우리는 원고를 개선하기 위해이 4 익명 검토에 감사하고, 국립 과학 재단 (기금 IOS-0546784)에 지원.

1. 수산화 잎에 대한 측정 잎 유압 전도성 (K 최대) <ol><li> 바람직 목부의 긴장은 젖은 종이 타월로 가득 어두운 비닐 봉지에 공기와 장소에서 절단, 낮은 것을 같은 저녁이나 밤에 촬영을 수집합니다. 실험실에서 수중 모든 촬영의 끝에서 적어도 두 개의 노드를 recut. 순수한 물, 또는 K 잎 측정에 사용될 수있는 다른 솔루션에 하루 아침에 rehydrate 쏠께 요. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. </li><li> 부분적으로 degassed 흐름 솔루션을 아래에 신선한 면도날로 촬영에서 잎을 잘라 요. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. 우리는 진공 펌프를 사용하여 플라스크에 밤새 솔루션을 degassing 권장하지만, 다른 방법이 사용될 수있다. </li><li> petio 주변 랩 미리 신장 parafilm잎자루와 튜브 사이 좋은 인감을 위해 르. 추가 parafilm을 래핑하면 튜브 내부에 맞게 잎자루 주위에 도움이 될 것 같은이 단계는, 비 원형 petioles 특히 도움이됩니다. 치과 붙여 넣기가 petioles의 홈을 채우기 위해 parafilm을 포장하기 전에 잎자루에 적용 할 수 있습니다. </li><li> 시스템을 입력 공기를 방지하기 위해 ultrapure 물에 실리콘 튜브에 잎을 연결합니다. 잎은 물 소스 위에 올려진다 때, 튜브의 물 subatmospheric 압박이며, 어떤 공기가 측정하는 동안 튜브에 그려되지 않을 경우 따라서 인감이 양호합니다. Omnifit, 캠브리지, 영국),이 접근법은 특히 복잡한 형상과 petioles에 유용하거나, 잔디 블레이드에 대한 또는 실리콘 튜브에 직접 잎자루를 밀폐에, 고무 가스켓과 압축 피팅은 (예를 들어, (Omnifit A2227 구멍 어댑터 사용할 수 있습니다 , 그는 유리 막대 주위에 포장 및 압축 피팅을 밀봉 할 수 있습니다. 때 가능한, 그거에 직접 잎자루를 밀폐licone 관이 빠른 것하고 투명 잎자루-튜브 접합을 남겨두고 거품이보다 쉽게​​ 볼 수 있도록 수있는 이점이 있습니다. 튜브는 컴퓨터 (, Mettler-톨레도 (Toledo) GmbH의, Greifensee, 스위스 등은 &quot;밸런스 링크&quot;소프트웨어를 사용하여)에 매 30 초 데이터를 기록 밸런스 (± 10 μg 해상도)의 눈금 실린더에 실행 하드 튜브에 잎을 연결 잎을 통해 유량의 계산. </li><li> 잎은 큰 상자 팬 위의 낚시 줄과와 광원 (&gt; 1,000 μmol • m 2 • S -1 높은 방사 측정을위한 photosynthetically 활성 방사선), 약간의 레벨 위 아래에 매달아 나무 프레임에 adaxial 표면 위쪽으로 개최해야 눈금 실린더에있는 초승달 모양. 잎은 같은 겠어, 잎으로 이동 물은 증발에 의해 구동 및 중력에 의한 압력 아래에있는 잎을 입력되지 않도록하기 위해 눈금 실린더에 물 위에 삽입되어야합니다잎이 실린더에 물이 초승달 모양 아래 배치 된 경우가. 젖은 종이 타월로 가득 작은 용기 따라서 균형에서 분위기를 물 소스에서 증발을 피하고, 균형 공기가 물 포화을 보장하기 위해 균형 챔버 내부에 배치됩니다. 이 가능성은 튜브에 4 웨이 꼭지 밸브를 사용하여 잎에 흐름을 중단하고, 잔액에 물 실린더의 질량이 감소하지 않는 선택하여 확인하실 수 있습니다. </li><li> 램프의 열을 흡수하기 위해 잎 위의 물이 담겨있는 명확한 Pyrex 컨테이너를 배치합니다. </li><li> ° C 실험을하는 동안 열 램프 아래 잎 주위의 공기를 따뜻하게 충분히 Pyrex 컨테이너를 가열하지 않는 것과 같은 Pyrex 컨테이너에 더 차가운 물을 추가하여 23 ° C 및 28 사이의 잎 온도를 유지하고 있습니다. </li><li> 따라서 높은 조사량에 순응하기 위해 충분한 시간을 제공하고, additi, 적어도 30 분을위한 장치에 발산에 잎 허용onally까지 유속은 더 상향 또는 하향 추세로, 안정화, 그리고 변화의 계수 &lt;30 초 유동 간격으로 한 최소한 5-10 측정 5 %로하고 있습니다. 이 방법은 안정적인 Ψ 잎을 가정하기 때문에 유량이 정상 상태에 도달하는 것이 중요합니다. 이전 연구는 이러한 기준 유량 (E), Ψ 잎과 K 잎의 안정화에 충분한 것으로, 안정적인 흐름을 한 후 더 이상 측정 기간과 시험은 폭 넓은 일곱 종의 각각에 대해 측정 시간에 K 잎 대한 관계를 보여주지 설립 잎 용량 17,18 범위. 안정화는 일반적으로 30 분 미만이 소요되지만 일부 종에서 종 (种)에 대한 시간 이상이 필요할 수 있습니다. </li></ol> 참고 : 유량 (&lt;8 μg의 -1) 매우 낮은 경우, 안정성이 마지막 다섯 30 초 간격의 실행중인 평균을 사용하여 결정 할 수 있습니다. </p&gt; <ol start="9"><li> 갑자기 흐름이 변경 하나 때문에 갑자기 stomatal 폐쇄에, 또는 입자 또는 기포에 의한 시스템의 인감이나 막힘에서 명백한 누설하는 경우 측정을 폐기하십시오. </li><li> 흐름이 안정화되면 열전대와 잎의 온도를 기록합니다. </li><li> 신속 튜브에서 잎을 제거, 소량은 잎자루을 건조 증발를 중단하기 이전에 exhaled 된 sealable 가방에 잎을 배치합니다. </li><li> 잎은 적어도 20 분에 그 가방에 평형 보자. </li><li> 최종 10 유량 측정 평균. 이렇게하면 E 측정 될 것입니다. </li><li> 잎이 equilibrated 경우, 압력 챔버와 최종 잎 물 전위 (Ψ 최종)을 측정합니다. </li><li> 평판 스캐너 및 이미지 처리 소프트웨어를 사용하거나 잎 지역 미터와 잎 영역을 측정합니다. </li><li> K 잎은 E / - ΔΨ 잎 (여기서 ΔΨ 잎 = Ψ 마지막으로 계산됩니다 </하위&gt; - 0 MPA) 및 잎 면적 별도의 정상화. 단위 mmol에서 m -2 s의 -1 MPA -1입니다. 잎은 단지 눈금 실린더의 물 레벨보다 위에 위치하기 때문에 잎을 입력 물 압력을 감소 중력의 효과는 항상&gt; -0.1 MPA입니다 Ψ 마지막에 특히 상대적으로 무시할 것입니다. </li><li> 물 점도 15,19,20의 온도 의존성에 의해 유도 K 잎의 변화를 해결하려면 다음 방정식을 사용하여 25 ° C로 K 잎 값을 표준화 : </li></ol><img alt="수식 1" fo:content-width="3.863in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq1.jpg" /><ol start="18"><li> E 증기 pressu에 해당 잎 - 투 - 공기 증기 압력 차이에 의해 구분으로 Stomatal 전도성 (g들) 결정될 수잎에 인접 온도 및 상대 습도 센서를 사용하여 결정 재 적자 (VPD). VPD는 다음 방정식에게 21을 사용하여 계산됩니다 </li></ol><img alt="수식이" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq2.jpg" fo:content-width="1.67in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq2highres.jpg" /> (; 아덴 벅 방정식 22에 의하면, 온도의 함수 kPa에서), 그리고 AP 대기압 (kPa)을 RH는 상대 습도이고, VP는 공기의 포화 증기 압력을 표시합니다. 2. 건조 잎에 잎 유압 컨덕턴스 측정 <ol><li> 바람직 목부의 긴장은 젖은 종이 타월로 가득 어두운 비닐 봉지에 공기와 장소에서 절단, 낮은 것을 같은 저녁이나 밤에 촬영을 수집합니다. 실험실에서 수중 모든 촬영의 끝에서 적어도 두 개의 노드를 recut. K 르에 사용되는 순수한 물, 기타 용액에 하루 아침에 rehydrate 쏴AF 측정. 다른 솔루션의 영향이 요인으로 조사 할 수없는 한 Ultrapure 물은 흐름 솔루션으로 권장합니다. </li><li> ultrapure 물 아래에 적어도 세 잎 세그먼트에 촬영을 잘라 Ψ 잎 값의 범위에 시간이 서로 다른 기간 동안 팬과 함께 촬영을 탈수. </li><li> 촬영의 각 잎 주위 이전에 exhaled 된)을 한 다음 젖은 종이로 큰 sealable 가방에 모든 촬영을 배치, 일단 촬영 수분이 있으며, sealable 가방 (Nasco, 포트 앳킨슨, WI, USA 소용돌이 - 박)을 배치 수건. </li><li> 촬영은 최소한 30 분 (강력 탈진 촬영을 위해 더 이상 평균 시간이 필요 할 수 있습니다)에 대한 평형 보자. </li><li> 평균 한 후, 소비세 상단과 하단 잎 및 측정 초기 Ψ 잎 (= Ψ O) 압력 챔버를 사용합니다. </li><li> 두 잎의 Ψ 잎의 차이가보다 큰 0.1 MPA (stron의 경우 촬영을 취소gly 건조 잎이 범위)이 0.3 MPA까지 연장 할 수 있습니다. </li><li> 세 번째 잎 그런 다음 위의 단계를 1.2 -1.18 따라 EFM와 K 잎과 g을 결정하는 데 사용됩니다. 