우리는 원고의 비판적 읽기를 위해 열 플레이트 분석, 플라이 주식에 대한 블루밍턴 Drosophila 증권 센터, Galko 연구소 회원 제안에 대한 애벌레 열 프로브 분석, 숀 스위니을 개발하기 위해 열 프로브 설계, 다니엘 Babcock위한 기독교 랜드리 감사드립니다. 이 작품은 MJG 및 연구 경력 (AVG)에 소수 액세스를위한 NIH MARC U-STAR 교육 그랜트 (휴스턴 - 다운 타운 학자 아카데미 대학 T34GM079088)에 NIH R01 NS069828에 의해 지원되었다.

<ol>
	<li>Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+signaling+mediates+UV-induced+nociceptive+sensitization+in+Drosophila+larvae.">Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae.</a> Curr. Biol. 19, 799-806 (2009).</li><li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=painless,+a+Drosophila+gene+essential+for+nociception.">painless, a Drosophila gene essential for nociception.</a> Cell. 113, 261-273 (2003).</li><li>Oswald, M., Rymarczyk, B., Chatters, A., Sweeney, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+thermosensitive+escape+behavior+in+Drosophila+larvae.">A novel thermosensitive escape behavior in Drosophila larvae.</a> Fly (Austin). 5, 17810 (2011).</li><li>Grueber, W. B., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tiling+of+the+Drosophila+epidermis+by+multidendritic+sensory+neurons.">Tiling of the Drosophila epidermis by multidendritic sensory neurons.</a> Development. 129, 2867-2878 (2002).</li><li>Moore, A. W., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hamlet,+a+binary+genetic+switch+between+single-+and+multiple-+dendrite+neuron+morphology.">hamlet, a binary genetic switch between single- and multiple- dendrite neuron morphology.</a> Science. 297, 1355-1358 (2002).</li><li>Gao, F. B., Brenman, J. E., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+regulating+dendritic+outgrowth,+branching,+and+routing+in+Drosophila.">Genes regulating dendritic outgrowth, branching, and routing in Drosophila.</a> Genes Dev. 13, 2549-2561 (1999).</li><li>Walters, E. T., Illich, P. A., Weeks, J. C., Lewin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensive+responses+of+larval+Manduca+sexta+and+their+sensitization+by+noxious+stimuli+in+the+laboratory+and+field.">Defensive responses of larval Manduca sexta and their sensitization by noxious stimuli in the laboratory and field.</a> J. Exp. Biol. 204, 457-469 (2001).</li><li>Woolf, C. J., Ma, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptors--noxious+stimulus+detectors.">Nociceptors--noxious stimulus detectors.</a> Neuron. 55, 353-364 (2007).</li><li>Hwang, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptive+neurons+protect+Drosophila+larvae+from+parasitoid+wasps.">Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps.</a> Curr. Biol. 17, 2105-2116 (2007).</li><li>Xiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921-926 (2010).</li><li>Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Projections+of+Drosophila+multidendritic+neurons+in+the+central+nervous+system:+links+with+peripheral+dendrite+morphology.">Projections of Drosophila multidendritic neurons in the central nervous system: links with peripheral dendrite morphology.</a> Development. 134, 55-64 (2007).</li><li>Sweeney, N. T., Li, W., Gao, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+manipulation+of+single+neurons+in+vivo+reveals+specific+roles+of+flamingo+in+neuronal+morphogenesis.">Genetic manipulation of single neurons in vivo reveals specific roles of flamingo in neuronal morphogenesis.</a> Dev. Biol. 247, 76-88 (2002).</li><li>Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+mechanosensory+transduction:+mechanoreception-defective+mutations+of+Drosophila.">Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila.</a> Neuron. 12, 1195-1206 (1994).</li><li>Nitabach, M. N., Blau, J., Holmes, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+silencing+of+Drosophila+pacemaker+neurons+stops+the+free-running+circadian+clock.">Electrical silencing of Drosophila pacemaker neurons stops the free-running circadian clock.</a> Cell. 109, 485-495 (2002).</li></ol>

우리는 공개 할게 없다.

