우리는 시각적 모델 지원 비디오 제작 및 편집과 칼튼에서 박사 마틴 버트 란드 몰입 미디어 스튜디오 / 신경 재생 연구실에서 전문가 기술 지원 칼튼 몰입 미디어 스튜디오에서 마크 레너드 감사드립니다. 저자는 굉장히 박사 매릴린 Keaney와 오타와 동물 관리 및 수의학 서비스의 대학에서 그녀의 헌신적 인 직원의 모든 전문가의 조언을 인정합니다. 이 작품은 SALB, 노화의 CIHR 연구소 SALB와 SF, 캐나다 재단에 Neurodegenerative Lipidomics의 건강 연구 / CIHR 교육 프로그램 (TGF 96,121)의 전략적 교육 사업에 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR, 걸레 62826)에 의해 재정 지원되었다 SF, SF에 온타리오 혁신 믿어, 그리고 SF에 대한 오토 데스크 연구에 혁신. ACM은 CIHR의 들소와 베스트 박사 상을 받게됩니다. NV는 노화와 Neurodegenerative Lipidomics의 CIHR 교육 프로그램의 연구소에서 포스트 - 전문 교제를받습니다.

1. 준비 시약 <ol><li> 필요한 때까지 무균 질 세척을, 실온에서 단단하게 밀봉 된 용기에 두 번 증류수 (ddH 2 O)와 상점을 압력솥. </li><li> cytological 평가를 들어, ddH 2 O. 100 ML에 크리스탈 바이올렛 가루 0.1 g을 추가 잘 섞는다. 필요한 때까지 크리스탈 바이올렛 얼룩 (0.1 %)는 실온에서 단단하게 밀봉 된 용기에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 2. 수집 질 세포 (질 세척) <ol><li> 멸균 200 μl 팁의 끝 부분에 라텍스 전구를 놓고 멸균 ddH 2 O는 볼륨 지침으로 끝에서 순서를 사용하는 약 100 μl를 그린다. </li><li> 그녀 케이지의 마우스를 올려 당신에 대한 그녀의 엉덩이 / 후방 단부와 케이지 호퍼 (뚜껑)에 그녀를 놓습니다. </li><li> 단단히 꼬리를 파악하고 뒤쪽 끝을 향상. 마우스는 이제 호퍼을 쥐었고 만 그녀 앞에서 손을 갖게됩니다. 이 시점에서 마우스가 소변을 할 수 있습니다. 그렇다면, 배뇨 멈출 때까지 기다리십시오. 거기에 질 운하의 입구에서 왼쪽으로 소변을 할 경우, 당신은 별도의 팁 (즉,하지 샘플 수집 팁)를 사용하여 초과 ddH 2 O로 시작을 씻어 할 수 있습니다. </li><li> 질 (및 경부) 자극이 쥐 1,2에 pseudopregnancy을 일으킬 수로 구멍을 통과하지 돌봐 질 운하의 개통에 ddH 2 O 가득한 팁의 끝을 놓으십시오. 최근 보고서는 쥐가 그럼에도 불구하고 치료가 반복 분석 3 invasiveness의 정도를 최소화하기 위해주의해야한다이 효과에 덜 민감한 것이 좋습니다. </li><li> 부드럽게 질 운하의 개통에 물 (~ 25-50 μl)의 양의 절반에 분기 추방 전구를 놓으면 되죠. 액체가 저절로 팁 삽입없이 운하에 기음합니다. 천천히 전구에 가해지는 압력을 놓습니다. 유체는 끝으로 다시 인출됩니다. 유체의 흡인을 방지하기 위해 너무 빨리 해제 압력을 피전구에. 필터링 팁이 목적을 위해 유용 할 수 있습니다. </li><li> 하나의 샘플에서 세포의 충분한 숫자를 얻기 위해 같은 팁, ​​전구, 그리고 유체를 사용하여 이전 단계 4-5 번 반복합니다. </li><li> 유리 슬라이드에 유체를 삽입하고, 비방 완전히 실온에서 건조 할 수 있습니다. 