특히, 정상 상태 E는 stomata가 계속 열고 cuticular 도전 17보다 실질적으로 높은 g의 값을 생성으로, 심한 건조 잎되었습니다 잎에도 구할 수 있습니다. </li><li> 유압 취약성 곡선을 구성하는 단계 1.16에서와 같이 Ψ 최종을 사용하여 K 잎을 계산 한 후 가장 낮은 중에서 대한 플롯 K 잎 값 Ψ O 또는 Ψ 최종 즉, 실험이 진행되는 동안 잎에 의해 경험 강한 탈수 (= Ψ 낮은 가격순). 마찬가지로, 잎 탈수에 대한 응답으로 g s의 감소는 낮은 Ψ에 대한 g을 음모에 의해 결정될 수있다. 이전 작업은 쉬가<html> 자신이 탈수는 K 잎과 g의 14,16에서 적어도 부분적으로 돌이킬 수 감소를 유도. </li><li> 우리는 Ψ 낮은 0.5 MPA 간격마다 적어도 6 K 잎 값을 취득하는 것이 좋습니다 (당신이 작업중인 종 탈수에 정말 취약 경우이 간격은 0.25 MPA를 줄일 수 있습니다.) </li><li> 귀하의 취약점 곡선 23 일부터 특이점을 제거하는 가장 Ψ 각 0.5 MPA 물을 가능성이 간격 K 잎 값에 딕슨 국외자 테스트를 수행합니다. </li><li> 종 탈수 14,16에 K 잎과 g s의 응답에 차이가 있기 때문에, 각 종에 대해 서로 다른 기능에 맞게하고 최대 가능성 (낮은 가격순 AIC 값을, 자세한 내용은 14 참조)을 선택합니다. 우리는 이전에 문학에 사용되는 피팅 최소한 네 기능을하는 것이 좋습니다 : 선형 (PG &quot;강한 : 콘텐츠 폭 =&quot;1.4in &quot;강한 : SRC =&quot;/ files/ftp_upload/4179/4179eq3highres.jpg &quot;/&gt;), sigmoidal ( <img alt="수식 4" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq4.jpg" fo:content-width="1.483in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq4highres.jpg"/> ), 물류 ( <img alt="수식 5" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq5.jpg" fo:content-width="1.7in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq5highres.jpg"/> )와 지수 ( <img alt="수식 6" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq6.jpg" fo:content-width="1.583in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq6highres.jpg"/> ). </li></ol> 3. 대표 결과 탈수와 잎 유압 전도성의 하락은 종 (그림 1)에서 강력하게 다릅니다. 높은 조사량에 따라 측정 할 때 가뭄에 민감한 종보다 가뭄 저항성 종보다 부정적인 물 잠재력에 강한 하락을 경험 (PAR&gt; 1,000 μmol • m -2 • S -1). 물mesic 허브 Helianthus annuus을위한 유압 전도성의 80 % 손실 (P 80)의 잠재력은 캘리포니아 키 작은 떡갈 나무 덤불에 기본 Heteromeles arbutifolia의보다 부정적인 3 MPA였다. Helianthus annuus이 아닌을 보여 주었다 반면 Heteromeles arbutifolia는, 물 잠재력의 감소에 선형 응답 감소 - 선형. stomatal 전도성 (g들)과 리프 유압 전도성 (K 잎)에는도 (그림 2) 조사량에 크게 응답 할 수 있습니다. Raphiolepis indica를 들어, stomatal 전도성이 높은 조사량에 따라 측정 잎 탈수를 강하게 거부했다 (PAR&gt; 1,000 μmol • m -2 • S -1)과 실험실 빛 아래에서 (PAR &lt;6 μmol • m -2 • S -1). 높은 방사에서 잘 조명 레아에 대한 일반적인 물 잠재적으로 탈진 상태였다 EFM로 측정 잎낮에 그대로 식물에 ves는 porometer (그림의 성. 2)로 그대로 공장에서 측정 잎으로 유사한 g을 보여 주었다. 특히, 최대 수화의 잎을 위해, K 잎은 낮은 조사량 (11 대 2.8 mmol m -2 s의 -1 MPA -1)보다 높은에 노출 잎에는 4 배 이상이었고, 따라서 K 잎은 잘에 강한 빛 응답을 보여 주었다 g S보다 충분한 잎. 또한, 높은 조사량에 따라, K 잎은 탈수으로 더 강력하게 거부했다. P 80 낮은 조사량보다 높은에서 0.93 MPA 덜 부정적이었다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/4179/4179fig1.jpg" /> 그림 1. 민감한 가뭄 (위)와 가뭄 관대 (아래) 종 (14,24에서)에 대한 잎 유압 취약점 곡선. 각 포인트는 죄를 나타냅니다증발 플럭스 방법 (EFM)을 사용하여 단독 잎에 잎 유압 전도성 (K 잎)의 gle은 측정. 수직 막대는 종이 초기 잎 유압 전도성 (P 80)의 80 %를 잃어되는 물 가능성을 나타냅니다. 최대 가능성을 사용하여 가장 적합한 기능을 모두 종에 대한 역모 있습니다. <img alt="수식 7" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq7.jpg" fo:content-width="3.293in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq7highres.jpg"/><img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/4179/4179fig2.jpg" /> 그림 2. Raphiolepis indica에 대한 감소 잎 물 잠재적으로 stomatal 전도성 (g들)과 잎 유압 전도성 (K 잎)의 반응은 높은 대 낮은 조사량 (16 일부터)에 따라 측정. (PAR은&gt; 1,000 &lt;6 mmol • m -2 • S-1). 각 점은 각각 높고 낮은 조사량에 따라 측정 잎을 대표하는 흰색과 검은 색 점으로, 증발 플럭스 방법 (EFM)을 사용하여 단독 잎에 하나의 측정을 나타냅니다. 고 대 낮은 조사량에서 stomatal 전도성 곡선에 대한 방정식 : <img alt="수식 8" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq8.jpg" fo:content-width="4.727in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq8highres.jpg" /> 과 <img alt="수식 9" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq9.jpg" fo:content-width="2.26in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq9highres.jpg"/> . 고 대 낮은 조사량의 취약성 곡선에 대한 방정식 : <img alt="수식 10" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq10.jpg" fo:content-width="2.7in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq10highres.jpg"/> 과 <img alt="수식 11" src="/files/ftp_upload/4179/4179eq11.jpg" fo:content-width="1.8in" fo:src="/files/ftp_upload/4179/4179eq11highres.jpg"/> . 상단 패널에 회색 별 평균 ± 역을 나타냅니다g s와 porometer과 낮에 그대로 식물의 잎에서 측정 잎 물 잠재 ndard 오류가 발생했습니다. 회색과 하단 패널에 검은 색 세로 막대는 종이 각각 높고 낮은 조사량에 따라 초기 잎 유압 전도성 (P 80)의 80 %를 잃어되는 물 가능성을 나타냅니다.

