우리는 특히 실험 설정 및 원고에 대한 의견에 대한 기술 지침에 대한 거버 연구소의 구성원을 감사드립니다. 우리는 또한 야생 형 CantonS 주식의 플라이 관심과 유지 보수를 위해 류 보프 Pankevych 감사드립니다. 이 작품은 DFG 부여 TH1584/1-1, SNF 부여 31003A_132812 / 1 콘 스탄 츠 (Konstanz) 대학의 Zukunftskolleg (모든 대서양 표준시로)에 의해 지원됩니다.

1. 준비하기 <ol><li> Drosophila 야생 형 유충은 25 제기 ° C와 10분의 14 라이트 / 어두운주기에 60% -80 %의 습도. 항상 20 여자는 표준 플라이 식품의 약 6 ML을 포함 한 병 (6cm의 높이와 2.5 cm 직경)에 10 남성시킨 애벌레의 정확한 연령을 제어하십시오. 파리는 12 시간에 알을 낳기 위해 허용하고 두 번째 날에 새로운 유리 병으로 전송됩니다. 25 ° C에서 제기되어, 지금은 행동 실험을 위해 사용할 수있을 경우 계란 누워있는 애벌레 후 5~6일는 먹이 3 instar 단계에 도달합니다. 그러나, 하나는 유리 병의 측면에서 애벌레가 아닌 음식을 아직하고 애벌레 만 취할 수 있도록합니다. 이 애벌레는 이미 &quot;방황 3 instar 단계&quot;에 도달 한 - 곧 pupation 전에 -과 사용법은 결과의 해석을 복잡하게. </li><li> 2.5 % 아가로 오스 배양 접시의 준비 (다른 실험실에서 실험을하는 동안도 1 %의 한천 농도를 사용하는 방법어느 낮은 농도는 먹이 3 instar의 애벌레)은 기판에 파를 허용 할 수 있습니다 : 100 ML ddH 2 O.에서 2.5 g 아가로 오스를 해산 가 끓는 시작할 때까지 전자 레인지에서 솔루션을 가열. 조심스럽게 솔루션을 선동하고 모든 아가로 오스가 해소 될 때까지 전자 레인지에 돌려 놓을. 배양 접시의 바닥이 완전히 적용하고 아가로 오스 솔루션은 매끄러운 표면을 형성되는 등 배양 접시에 따뜻한 아가로 오스 솔루션을 넣어. 솔루션은 실내 온도로 냉각하고 뚜껑을 닫습니다 보자. 이 뚜껑에 물을 응축 할 수 있도록하기 때문에 즉시 뚜껑을 닫고하지 마십시오. </li><li> 2M 과당 배양 접시의 준비 : 100 ML ddH 2 O (다시 1 % 한천 농도의 사용이 가능하지만이 3 instar의 애벌레가 기판에 ​​파고 먹이를 허용 할 수 있습니다)에 2.5 g 아가로 오스를 해산. 가 끓는 시작할 때까지 전자 레인지에서 솔루션을 가열. 조심스럽게 솔루션을 선동하고 마이크로으로 다시 넣어모든 아가로 오스까지 파도가 해산되어 있습니다. 조심스럽게 뜨거운 용액에 과당의 35g을 추가하고, 설탕은 끓는 지체를 피하기 위해 해산 될 때까지 천천히 혼합물을 선동. 바닥이 완전히 적용과 과당 - 아​​가로 오스 솔루션은 매끄러운 표면을 형성되는 등 배양 접시에 뜨거운 과당 - 아​​가로 오스 솔루션을 넣어. 솔루션은 실내 온도로 냉각하고 뚜껑을 닫습니다 보자. 이 뚜껑에 물을 응축 할 수 있도록하기 때문에 즉시 뚜껑을 닫고하지 마십시오. </li><li> 1 octanol (OCT) 악취 컨테이너의 준비 : 테플론 냄새 컨테이너를 만든 사용자 정의로 순수 10월의 10 μl를 입력하고 냄새의 증발 할 수 있도록하는 방법에는 여러 작은 구멍이있는 뚜껑으로 닫습니다. 컨테이너에 대한 자세한 설명은 거버와 스토커 2007 년에 제공됩니다. 10월위한 세 가지 냄새 용기를 준비합니다. 냄새 컨테이너는 삽입 된 화학 물질의 증발을 허용하지만, 애벌레 직접 연락 할 수 마십시오. 따라서 여기에서 설명한 실험 구체적으로gustatory 부작용을 perturbing하지 않고 유충의 후각 학습을 해결합니다. </li><li> amylacetate (AM) 악취 컨테이너의 준비 : 희석는 파라핀 오일에서 오전 1시 50분. 맞춤 제작 테플론 냄새 컨테이너에 희석의 10 μl를 입력하고 냄새의 증발 할 수 있도록하는 방법에는 여러 작은 구멍이있는 뚜껑으로 닫습니다. AM위한 세 가지 냄새 용기를 준비합니다. 희석은 두 냄새 사이의 상대적 선호의 학습에 의존 변화를 마스크 수있는 다른 통해 하나 냄새에 대한 강한 선호를 피하기 위해, 즉 실용적인 이유로 중요합니다. 두 냄새에 대한 동등한 매력은 순진한 동물과 뒷부분에서 설명하는 테스트 (2.5)를 적용하여 실험하기 전에 실험실에서 확인해야 할 수 있습니다. 여기에 제시된 최근 우리 연구소 9,15,16에 의해 복제 된 거버 연구소의 여러 간행물을 기반으로 값. </li><li> 배양 접시의 라벨 : 행동 실험을하기 전에 모든 페트리 요리 코딩해야합니다. 그런 의미배양 접시를 포함하는 과당은 &quot;X&quot;또는 &quot;A&quot;와 &quot;Y&quot;또는 &quot;B&quot;와 아가로 오스 만 페트리 요리 예를 들어 표시해야합니다. 이 코드는 모든 데이터가 기록 된 후에 만​​ 실험에 공개해야합니다. 실험을 수행하여 그 실험의 기대는 애벌레의 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 가능한 &#39;맹인&#39;은 아닙니다. 우리가 오직 아가로 오스에 표시 할 때 과당 페트리 접시 (+) 또는 비 보상에 표시 할 때 하나 보상이 설치된 자극 (CS1 또는 CS2) 등의 냄새에 대해 이야기합니다 다음에 폭 넓은 독자층에 대한 이해를 쉽게하기 위해 페트리 접시 (-). </li></ol> 2. 슈가 보상 교육 및 시험 <ol><li> 식품 유리 병에서 30 수유 3 instar의 애벌레를 수집합니다. 수돗물의 일부 방울을 포함하는 첫번째 페트리 접시로 갈아 조심스럽게 브러시로 앞으로 및 뒤로를 이동합니다. 또한 탭 구미시의 일부 방울을 포함하는 두 번째 페트리 접시로 전송적이 더 음식 붙여 넣기가 애벌레의 bodywall에 남아 없다는 것을 확인하는, 그렇지 않으면 애벌레에서 실험이 진행되는 동안 음식 냄새를 체험 할 수있을 것입니다. 