저자는 유럽위원회 (European Commission) 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (PIOF-GA-2009-255466)와 아일랜드 보건 연구위원회 (HRA_POR/2010/138)에서이 원고에 관련된 지원을 인정하고 싶습니다. 럭스 태그 E. 대장균 박사 코르 막 Gahan, 대학 대학 코르크에서 일종의 선물이었다.

1. 종양 유도 <ol><li> 일상적인 종양 유도를 들어, 혈청이없는 배지 200 μl에 떠있는 셀의 최소 tumorigenic 선량은 무료로 감염의 측면 6~8주 세 여성 Balb / C 또는 athymic MF1-nu/nu 마우스로 (SC) 피하 주입 된 N 21 게이지 주사기 바늘을 사용하여 = 6 (할렌, 옥스퍼드 셔, 영국) (1 X 10 6 4T1 세포). 혈구와 Trypan 파랑 염료 제외 (Gibco)를 사용 시각적 개수에 의해 결정으로 접종에 사용되는 세포의 생존 능력은보다 큰 95%했다. </li><li> 종양 설립 후, 종양은 성장하고 발전 할 수 있었고, 2 회 모니터링했다. 종양 볼륨이 종양의 가장 긴 직경이며, B는 직경을에 가장 긴 직경 수직 공식 V = (AB 2) Π / 6에 따라 계산되었습니다. </li></ol> 2. 세균 준비 <ol><li> 이 protoco에 사용 된 세균의 변형난 E.했다 대장균 K-12 MG1655, 비 단백질 독소 표현 세균에 의해 감지 할 수 있도록 그 luxABCDE 인코딩 플라스미드을 품고, 스트레인을 BLI. E. 통합 luxABCDE를 포함하는 대장균 MG1655은 37 aerobically 성장했습니다 ° LB 매체에서 C (시그마 - 알드리치, 아일랜드) 300 μg / ML 에리스로 마이신 (엠)와 보충. MG1655의 발광 생물 파생는 플라스미드 p16S 룩스 제정 P 도움말 luxABCDE 오페론 1 포함 된을 사용하여 만들어졌습니다. </li><li> 마우스로 관리를위한 준비, 문화는 중간 로그 단계 (600 nm의에서 광학 밀도)에 200 rpm으로 흔드는에서 37 ° C에서 LB 매체에 incubated되었습니다. 박테리아는 (6,000 × g로 5 분)을 원심 분리하여 수확 PBS (시그마)로 세척하고, PBS 1 희석 된 × 10 7 식민지 형성 단위 (CFU) / IV 관리를위한 ML, 또는 gavage 1 × 10 10. </li></ol> 3. 세균 Administra기 <ol><li> 종양 볼륨에서 약 100mm 3에 도달하면 마우스가 무작위로 실험 그룹으로 나누어되었다. 정맥 주사 관리를 들어, 절제된 마우스 각 28G 주사기 바늘을 사용하여 측면 꼬리 정맥에 직접 주입, 100 μl에 10 6 세포를 받았다. 각 inoculum의 가능한 개수는 회고 도금에 의해 결정되었다. </li><li> GIT의 식민지 연구를 들어, 10 9 박테리아 세포는 구두 세 번 일에 gavage에 마우스 당 100 μl으로 시행되었다. 기존의 공생 박테리아 수준은 이전의 구두 gavage 1 개시 7 일 동안 마우스 식수 5 MG / ML 스트렙토 마이신의 추가에 의해 공급 이전에 감소했다. </li></ol> 4. BioLuminescence 영상 <ol><li> 생체 BLI 영상의 2D는 IVIS100 (캘리퍼)를 사용하여 수행되었습니다. 정의 시간 포인트 후 세균 관리에서, 쥐 캘리퍼스의 XGI-8 가스 마취를 사용하여 anesthetized했다3 % Isofluorane, 그리고 전체 - 신체 이미지 분석 시스템은 고감도에서 2-5 분 동안 IVIS 100 시스템에 수행되었다. </li><li> 3D 영상의 경우, anesthetized 마우스는 등쪽의 이미징을위한 광학 이미징 시스템 (IVIS 스펙트럼, 캘리퍼스)의 내부에 마우스 이미징 셔틀에 배치되었습니다. 3D 광학 재건을위한 세균 루시 페라 신호의 이미지를 취득하려면 500-580 nm의에 이르기까지 방출 필터 파장은 소음 비율에 신호를 극대화 할 수 필터 당 3-4 분 빈 16 수집 시간으로 사용되었습니다. 