여기에 설명된 assays는 질적 및 양적 유해 열 자극에 대한 반응에 대해 다른 genotypes의 유충을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 열 프로브 분석의 주요 기능은 자극은 단지 하나의 현장에서 주어진다는 것입니다. 이것은 아마도 아마도 유일한 작은 탐침으로 연락을 세그먼트에있는 클래스 IV 뉴런-것들의 집합과 바로 인접 세그먼트 11에서 이들의 발포로 안내합니다. 때문에 현지 자극, 열 프로브 분석은 지역과 같은 뜨거운 난로에 문의 손으로로서 특정 몸에 현지되는 유해 자극을 감지의 일반적인 감각 경험을 모방한 것이었 지요. ) I) 사용자가 유충에 프로브를 적용있는 압력, II 프로브의 정확한 위치 열 프로브 분석의 단점은 그것이 가능성이 세 가지 요소에 의한 것이 일부 사용자에 대한 사용자의 다양성을 가지고있다는 것입니다 기본 nociceptive 뉴런, 그리고, 3) 정확한 중앙에 상대적으로 유충에르 어떤 탐사선이 접점 유충의 표면에서. 우리는 이전에 주어진 온도를 1로 자신의 탈퇴 대기 시간을 기준으로 비 답장, 느린 조치 및 신속한 조치로 분류 애벌레의 양적 전략을보고했다. 여기에서 우리는 더 높은 온도에 애벌레 대응에 대한 리포트입니다. 흥미롭게도, 우리는 애벌레 열 nociceptive 답변에 천정이있다는 것을 발견하고이 천장 52 54 사이에 놓여 있다고 ° C. 이것은 일시적인 수용체 잠재적인 (TRP) 52보다 높은 온도에서 게이팅 수있는 채널 ° C를 소유하지 않는 애벌레 나타낼 수 또는 그것이 사용되는 뉴런이나 근육이 시작하거나 심지어 그들 aversive 탈퇴에서 작동하기 전에 운동 반응이 손상되어 수행하는 것이 좋습니다 수 있습니다. 우리는 또한 금단의 진폭의 다른 분석 반응을 이용하여 응답의 &quot;견고&quot;의 지표로서 롤의 숫자 중 하나를보고합니다. Naively 한이러한 매개 변수가 자극을 증가 온도 또​​는 시간으로 증가할 것이라고 기대합니다. 놀랍게도, 우리는이 사건 아닌 것을 알게됩니다. 애벌레는 유해 범위 (42 ℃)의 낮은 끝에 온도에서 긴 시간 동안 자극하는 것은 더 많은 롤을 보여 주며 더 많은 시간이 애벌레는 높은 온도 (48-52 ° C)에서 탐지보다 압연 보냈다. 이것은 유해 온도 창 안에 그것이 주로 응답의 진폭을 결정하는 노출의 기간입니다 것이 좋습니다. 애벌레는 매우 유해 온도에 노출되어 있기 때문에 (48-52 ° C) 매우 빠른 속도로 평균 반응, 그들은 시간의 긴 기간 동안 덜 유해 온도에 노출 애벌레 많은 롤스로 전시하지 않습니다.에게 여기에 보고된 응답 진폭의 분석은 다른 genotypes이나 환경 조작가를 비교할 수있는 더불어 또 다른 양적 차원을 추가합니다. 열 플레이트 분석의 주된 기능은 유해에 대한 글로벌 노출과 관련된 것입니다더위. 따라서 그것은 뜨거운 난로를 만져보다 가열 가마솥에 앉아 동물에 더 가깝다입니다. 유충이 글로벌 노출에 대한 행동 반응은 현지 자극에 따라 관찰하는 것보다 더 복잡 실험실에서, 야생에서 세계적으로 유해 자극을 경험할 수 있습니다했을 때 그것은 명확하지 않지만. 또 다른 3 언급 열 플레이트 분석의 강점은, 유충을 만지는 것은 프로토콜의 구성 요소가 아니므로 그것이 작은 사용자로 사용자의 다양성을 가지고있다는 것입니다. 유일한 상당한 편차는 각 행동 개시하고 이것이 반복 시청 / 친숙로 최소화할 수있을 때 정의하는 것으로 보인다. assays 사이에 흥미로운 차이는 aversive 동작이 시작되는 온도입니다. 이것은 열 프로브보다 열 플레이트 분석에서 훨씬 낮은 수 있습니다. 열 프로브 (머리와 꼬리 인상)으로 연락 애벌레가 전시 예비 동작 ° C 열 작은지면으로 ~ 27에서 관찰 헤드 록 음악의 한 형식으로 상관 관계를 수전자 분석. 그것은이 반응은 &#39;고통&#39;보다 더 &#39;불편&#39;을 반영하는 것이 가능합니다. 우리는 심지어 높은에서 압류를 흔든다의 상관 관계, 그리고 마비를 감찰하지 않은 (최대 48 ° C) 열 프로브 분석 기온 그리고 신체의 하나 이상의 지역에서 소성 감각 신경 세포의 중요한 대량임을있을 수 있습니다 이러한 행동을 가지고 필요했습니다. 그 세계 자극 로컬로 행동을 실행하는 데 충분하지가의 연결 응답 합산 포함됩니다 나타내는 열 프로브로 관찰 nociceptive 임계값의 하단 끝 아래 - 흥미롭게도, 발작과 마비 행동은 온도 (37 ° C ~ 34)에서 관찰된다 열 프로브의 응용. 이러한 온도 실제로 애벌레에 대한 유해으로 인식하고있는가 대부분의 경우하지 마비 동작을 시작하고 이후 플라이 음식을 복구하는 데 사용할 수 있습니다 애벌레는 (그림 5C) 살아남을 것을 관찰에 의해 지원됩니다. 또한 인수를 지원하는 그 열기 PL먹은 분석은 nociceptive 답변을 읽고있는 것은 잘 알려진 nociceptive 감각 뉴런에서 시냅스 전송을 차단하는 것이 관찰된 행동 (그림 6) 대부분의 대기 시간을 증가한다는 사실입니다. 