이 가능성이 테스트 상황에서 학습 과정과 성능을 가리는 것입니다. </li><li> 교육 : appetitive 설탕 큐 다음 정권과 연관 냄새에 애벌레를 양성하는이 적용됩니다. 표시 &quot;X&quot;의 왼쪽과 오른쪽에 10월 냄새 컨테이너를 넣어 - 따라서, 과당 보상 (자세한 내용은 1.6 참조에 대해 &quot;맹인&quot;실험) (+) 페트리 접시를 포함. 페트리 접시의 중간에 30 수유 3 instar의 유충의 그룹을 넣고, 뚜껑을 닫고 동물 10월에 노출되는 동안 5 분 기다립니다. 유충이 물 드롭 안에 갇혀 있지 않고, 그것의 표면 장력을 극복 할 수 있는지 확인하십시오. 그 애벌레가 자유롭게 페트리 접시에 이동 후각 및 / 또는 gustatory 자극을 경험할 수 있습니다. </li><li> 교육 : moistened 브러시로 페트리 접시에서 애벌레를 제거하고 전송따라서, 아가로 오스 만 (- -) 페트리 접시를 포함하는 - &quot;Y&quot;으로 표시됩니다 두 번째 페트리 접시 위에 m와는 왼쪽과 오른쪽에있는 AM 냄새 컨테이너가 있습니다. 뚜껑을 닫고 동물 AM에 노출되는 동안 5 분 기다립니다. </li><li> 교육 : 두 번 반복 2.2) 및 2.3) 등 모든 30 애벌레의 경험 세 교육주기 : CS1 / (+) - CS2 / (-), CS1 / (+) - CS2 / (-), CS1 / (+) - CS2 / (-). 이 실험에서는 CS1은 AM에 10월 및 CS2 코드를 나타냅니다. </li><li> 테스트 : 장소 하나가 오전과 아가로 오스 전용 페트리 접시의 반대 사이트에 하나 10월 냄새 컨테이너. 테스트 페트리 접시의 중간에 훈련 동물을 전송합니다. 뚜껑을 닫고 5 분 기다립니다. 그 후 왼쪽, 시험 페트리 접시의 중간과 오른쪽에 유충의 수를 계산합니다. </li><li> 30 수유 3 instar의 애벌레의 두 번째 그룹과 2.5)에 단계 2.1) 반복하지만, AM과 10월 동물은 다음과 훈련을받을 그러한 실험 역할을 교환 : CS2/ (+) - CS1 / (-), CS2 / (+) - CS1 / (-), CS2 / (+) - CS1 / (-). 이 실험에서는 CS1은 AM에 10월 및 CS2 코드를 나타냅니다. </li><li> 교육에 대한 가능성이 조치. 우리가 10월 / (+) 중 세 가지 교육 실험의 존재 훈련을 제시 위 - AM / (-) 또는 AM / (+)의도 세 교육 시험의 상호 그룹 - 10 / (-). 교육 기간 동안 순서에 의존 효과를 방지하기 위해하지만 그것은 완전한 실험의 다음 반복에서 자극의 순서를 변경할 중요합니다. CS1 또는 CS2 순서와도 첫 번째 또는 두 번째 제시 판에 보상 프리젠 테이션을 변화함으로써, 교육 시험에 대한 네 가지 절차가 가능합니다 : </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> 첫 번째 그룹 </td><td> CS1 / (+) - CS2 / (-) </td><td> 상호 그룹 </td><td> CS2 / (+) - CS1 / (-) </td></tr><tr><td></td><td> CS1 / (-) - CS2 / (+) </td><td></td><td> CS2 / (-) - CS1 / (+) </td></tr><tr><td></td><td> CS2 / (+) - CS2 / (-) </td><td></td><td> CS1 / (+) - CS2 / (-) </td></tr><tr><td></td><td> CS2 / (-) - CS1 / (+) </td><td></td><td> CS1 / (-) - CS2 / (+) </td></tr></tbody></table> 주변 실험 환경에서 자극의 체계적 효과를 방지하기 위해, 하나는 10월이 왼쪽에 표시하고 오른쪽에 AM되는 등의 사례 중 하나를 반으로 테스트를 수행해야합니다. 사건의 다른 반쪽에서 오른쪽에있는 왼쪽 10월에 나타납니다입니다. 3. 작업과 관련된 감각 - 모터 학부에 대한 시험 위에서 설명한 실험의 디자인은 그 자체로 3 instar의 애벌레 먹이를 야생 유형에 냄새 설탕 학습을 분석 할 수 있습니다. 후각 학습 파에 따라 달라집니다 경우, 일일 실험실 생활 연구원에 일반적으로 비교 애벌레의 두 개 이상의 서로 다른 실험 그룹을 사용ticular 유전자 뉴런의 특정 세트, 돌연변이 주식, 특별 음식 다이어트, 서로 다른 양육 조건, 독성 화학 물질은 애벌레의 두 개 이상의 실험 그룹 테스트 모든 경우에 하나를 수행 있으며, 따라서 등, 개발 중에 추가 애벌레의 다른 그룹 적절한 감각 모터 acuities을 표시하는 경우 테스트하기 위해 의무적으로 제어 실험을 설정합니다. 잠재적 인 phenotypes 반드시 설탕과 연관 냄새를 감소 또는 폐지 능력으로 인해 없기 때문에이 필수가됩니다. 오히려 잠재적 인 학습 결함은 악취 및 / 또는 설탕의 처리에있는 감각 모터 회로의 단계에서 결함을 기반으로 할 수있다. 돌연변이 유충이 의미 설탕 할 수없는 경우 또는 다른 말로, 그것은 설탕 메모리를 설정할 수 없습니다. 그러나 이것은 유충 학습 할 수 성립 허용하지 않습니다. 세부에서 다음 제어 실험 적절한 10 월, AM 및 유전자 변형 애벌레의 과당 처리를위한 테스트 수행해야합니다. 1. 순진한 10월 prefe에 대한 시험rence 식품 유리 병에서 30 수유 3 instar의 애벌레를 수집합니다. 2.1에 설명 된대로 수돗물에 신중을 씻으십시오. 아가로 오스 페트리 접시의 한쪽에 하나의 10월 냄새 컨테이너를 넣어, 페트리 접시의 중간에 애벌레를 추가 뚜껑을 닫고 애벌레가 10월으로 페트리 접시와 방향에 크롤링 할 수 있도록, 5 분 기다려야 냄새 소스. 