이 프로토콜은 포괄적이고 저렴한 비용 시간 효과적인 기술을 제공한다는 점에서 중요합니다. 번역 연구의 핵심 요소에 답하고 개인 및 그룹 수준에서 구성 요소 데이터를 분류합니다. 이 기술은 동물의 전체 프로파일에 관하여 추출될 수 있는 정보의 총량으로 인해 유리하다.
여기에는 분류 구성 요소와 후속 결론이 포함됩니다. 이 기술은 심장학, 신경학 및 약리학을 포함한 광범위한 연구 분야에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 이 기술은 생식 연구에만 적용되는 것은 아닙니다.
사춘기 노인 쥐를위한 압축 스타일 홀드와 같은 나이에 적합한 홀드로 쥐를 다루는 것으로 시작하여 코가 땅에 뾰족한 흉부 위쪽 부위에 피사체를 배치하십시오. 주사기를 삽입하기 전에 꼬리를 부드럽게 구부려 피험자의 질 운하를 노출시킵니다. 주사기를 앞 손가락과 가운데 손가락으로 단단히 잡고 주사기의 끝을 평행 한 각도로 질 운하에 삽입하고 엄지 손가락으로 플런저를 안쪽으로 밀어 염화나트륨을 운하로 천천히 배출하십시오.
주사기의 플런저를 상피 내벽에서 멀리 당겨 질 운하에서 염화나트륨을 추출하십시오. 각 세포 유형에 대한 기준을 사용하여 샘플에 존재하는 세포를 특성화하고 결과를 기록하십시오. 유핵화된 각질화된 상피 또는 정량화된 상피 세포는 들쭉날쭉하거나 각진 가장자리로 나타날 것이다.
핵이 부족함에도 불구하고, 그것은 핵이 한때 유령 핵이라고 불리는 곳을 나타내는 세포 내에서 가벼운 둥근 영역을 나타낼 수 있습니다. 큰 유핵화된 상피, 또는 LNE 세포는 전형적으로 불규칙한 들쭉날쭉한 또는 각진 경계에 의해 둘러싸인 다각형 모양의 세포에 둥글다. 그들의 핵은 손상되거나 악화되는 세포의 핵에서 크로마틴의 돌이킬 수없는 응축과 관련된 온전한 것에서 퇴화 또는 pyknotic까지 다양 할 수 있습니다.
핵은 세포 내의 세포질보다 적은 공간을 차지하며, 작은 상피 세포보다 핵 대 세포질 비율이 낮습니다. 백혈구는 콤팩트한 구형 세포입니다. 다른 모든 기술된 세포 유형과 비교했을 때 가장 작다.
SNE 세포는 세포 내부의 세포질보다 더 큰 공간을 차지하는 둥근 핵을 가진 비 케라틴화 된 세포로, 큰 상피 세포에 비해 더 높은 핵 대 세포질 비율을 만듭니다. 네 개의 X와 같은 더 낮은 객관화를 사용하여 전체 셀 배열의 대표적인 뷰를 얻는다. 세포가 함께 뭉쳐 있는지, 고르게 분산되었는지, 무작위로 분산되어 있는지 여부를 기록하고 각 세포 유형의 특정 조직을 기록하십시오.
그런 다음 시각적으로 추정하고 총 세포량을 스미지, 중간 또는 수로 기록하고 개별 세포 양을 존재하는 각 세포 유형의 백분율로 기록합니다. 이러한 범주화 구성 요소를 결합하면 어떤 에스트로우스 사이클 단계가 제공되는지 결정하십시오. 디스트러스 단계 내에서, 백혈구가 우세하거나 유일한 세포 유형임을 알 수 있다.
이들은 전형적으로 처음에 뭉친 방식으로 배열되지만, 후기 단계에서 더 분산된다. 세포의 총 양은 비교적 낮을 수 있으며, 가장 자주 두 번째 또는 세 번째 날에 디스트러스 기간의 후기 단계에서 발생할 수 있습니다. 백혈구의 농축 가닥은이 단계에서 존재할 수있는 많은 양의 점액으로 인해 관찰 될 수 있습니다.