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T., Salleo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xylem+cavitation+in+the+leaf+of+Prunus+laurocerasus+and+its+impact+on+leaf+hydraulics.">Xylem cavitation in the leaf of Prunus laurocerasus and its impact on leaf hydraulics.</a> Plant Physiol. 125, 1700-1709 (2001).</li><li>Brodribb, T. J., Holbrook, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stomatal+closure+during+leaf+dehydration,+correlation+with+other+leaf+physiological+traits.">Stomatal closure during leaf dehydration, correlation with other leaf physiological traits.</a> Plant Physiol. 132, 2166-2173 (2003).</li><li>Blackman, C. J., Brodribb, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+measures+of+leaf+capacitance:+insights+into+the+water+transport+pathway+and+hydraulic+conductance+in+leaves.">Two measures of leaf capacitance: insights into the water transport pathway and hydraulic conductance in leaves.</a> Funct. Plant Biol. 38, 118-126 (2011).</li><li>Nardini, A., Raimondo, F., Lo Gullo, M. A., Salleo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leafminers+help+us+understand+leaf+hydraulic+design.">Leafminers help us understand leaf hydraulic design.</a> Plant Cell Environ. 33, 1091-1100 (2010).</li><li>Sheriff, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaporation+sites+and+distillation+in+leaves.">Evaporation sites and distillation in leaves.</a> Ann. Bot. 41, 1081-1082 (1977).</li><li>Canny, M. J., Huang, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leaf+water+content+and+palisade+cell+size.">Leaf water content and palisade cell size.</a> New Phytol. 170, 75-85 (2006).</li><li>Santiago, L. S., Mulkey, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+of+gas+exchange+measurements+on+excised+canopy+branches+of+ten+tropical+tree+species.">A test of gas exchange measurements on excised canopy branches of ten tropical tree species.</a> Photosynthetica. 41, 343-347 (2003).</li><li>Sack, L., Cowan, P. D., Jaikumar, N., Holbrook, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'hydrology'+of+leaves:+co-ordination+of+structure+and+function+in+temperate+woody+species.">The 'hydrology' of leaves: co-ordination of structure and function in temperate woody species.</a> Plant Cell Environ. 26, 1343-1356 (2003).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