그 후 중간에와 테스트 페트리 접시의 오른쪽에, 왼쪽에 유충의 수를 계산합니다. 2. 순진한 AM 환경 설정을위한 시험 식품 유리 병에서 30 수유 3 instar의 애벌레를 수집합니다. 2.1에 설명 된대로 수돗물에 신중을 씻으십시오. 아가로 오스 페트리 접시의 한쪽에 단일 AM 냄새 컨테이너를 넣어, 페트리 접시의 중간에 애벌레를 추가 뚜껑을 닫고 애벌레는 오전 향해 페트리 접시와 방향에 크롤링 할 수 있도록, 5 분 기다려야 냄새 소스. 그 후 리터의 수를 계산중간과 테스트 페트리 접시의 오른쪽에, 왼쪽에 arvae. 3. 순진한 설탕 환경 설정을위한 시험 식품 유리 병에서 30 수유 3 instar의 애벌레를 수집합니다. 2.1에 설명 된대로 수돗물에 신중을 씻으십시오. 절반과 다른 반으로 2M 과당 - 아​​가로 오스의 혼합물에 2.5 % 아가로 오스를 포함 배양 접시를 준비합니다. 페트리 접시 위에 애벌레를 추가 애벌레는 과당이 포함 된 편으로 페트리 접시와 방향에 크롤링 할 수 있도록 5 분을 위해 뚜껑을 닫고 기다립니다. 그 후 중간에와 테스트 페트리 접시의 오른쪽에, 왼쪽에 유충의 수를 계산합니다. 이분의 일 반 페트리 요리 준비 : 위의 섹션 1.2에서 설명한 바와 같이 정상적인 아가로 오스 판을 준비합니다. 아가로 오스 가득 배양 접시가 냉각되면주의 깊게 메스 수직 축을 따라 아가로 오스를 잘라. 페트리 접시에서 아가로 오스의 절반을 제거합니다.페트리 접시의 빈 절반 DD는 뜨거운 과당 - 아​​가로 오스 솔루션 (준비를 위해 1.3 참조). 두 반쪽 일치하고 정의 된 가장자리를 형성하지 않는 것이주의 -이 애벌레의 선택 행동에 영향을 오히려 어려운 행동 분석을 렌더링 4.. 사기 훈련 유전자 변형 먹이 3 instar의 애벌레가 10월과 공기 (3.1), AM, 공기 (3.2), 설탕 순수한 아가로 오스 (3.3), 테스트 실험의 추가 집합 사이 야생 유형 수준에서 구별 할 수있는 경우 테스트에도 불구하고 최근 왔습니다 (토론 거버와 스토커, 2007 참조) 소개했다. 이 실험에 대한 근거는 다음과 같습니다. 교육 유충 기간 동안 대규모 처리 및 연속 냄새와 설탕의 자극이 거칩니다. 따라서, 그것은 관찰 학습 표현형이 (순진 냄새와 설탕 인식 테스트 야생 형 수준에 있지만!) 오해의 소지가 있다는 잘 수 있습니다. 사실, 가능하다면, 그 유전자 변형 동물 D스트레스 저항, 동기 부여, 피로, 감각 적응, 콘텐츠 학습, 물림의 변화와 관련하여 야생 유형 애벌레에서 iffer. 따라서, Michels 외. (2005)는 당신이 보상을 생략하고 단순히 모두에게 노출된다는 점을 제외하고 그대로 교육하는 동안 애벌레를 처리하는 경우 특정 돌연변이 (1) 감지 할 수 있는지 여부를 테스트 빈 냄새 컨테이너 비해 AM하는 컨트롤을 도입 냄새, 당신이 냄새를 생략하고 단지 보상에 노출 점을 제외 훈련과 같은 방법으로 애벌레를 처리하는 경우 (3), 빈 냄새 컨테이너 비해 AM 감지,, (2) 같은 정권 이후 10월를 감지하고 (4 ) 같은 처방 후 10월을 감지합니다. 종합 토론 및 방법에 대한 자세한 내용은 Michels 외 (2005)와 거버와 스토커 (2007)를 참조하시기 바랍니다. 4. 슈가 보상 학습에 대한 데이터 분석 <ol><li> 설탕 보상 학습 프로토콜의 데이터를 평가하기 위해 두 recipro 각각에 대한 10월 환경 지수 (현 10월)를 계산켈리 훈련 그룹 : AM / (- -) 10월 / (+)받은 첫 번째 그룹에 대한 교육을 : 현 10월 (OCT + / AM-) = (# 10월 측에서 애벌레의 - # AM 측에서 애벌레의) / # 모든 애벌레의 왼쪽, 오른쪽과 중간 영역 내에서 : - 10 / (-) 교육 AM / (+)를받은 두 번째 그룹에 대한 현 AM (AM + / 월) =가 (# AM 쪽 애벌레의 - # 애벌레의 10월 쪽) / # 왼쪽, 오른쪽 및 중간 영역 내의 모든 애벌레의 </li></ol><ol start="2"><li> 4.1에서 두 현 값에 대한 성능 지수 (PI)를) 계산합니다. PI는 냄새와 처벌 노출, 시간 및 취급 통과 perturbing 효과를 취소하여 연관 학습을 나타냅니다 : PI = (현 10월 (OCT는 + / AM) + 현 AM (AM + / -10 월)) / 2 따라서 싸개 동상은 -1에서 1까지 다양 할 수 있습니다. 상당히 긍정적 인 가치가 appetitive 학습을 설명하는 반면에 크게 음수 값은 ave​​rsive, 학습 나타냅니다. 전체 실험은 일반적으로 10 개 이상의 싸개로 구성되어 있습니다. 데이터 상자 플롯의 includin으로 시각화 아르주어진 실험 그룹의 g는 모든 값. 값의 50 %가 상자 내에 위치한되고, 중간 성능 지수는 상자 플롯에서 굵은 선으로 표시됩니다. </li></ol> 5. 작업과 관련된 감각 - 모터 학부에 대한 데이터 분석 <ol><li> 적절한 10월 냄새 처리는 다음과 같이 10월 냄새 환경 지수를 계산에 테스트 할 때 데이터를 평가하려면 : 냄새 현 10월 = (# 10월 측에서 애벌레의 - # 맞은 편에 유충의) / # 왼쪽, 오른쪽 및 중간 영역 내의 모든 애벌레의 </li><li> 적절한 AM 냄새 인식은 다음과 AM 냄새 환경 지수를 계산에 테스트 할 때 데이터를 평가하려면 : / # 왼쪽, 오른쪽 및 중간 영역 내의 모든 애벌레의 - 현 AM = (# 다른쪽에 애벌레의 # AM면에 유충의) 냄새 </li><li> 적절한 과당 인식에 대한 테스트를하는 것은 다음과 같은 과당 환경 지수를 계산하면 데이터를 평가하려면 : 현 과당 = (# 과당 쪽 애벌레의 - # 맞은 편에 애벌레의) / # 왼쪽, 오른쪽 및 중간 영역 내의 모든 애벌레의 </li><li> 체하다 교육에 대한 자세한 내용은 Michels 외에 부여됩니다. 2005. </li></ol>