일단 건조,이 estrous 얼룩은 즉시 물들거나 저장하고 나중에 물들 일 수 있습니다. </li></ol> 3. 크리스탈 바이올렛을 사용하여 Cytological 착색 * 4 <ol><li> 크리스탈 바이올렛은 1 분에 얼룩을 포함하는 coplin 병 (또는 다른 유사한 착색 용기)에서 건조 슬라이드를 놓습니다. </li><li> ddH 2 O.을 포함하는 두 번째 coplin 병에 제거 1 분에 ddH 2 O로 슬라이드를 씻으십시오. 반복합니다. </li><li> 스테인드 도말 표본과 접촉을 피하고, 가벼운 의무 조직 와이퍼와 슬라이드의 가장자리에서 초과 ddH 2 O를 제거합니다. </li><li> 비방과 커버 상단에 글리세롤의 피펫 약 15 μl나오십시오. 또한, 다른 조직 학적 장착 시약은 더 영구적, 비 diffusing 얼룩을 얻기 위해 이용 될 수있다. </li></ol> 여기에 설명 * 착색 방법은 실험실에서 수행 할 수있는 간단한 절차입니다. 다른 방법은 자세한 내용을 제공 할 수 있습니다. 예를 들어, Papanicolaou의 얼룩 사용하여 nucleated 상피 세포의 성숙이 덜 성숙 세포 스테인드 청록색 더 성숙 세포 핑크 또는 오렌지 스테인드로 구별 할 수 있습니다. 이러한 차이는 일찍 또는 늦게 proestrus를 개최하는 데 사용할 수 있습니다. 4 4. 질 세포학 <ol><li> 세포 유형이 존재 결정하는 빛 현미경 아래에있는 얼룩을 검사합니다. 현미경 검사는 coverslipping에 글리세롤을 사용하면 크리스탈 바이올렛은 시간이 지남에 따라 세포의 확산되므로 얼룩 후 바로 수행해야합니다. Photomicrographs는 세포학을 문서화하는 분석시에주의해야한다. </li><li> entir를 검사하여 시작낮은 배율의 전자 도말 표본. 대표 지역을 선택하고 더 높은 배율로 이동합니다. 귀하는 (대표 결과, 그림 1A-C) 편평 상피 세포, 백혈구 및 / 또는 nucleated 상피 세포를 cornified 볼 수 있습니다. 세포 존재의 비율은 샘플 수집 시간 (대표 결과, 그림 1D-G)와 즉각적인 호르몬 상태 (토론, 그림 2)에서 마우스의 estrous 단계를 결정 할 수 있습니다. </li></ol> 5. 대표 결과 세포학 : 세 가지 기본 세포 유형은 질을 뛰어 넘는 샘플에서 감지 할 수 있습니다 : (1) nucleated 상피 세포 (그림 1A)는, (2) 편평 상피 세포 (그림 1B) 및 (3) 백혈구 (그림 1C)을 cornified. Nucleated 상피 세포는 가볍게 스테인드 세포질, 어두운 스테인드 플라즈마 막, 그리고 타원형 핵이 ( <str긴 사연&gt; 그림 1A). Cornified 편평 상피 세포는 nucleated 상피 이전보다 모양에 더 많은 다각형, 균일 스테인드 있으며, 핵 (그림 1B)를 부족합니다. Polymorphonuclear 백혈구들은 불규칙한 모양, 어둡게 스테인드 다형성 핵, 그리고 작은 크기 (그림 1C, 검은 색 화살표)로 상피 세포로부터 구별 할 수 있습니다. 소변 오염 비방에 존재해야합니다, 요산의 결정이 쉽게 어떤 예상 세포 유형 (그림 3)에 이종의 결정 구조에 의해 감지됩니다. 