이 이미지 수집 과정의 일환으로, 구조화 된 빛이 이미지는 높이 맵을 정의하기 위해 얻은 것입니다. 이지도는 입력 확산 광 단층 촬영 영상 (DLIT) 음수가 아닌 최소 제곱 최적화 2를 사용 3D 광학 이미지를 형성하는 데 사용 된 reconstructions 알고리즘했다. </li><li> 이미지 분석 : 관심 지역을 파악하고 생활 이미지 소프트웨어 (캘리퍼)를 사용하여 정량 하였다. </li></ol> 5. 대표하는결과 본 연구에서는 비 병원성 세균 공생 E.coli K-12 MG1655 luxABCDE 오페론을 표현하는 IV는 SC 4T1의 이종 이식 종양을 간직한 생쥐에 투여했다. 세균 룩스 신호는 마우스의 종양에 구체적으로 발견 된 후 IV-행정 (그림 2). 샘플 마우스에서 박테리아의 문화 복구 가능한 박테리아 숫자와 감지 빛의 양 (그림 3) 사이의 선형 관계의 존재를 확인합니다. GIT에 구두 - 관리 공생 박테리아의 생체 이미징에서 또한 3D BLI를 사용하여 달성된다. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1.jpg" alt="그림 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/4318/4318fig1highres.jpg"/> 1 그림. 프로토콜 타임 라인. 피하 종양은 마우스에서 유도하고, 박테리아는 종양 개발 (100mm 3)에 따라 관리됩니다. 라이브 쥐 BLI 인스턴트 메신저 아르여러 시간 지점 게시물 세균 관리 (화살표가 일반적인 시간을 표시)에 세. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. E.의 관리 종양 베어링 마우스에 대장균 MG1655 luxABCDE. 피하 4T1 종양은 MF1 뉴 / 뉴 마우스와 E.에서 유도 된 대장균 MG1655 luxABCDE는 종양 개발에 실시. 각 동물은 측면 꼬리 정맥에 직접 주사 10 6 세포를 받았습니다. 마우스는 샘플 희생 마우스 종양에서 가능한 박테리아의 후속 복구 (CFU)로 연구 기간 동안 4 개의 시간대 포인트 (검은 점 Z-축 및 이미지) (막대 그래프)에서 이미징되었다. 세균 번호와 특히 종양에 시간 (대표 마우스 시점에 따라 그림)을 통해 관찰 된 플라스미드 유전자 발현에 향상시킬 수 있습니다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4318/4318fig2large.jpg" target="_blank">큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> .<img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. Intratumoral 세균 번호와 Bioluminescence 관계. 가능한 박테리아는 종양의는 다양한 시간 포인트 이후 IV 관리에서 BLI에 다음 종양에서 예 생체 박테리아 문화가 열거되었다. 생체 bioluminesce 단위를 기준으로 세균의 숫자 값 (CFU)를 로그하는 것은 그래프로 나타납니다. 세균 수와 세균 bioluminescence 신호 사이의 강력한 상관 관계가 관찰 R 2 = 0.9717 1. <img src="/files/ftp_upload/4318/4318fig4.jpg" alt="그림 4" /> 4 그림. 손쥐 위장관의 3D IVIS 이미지 E.하여 식민지 대장균 MG1655은. 마우스의 GIT는 E.의 10 9 CFU의 구두 행정부에 의해 개척했고 세 번 일 대장균. 식민지 마우스의 3D 단층 촬영에서 샘플 격리 된 이미지가 표시됩니다.3D 이미지는 해부학 등록을 제공하는 해골의 디지털 마우스 아틀라스를 보여줍니다. E.는 대장균 MG1655 bioluminescence는 낮은에서 녹색으로 표시하고, 높은 수준의 보라색입니다.