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Senses. 35, 335-346 (2010).</li><li>Eschbach, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+between+odorants+and+mechanosensory+punishment+in+larval+Drosophila.">Associative learning between odorants and mechanosensory punishment in larval Drosophila.</a> J. Exp. Biol. 214, 3897-3905 (2011).</li><li>von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacity+of+visual+classical+conditioning+in+Drosophila+larvae.">Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae.</a> Behav. 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Senses. , (2012).</li><li>Lee, T., Lee, A., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+Drosophila+mushroom+bodies:+sequential+generation+of+three+distinct+types+of+neurons+from+a+neuroblast.">Development of the Drosophila mushroom bodies: sequential generation of three distinct types of neurons from a neuroblast.</a> Development. 126, 4065-4076 (1999).</li><li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+organization+of+extrinsic+neurons+and+their+implications+in+the+functional+roles+of+the+mushroom+bodies+in+Drosophila+melanogaster+Meigen.">The organization of extrinsic neurons and their implications in the functional roles of the mushroom bodies in Drosophila melanogaster Meigen.</a> Learn Mem. 5, 52-77 (1998).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmembrane/juxtamembrane+domain-dependent+Dscam+distribution+and+function+during+mushroom+body+neuronal+morphogenesis.">Transmembrane/juxtamembrane domain-dependent Dscam distribution and function during mushroom body neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 43, 663-672 (2004).</li><li>Robertson, K., Mergliano, J., Minden, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Drosophila+embryonic+brain+development+using+photoactivated+gene+expression.">Dissecting Drosophila embryonic brain development using photoactivated gene expression.</a> Dev. Biol. 260, 124-137 (2003).</li><li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+functions+of+the+reaper+and+head+involution+defective+genes+in+the+programmed+cell+death+of+Drosophila+central+nervous+system+midline+cells.">Cooperative functions of the reaper and head involution defective genes in the programmed cell death of Drosophila central nervous system midline cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 5131-5136 (1997).</li><li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons.">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li><li>Schroll, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-induced+activation+of+distinct+modulatory+neurons+triggers+appetitive+or+aversive+learning+in+Drosophila+larvae.">Light-induced activation of distinct modulatory neurons triggers appetitive or aversive learning in Drosophila larvae.</a> Curr. Biol. 16, 1741-1747 (2006).</li><li>Rosenzweig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+ortholog+of+vertebrate+TRPA1+regulates+thermotaxis.">The Drosophila ortholog of vertebrate TRPA1 regulates thermotaxis.</a> Genes Dev. 19, 419-424 (2005).</li><li>Baines, R. A., Uhler, J. P., Thompson, A., Sweeney, S. T., Bate, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+electrical+properties+in+Drosophila+neurons+developing+without+synaptic+transmission.">Altered electrical properties in Drosophila neurons developing without synaptic transmission.</a> J. Neurosci. 21, 1523-1531 (2001).</li><li>Chen, Y. C., Mishra, D., Schmitt, L., Schmuker, M., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+odor+similarity+"space"+in+larval+Drosophila.">A behavioral odor similarity "space" in larval Drosophila.</a> Chem. Senses. 36, 237-249 (2011).</li><li>Saumweber, T., Husse, J., Gerber, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+attractiveness+and+associative+learnability+of+odors+can+be+dissociated+in+larval+Drosophila.">Innate attractiveness and associative learnability of odors can be dissociated in larval Drosophila.</a> Chem. Senses. 36, 223-235 (2011).</li><li>von Essen, A. M., Pauls, D., Thum, A. S., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacity+of+visual+classical+conditioning+in+Drosophila+larvae.">Capacity of visual classical conditioning in Drosophila larvae.</a> Behav. Neurosci. , (2011).</li><li>Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+cAMP+response+element-binding+protein-dependent+medium-term+memory+by+appetitive+gustatory+reinforcement+in+Drosophila+larvae.">Induction of cAMP response element-binding protein-dependent medium-term memory by appetitive gustatory reinforcement in Drosophila larvae.</a> J. Neurosci. 25, 7905-7913 (2005).</li><li>Honjo, K., Furukubo-Tokunaga, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+neuronal+networks+and+biochemical+pathways+for+appetitive+and+aversive+memory+in+Drosophila+larvae.">Distinctive neuronal networks and biochemical pathways for appetitive and aversive memory in Drosophila larvae.</a> J. Neurosci. 29, 852-862 (2009).</li><li>Khurana, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+Conditioning+in+the+Third+Instar+Larvae+of+Drosophila+melanogaster+Using+Heat+Shock+Reinforcement.">Olfactory Conditioning in the Third Instar Larvae of Drosophila melanogaster Using Heat Shock Reinforcement.</a> Behav. Genet. 42, 151-161 (2012).</li><li>Tully, T., Cambiazo, V., Kruse, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory+through+metamorphosis+in+normal+and+mutant.">Memory through metamorphosis in normal and mutant.</a> 14, 68-74 (1994).</li><li>Michels, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+site+and+molecular+mode+of+synapsin+action+in+associative+learning.">Cellular site and molecular mode of synapsin action in associative learning.</a> Learn Mem. 18, 332-344 (2011).</li><li>Saumweber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+synaptic+plasticity+are+impaired+upon+lack+of+the+synaptic+protein+SAP47.">Behavioral and synaptic plasticity are impaired upon lack of the synaptic protein SAP47.</a> J. Neurosci. 31, 3508-3518 (2011).</li><li>Pfeiffer, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+tools+for+targeted+gene+expression+in+Drosophila.">Refinement of tools for targeted gene expression in Drosophila.</a> Genetics. 186, 735-755 (2010).</li><li>Rosenzweig, M., Kang, K., Garrity, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+TRP+channels+are+required+for+warm+and+cool+avoidance+in+Drosophila+melanogaster.">Distinct TRP channels are required for warm and cool avoidance in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 14668-14673 (2008).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