이 문제가 발생할 있으며, 주된 세포 유형의 모호한 감지 경우, 비방은 삭제와 목적을 교대 사용하지해야합니다. 준비 : 얼룩에서 관찰 세포 유형의 상대적 비율은 샘플 수집의 날 (그림 1D-G)에 마우스의 estrous주기의 단계를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. proestrus 동안, 세포는 거의 대부분 아르원형의 클러스터는 상피 세포를 (그림 1D, 흰색 화살표로 표시 대표 셀) nucleated 잘 형성 될 수있다. 발정 동안, 세포는 주로 밀도가 높은 포장 클러스터에 존재하는 편평 상피 세포 (그림 1E, 화살촉으로 표시 대표 셀) cornified 있습니다. metestrus 동안, 작은 모호하게 스테인드 백혈구는 (그림 1 층 검은 색 화살표로 표시 대표 셀) predominate. Cornified 편평 상피 세포는 종종 조각, (그림 1 층, 검은 화살촉으로 표시 대표 셀)에서 관찰 될 수 있습니다. diestrus 동안, 희귀 cornified 편평 상피 세포가 계속 (그림 1G, 검은 화살촉으로 표시 대표 세포)가 될 수 있습니다, 그러나 백혈구는 여전히 (그림 1G, 검은 색 화살표로 표시 대표 셀) predominate. Metestrus는 diestrus의 nucleated 상피 세포의 모양 (가 diestrus 구별 할 수 있습니다 <stron<html> g&gt; 그림 1G는 대표 셀은) 흰색 화살표로 표시. <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="그림 1" /> 1 그림. 질 얼룩의 Cytological 평가는 estrous 단계를 식별하는 데 사용할 수있는 세 가지 기본 세포 유형의 질을 뛰어 넘는 샘플에서 발견됩니다. (A) nucleated 상피 세포, (B) cornified 편평 상피 세포, 그리고 (C) 백혈구. 비방에 존재하는 이러한 세포 유형의 비율 (D) proestrus이 (E) 발정은 (F) metestrus, 또는 (G) diestrus대로 대표 결과에 설명의 생쥐를 식별하는 데 사용할 수 있습니다. 대표 cornified 편평 상피 세포에 E, F 및 G 포인트의 블랙 화살촉. 대표 leykocytes에 C, F 및 G 포인트의 검은 색 화살표. D와 G 강조 담당자에 흰색 화살표는 상피 세포를 nucleated. . JPG &quot;대체 =&quot;그림 2 &quot;/&gt; 그림 2. 질 비방 세포학은 기본 내분비 이벤트를 반영합니다. 세부 사항도 토론에 제공됩니다. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">더 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 요산의 결정이 소변 오염 된 시료의 현재 다음 크리스탈 바이올렛 염색 할 수 있습니다. (A) 크리스털 투명하고 다양한 크기 ((B)에 확대 화살표와 박스 지역) 될 수 있습니다. 어떤 세포는이 분야에서 존재하지 않습니다. cytological 착색에 사용되는 필드 내에서 요산의 결정 오염이 존재해야, 그것은 정확하게 세포 유형이 현재와 비방을 폐기해야합니다 식별하기 어려울 수 있습니다. 스케일 바 = 50 μm.