높은 온도를 일으키는 행동을위한 대기 시간에는 증가가 없다는 것을 관찰 MD-Gal4을 표현하지 않는 감각 뉴런이 동작이 필요할 수 있습니다하는 것이 좋습니다. 글로벌 분석의 급속 가열 물 한 방울의 지역 분석 및 침수에 작은 금속 탐침의 핫 팁 - 요컨대, 두 assays는 정의된 온도의 유해 열 자극에 개별 애벌레를 노출하는 방식입니다. 유전 배경 및 / 변화 또는 환경 조건 (예 : 플러스 또는 마이너스 조직 손상에) 변화에 노출의 Drosophila의 유충의 행동 반응은, 공부하고 이러한 assays를 사용하여 계량하실 수 있습니다. 궁극적으로 이러한 assays 결과에서 우리가 더 NOC을 제어하는​​ 유전자 네트워크를 이해하는 데 도움이됩니다Drosophila 및 기타 관련 종의 iception.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 온도 프로브 </td><td> 프로 - 데브 공학 </td><td> 수요에 맞춤 건설한 </td><td> 연락처 정보는 요청시 제공될 수 있습니다 </td></tr><tr><td> 드라이 바스 인큐베이터 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 11-718 </td><td> 한 고체 가열 블록 및 16mm 우물 1 개 가열 블록 </td></tr><tr><td> Leica DFC290 12v/400mA 컬러 카메라 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 </td><td> 12730080 </td><td> 이와 동등한 카메라는 할 것입니다. </td></tr><tr><td> Leica MZ6 현미경 </td><td> Leica 마이크로 시스템즈 </td><td> MZ6 줌 몸에 부품 번호 (광학 캐리어)는 10445614입니다 </td><td></td></tr><tr><td> SCHOTT 에이스 Modulamp 단위 </td><td> SCHOTT 북미, 주식 회사 </td><td> A20500 </td><td></td></tr><tr><td> SCHOTT 듀얼 거위 목처럼 생긴 것 23 인치 광섬유 라이트 가이드 </td><td> SCHOTT 북미, 주식 회사 </td><td> SCHOTT A08575 </td><td></td></tr><tr><td> 온도 제어 장치 </td><td> TSCI 사. </td><td> 사용자 정의가 내장 </td><td> 자세한 내용은 요청시 제공될 수 있습니다 </td></tr><tr><td> 자이스 혈구 Stemi 2,000 현미경 </td><td> 자이스 혈구 </td><td> NT55-605 </td><td> 이와 동등한 현미경할 것입니다. </td></tr><tr><td> 집게 </td><td> FST </td><td> FS-1670 </td><td></td></tr><tr><td> 1mm 메쉬 </td><td> Genesee 과학 </td><td> 57-101 </td><td></td></tr><tr><td> 화필 </td><td> 딕 Blick 미술 재료 </td><td> 06762-1002 </td><td></td></tr><tr><td> 자외선 crosslinker </td><td> 피셔 과학 </td><td> 1,199,289 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin 단지 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 08-816 </td><td></td></tr><tr><td> 10ml의 비이커 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 02-540C </td><td></td></tr><tr><td> 디에틸 에테르 </td><td> 피셔 과학 </td><td> E138-500 </td><td></td></tr><tr><td> 35 X 10 밀리미터 폴리스티렌 페트리 접시 </td><td> 매 </td><td> 351,008 </td><td> 우리는 테스트하지 않았습니다 대안 요리. </td></tr><tr><td> 유리 현미경 슬라이드 </td><td> 코닝 </td><td> 26,003 </td><td></td></tr><tr><td> 열전대 </td><td> 오메가 엔지니어링 주식 회사 </td><td> HH802U </td><td></td></tr><tr><td> 비닐 조각 </td><td> 오피스 디포 </td><td> 480,009 </td><td></td></tr><tr><td> Microcentrifuge 관 </td><td> Denville 과학주식 회사 </td><td> C-2170 </td><td></td></tr></tbody></table>