<html> Drosophila의 애벌레의 설명 설정은 comparably 초등학교 두뇌 속에 연관 후각 학습의 조사 할 수 있습니다. 방법은 실험실에서 확립 할, 간단한 저렴 용이하고 첨단 장비를 구가 필요하지 않습니다. 우리는 과당 보상 11에 의해 강화 appetitive 연관 학습을 연구하는 실험 버전을 제시한다. 설명 설정이 종합적으로 교육 시험의 수가 변화, 단일 검정 대 질량 분석, 보존 기간, 사?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> CAS 번호 </td></tr><tr><td> 프 럭토 오스 </td><td> 시그마 </td><td> 47,740 </td><td> 57-48-7 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Fluka </td><td> 71,350 </td><td> 7647-14-5 </td></tr><tr><td> 아가로 오스 </td><td> 시그마 </td><td> A5093 </td><td> 9012-36-6 </td></tr><tr><td> 1 octanol </td><td> 시그마 </td><td> 12,012 </td><td> 111-87-5 </td></tr><tr><td> Amylacetate </td><td> 시그마 </td><td> 46,022 </td><td> 628-63-7 </td></tr><tr><td> 파라핀 유 </td><td> 시그마 </td><td> 18,512 </td><td> 8012-95-1 </td></tr></tbody></table>