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	<li>Adler, N. T., Zoloth, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copulatory+behavior+can+inhibit+pregnancy+in+female+rats.">Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats.</a> Science. 168, 1480-1482 (1970).</li><li>Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+copulatory+behavior+on+hormonal+change+in+the+female+rat+prior+to+implantation.">The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation.</a> Physiology. 5, 1003-1007 (1970).</li><li>Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating-induced+neuroendocrine+responses+during+pseudopregnancy+in+the+female+mouse.">Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse.</a> Journal of. 21, 30-39 (2009).</li><li>Hong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+mouse+estrus+cycle+in+response+to+BRCA1+inactivation+suggest+a+potential+link+between+risk+factors+for+familial+and+sporadic+ovarian+cancer.">Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer.</a> Cancer research. 70, 221-228 (2010).</li><li>Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menstrual+cycle:+basic+biology.">The menstrual cycle: basic biology.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).</li><li>Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactoferrin+expression+in+the+mouse+reproductive+tract+during+the+natural+estrous+cycle:+correlation+with+circulating+estradiol+and+progesterone.">Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone.</a> Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).</li><li>Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+pituitary+concentrations+of+LH,+FSH,+and+prolactin+in+aging+C57BL/6+mice+at+various+times+of+the+estrous+cycle.">Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle.</a> Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).</li><li>Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+surge+in+pro-oestrous+rats.">Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats.</a> Nature. 264, 461-463 (1976).</li><li>Rajendren, G., Gibson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+confocal+microscopic+study+of+synaptic+inputs+to+gonadotropin-releasing+hormone+cells+in+mouse+brain:+regional+differences+and+enhancement+by+estrogen.">A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen.</a> Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).</li><li>Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+stimulating+hormone+is+required+for+ovarian+follicle+maturation+but+not+male+fertility.">Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility.</a> Nature. 15, 201-204 (1997).</li><li>Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH-induced+ovulation+in+intact+and+hypophysectomized+mice.">FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice.</a> Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).</li><li>Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+menstrual+cycle+in+women.">The normal menstrual cycle in women.</a> Animal reproduction science. , 124-229 (2011).</li><li>Appelgren, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+demonstration+of+drug+interference+with+progesterone+synthesis.">Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis.</a> Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).</li><li>Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+DHEA+and+metformin+on+corpus+luteum+in+mice.">Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice.</a> Reproduction. 138, 571-579 (2009).</li><li>Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+control+of+corpus+luteum+formation,+function,+and+regression.">The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression.</a> Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).</li><li>Rudolph, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+overt+menstruation+in+intact+mice.">Induction of overt menstruation in intact mice.</a> PLoS One. 7, e32922 (2012).</li><li>Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).</li><li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+anoestrus+in+mice+caged+in+groups.">Occurrence of anoestrus in mice caged in groups.</a> The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).</li><li>Lamond, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+derived+from+other+animals+of+the+same+species+on+oestrous+cycles+in+mice.">Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice.</a> The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).</li><li>Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+studies+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+II.+Cessation+of+cyclicity+and+the+duration+of+persistent+vaginal+cornification.">Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification.</a> Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.+II.">Spontaneous pseudopregnancy in mice. II.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.">Spontaneous pseudopregnancy in mice.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).</li><li>Armaiz-Pena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+modulates+ovarian+carcinoma+growth.">Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).</li><li>Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+Whitten+effect+in+female+mice+by+synthetic+analogs+of+male+urinary+constituents.">Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).</li></ol>