여기에 제시된 증발 플럭스 방법은 stomatal 전도성의 동시 측정과 실험실에서 잎 유압 전도성의 상대적으로 빠른 (30 분) 결정을 할 수 있습니다. EFM은 주어진 지금까지 가장 가까운 잎에 물의 자연 경로를 따라하는 방법입니다 stomata 15 일부터 잎 airspaces 및 diffuses의 물이 증발. K 잎 결정을 위해 다른 실험 방법의 숫자는 세 특히 일반적인거든요, 25 존재합니다. (1) 고압 흐름 방법 (HPFM)에서 물을 고압 15,26 아래의 잎을 통해 밀어 수 있습니다. 그러나, 취약성 곡선이 방법으로 취득 할 수없는 적용 긍정적 인 압력이 충전 emboli을 수 있으며 mesophyll 조직을 rehydrate 때문입니다. (2) rehydration 동력학 방법 (RKM)에서 K 잎은 채널과 건조 잎의 rehydration 사이의 비유를 사용하여 계산됩니다저항 27,28있는 일련의 콘덴서의 arging. 이 방법은 빠른 속도이지만, 잎에 자연 transpirational 경로의 전체 시스템을 복제하지 않으며, 쉽게 높은 방사에 적응 잎의 측정을 허용하도록 수정되지 않습니다. 다른 농도의 진공은 잎 15,26의 잎 운전 물 손실에 적용되어있는 동안 (3) 진공 펌프 방법 (VPM)에서 잎이 챔버에 배치됩니다, 그 잎자루는 균형에 물 소스에 연결되어 있습니다. 이 방법은 시간이 많이 걸릴 수 있습니다. 3 가지 방법을 모두 사용하는 측정은 일관된 결과에게 15,28,29를 제공하는 것으로되어 있으며, 따라서 EFM은 자주는 transpirational 물 운동을 기반으로 주어진 사용하며, 상대적으로 급속하고, 서로 다른 조건 하에서 K 잎을 측정하기위한의 수정됩니다. K 잎을 결정에 사용되는 일반적인 방법의 모든 ACC 정량화에 불확실성의 수준을 포함증산 25에 해당하는 urately 원동력. EFM에서 ΔΨ 잎은 잎이 압력 폭탄 equilibrated 후는 대량 Ψ 잎을 기반으로 K 잎이 진정한 원동력보다 낮은 계산하는 데 사용. 이 시점에서, 대량 Ψ 잎 반드시 유압 경로의 끝에있는 세포의 물 가능성을 나타내지 않는 곳의 물이 증발, 오히려 물이 낮은 물 잠재력의 비교적 적은 세포의 볼륨 가중 평균 이동과 증발과 증산 스트림에서 분리 될 수 높은 물 가능성의 더 많은 세포. Ψ 잎은 진정한 원동력 다릅니다 얼마나 때문에 물이 잎에서 증발되어 위치에 따라 달라집니다. 경우 잎에 걸쳐 물이 증발은 대량 Ψ 잎은 진정한 원동력에 가까이 있으며, 수도 물은 비교적 적은 C에서 증발하는 경우stomata 근처 ells은 대량 Ψ 잎은 실질적으로 진정한 원동력, 즉, 실제로는 훨씬 더 낮을 수 있습니다 이러한 세포의 물 잠재력을 과소 평가 할 수 있으며, 따라서 실제 K 잎은 EFM로 결정보다 낮은 것입니다. 따라서, EFM에 의해 결정 K 잎은 진정한 K 잎을 대표하는 정도는 아직 잘 이해되지 않는 물 흐름 경로에 민감하다. EFM은 K 잎을 (위 참조) 측정을 위해 다른 방법을 일치하고, 비교 사용 우수한 데이터, 종 - 변화 mesophyll를 통해 물 흐름 경로의 추가 조사가 필요의 가능성을 제공하고 있지만. 사실, 심지어 특정 종의 잎을 위해,이 물이 경로는 다른 irradiances와 열로드 4,30에서 또는 다른 물 상태 (조직 수축 부여) 31의 다른 조건, 예를 들면 아래 다를 수 있습니다. 추가 지식물 운송 경로의 따라서 EFM이 전체 잎 유압 전송에 변화 경로의 효과를 확인하는 데 사용 할 수 있도록합니다. EFM에서 stomatal 전도성의 측정은 방사와 탈수에 대한 답변의 결정을 허용하고, K 잎과 g s의 일치 답변을 제공하는 장점이 있습니다. 또한, g s의 rehydration 다음 이전 잎 탈수의 효과는이 방법으로 평가 할 수 있습니다. 그러나,이 방법은 두 잠재적 인 단점을 가지고있다. 먼저,이 g의 측정이 아니라 그대로 식물에 대한보다 excised 잎에했고, 둘째 있으며, stomatal 전도성의 결정은 기후 잎의 측정 거리를하기보다는 porometer 챔버에서와 같이 잎 가까이에 기반 , 팬과 잎의 환기는 공기를 주변으로 잎 표면을 equilibrates하지만. 종 (种)의 경우, excised잎은 그대로 식물 16,32에 나뭇잎보다 다른 stomatal 응답을 표시 할 수 있습니다. 그러나, 몇 종에 대한 g s은 (는) EFM를 사용하여 낮 Ψ 잎 16 (그림 2)에서 잎 porometer을 그대로 공장에서 측정 된 값과 비슷했다 추정했다. EFM은 K 잎, 구조 및 해부학의 원리, 환경 요인과의 반응의 역학을 조사, 생리 통찰력, 즉에 적용 할 수 있습니다. 또한, 방법은 서로 다른 조건 하에서 성장 주어진 종의 식물을 비교하거나, 다른 연령대의, 또는 다른 환경에 적응 종 식물을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 잎 취약성 커브를 구축함으로써, 하나는 가뭄에 종 오차의 메커니즘에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 가뭄 동안, 캐비테이션 및 세포 붕괴는 일부의 잎 목부에서 발생하는 표시되었습니다<html> 종, 그리고 탈수시 mesophyll의 세포 수축도 (14에서 검토) 물 운동에 영향을 미칠 수 있습니다. 미래 연구는 K 잎과 stomatal 폐쇄의 하락을 유발하는 측면에서 이러한 프로세스의 각각의 상대적 중요성을 결정하기 위해 필요합니다. 방사는 K 잎과 EFM이 매우 높은 조사량에 따라 측정에 적합합니다에 영향을 미치는 강력한 요소입니다. 방사와 가뭄이 aquaporins의 결합 반응은 많은 관심을 얻을해야합니다. 감소 표현 및 / 또는 aquaporins의 드 activatation에 탈수 리드는 K 잎을 줄이는 반면, 높은 방사는 K 잎을 증가, 증가 표현 및 / 또는 살아있는 세포를 통해 빠른 물 흐름을 허용 aquaporins의 활성화로 연결됩니다. K 잎에 방사와 물 공급의 결합에 미치는 영향은 추가 조사 4,10,16,33이 필요합니다. 십t &quot;&gt; 또한, 종에서, K 잎과 보안 문제는. 빛 물 및 기타 리소스 3,13,24의 공급과 관련하여 종 분포에 관한 왔습니다 종은 건조한 지역에서 직면하고, 유압 감소에 더 큰 저항을 표시하는 경향이 더 많은 부정적인 토양 물 잠재력, 그리고 더 부정적인 물 잠재력에서 높은 K 잎을 유지하여, 그들은 높은 g을 유지하고 광합성 13,14에 대한 CO 2를 포착 계속 진행합니다. 따라서, 잎 유압 속성의 연구 수준의 통찰력을 제공 할 수 있습니다 세포, 잎, 그리고 전체 플랜트 및 환경에의 대응, 모든 스케일에서 많은 중요한 새로운 발견을 양보 할 가능성이 있습니다.