appetitive associative olfactory learning in drosophila larvae

다음에 우리는 Drosophila의 애벌레에 appetitive 연관 후각 학습의 방법론 자세한 내용을 설명합니다. 설정은, 유전자 간섭와 함께, 간단한 애벌레의 뇌에 구체적으로 연관 학습의 neuronal와 분자 기초를 분석 할 수있는 핸들을 제공합니다. 생물은 현재 동작을 조정하는 과거의 경험을 사용할 수 있습니다. 행동 잠재력 이러한 인수는 학습으로 정의하고, 메모리 트레이스 1-4 이러한 가능성의 물리적 기반. 할 수 있습니다 Neuroscientists이 프로세스가 곤충에서 vertebrates 5,6에 이르기까지 다양한 모델 생물의 다양한 방법을 사용하여 뇌의 분자와 neuronal 변화의 관점에서 구성하는 방법을 이해하려고합니다. 이러한 노력에 대한 간단하고 실험적으로 액세스 할 수 있습니다 모델 시스템을 사용하는 도움이됩니다. Drosophila의 유충이에 따라 이러한 요구를 충족하기 위해가되었습니다7-10 강력한 행동 assays, 유전자 변형 기술의 다양성과 약 10,000 뉴런을 (인지 제한, 몇 가지 행동 옵션 및 의심 경험 풍부한 일부 할인 혜택이있는에도 불구하고)를 포함하는 신경계의 초등학교 조직의 존재의 가용성 . Drosophila의 애벌레는 악취, 설탕 11-14 같은 appetitive gustatory 강화 사이의 연관 관계를 형성 할 수있다. 표준 검정에서 B. 거버의 연구실에 설립, 동물은 두 냄새 상호 교육을받을 : 애벌레의 첫 번째 그룹은 gustatory reinforcer (설탕 보상)와 함께 냄새에 노출되어 이후 냄새에 노출되어 강화 아홉없이 B. 보강하지 않고 냄새가 발생하고 이후 강화 (설탕 보상)와 악취 B에 노출되는 동안 한편 애벌레의 두 번째 그룹은 상호 교육을받습니다. 다음의 두 그룹 tes 아르두 냄새 사이의 환경 설정에 대한 테드. 보상 냄새에 대한 상대적으로 높은 환경 설정 연관 학습을 반영 - 성능 지수 (PI)로 제시했다. 성능 색인의 결합 특성에 대한 결론은 떨어져 냄새와 tastants 등 냄새 및 보상에 노출, 시간 및 취급의 통로 두 그룹 9 다를하지 않는 등 다른 매개 변수 사이의 우발적의 때문에 눈길을 끄는 것입니다.

그림 1A는 애벌레의 후각 연관 학습을위한 실험 절차의 개요를 보여줍니다. 설탕 보상 애벌레와 두 제시 냄새 중 하나를 페어링하면 보수없는 냄새에 비해 보상 냄새에 대한 매력적인 응답을 표현할 수있는 잠재적 인 행동을 습득. 애벌레의 두 그룹은 항상 두 냄새 10월 또는 AM으로 reinforcer을 페어링하여 훈련하고 있습니다. 성능 지수 (PI)는 서로 훈련 집단 간의 선호의 차이로 연관 기...

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Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Drosophila의 애벌레는 gustatory 보상과 냄새 자극을 연결 할 수 있습니다. 여기 appetitive 연관 후각 학습의 분석을 할 수있는 간단한 행동 패러다임을 설명합니다.

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

appetitive-associative-olfactory-learning-in-drosophila-larvae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

18.8K 조회수.  University of Konstanz. Drosophila의 애벌레는 gustatory 보상과 냄새 자극을 연결 할 수 있습니다. 여기 appetitive 연관 후각 학습의 분석을 할 수있는 간단한 행동 패러다임을 설명합니다.

