이 작품은 컨셉 교부금의 UC 발견 증명 의해 NIH (R00 EB007241)에 의해 지원되었다. 저자는 또한이 실험에서 그녀의 도움 재클린 허바드 감사드립니다.

1. 외과 준비 <ol><li> 6~8주 세 사이의 여성 CD 1 마우스는 우리 실험에 사용되었습니다. </li><li> 케타민과 xylazine 조합 (80 MG / kg ketamine/10 MG / kg xylazine)의 intraperitoneal 주사와 마우스를 마취. ~ 37 ° C.에 최적의 체온을 보장하기 위해 homeothermic 패드에서 마우스를 놓으십시오 지속적인 동물의 반사 신경 (예를 들면, 무딘 집게와 발을 곤란하게) 테스트에 의해 마취의 수준을 모니터링하고 필요한 경우 더 많은 마취를 삽입. </li><li> 인공 눈물의 연고와 함께 두 눈에 기름칠. 면도칼을 사용하여 두피에 머리카락을 제거하고 70 % 알코올 시험을 치루 패드를 사용하여 잔류 머리카락을 제거합니다. 두피 이상 Nair 헤어 제거 크림의 얇은 층을 적용하고 적용하려면 2 분 정도 기다리십시오. 부드럽게 생리를 사용하여 Nair와 나머지 머리는 면봉과 알코올 시험을 치루 패드를 moistened 닦아. 두피는 이제 완전히 사나이 답게해야합니다. </li><li> betadine 면봉 스틱을 사용하여 두피를 소독하고 7 청소0 % 에탄올 사립 패드. </li><li> ~ 37 최적의 체온을 보장하기 위해 수술 커튼에 동물을주의 깊게 포장 ° C와 두개골을 고정 할 수있는 stereotaxic 프레임에 동물을 탑재합니다. 살짝의 안정성을 보장하기 위해 두개골을 누릅니다. 사용 재료의 목록은 표 1에 제공됩니다. </li></ol> 2. 얇게 - 두개골 두피 창 준비 <ol><li> 눈 사이의 중간 선 지점에 절개를 시작합니다. 귀 사이의 중간 선 지점으로 caudally 계속합니다. 집게가있는 부분 피부를. </li><li> 해부 현미경으로 얇게 할 지역을 찾아 부드럽게 핀셋을 사용하여 근막을 제거합니다. 얇게 대뇌 피질의 창을 만들기 전에 멸균 면봉으로 두개골을 말린다. 우리의 실험에서, 우리는 4 만든 × 4mm는 두개의 창 ~ bregma에 뒤쪽과 측면 1mm를 얇게. </li><li> 빛 한눈에 모션 onl를 사용하여 수술 핸드 드릴에 드릴 비트 크기 0.75 mm를 둥근 카바이드 버를 사용하여 두개골을 썼음 시작Y. 두개골로 직접 압력을 가하지 마십시오. 멸균 생리와 면봉을 사용하여 뼈 먼지를 제거하고 두개골을 과열 방지를 위해 매 20-30 초를 드릴 중지합니다. 생리는 또한 두개골 전체의 열을 사라지고에 도움이됩니다. </li><li> 소형 뼈의 바깥 층이 완전히 제거되면 중간 작은 구멍이 많은 뼈 층은 이제 표시됩니다. 혈관이 작은 구멍이 많은 뼈 계층에서 더 명백만큼 ​​일부 약간의 출혈이있을 수 있습니다. 녹색 돌 버로 전환하여 작은 구멍이 많은 층 더 섬세하므로 특히주의를 사용하여 드릴 계속 진행합니다. 두개골 창 전체 반반 함을 만들 때 녹색 돌 버 적은 뼈 자료를 삭제합니다. 뼈 먼지를 제거하고 두개골을 냉각 가끔 드릴 중지합니다. </li><li> 마지막으로, 두개골이 더 투명하고 뇌에 vasculature 나면 이제 볼 수 있습니다, 연마 버를 사용하여 두개골을 연마 시작합니다. 이 수 두개골을 부드럽게하면서 숱이 더 정확.주세요 SKU의 두께를 확인부드럽게 포셉과에 눌러 붙인다. 두개골이 약간 유연하게 될 때 연마를 중지합니다. </li><li> 얇게 두개골 창이 완전히 부드럽고 반사 및 이미징 (그림 1)에 대한 준비가되어 있어야합니다. 뇌의 고도의 분산 조직의 특성으로 인해, 두개골은 최적 깊이 침투에 대해 최소 55 μm로 얇게해야합니다. 사용 재료의 목록은 표 1에 제공됩니다. </li></ol> 3. 광 결맞음 단층 촬영 영상 <ol><li> 수술이 완료되면 마취의 적절한 수준을 보장하고 필요한 경우 추가 마취를 관리하는 동물의 호흡 속도와 반사 신경을 확인합니다. stereotaxic 프레임에서 동물을 제거 동물 이미징 역 수술 커튼에 싸여 있으며, 교통 동물 유지. </li><li> 이미지는 반사 표지판을 확인하고 필요한 경우 추가 인공 눈물을 적용하기 전에. 두개골을 확보 할 수있는 stereotaxic 프레임에 동물을 탑재합니다. </li><li> 아래의 장소 동물10월 카메라와 광학 빔 (그림 2)에 따라 위치 TSCW합니다. 두개골과 뇌의 단면도는 이제 (그림 3) 시각화 할 수 있습니다. </li><li> 관심 지역이 위치한되면 데이터 수집이 시작 할 수 있습니다. 영상을 위해, 우리는 4.0 mm의 폭과 이미지 창을 달성하기 위해 갈보 거울을 사용합니다. 2mm의 이미지 깊이는 6 사고 전력 MW과 초점 얇게 두개골 아래의 1mm를 얻은 것입니다. 각 단면적 이미지 당 0.14 초의 수집 속도 2,048 축 스캔으로 구성. </li><li> 뇌의 용적 검사는 XY의 화살 방향으로 빔을 스캔 첫 번째 갈보 거울과 코로나에서 스캔 두 번째 갈보 거울과 스캔을위한 갈보 거울 두 개를 사용하여 2D 단면 일련의 이미지를 수집하여 구할 수 있습니다 방향. </li></ol>