measurement of leaf hydraulic conductance and stomatal conductance and their responses to irradiance and dehydration using the evaporative flux method (efm)

물은 중요한 자원이며, 공장 물 운송 시스템은 최대 성장과 가뭄 허용 한도를 설정합니다. 식물이 광합성에 CO 2를 캡처 높은 stomatal 전도성 (g들)을 달성하기 위해 자신의 stomata을 열 때, 물은 증발 1,2에 의해 손실됩니다. airspaces에서 증발 물은 줄기와 뿌리의 목부에서 회전 추첨에, 잎 정맥의 목부에서 물을 그리기 결과적으로, 세포 벽에서 대체됩니다. 물이 시스템을 통해 당겨로서 시스템에 걸쳐 긴장과 낮은 잎 물 전위 (Ψ 잎)를 작성, 유압 저항을 경험한다. 잎 자체 공장 유압 저항 3의 평균 30 % 회계, 전체 공장 시스템의 중요한 병목 현상입니다. 잎 유압 전도성 (K 잎 = 1 / 잎 유압 저항)은 잎에서 물 잠재적 그라디언트에 물 유량의 비율이며, 요약복잡한 시스템의 동작 :. 잎자루을 통하여 정맥, 번들 집에 출구와 영공으로 증발하고 stomata에서 일어난되기 전에 mesophyll 셀이나 주변 통과의 여러 주문을 통해 물이 이동은 K 잎은으로 강한 관심을 종을 비교하는 중요한 생리적 특징, 물 수송 및 구조의 변화의 관계 (예를 들어, 잎 엽맥의 분포 상태 아키텍처) 및 광합성 가스 교환에 미치는 영향에 대해 조사 할 수있는 키 변수의 잎 구조와 생리학의 효과를 정량화. 또한, K 잎은 K의 잎이 aquaporins, 멤브레인 4 물 수송에 관여 단백질의 표현 및 활성화의 변화로 인해 확실히 조사량을 크게 높일 수 있습니다. 내부 및 외부 잎 환경 3 강력하게 대응하고, K 잎은 동안 강하게 거부 박사캐비테이션 및 / 또는 mesophyll 및 번들 피복 셀 수축 또는 aquaporin 비활성화 5-10으로 인해 매우 목질부의 조직에서 목질부의 도관 및 / 또는 투자율 손실의 붕괴로 인해 하겠군. K 잎이 잘 물결 무늬가있는 조건에서 종에 걸쳐, 그리고 가뭄 기간 동안 g s와 광합성 속도를 제한하고, 따라서 전체 - 공장 성능을 제한 할 수 있기 때문에 가뭄이 주파수 및 심각도 11-14의 증가 특히 그들은 가능한 종 분포를 결정할 수있다. 우리는 excised 잎에 K 잎과 g s의 동시 결정하는 간단한 방법을 제시한다. transpiring 잎은 균형에 물 소스에 실행 튜브에의 잎자루에 의해 연결되어 있습니다. 잔고에서 물 손실은 잎을 통해 유량을 계산 기록됩니다. 정상 상태 증산 (E, mmol • m -2 • S -1)이 도달, g <sub&gt; S는 증기 압력 적자에 의해 나누어 결정되고 압력 챔버 사용하여 결정 물 잠재적 인 원동력으로 나누어 K 잎 (K 잎 = E / - Δψ 잎, MPA) 15. 이 방법은 다른 irradiances과 탈수 14,16,17에 K 잎의 취약성에 K 잎 응답을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