저자는 이익 갈등을 선언하지 않습니다. 동물의 모든 실험은 오타와 동물 관리위원회의 대학과 동물 관리에 캐나다 의회에 의해 명시된 지침과 규정에 엄격한에 따라 수행되었다.

셀 예표 론의 이러한 변화는 기본 내분비 이벤트를 나타내는 수 있습니다. estrous주기의 proestrus 단계는 월경주기 (5)의 인간 follicular 단계에 해당하며 17 β-에스트라 디올 수치에게 6 순환의 사전 ovulatory 증가뿐만 아니라, prolactin 7의 작은 급증 (그림 2에 의해 정의되는 것은, Proestrus, 왼쪽 패널). 17 β-에스트라 디올의 증가는 간접적으로 자극 생식샘 자극 호르몬 - 방출 차례로, 순환 8,9에 luteinizing 호르몬과 소낭 자극 호르몬을 출시 할 앞 뇌하수체에 반응 세포를 활성화, 시상 하부 및 심실 중격 호르몬 뉴런을 (그림 2 , Proestrus, 왼쪽 패널). proestrus의 동물에서 가져온 질 얼룩에서 세포는 거의 대부분 타원형 nucleated 상피 세포 (그림 1D, 그림 2, Proestrus, 오른쪽 패널)입니다. 소낭 자극의 horm의 피크발정 10,11 하나의 레벨 신호의 배란 및 항목. 발정 기간 동안, 17-β-에스트라 디올 수치 감소와 prolactin 수준에게 최대 6,7 (그림 2, 발정, 왼쪽 패널을). 질 얼룩은 clumps에서 종종 불규칙 모양의 cornified 편평 상피 세포 (그림 1E, 그림 2, 발정, 오른쪽 패널)의 거의 독점적 인 검색을 특징으로하고 있습니다. metestrus에 입장 progesterone 호르몬 수준 6 연속 상승과 일치과 인간의 luteal 단계 12 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)의 시작 부분에 해당합니다. progesterone 수준은 상승이 시작 코퍼스 luteum 활성화 6,13,14 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)에 대한 응답으로 17 β-에스트라 디올 수치의 작은 동요가 있습니다. 이 단계 동안 질 얼룩에 존재하는 세포 유형은 조각, cornified 상피 세포와 작은 어두운 스테인드 백혈구 (Figur 아르전자 층, 그림 2, Metestrus, 오른쪽 패널). 마지막으로, 쥐 diestrus에 항목이 발생하고 progesterone 수준에게 인간의 말 luteal 단계 12에 해당하는 최대 6, 순환. 코퍼스 luteum의 회귀는 progesterone 수준 15,16의 후속 급락 (그림 2, Diestrus, 왼쪽 패널)로 연결됩니다. 백혈구는 diestrus 동안 얼룩에 predominate. cornified 상피 세포의 주파수는 감소 nucleated 상피 세포는 이전에 proestrus (그림 1G, 그림 2, Diestrus, 오른쪽 패널)으로 전환 할 감지하기 시작합니다. 요약하면,이 단순하고, 일상적인 프로토콜은 매일 호르몬 변동을 예측하고 다음주의 사항을 촬영하는 경우 생식 상태를 변경하지 않고 실험 쥐 estrous 단계를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 샘플링은 하루에 한 번씩 비 침습적 프로토콜 내림차순를 사용하는 것보다 더 이상 수행되지 않을 것입니다질 운하, 흡인 및 교반의 반복 침투에 비해 여기 ribed. 이 cytological 평가를 먹이고 있습니다 얼룩에 존재하는 백혈구와 다른 세포 유형의 결과 염증성 응답 17에 결과 질 자극을 일으킬 수 있습니다. 또한, 심지어 식민지-자리 여성은, 그게 잘 anestrous 18 유도하고이 식별 번식이, 성별에 호르몬 영향의 해석에 유용합니다, 질병 연구 등 다양한 마우스에 확장 diestrus와 발정 단계를 볼 정상입니다. 사이클 길이 변화는 나이가 및 여성 7,19-21의 식민지에서 주택의 차이 (개인 또는 그룹 주택)에 의해 소개되어 있습니다. 여성 전용 식민지에 자리 잡고 여자들은 자전거를 중단하고 자전거는 자전거 24,25을 유도하는 남성 소변과 pretreated 케이지에 노출에 의해 다시 instated 할 수 있지만 장시간 diestrus 18,22,23의 상태를 입력 할 수 있습니다. 따라서, individua를 확립하는주어진 마우스 리터 사이클 길이는,이 두개의 완벽한 사이클이 관찰 될 때까지 여기에 설명 된 비 침습적 평가가주의 매일 수행 할 것을 권장합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 # </td></tr><tr><td> 멸균 200 μl 피펫 팁 </td><td> Diamed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> 라텍스 전구 (1 ML) </td><td> 어부 </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> 유리 현미경 슬라이드 </td><td> 어부 </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 크리스탈 바이올렛 (25 G) 얼룩 </td><td> 어부 </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> 가벼운 의무 조직 와이퍼 </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> 글리세린 </td><td> 어부 </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> 현미경 커버 유리 (22x30) </td><td> 어부 </td><td> 12 544A </td></tr></tbody></table>

performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification

설치류에 생식 상태를 평가의 급속한 수단뿐만 아니라 생식 기능 장애의 연구에 유용합니다뿐만 아니라 병적 인 도전에 따라 조직 변성의 호르몬 조절 (또는 재생)에 새 마우스 질병의 모델과 조사의 생산이 필요합니다. proestrus, 발정, metestrus 및 diestrus : 손쥐 생식 (또는 estrous)주기는 4 단계로 나누어 져 있습니다. 난소 스테로이드 17-β-에스트라 디올과 progesterone의 수준을 순환에 정의 변동, gonadotropins는 luteinizing와 자극 호르몬을 고치,이 생식 단계를 통해 luteotropic 호르몬 prolactin 신호 전환. 손쥐 질 운하 내에서 세포 예표 론의 변화는 이러한 기본 내분비 이벤트를 반영합니다. nucleated 상피 세포, cornified 편평 상피 세포, 그리고 질 얼룩에 존재하는 백혈구의 상대 비율 매일 평가는 손쥐 estrous을 식별하는 데 사용할 수 있습니다단계. invasiveness의 정도 그러나, 이러한 샘플 생식 상태를 변경하고 얼룩의 cytological 평가를 먹이고 수있는 염증 반응을 유도 할 수 있습니다 수집에 채용. 여기, 우리는 그녀의 생식주기를 변경하지 않고 여성 마우스의 estrous주기의 단계를 결정하는 데 사용할 수있는 간단한 비 침습적 프로토콜을 설명합니다. 어떻게 우리가 네 가지 질 얼룩의 주된 세포 예표 론의 수집과 분석에 의한 estrous주기의 단계와 우리가 이러한 변경 사항은 내분비 상태에 대해 해석 할 수있는 방법을 보여 구별하는 방법을 자세히 설명합니다.

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Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

여기, 우리는 간단한 비 침습적 수집 및 질을 뛰어 넘는 샘플 cytological 평가하여 손쥐 생식 (proestrus, 발정, metestrus, 또는 diestrus)의 단계를 확인하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 더 질 세포학은 손쥐 생식주기를 통해 전환을 하부 호르몬 수준을 순환 반영 방법에 대해 설명합니다.

마우스 Estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 Cytological 평가를 수행

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

performing-vaginal-lavage-crystal-violet-staining-vaginal-cytological

Research

JoVE Journal

Biology

110.1K 조회수.  Neural Regeneration Laboratory and Ottawa Institute of Systems Biology. 여기, 우리는 간단한 비 침습적 수집 및 질을 뛰어 넘는 샘플 cytological 평가하여 손쥐 생식 (proestrus, 발정, metestrus, 또는 diestrus)의 단계를 확인하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 더 질 세포학은 손쥐 생식주기를 통해 전환을 하부 호르몬 수준을 순환 반영 방법에 대해 설명합니다.

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A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated procedures to obtain such measurements in the same animal are generally not feasible.  Here, we demonstrate protocols for obtaining from mice repeated measurements of AHR and bronchoalveolar lavage fluid samples.  Mice were challenged intranasally seven times over 14 days with a potent allergen or sham treated.  Prior to the initial challenge, and within 24 hours following each intranasal challenge, the same animals were anesthetized, orally intubated and mechanically ventilated.  AHR, assessed by comparing dose response curves of respiratory system resistance (RRS) induced by increasing intravenous doses of acetylcholine (Ach) chloride between sham and allergen-challenged animals, were determined.  Afterwards, and via the same intubation, the left lung was lavaged so that differential enumeration of airway cells could be performed.  These studies reveal that repeated measurements of AHR and BAL fluid collection are possible from the same animals and that maximal airway hyperresponsiveness and airway eosinophilia are achieved within 7-10 days of initiating allergen challenge.  This novel technique significantly reduces the number of mice required for longitudinal experimentation and is applicable to diverse rodent species, disease models and airway physiology instruments.  

Repeated measurements of rodent respiratory physiology and sampling of airway inflammatory cells are desirable, but generally not feasible. Here we describe a repeatable method for orally intubating mice that permits repeated measurements of airway hyperreactivity and sampling of airway inflammatory cells.