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	<li>Bizheva, K., Unterhuber, A., Hermann, B., Povazay, B., Sattmann, H., Drexler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+ex+vivo+and+in+vitro+brain+morphology+in+animal+models+with+ultrahigh+resolution+optical+coherence+tomography.">Imaging ex vivo and in vitro brain morphology in animal models with ultrahigh resolution optical coherence tomography.</a> Journal of Biomedical Optics. 9, 719-724 (2004).</li><li>Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+for+ultrahigh+resolution+in+vivo+imaging.">Optical coherence tomography for ultrahigh resolution in vivo imaging.</a> Nature Biotechnology. 21, 1361-1367 (2003).</li><li>Wantanabe, H., Rajagopalan, U. M., Nakamichi, Y., Igarashi, K. 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M., Calabresi, P. A., Saidha, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+retinal+neuronal+layers+in+multiple+sclerosis+with+maual+and+automated+optical+coherence+tomography+segementation+techniques.">In vivo assessment of retinal neuronal layers in multiple sclerosis with maual and automated optical coherence tomography segementation techniques.</a> J. Neurol. , (2012).</li><li>Frohman, E. M., Fujimoto, J. G., Frohman, T. C., Calabresi, P. A., Cutter, G., Balcer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography:+a+window+into+the+mechanisms+of+multiple+sclerosis.">Optical coherence tomography: a window into the mechanisms of multiple sclerosis.</a> Nature Clinical Practice. 4, 664-675 (2008).</li><li>Gill, A. S., Rajneesh, K. F., Owen, C. M., Yeh, J., Hsu, M., Binder, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+optical+detection+of+cerebral+edema+in+vivo.">Early optical detection of cerebral edema in vivo.</a> J. Neurosurg. 114, 470-477 (2011).</li></ol>

관심 없음 충돌이 선언 없습니다.

10월와 얇게-두개골 영상은 최근 15, 16, 조사 된 소설 신경 영상 기술이다. 우리의 실험에서, 우리는 생체 내 마우스 모델에서 TSCW을 통해 SD 10 월 영상의 가능성을 보여 주었다. 결과에서 두개골이 약 55 μm로 얇게되어 있고 침투 깊이는 각각의 축 방향 및 측 방향에서 8 μm 및 20 μm의 이미지 해상도로 약 1mm에서 얻어진다. 정상적인 두개골 (그림 4)에 비해 신호 강도 프로파...

초기 1990 년대의 도입 이후, 10 월은 조직 구조와 기능 2 생물 이미징 용도로 사용되었습니다. 10월는 광섬유 켈슨 간섭계 2,4과 낮은 일관성 광원을 구현하여 backscattered 조명 4 반향 시간 지연을 측정하여 단면 이미지를 생성합니다. 또한 푸리에 도메인 10월 (FD 10 월)로 알려진 SD 10 월은, 첫째 1995 5 소개 및 전통적인 시간 도메인 10월 (TD -10 월)에 비해 우수한 이미징 양상을 제공합니다. SD 10 월에서 참조 암은 높은 속도와 초 고해상도 이미지 획득 6-9의 결과로 고정 유지됩니다. 현재 TSCW 모델은 전통적인 craniotomy 대신에 두 광자 현미경의 생체 뇌 이미징 응용 프로그램에 주로 사용되었습니다. 이러한 TSCW은 추가 IMA을 제공하기 위해 사용자 정의 두개골 판이나 유리 커버 슬립 10-13와 동시에 사용되어왔다안정성을 ging. 우리의 연구에서 우리는 TSCW을 사용하는 경우 다음과 같은 액세서리는 10월 이미징에 필요한 아니라는 것을 관찰했다. 그들은 광학 빔을 방해하고 10월 이미지를 변경 할 수 있으므로 따라서, 두개골 판이나 유리 커버 용지의 부족은 이미지 창 크기의 넓은 범위의 할 수 있습니다. 얇게-두개골 준비 두 광자 현미경 10-13를 사용하여 뇌의 이미징 연구에 도움이 될 입증되었습니다. 우리의 실험에서, 우리는 TSCW을 통해 생체 내 이미지 피질에 SD 10 월 시스템을 사용합니다. 우리의 사용자 정의 SD 10 월 영상 설정은 각각 8 μm 및 20 μm의 축 방향 및 측 방향 해상도의 결과로 97 nm의 대역폭과 1,295 nm의 중심이 superluminescent 다이오드 (SLD), 14로 구성된 광대역, 낮은 간섭 광원을 포함 . 우리의 광학 이미징 장치와 함께, 우리는 TSCW을 통해 이미지가 O에 구조와 기능을 파악하고 시각화에 큰 가능성이 있다는 구상ptically 조밀 한 뇌 조직.