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Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method EFM

우리는 잎 유압 전도성의 동시 측정 (위해 상대적으로 빠른 (30 분)와 현실적인 방법을 설명<em&gt; K</em<sub&gt; 잎</sub&gt;)와 stomatal 컨덕턴스 (<em&gt; g</em<sub&gt; S</sub&gt;) transpiring excised 잎. 방법의 빛과 탈수 반응을 측정하기 위해 수정할 수 있습니다<em&gt; K</em<sub&gt; 잎</sub&gt;와<em&gt; g</em<sub&gt; S</sub&gt;.

증발 플럭스 방법 (EFM)를 사용 조사량과 탈수에 잎 유압 전도성과 Stomatal 전도성과 응답 측정

Water is a key resource, and the plant water transport system sets limits on maximum growth and drought tolerance. When plants open their stomata to ...

measurement-leaf-hydraulic-conductance-stomatal-conductance-their

Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method (EFM)

36.9K 조회수.  University of California, Los Angeles. 우리는 잎 유압 전도성의 동시 측정 (위해 상대적으로 빠른 (30 분)와 현실적인 방법을 설명 K

비디오: Measurement of Leaf Hydraulic Conductance and Stomatal Conductance and Their Responses to Irradiance and Dehydration Using the Evaporative Flux Method EFM

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stable isotopic profiling has long permitted sensitive investigations of the metabolic consequences of genetic mutations and/or pharmacologic therapies in cellular and mammalian models. Here, we describe detailed methods to perform stable isotopic profiling of intermediary metabolism and metabolic flux in the nematode, Caenorhabditis elegans. Methods are described for profiling whole worm free amino acids, labeled carbon dioxide, labeled organic acids, and labeled amino acids in animals exposed to stable isotopes either from early development on nematode growth media agar plates or beginning as young adults while exposed to various pharmacologic treatments in liquid culture. Free amino acids are quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) in whole worm aliquots extracted in 4% perchloric acid. Universally labeled 13C-glucose or 1,6-13C2-glucose is utilized as the stable isotopic precursor whose labeled carbon is traced by mass spectrometry in carbon dioxide (both atmospheric and dissolved) as well as in metabolites indicative of flux through glycolysis, pyruvate metabolism, and the tricarboxylic acid cycle. Representative results are included to demonstrate effects of isotope exposure time, various bacterial clearing protocols, and alternative worm disruption methods in wild-type nematodes, as well as the relative extent of isotopic incorporation in mitochondrial complex III mutant worms (isp-1(qm150)) relative to wild-type worms. Application of stable isotopic profiling in living nematodes provides a novel capacity to investigate at the whole animal level real-time metabolic alterations that are caused by individual genetic disorders and/or pharmacologic therapies.

Stable Isotopic Profiling of Intermediary Metabolic Flux in Developing and Adult Stage Caenorhabditis elegans

Stable isotopic profiling by gas chromatography mass spectrometric analysis of intermediary metabolic flux is described in the nematode, Caenorhabditis elegans. Methods are detailed for assessing isotopic enrichment in carbon dioxide, organic acids, and amino acids following isotope exposure either during development on agar plates or during adulthood in liquid culture.

개발하고 성인 단계에서 중개 신진 대사 플럭스 안정 원소 프로파일 Caenorhabditis 엘레간스</em

Stable isotopic profiling has long permitted sensitive investigations of the metabolic consequences of genetic mutations and/or pharmacologic therapies in ...