에어웨이 저항 측정 및 마우스에 Bronchoalveolar 세척 유체 샘플링에 대한 가역, 비침습 방법

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

연구

생물학

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves composed of a number of terminal duct lobular units made of secretory alveoli and converging ducts1. In mice, a similar architecture is observed at pregnancy in which ducts and alveoli are interspersed within the connective tissue stroma. The mouse mammary gland epithelium is a tree like system of ducts composed of two layers of cells, an inner layer of luminal cells surrounded by an outer layer of myoepithelial cells denoted by the confines of a basement membrane2. At birth, only a rudimental ductal tree is present, composed of a primary duct and 15-20 branches. Branch elongation and amplification start at the beginning of puberty, around 4 weeks old, under the influence of hormones3,4,5. At 10 weeks, most of the stroma is invaded by a complex system of ducts that will undergo cycles of branching and regression in each estrous cycle until pregnancy2. At the onset of pregnancy, a second phase of development begins, with the proliferation and differentiation of the epithelium to form grape-shaped milk secretory structures called alveoli6,7. Following parturition and throughout lactation, milk is produced by luminal secretory cells and stored within the lumen of alveoli. Oxytocin release, stimulated by a neural reflex induced by suckling of pups, induces synchronized contractions of the myoepithelial cells around the alveoli and along the ducts, allowing milk to be transported through the ducts to the nipple where it becomes available to the pups 8. Mammary gland development, differentiation and function are tightly orchestrated and require, not only interactions between the stroma and the epithelium, but also between myoepithelial and luminal cells within the epithelium9,10,11. Thereby, mutations in many genes implicated in these interactions may impair either ductal elongation during puberty or alveoli formation during early pregnancy, differentiation during late pregnancy and secretory activation leading to lactation12,13. In this article, we describe how to dissect mouse mammary glands and assess their development using whole mounts. We also demonstrate how to evaluate myoepithelial contractions and milk ejection using an ex-vivo oxytocin-based functional assay. The effect of a gene mutation on mammary gland development and function can thus be determined in situ by performing these two techniques in mutant and wild-type control mice.

This method describes how to dissect and assess mammary gland development and function from mice. Excised mammary glands are assessed for the degree of development using whole mount while milk ejection is evaluated using an oxytocin-based myoepithelial cell contraction assay.

마우스 모델에서 유선 개발 및 기능 평가

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has been widely used to obtain information about DNA content in a population of cells, to infer relative percentages in different cell cycle phases. This technique has been successfully extended to the mitotic tissues of the model organism Drosophila melanogaster for genetic studies of cell cycle regulation in vivo. When coupled with cell-type specific fluorescent protein expression and genetic manipulations, one can obtain detailed information about effects on cell number, cell size and cell cycle phasing in vivo. However this live-cell method has relied on the use of the cell permeable Hoechst 33342 DNA-intercalating dye, limiting users to flow cytometers equipped with a UV laser. We have modified this protocol to use a newer live-cell DNA dye, Vybrant DyeCycle Violet, compatible with the more common violet 405nm laser. The protocol presented here allows for efficient cell cycle analysis coupled with cell type, relative cell size and cell number information, in a variety of Drosophila tissues. This protocol extends the useful cell cycle analysis technique for live Drosophila tissues to a small benchtop analyzer, the Attune Acoustic Focusing Cytometer, which can be run and maintained on a single-lab scale.

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

A protocol for cell cycle analysis of live Drosophila tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer is described. This protocol simultaneously provides information about relative cell size, cell number, DNA content and cell type via lineage tracing or tissue specific expression of fluorescent proteins in vivo.

라이브 세포주기 분석<em&gt; 초파리</em조율 어쿠스틱 초점 cytometer에와 Vybrant DyeCycle 바이올렛 DNA 얼룩을 사용하여&gt; 조직

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

Pyrosequencing for Microbial Identification and Characterization

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. The advantages of pyrosequencing for microbiology applications include rapid and reliable high-throughput screening and accurate identification of microbes and microbial genome mutations. Pyrosequencing involves sequencing of DNA by synthesizing the complementary strand a single base at a time, while determining the specific nucleotide being incorporated during the synthesis reaction. The reaction occurs on immobilized single stranded template DNA where the four deoxyribonucleotides (dNTP) are added sequentially and the unincorporated dNTPs are enzymatically degraded before addition of the next dNTP to the synthesis reaction. Detection of the specific base incorporated into the template is monitored by generation of chemiluminescent signals. The order of dNTPs that produce the chemiluminescent signals determines the DNA sequence of the template. The real-time sequencing capability of pyrosequencing technology enables rapid microbial identification in a single assay. In addition, the pyrosequencing instrument, can analyze the full genetic diversity of anti-microbial drug resistance, including typing of SNPs, point mutations, insertions, and deletions, as well as quantification of multiple gene copies that may occur in some anti-microbial resistance patterns.

