioanalytical or imaging techniques. The in vitro measurement of drug binding to caseum macromolecules was proposed as an alternative to such techniques since this binding hinders the passive diffusion of drug molecules through caseum. Rapid equilibrium dialysis is a fast and reliable system for performing plasma protein and tissue binding studies. In this protocol, we used a rapid equilibrium dialysis (RED) device to measure drug binding to homogenates of caseum that is excised from the lesions and cavities of tuberculosis-infected rabbits. The protocol also describes how to generate a surrogate matrix from lipid loaded THP-1 macrophages to use in place of caseum. This caseum/surrogate binding assay is an important tool in tuberculosis drug discovery and can be adapted to help study drug distribution in lesions or abscesses caused by other diseases.

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

Here we describe a rapid equilibrium dialysis (RED) method to measure drug binding to caseum from pulmonary tuberculosis lesions and cavities. The protocol is also used with a foamy macrophage-derived matrix that is an effective surrogate to caseum.

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese individuals worldwide by 2030, thus representing a growing socioeconomic burden. Simultaneously, obesity-related comorbidities, including diabetes as well as heart and chronic lung diseases, are continuously on the rise. Although obesity has been associated with increased risk for asthma exacerbations, worsening of respiratory symptoms, and poor control, the functional role of obesity and perturbed metabolism in the pathogenesis of chronic lung disease is often underestimated, and underlying molecular mechanisms remain elusive. This article aims to present methods to assess the effect of obesity on metabolism, as well as lung structure and function. Here, we describe three techniques for mice studies: (1) assessment of intraperitoneal glucose tolerance (ipGTT) to analyze the effect of obesity on glucose metabolism; (2) measurement of airway resistance (Res) and respiratory system compliance (Cdyn) to analyze the effect of obesity on lung function; and (3) preparation and fixation of the lung for subsequent quantitative histological assessment. Obesity-related lung diseases are probably multifactorial, stemming from systemic inflammatory and metabolic dysregulation that potentially adversely influence lung function and the response to therapy. Therefore, a standardized methodology to study molecular mechanisms and the effect of novel treatments is essential.

The incidence of obesity is rising and increases the risk of chronic lung diseases. To establish the underlying mechanisms and preventive strategies, well-defined animal models are needed. Here, we provide three methods (glucose-tolerance-test, body plethysmography, and lung fixation) to study the effect of obesity on pulmonary outcomes in mice.

복 포도 당 내성 검사, 폐 기능 측정 및 폐의 고정 비만 및 장애인된 대사 폐 결과에 미치는 영향 연구

Obesity and respiratory disorders are major health problems. Obesity is becoming an emerging epidemic with an expected number of over 1 billion obese ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by fluorescence or bioluminescence. We utilize BlaC, an enzyme expressed constitutively by all M. tuberculosis strains. REF allows rapid quantification of bacteria in lungs of infected mice. The same group of mice can be imaged at many time points, greatly reducing costs, enumerating bacteria more quickly, allowing novel observations in host-pathogen interactions, and increasing statistical power, since more animals per group are readily maintained. REF is extremely sensitive due to the catalytic nature of the BlaC enzymatic reporter and specific due to the custom flourescence resonance energy transfer (FRET) or fluorogenic substrates used. REF does not require recombinant strains, ensuring normal host-pathogen interactions. We describe the imaging of M. tuberculosis infection using a FRET substrate with maximal emission at 800 nm. The wavelength of the substrate allows sensitive deep tissue imaging in mammals. We will outline aerosol infection of mice with M. tuberculosis, anesthesia of mice, administration of the REF substrate, and optical imaging. This method has been successfully applied to evaluating host-pathogen interactions and efficacy of antibiotics targeting M. tuberculosis.

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

We describe the optical imaging of mice infected with Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) using reporter enzyme fluorescence (REF). This protocol facilitates the sensitive and specific detection of M. tuberculosis in pre-clinical animal models for pathogenesis, therapeutics and vaccine research.

기자 효소 형광와 쥐에서 이미징 결핵균

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...

Co-immunoprecipitation Assay for Studying Functional Interactions Between Receptors and Enzymes

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with cytoplasmic tails of the receptors. The interactions often occur through specific protein domains and result in activation of the enzymes. There are several methods to study interactions between proteins. While co-immunoprecipitation is commonly used to study domains that are required for protein-protein interactions, there are no assays that document the contribution of specific domains to activity of the recruited enzymes at the same time. Accordingly, the method described here combines co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay for simultaneous evaluation of interactions between proteins and associated enzymatic activation. The goal of this protocol is to identify the domains that are critical for physical interactions between a protein and enzyme and the domains that are obligatory for complete activation of the enzyme. The importance of this assay is demonstrated, as certain receptor protein domains contribute to the binding of the enzyme to the cytoplasmic tail of the receptor, while other domains are necessary to regulate the function of the same enzyme.

Here, we present a protocol for co-immunoprecipitation and an on-bead enzymatic activity assay to simultaneously study the contribution of specific protein domains of plasma membrane receptors to both enzyme recruitment and enzyme activity.

수용 체와 효소 간의 기능 상호 작용을 공부에 대 한 분석 결과 Co-immunoprecipitation

Receptor-associated enzymes are the major mediators of cellular activation. These enzymes are regulated, at least in part, by physical interactions with ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of massage on skeletal muscles, the molecular mechanisms behind are poorly understood. We have recently developed a simple device to apply local cyclical compression (LCC), which can generate intramuscular pressure waves with varying amplitudes. Using this device, we have demonstrated that LCC modulates inflammatory responses of macrophages in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Here, we describe protocols for the optimization and application of LCC as a massage-like intervention against immobilization-induced inflammation and atrophy of skeletal muscles of mouse hindlimbs. The protocol that we have developed can be useful for investigating the mechanism underlying beneficial effects of physical exercise and massage. Our experimental system provides a prototype of the analytical approach to elucidate the mechanical regulation of muscle homeostasis, although further development needs to be made for more comprehensive studies.

Here we describe the protocols for applying defined mechanical loads to mouse calves and for monitoring the concomitant intramuscular pressure changes. The experimental systems that we have developed can be useful for investigating the mechanism behind the beneficial effects of physical exercise and massage.

마우스 종아리에 일관된 마사지와 같은 섭동을 적용하고 근육 내 압력 변화를 모니터링

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...