연구

생물학

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

The cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in humans.There is therefore considerable interest in this protein, but efforts to study its structure and activity have been hampered by the difficulty of expressing and purifying sufficient amounts of the protein1-3. Like many 'difficult' eukaryotic membrane proteins, expression in a fast-growing organism is desirable, but challenging, and in the yeast S. cerevisiae, so far low amounts were obtained and rapid degradation of the recombinant protein was observed 4-9. Proteins involved in the processing of recombinant CFTR in yeast have been described6-9 .In this report we describe a methodology for expression of CFTR in yeast and its purification in significant amounts. The protocol describes how the earlier proteolysis problems can be overcome and how expression levels of CFTR can be greatly improved by modifying the cell growth conditions and by controlling the induction conditions, in particular the time period prior to cell harvesting. The reagants associated with this protocol (murine CFTR-expressing yeast cells or yeast plasmids) will be distributed via the US Cystic Fibrosis Foundation, which has sponsored the research. An article describing the design and synthesis of the CFTR construct employed in this report will be published separately (Urbatsch, I.; Thibodeau, P. et al., unpublished). In this article we will explain our method beginning with the transformation of the yeast cells with the CFTR construct - containing yeast plasmid (Fig. 1). The construct has a green fluorescent protein (GFP) sequence fused to CFTR at its C-terminus and follows the system developed by Drew et al. (2008)10. The GFP allows the expression and purification of CFTR to be followed relatively easily. The JoVE visualized protocol finishes after the preparation of microsomes from the yeast cells, although we include some suggestions for purification of the protein from the microsomes. Readers may wish to add their own modifications to the microsome purification procedure, dependent on the final experiments to be carried out with the protein and the local equipment available to them. The yeast-expressed CFTR protein can be partially purified using metal ion affinity chromatography, using an intrinsic polyhistidine purification tag. Subsequent size-exclusion chromatography yields a protein that appears to be &gt;90% pure, as judged by SDS-PAGE and Coomassie-staining of the gel.

Expression and Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein in Saccharomyces cerevisiae

Attempts to express the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in Saccharomyces cerevisiae have, until now, yielded relatively low amounts of protein. This protocol and the associated reagents distributed via the Cystic Fibrosis Foundation should allow the preparation of milligram amounts of this 'difficult' eukaryotic membrane protein.

의 낭성 섬유증의 Transmembrane의 전도성 조절 단백질의 표현과 정제 Saccharomyces cerevisiae

The  cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) is a chloride  channel, that when mutated, can give rise to cystic fibrosis in  ...

An Innovative Method for Exosome Quantification and Size Measurement

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about their complex pathways, their bioavailability and their diverse functions in health and disease. Current work focuses on the presence and the behavior of exosomes (in vitro as well as in vivo) in the context of different human disorders, especially in the fields of oncology, gynecology and cardiology.
Unfortunately, neither a consensus regarding a gold standard for exosome isolation exists, nor is there an agreement on such a method for their quantitative analysis. As there are many methods for the purification of exosomes and also many possibilities for their quantitative and qualitative analysis, it is difficult to determine a combination of methods for the ideal approach. 
Here, we demonstrate nanoparticle tracking analysis (NTA), a semi-automated method for the characterization of exosomes after isolation from human plasma by ultracentrifugation. The presented results show that this approach for isolation, as well as the determination of the average number and size of exosomes, delivers reproducible and valid data, as confirmed by other methods, such as scanning electron microscopy (SEM).

A method for isolation of exosomes from whole blood and further analysis by nanoparticle tracking using a semi-automatic instrument is presented in this article. The presented technology provides an extremely sensitive method for visualizing and analyzing particles in liquid suspension.

엑소 정량화 및 크기 측정을위한 혁신적인 방법

Although the biological importance of exosomes has recently gained an increasing amount of scientific and clinical attention, much is still unknown about ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that currently limits the average life expectancy of sufferers to &#60;40 years of age. The development of novel drug molecules to restore the activity of CFTR is an important goal in the treatment CF, and the isolation of functionally active CFTR is a useful step towards achieving this goal.
We describe two methods for the purification of CFTR from a eukaryotic heterologous expression system, S. cerevisiae. Like prokaryotic systems, S. cerevisiae can be rapidly grown in the lab at low cost, but can also traffic and posttranslationally modify large membrane proteins. The selection of detergents for solubilization and purification is a critical step in the purification of any membrane protein. Having screened for the solubility of CFTR in several detergents, we have chosen two contrasting detergents for use in the purification that allow the final CFTR preparation to be tailored to the subsequently planned experiments.
In this method, we provide comparison of the purification of CFTR in dodecyl-&#946;-D-maltoside (DDM) and 1-tetradecanoyl-sn-glycero-3-phospho-(1&#39;-rac-glycerol) (LPG-14). Protein purified in DDM by this method shows ATPase activity in functional assays. Protein purified in LPG-14 shows high purity and yield, can be employed to study post-translational modifications, and can be used for structural methods such as small-angle X-ray scattering and electron microscopy. However it displays significantly lower ATPase activity.

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Heterologous expression and purification of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) are significant challenges and limiting factors in the development of drug therapies for cystic fibrosis. This protocol describes two methods for the isolation of milligram quantities of CFTR suitable for functional and structural studies.&#160;

로 표현 낭포 성 섬유증 막 횡단 전도력 규칙 단백질의 정제<em&gt; 사카로 마이 세스 세레 비시 애</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

A Standardized Method for the Analysis of Liver Sinusoidal Endothelial Cells and Their Fenestrations by Scanning Electron Microscopy

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved substances from the blood into the liver parenchyma for metabolism and processing. Fenestrations are dynamic structures - both their size and/or number can be altered in response to various physiological states, drugs, and disease, making them an important target for modulation. An understanding of how LSEC morphology is influenced by various disease, toxic, and physiological states and how these changes impact on liver function requires accurate measurement of the size and number of fenestrations. In this paper, we describe scanning electron microscopy fixation and processing techniques used in our laboratory to ensure reproducible specimen preparation and accurate interpretation. The methods include perfusion fixation, secondary fixation and dehydration, preparation for the scanning electron microscope and analysis. Finally, we provide a step by step method for standardized image analysis which will benefit all researchers in the field.

The fenestrated liver sinusoidal endothelial cell is a biologically important filter system that is highly influenced by various diseases, toxins, and physiological states. These changes significantly impact on liver function. We describe methods for the standardisation of the measurement of the size and number of fenestrations in these cells.

주사 전자 현미경으로 간 사인 내피 세포의 분석 및 그들의 Fenestrations위한 표준화 된 방법

Liver sinusoidal endothelial cells are the gateway to the liver, their transcellular fenestrations allow the unimpeded transfer of small and dissolved ...