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains, and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. In this video, the procedure for microbial amplicon generation, amplicon pyrosequencing, and DNA sequence analysis will be demonstrated.

미생물 식별 및 특성화를위한 Pyrosequencing

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

정자의 세포 학적 분석 : 라이브와 고정 준비<em&gt; 초파리</em&gt; 고환

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary changes. In particular, the adult stage is a rich source of morphological traits for interspecific comparison, including wing pigmentation comparison. To study developmental differences among species, detailed observation and appropriate staging are required for precise comparison. Here we describe protocols for staging of pupal periods and quantification of wing pigmentation in a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera. First, we describe the method for detailed morphological observation and definition of pupal stages based on morphologies. This method includes a technique for removing the puparium, which is the outer chitinous case of the pupa, to enable detailed observation of pupal morphologies. Second, we describe the method for measuring the duration of defined pupal stages. Finally, we describe the method for quantification of wing pigmentation based on image analysis using digital images and ImageJ software. With these methods, we can establish a solid basis for comparing developmental processes of adult traits during pupal stages.

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Protocols for staging pupal periods and measurement of wing pigmentation of Drosophila guttifera are described. Staging and quantification of pigmentation provide a solid basis for studying developmental mechanisms of adult traits and enable interspecific comparison of trait development.

준비 번데기 기간 및 초파리 guttifera 의 날개 색소 측정 방법

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

트랜스-내부 세포 배아 줄기 세포의 대량 주입 리드 더 높은 Chimerism 요금

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved in humans and are associated with metabolic syndrome or other diseases. Examination of lipid accumulation in this organism can be carried out by fixative dyes or label-free methods. Fixative stains like Nile red and oil red O are inexpensive, reliable ways to quantitatively measure lipid levels and to qualitatively observe lipid distribution across tissues, respectively. Moreover, these stains allow for high-throughput screening of various lipid metabolism genes and pathways. Additionally, their hydrophobic nature facilitates lipid solubility, reduces interaction with surrounding tissues, and prevents dissociation into the solvent. Though these methods are effective at examining general lipid content, they do not provide detailed information about the chemical composition and diversity of lipid deposits. For these purposes, label-free methods such as GC-MS and CARS microscopy are better suited, their costs notwithstanding.

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Nile red staining of fixed Caenorhabditis elegans is a method for quantitative measurement of neutral lipid deposits, while oil red O staining facilitates qualitative assessment of lipid distribution among tissues.

지질 풍부 및 평가의 지질 분포 나 일 빨강, 기름 빨간 O 얼룩으로 꼬마 선 충 의 정량화

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, uncoupling of metabolism to generate heat, and secretion of adipokines to regulate whole-body homeostasis and immune responses. Emerging research is identifying important regional differences in the developmental, molecular, and functional profiles of adipocytes located in discrete depots throughout the body. Different properties of the depots are medically relevant since metabolic diseases often demonstrate depot-specific effects. This protocol will provide investigators with a detailed anatomic atlas and dissection guide for the reproducible and accurate identification and excision of diverse mouse adipose tissues. Standardized dissection of discrete adipose depots will allow detailed comparisons of their molecular and metabolic characteristics and contributions to local and systemic pathologic states under various nutritional and environmental conditions.

Adipocytes exist in discrete depots and have diverse roles within their unique microenvironments. As regional differences in adipocyte character and function are uncovered, standardized identification and isolation of depots is crucial for advancement of the field. Herein, we present a detailed protocol for the excision of various mouse adipose depots.

다양한 마우스 지방 창고의 식별 및 해부

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...