<table border="1"><tbody><tr><td> 자료 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> 케타민 </td><td> 피닉스 제약 </td><td> 57319-542-02 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Akorn 주식회사 </td><td> 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> 인공 눈물 연고 </td><td> 럭비 </td><td> 0536-6550-91 </td><td></td></tr><tr><td> Nair </td><td> 교회 &amp; 드와이트 (주) 주식회사 </td><td> 4010130 </td><td></td></tr><tr><td> 멸균 알코올 준비 패드 </td><td> 켄달 의료 </td><td> 6818 </td><td></td></tr><tr><td> 면화는 Applicators 줬 </td><td> Fisherbrand </td><td> 23-400-115 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine 솔루션 Swabstick </td><td> 퍼듀 제품 &lt;/ TD&gt; <td> 67618-153-01 </td><td></td></tr><tr><td> 생리 식염수, 0.9 % </td><td> 피닉스 제약 </td><td> 57319-555-08 </td><td></td></tr><tr><td> Stereotactic 프레임 </td><td> Stoelting </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 고속 외과 핸드 드릴 </td><td> Foredom </td><td></td><td> 38,000 RPM </td></tr><tr><td> 초경 라운드 버 </td><td> Stoelting </td><td></td><td> 0.75 mm </td></tr><tr><td> 경질 - 그린 스톤 </td><td> Shofu </td><td></td><td> 생크 : HP 모양 : BA1 </td></tr><tr><td> CompoMaster 거친 &amp; CompoMaster 폴리 셔 </td><td> Shofu </td><td></td><td> 모양 : 미니 PT. </td></tr><tr><td> SpaceDrapes </td><td> Braintree 과학 주식회사 </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

thinned-skull cortical window technique for in vivo optical coherence tomography imaging

광 간섭 단층 촬영 (OCT)는 높은 공간적 - 시간적 해상도 바이오 메디컬 이미징 기술이다. 그 최소한 침략 방식으로 10월는 피부과 안과, 그리고 gastroenterology 1-3에서 널리 사용되었습니다. 얇게 - 두개골 대뇌 피질의 창 (TSCW)를 사용, 우리는 생체 내 이미지 피질을하는 도구로 스펙트럼 도메인 10월 (SD -10 월) 양상을 채용하고 있습니다. 더 다양한 기능을 제공으로 일반적으로, 오픈 - 머리가 신경 이미징에 사용 된 그러나, TSCW의 접근 방식은 덜 침습적이며, neuropathology의 연구에 장기 이미징을위한 효과적인 의미입니다. 여기, 우리는 대뇌 피질의 생체 10월 이미지에서의 마우스 모델에서 TSCW를 만드는 방법을 제시한다.

대뇌 피질 위에 얇게 창을 만든 후 vasculature는 이제 더 시각적으로 눈에 잘 띄는해야합니다 (그림 1)과 (최대 1 ㎜) 깊이 이미징 깊이있게됩니다. 140 μm (그림 1)에서 측정 및 더 큰 광학 선명도를 제공하는 일반 두개골에 비해 오른쪽 피질은 약 55 μm로 얇게되어 있습니다. 또한 10-15 μm로 썼음하면 11 그러나 유리 커버 용지와 두개골 플레이트의 사용 등 필요한는 <stro...

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Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

우리는을위한 마우스 모델에서 얇게 - 두개골 대뇌 피질의 창 (TSCW)를 생성하는 방법을 제시<em&gt; 생체 내</em대뇌 피질의&gt; 10월 영상.

에 얇게 - 두개골 두피 창 기술<em&gt; 생체 내</em&gt; 광 결맞음 단층 촬영 영상

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

thinned-skull-cortical-window-technique-for-vivo-optical-coherence

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

15.0K 조회수.  University of California, Riverside. 우리는을위한 마우스 모델에서 얇게 - 두개골 대뇌 피질의 창 (TSCW)를 생성하는 방법을 제시 생체 내 10월 영상.