Relating Stomatal Conductance to Leaf Functional Traits

Leaf functional traits are important because they reflect physiological functions, such as transpiration and carbon assimilation. In particular, morphological leaf traits have the potential to summarize plants strategies in terms of water use efficiency, growth pattern and nutrient use. The leaf economics spectrum (LES) is a recognized framework in functional plant ecology and reflects a gradient of increasing specific leaf area (SLA), leaf nitrogen, phosphorus and cation content, and decreasing leaf dry matter content (LDMC) and carbon nitrogen ratio (CN). The LES describes different strategies ranging from that of short-lived leaves with high photosynthetic capacity per leaf mass to long-lived leaves with low mass-based carbon assimilation rates. However, traits that are not included in the LES might provide additional information on the species&#39; physiology, such as those related to stomatal control. Protocols are presented for a wide range of leaf functional traits, including traits of the LES, but also traits that are independent of the LES. In particular, a new method is introduced that relates the plants&#8217; regulatory behavior in stomatal conductance to vapor pressure deficit. The resulting parameters of stomatal regulation can then be compared to the LES and other plant functional traits. The results show that functional leaf traits of the LES were also valid predictors for the parameters of stomatal regulation. For example, leaf carbon concentration was positively related to the vapor pressure deficit (vpd) at the point of inflection and the maximum of the conductance-vpd curve. However, traits that are not included in the LES added information in explaining parameters of stomatal control: the vpd at the point of inflection of the conductance-vpd curve was lower for species with higher stomatal density and higher stomatal index. Overall, stomata and vein traits were more powerful predictors for explaining stomatal regulation than traits used in the LES.

Unraveling how physiology and morphology are linked allows a deeper understanding of mechanistic functioning of plant leaves. We present both a procedure to derive parameters of stomatal regulation from stomatal conductance measurements and correlations with traditional functional leaf traits.

잎 기능 형질에 기공 컨덕턴스 관련된

Leaf functional traits are important because they reflect physiological functions, such as transpiration and carbon assimilation. In particular, ...

Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular systolic and diastolic function. Measures of ventricular contractility and compliance are obtained through examination of cardiac response to changes in afterload and preload. These techniques were originally developed nearly three decades ago to measure cardiac function in large mammals and humans. The application of these analyses to small mammals, such as mice, has been accomplished through the optimization of microsurgical techniques and creation of conductance catheters. Conductance catheters allow for estimation of the blood pool by exploiting the relationship between electrical conductance and volume. When properly performed, these techniques allow for testing of cardiac function in genetic mutant mouse models or in drug treatment studies. The accuracy and precision of these studies are dependent on careful attention to the calibration of instruments, systematic conduct of hemodynamic measurements and data analyses. We will review the methods of conducting pressure-volume loop experiments using a conductance catheter in mice.

Cardiac pressure-volume loop analysis is the most comprehensive way to measure cardiac function in the intact heart. We describe a technique to perform and analyze cardiac pressure volume loops, using conductance catheters.

마우스에서 컨덕턴스 카테터를 사용하여 심장 압력 볼륨 루프 분석

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, implantation of transgenic cells and tiny optical sensors. However, intravenous microinjections into small animals, which are mostly used in biological and veterinary laboratories, are very difficult and require trained personnel. Herein, we demonstrate a robust and efficient method for the introduction of microparticles into the circulatory system of adult zebrafish (Danio rerio) by injection into the fish kidney. To visualize the introduced microparticles in the vasculature, we propose a simple intravital imaging technique in fish gills. In vivo monitoring of the zebrafish blood pH was accomplished using an injected microencapsulated fluorescent probe, SNARF-1, to demonstrate one of the possible applications of the described technique. This article provides a detailed description of the encapsulation of pH-sensitive dye and demonstrates the principles of the quick injection and visualization of the obtained microcapsules for in vivo recording of the fluorescent signal. The proposed method of injection is characterized by a low mortality rate (0-20%) and high efficiency (70-90% success), and it is easy to institute using commonly available equipment. All described procedures can be performed on other small fish species, such as guppies and medaka.

This article demonstrates the principles of a quick, minimally invasive injection of fluorescent microparticles into the circulatory system of small fishes and the in vivo visualization of the microparticles in fish blood.

간단 하 고 효과적인 관리 및 신장 주입을 사용 하 여 작은 물고기의 순환 시스템에 미의 시각화

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Measurement of Energy Metabolism in Explanted Retinal Tissue Using Extracellular Flux Analysis

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while maintaining transparency of the visual axis. Perturbations to this delicate balance cause blinding illnesses, such as diabetic retinopathy. Therefore, the understanding of energy metabolism changes in the retina during disease is imperative to the development of rational therapies for various causes of vison loss. The recent advent of commercially-available extracellular flux analyzers has made the study of retinal energy metabolism more accessible. This protocol describes the use of such an analyzer to measure contributions to retinal energy supply through its two principle arms - oxidative phosphorylation and glycolysis - by quantifying changes in oxygen consumption rates (OCR) and extracellular acidification rates (ECAR) as proxies for these pathways. This technique is readily performed in explanted retinal tissue, facilitating assessment of responses to multiple pharmacologic agents in a single experiment. Metabolic signatures in retinas from animals lacking rod photoreceptor signaling are compared to wild-type controls using this method. A major limitation in this technique is the lack of ability to discriminate between light-adapted and dark-adapted energy utilization, an important physiologic consideration in retinal tissue.

This technique describes real time recording of oxygen consumption and extracellular acidification rates in explanted mouse retinal tissues using an extracellular flux analyzer.

Explanted 망막 조직 세포 외 유출 분석을 사용 하 여 신진 대사 에너지의 측정

High acuity vision is a heavily energy-consuming process, and the retina has developed several unique adaptations to precisely meet such demands while ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

표적 및 태비네이션 하에서 절단을 사용하는 식물에서의 H3K4me3 수정 프로파일링

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...