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C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment through neuron-specific detection of food and chemical odors1, 2, and can associate nutritive states with chemical odors3, temperature4, and the pathogenicity of a food source5.
Here, we describe assays of C. elegans associative learning and short- and long-term associative memory. We modified an aversive olfactory learning paradigm6 to instead produce a positive response; the assay involves starving ~400 worms, then feeding the worms in the presence of the AWC neuron-sensed volatile chemoattractant butanone at a concentration that elicits a low chemotactic index (similar to Toroyama et al.7). A standard population chemotaxis assay1 tests the worms' attraction to the odorant immediately or minutes to hours after conditioning.
After conditioning, wild-type animals' chemotaxis to butanone increases ~0.6 Chemotaxis Index units, its "Learning Index". Associative learning is dependent on the presence of both food and butanone during training. Pairing food and butanone for a single conditioning period ("massed training") produces short-term associative memory that lasts ~2 hours. Multiple conditioning periods with rest periods between ("spaced training") yields long-term associative memory (&lt;40 hours), and is dependent on the cAMP Response Element Binding protein (CREB),6 a transcription factor required for long-term memory across species.8
Our protocol also includes image analysis methods for quick and accurate determination of chemotaxis indices. High-contrast images of animals on chemotaxis assay plates are captured and analyzed by worm counting software in MatLab. The software corrects for uneven background using a morphological tophat transformation.9 Otsu's method is then used to determine a threshold to separate worms from the background.10 Very small particles are removed automatically and larger non-worm regions (plate edges or agar punches) are removed by manual selection. The software then estimates the size of single worm by ignoring regions that are above a specified maximum size and taking the median size of the remaining regions. The number of worms is then estimated by dividing the total area identified as occupied by worms by the estimated size of a single worm.
We have found that learning and short- and long-term memory can be distinguished, and that these processes share similar key molecules with higher organisms.6,8 Our assays can quickly test novel candidate genes or molecules that affect learning and short- or long-term memory in C. elegans that are relevant across species.

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

Here we describe methods to test C. elegans associative learning and short- and long-term associative memory. These population assays employ the worms abilities to chemotax toward volatile odorants, and form positive associations upon pairing food with the chemoattractant butanone. Increasing the number of conditioning periods induces long-term memory.

C. 엘레간스 긍정적인 Butanone 학습, 단기 및 장기 연관 메모리 Assays

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

연구

신경과학

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of these diseases, including Alzheimer's, Parkinson's and Huntington's disease are characterized by age-dependent deterioration in learning and memory functions and movement coordination2. Here we use behavioral assays, including the negative geotaxis assay3 and the aversive phototaxic suppression assay (APS assay)4,5, to show that some of the behavior characteristics associated with human neurodegeneration can be recapitulated in flies. In the negative geotaxis assay, the natural tendency of flies to move against gravity when agitated is utilized to study genes or conditions that may hinder locomotor capacities. In the APS assay, the learning and memory functions are tested in positively-phototactic flies trained to associate light with aversive bitter taste and hence avoid this otherwise natural tendency to move toward light. Testing these trained flies 6 hours post-training is used to assess memory functions. Using these assays, the contribution of any genetic or environmental factors toward developing neurodegeneration can be easily studied in flies.

Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration

Behavior assays for measuring locomotor functions, learning, and memory abilities in Drosophila.

에 시금 운동력이있는 사람, 학습, 및 메모리 적자 Drosophila</emNeurodegeneration의> 모델

Advances in genetic methods have enabled the study of genes involved in human neurodegenerative diseases using Drosophila as a model system1. Most of ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other insects proprioception is provided by specialized sensory organs termed chordotonal organs (ChOs) 2. Like many other organs in Drosophila, ChOs develop twice during the life cycle of the fly. First, the larval ChOs develop during embryogenesis. Then, the adult ChOs start to develop in the larval imaginal discs and continue to differentiate during metamorphosis.
The development of larval ChOs during embryogenesis has been studied extensively 10,11,13,15,16. The centerpiece of each ChO is a sensory unit composed of a neuron and a scolopale cell. The sensory unit is stretched between two types of accessory cells that attach to the cuticle via specialized epidermal attachment cells 1,9,14. When a fly larva moves, the relative displacement of the epidermal attachment cells leads to stretching of the sensory unit and consequent opening of specific transient receptor potential vanilloid (TRPV) channels at the outer segment of the dendrite 8,12. The elicited signal is then transferred to the locomotor central pattern generator circuit in the central nervous system.
Multiple ChOs have been described in the adult fly 7. These are located near the joints of the adult fly appendages (legs, wings and halters) and in the thorax and abdomen. In addition, several hundreds of ChOs collectively form the Johnston's organ in the adult antenna that transduce acoustic to mechanical energy 3,5,17,4.
In contrast to the extensive knowledge about the development of ChOs in embryonic stages, very little is known about the morphology of these organs during larval stages. Moreover, with the exception of femoral ChOs 18 and Johnston's organ, our knowledge about the development and structure of ChOs in the adult fly is very fragmentary.
Here we describe a method for staining and visualizing ChOs in third instar larvae and pupae. This method can be applied together with genetic tools to better characterize the morphology and understand the development of the various ChOs in the fly.

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

A method to immunostain and visualize chordotonal organs in larvae and pupae of Drosophila melanogaster is described.

의 Proprioceptors의 시각화<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레와 Pupae

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the elucidation of the molecular mechanisms involved in cognitive diseases1-7. Learning and memory can be assayed in larvae to study the effect of neurodevelopmental genes8-10 and in flies to measure the contribution of adult plasticity genes1-7. Furthermore, the short lifespan of Drosophila facilitates the analysis of genes mediating age-related memory impairment5,11-13. The availability of many inducible promoters that subdivide the Drosophila nervous system makes it possible to determine when and where a gene of interest is required for normal memory as well as relay of different aspects of the reinforcement signal3,4,14,16.
Studying memory in adult Drosophila allows for a detailed analysis of the behavior and circuitry involved and a measurement of long-term memory15-17. The length of the adult stage accommodates longer-term genetic, behavioral, dietary and pharmacological manipulations of memory, in addition to determining the effect of aging and neurodegenerative disease on memory3-6,11-13,15-21.
Classical conditioning is induced by the simultaneous presentation of a neutral odor cue (conditioned stimulus, CS+) and a reinforcement stimulus, e.g., an electric shock or sucrose, (unconditioned stimulus, US), that become associated with one another by the animal1,16. A second conditioned stimulus (CS-) is subsequently presented without the US. During the testing phase, Drosophila are simultaneously presented with CS+ and CS- odors. After the Drosophila are provided time to choose between the odors, the distribution of the animals is recorded. This procedure allows associative aversive or appetitive conditioning to be reliably measured without a bias introduced by the innate preference for either of the conditioned stimuli. Various control experiments are also performed to test whether all genotypes respond normally to odor and reinforcement alone.