local and global methods of assessing thermal nociception in drosophila larvae

이 문서에서는 Drosophila의 애벌레에서 열 nociception 공부를 assays를 보여줍니다. 두 번째는 대부분의 도매 (전역) 활성화 또는 이러한 모든 뉴런 3을 포함하면서 한 분석은 열 nociceptors 1,2의 (로컬) spatially - 제한 자극을 포함한다. 함께 이러한 기법은 Drosophila nociceptive 감각 뉴런의 행동 기능의 시각화 및 부량을 허용합니다. Drosophila의 유충은 온도 nociception, evolutionarily 종의 1,2 걸쳐 보존되고 잠재적으로 유해한 온도 감각 반응을 연구하기 위해 설립 모델 시스템입니다. 이러한 연구 Drosophila의 장점은 respons, 모든 metazoans에서와 같이, 그 신경계의 상대적인 단순 성과 Drosophila에서 근본적인 생물학 4-6의 분자 기초를 해부하는 데 사용할 수있는 유전자 기술의 고도화이다유해 열 자극에 전자는 일반적으로 제시 자극 7 &quot;nocifensive&quot;aversive 탈퇴 관련이 있습니다. 이러한 자극은 무료 신경 엔딩이나 nociceptors 통해 감지하고 organismal 응답의 진폭은 유해 자극에게 8을받은 nociceptors의 숫자에 달려있다. Drosophila에서는 photoreceptors 10들은 최근에 발견된 역할 이외에 유해 열 및 기계적 자극에 9 감지 클래스 IV의 돌기를 arborization 감각 뉴런이다. 잘 발달 수준에서 연구되어 이들 뉴런은 장벽 표피 시트 위에 arborize과 11,12 거의 모든 상피 세포와 연락처를 확인하십시오. 그들은 두 번째 순서 뉴런에 연결할 수있는 중추 신경계 11 복부 신경 코드로 각 클래스 IV 뉴런 프로젝트의 단일 축삭 그 뇌로 프로젝트. 기준 조건 하에서 nociceptive 감각 신경상대적으로 높은 임계값에 도달할 때까지 NS는 해고되지 않습니다. 여기에 설명된 assays는 조사가 기준선 행동 반응이나, 아마도, 다음과 같은 조직의 손상을 ensues sensitization.를 정할 수 있습니다 각 분석은 유해 열 자극에 뚜렷한하지만 관련 locomotory 행동 반응을 유발하고 Drosophila의 애벌레에 열 nociception의 다양한 측면을 시각화하고 수치 연구자를 허용합니다. assays는 원하는 genotypes의 유충이나 nociception에 영향을 미칠 수도 서로 다른 환경 조건 하에서 사육 유충에 적용할 수 있습니다. 열 nociception는 수종에 걸쳐 보존되어 있기 때문에, Drosophila의 유전자 해부에서 gleaned 결과 가능성이 척추 동물 등 다른 생물에서 열 nociception 우리의 이해를 통지합니다.

Watch this Scientific Journal Video about Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae at JoVE.com

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

이 문서에서 우리는 assays가 열 nociception 공부를 입증<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레. 한 분석은 열 nociceptors의 (로컬) spatially - 제한 자극을 포함<sup&gt; 1,2</sup&gt; 반면 두 번째는 대부분의 도매 (전역) 활성화 또는 이러한 모든 뉴런을 포함<sup&gt; 3</sup&gt;. 함께 이러한 기술의 행동 기능의 시각화 및 부량을 허용<em&gt; Drosophila</em&gt; nociceptive 감각 뉴런.

에서 열 Nociception를 평가 지역 및 글로벌 방법<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

local-global-methods-assessing-thermal-nociception-drosophila

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Biology

Neuroscience

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

Human Biology

Sensory Systems

SCIENTISTS IN ACTION

15.7K 조회수.  The University of Texas MD Anderson Cancer Center. 이 문서에서 우리는 assays가 열 nociception 공부를 입증 Drosophila 애벌레. 한 분석은 열 nociceptors의 (로컬) spatially - 제한 자극을 포함 1,2 반면 두 번째는 대부분의 도매 (전역) 활성화 또는 이러한 모든 뉴런을 포함 3. 함께 이러한 기술의 행동 기능의 시각화 및 부량을 허용 Drosophila nociceptive 감각 뉴런.