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	<li>Cronin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+in+vivo+bioluminescent+imaging+for+the+study+of+bacterial+tumour+targeting.">High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting.</a> PLoS One. 7, e30940 (2012).</li><li>Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+in+vivo+bioluminescent+sources+based+on+multispectral+imaging.">Three-dimensional reconstruction of in vivo bioluminescent sources based on multispectral imaging.</a> J. Biomed. Opt. 12, 024007 (2007).</li><li>Tangney, M., Ahmad, S., Collins, S. A., O'Sullivan, G. 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관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

유전자 치료의 맥락에서 환자에게 치료 유전자 전달을위한 생화학 제제의 사용은 큰 약속 3-5 나타났습니다. 바이러스처럼, 박테리아의 본래 생물학적 특성은 특히 암의 맥락에서, 셀이나 조직에 효율적으로 DNA 전달을 허용합니다. 그것은 박테리아가의 자연스럽게 할 수있는 것으로 표시되었습니다 체계적으로 중 외부 로컬 복제 높은 수준의 (비 침습적 종) 또는 종양 세포 (병원균)에 발?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 4T1 세포 라인 </td><td> ATCC </td><td> CRL-2539 </td><td> 자발적으로 발생하는 BALB / C 유방 종양에서 파생 Syngeneic 유방암 모델 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> D6429 </td><td> Dulbecco의 수정 된 이글의 매체 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> D8537 </td><td> 인산염은 식염 버퍼 </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS </td><td> 캘리퍼스 생명 과학 </td><td></td><td> 2D 이미지에 대한 IVIS 100, 3D에 대한 IVIS 스펙트럼. </td></tr><tr><td> Luria 국물 밀러 (LB) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> L2542 </td><td> E.의 성장 매체 대장균 </td></TR&gt; <tr><td> 에리스로 마이신 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> E5389 </td><td> 항생 물질 </td></tr><tr><td> 스트렙토 마이신 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> S9137 </td><td> 항생 물질 </td></tr><tr><td> MF1nu/nu 마우스 </td><td> 할렌 (UK) </td><td> 069 (뉴) / 070 (뉴 / +) </td><td> Hsd : Athymic 누드 - Foxn1nu </td></tr><tr><td> Balb / C 마우스 </td><td> 할렌 (UK) </td><td> 066 </td><td> Haplotype : H-2 D </td></tr><tr><td> Gavage 바늘 </td><td> 수의사 기술 솔루션 (UK) </td><td> DE009 </td><td> 22G X 38mm 바로 gavage 바늘 </td></tr><tr><td> IV 주입 주사기 </td><td> BD BioSciences </td><td> 309309-1 ML </td><td> 28 G X ½ 인치 마이크로 미세 IV 바늘과 인슐린 주사기. </td></tr><tr><td> 종양 접종에 대한 주사기 </td><td> 브라운 </td><td> 9161376V </td><td> Omnifix 26 G X &amp;frac12; 인치 바늘 </td></tr></tbody></table>

bioluminescent bacterial imaging in vivo

이 동영상은 암 유전자 및 세포 치료 박테리아의 사용에 중점을두고, 라이브 쥐 세균 매매의 연구 전신 bioluminesce 이미징 (BLI)의 사용에 대해 설명합니다. 박테리아가 조직 관리에 따라 종양 내에 우선적으로 성장하는 자연 능력을 보유하고 암 치료를위한 벡터의 매력적인 클래스를 제시한다. 박테리아는 박테리아와 동시에 종양 사이트의 럭스 유전자 카세트 허가 BLI 검색을 표현하는 설계. 시간이 지남에 따라 종양 내에 위치와 박테리아의 수준은 쉽게 검토 할 수 있습니다, 2, 3 차원 시각화. 방법은 박테리아 종과 종양 이종 이식 유형의 다양한 적용됩니다. 이 문서는 피하 종양 베어링 마우스에서 발광 생물 박테리아의 분석을위한 프로토콜을 설명합니다. BLI하여 위장관 (GIT)의 공생 박테리아의 시각화도 설명되어 있습니다. 이 강력하고 저렴한, 실시간 이미징 전략 represenTS 암 특정 유전자 치료의 연구, 그리고 전염성 질병의 맥락에서 생체 내 박테리아의 연구를위한 이상적인 방법입니다. 이 동영상은 럭스 태그 E.을 공부에 대한 절차를 설명 IVIS 시스템 공간과 측두엽 판독 달성 활용 BLI을 보여주는 라이브 쥐 대장균.

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Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

이 문서의 관리에 대해 설명합니다<em&gt; 룩스 태그</em&gt; 마우스에 세균 및 이후<em&gt; 생체 내</emIVIS의 bioluminescence 이미징을 사용하여&gt; 분석.

발광 생물 세균 이미징<em&gt; 생체 내</em

This video describes the use of whole body bioluminesce imaging (BLI) for the study of bacterial trafficking in live mice, with an emphasis on the use of ...

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Bioluminescent Bacterial Imaging In Vivo

15.1K 조회수.  University College Cork. 이 문서의 관리에 대해 설명합니다 룩스 태그 마우스에 세균 및 이후 생체 내 분석.