Drosophila Adult Olfactory Shock Learning

The method to measure adult Drosophila associative memory is described. The assay is based on the ability of the fly to associate an odor presented with a negative reinforcer (electric shock) and then recall this information at a later time, allowing memory to be measured.

초파리 성인 후각 충격 학습

Drosophila have been used in classical conditioning experiments for over 40 years, thus greatly facilitating our understanding of memory, including the ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em&gt; 초파리</em&gt; 안테나

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral variation. The larval path-length assay was developed to measure individual differences in foraging behavior that were later linked to the foraging gene. Larval path-length is an easily scored trait that facilitates the collection of large sample sizes, at minimal cost, for genetic screens. Here we provide a detailed description of the current protocol for the larval path-length assay first used by Sokolowski. The protocol details how to reproducibly handle test animals, perform the behavioral assay and analyze the data. An example of how the assay can be used to measure behavioral plasticity in response to environmental change, by manipulating feeding environment prior to performing the assay, is also provided. Finally, appropriate test design as well as environmental factors that can modify larval path-length such as food quality, developmental age and day effects are discussed.

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.

대한 꼴 경로 길이 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 애벌레

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method described here enables the investigator to measure long-lasting (from minutes to hours) high-quality intracellular responses from single Drosophila R1-R6 photoreceptors and Large Monopolar Cells (LMCs) to light stimuli. Because the recording system has low noise, it can be used to study variability among individual cells in the fly eye, and how their outputs reflect the physical properties of the visual environment. We outline all key steps in performing this technique. The basic steps in constructing an appropriate electrophysiology set-up for recording, such as design and selection of the experimental equipment are described. We also explain how to prepare for recording by making appropriate (sharp) recording and (blunt) reference electrodes. Details are given on how to fix an intact fly in a bespoke fly-holder, prepare a small window in its eye and insert a recording electrode through this hole with minimal damage. We explain how to localize the center of a cell's receptive field, dark- or light-adapt the studied cell, and to record its voltage responses to dynamic light stimuli. Finally, we describe the criteria for stable normal recordings, show characteristic high-quality voltage responses of individual cells to different light stimuli, and briefly define how to quantify their signaling performance. Many aspects of the method are technically challenging and require practice and patience to master. But once learned and optimized for the investigator's experimental objectives, it grants outstanding in vivo neurophysiological data.

Electrophysiological Method for Recording Intracellular Voltage Responses of Drosophila Photoreceptors and Interneurons to Light Stimuli In Vivo

Sharp microelectrodes enable accurate electrophysiological characterization of photoreceptor and visual interneuron output in living Drosophila. Here we show how to use this method to record high-quality voltage responses of individual cells to controlled light stimulation. This method is ideal for studying neural information processing in insect compound eyes.

의 기록 세포 내 전압 응답에 대한 전기 생리 방법<em&gt; 초파리</em&gt; 빛 자극에 광수와의 interneurons<em&gt; 생체</em

Voltage responses of insect photoreceptors and visual interneurons can be accurately recorded with conventional sharp microelectrodes. The method ...

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory machinery, such as in patients experiencing peripheral neuropathy or injury-induced sensitization, are not well characterized. The genetically tractable Drosophila model has been used to study the cells and genes required for noxious heat detection, which has yielded multiple conserved genes of interest. Little is known however about the cells and receptors important for noxious cold sensing. Although, Drosophila does not survive prolonged exposure to cold temperatures (&#8804;10 &#186;C), and will avoid cool, preferring warmer temperatures in behavioral preference assays, how they sense and possibly avoid noxious cold stimuli has only recently been investigated.
Here we describe and characterize the first noxious cold (&#8804;10 &#186;C) behavioral assay in Drosophila. Using this tool and assay, we show an investigator how to qualitatively and quantitatively assess cold nociceptive behaviors. This can be done under normal/healthy culture conditions, or presumably in the context of disease, injury or sensitization. Further, this assay can be applied to larvae selected for desired genotypes, which might impact thermosensation, pain, or nociceptive sensitization. Given that pain is a highly conserved process, using this assay to further study&#160;thermal nociception will likely glean important understanding of pain processes in other species, including vertebrates.

Novel Assay for Cold Nociception in Drosophila Larvae

Here we demonstrate a novel assay to study cold nociception in Drosophila larvae. This assay utilizes a custom-built Peltier probe capable of applying a focal noxious cold stimulus and results in quantifiable cold-specific behaviors. This technique will allow further cellular and molecular dissection of cold nociception.

콜드 통각에 대한 소설 분석<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레

How organisms sense and respond to noxious temperatures is still poorly understood. Further, the mechanisms underlying sensitization of the sensory ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

후 각 학습 및 쥐에 있는 차별의 객관적이 고 재현성 시험

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

Methods Article

에 Appetitive 연관 강한 학습