백혈구를 수반하는 SNE 세포의 세포 가닥의 작은 덩어리는 전두부로의 전이의 후기 단계 동안 볼 수 있다. 질액은 안으로 전환되고, 완전히 전환되고, 디스트러스에서 빠져 나올 때, 점성이 있고 불투명하게 보입니다. 발정기 단계 동안, SNE 세포는 백혈구, LNE, 및 AKE 세포가 낮은 숫자로 발견될 수 있는 동안 우세한 세포이다.
SNE 세포는 전형적으로 이 단계 동안 클러스터, 시트 또는 가닥으로 배열되고, 더 높은 배율에서 관찰될 수 있는 과립 외관을 갖는다. 질액은 피사체가 완전히 돌출부 단계로 전환되면 점성이 없고 투명해진다. AKE 세포는 발정 단계에서 우세하며, SNE 세포의 감소와 발정이 계속됨에 따라 세포의 수와 크기가 전반적으로 증가합니다.
AKE 세포는 종종 케라틴 바의 형태로 클러스터링됩니다. 그들은 또한 돌출부에서 metestrus로의 전환에서 더 분산 될 수있는 유령 핵을 포함 할 수 있습니다. 질액은 쥐가 에스트로우스로 전환하고, 완전히 전환하고, 발정기에서 빠져 나올 때 점성이 없으며 투명합니다.
쥐가 메테스러스로 전환함에 따라, 모든 세포 유형을 찾지만, LEU에 비해 종종 더 많은 양의 SNE 및 LNE 세포가 존재한다. 더 많은 양의 파편이 metestrus 및 발정 후 상피 세포 붕괴로 인한 전이 중에 관찰됩니다. 이 단계에서 모든 세포 유형이 다양한 양으로 보이기 때문에 일관된 배열이 부족합니다.
그러나, 초기 단계에서 상피 세포에 근접하여 패킹되는 백혈구는 디스트러스로 전환될 때 뭉친 배열로 돌아갈 수 있다. 질액은 단계에서 점성이 없으며 투명하게 보입니다. 그리고 diestrus로 이동하는 동안보다 점성이 있고 불투명 한 모양으로 바뀝니다.
각 단계 내에서, 많은 변이가 보여질 수 있는데, 예를 들어 디스트러스 단계 내에서, 상피 세포와 백혈구 둘 모두가 관찰되었다. 배열에서, 백혈구로 구성된 뭉친 점액 가닥, 백혈구의 초기 응집, 그리고 나중에 무작위 또는 심지어 지출이 또한 보였다. 질액 샘플을 수집 할 때, 부적절한 주사기 삽입으로 인해 질 운하 벽에서 편평 세포를 추출하는 것을 포함하여 반복적 인 세척을 보증하는 대표되지 않은 컬렉션이있었습니다.
유일한 파편, 분류하기에는 너무 낮은 세포 수, 초점이 맞지 않는 세포 수. 막대 그래프에 단계 진행 상황을 그래프로 표시하는 것이 일반적이며, 이를 통해 연구원은 전체 사이클 패턴을 검사하고 주기성을 확인할 수 있습니다. 그리고 샘플은 이어서 사이클 길이 및 단계 진행 패턴에 의해 분석될 수 있다.
에스트로우스 사이클 프로파일은 누적된 막대 그래프를 사용하여 만들 수 있으며, 쥐 당 또는 코호트 당 단계 진행을 추적합니다. 여기서 매일 분류 구성 요소는 하루 또는 스테이지별로 그래프로 표시됩니다. 범주화 구성 요소 데이터를 숫자로 구성하여 표준화된 범위를 만들고 통계를 수집할 수도 있습니다.
최소 침습성이 되도록 기술을 연습하고 현미경 슬라이드에서 대표적인 샘플을 스캔하여 선택 편향을 줄입니다. 전반적으로, 정상적인 사이클과 같은 것은 없다는 것을 기억하십시오. 이 절차에 따라 운동 및 행동 패러다임과 같은 실험 변수가 도입 될 수 있습니다.
이를 통해 연구는 사전에 동물의 기본 사이클링을 확립하고 나중에 특정 개입에 대한 호르몬 반응을 탐지 할 수 있습니다. 이 방법을 통해 연구자들은 성 스테로이드 호르몬과 다른 신체 시스템 간의 연결을 탐구 할 수 있습니다. 이것의 예는 성 스테로이드 호르몬에 대한 심장 수용체가 시스템 기능과 어떻게 관련되는지입니다.
