저자는 확장 에어컨 장소 기본 프로토콜을 확립 그들의 도움을 ANNI 리와 모린 이른에게 감사의 말씀을 전합니다.

모든 절차는 웨일 코넬 의과 대학 기관 애니멀 케어 및 사용위원회의 규칙에 따라 진행됩니다. 1. 준비 및 바이러스 성 벡터의 정위 납품 설치 <ol><li> 장비, 멸균 면봉, 또는 멸균 장갑을 착용 손 비 멸균 표면과 접촉에 의해 오염되는 경우 뜨거운 비드 살균기를 사용하여 기기를 폐기하거나 다시 소독 면봉을 삭제하거나 새로운 멸균 장갑을 변경합니다. </li><li> 수술 후 회복을 따뜻하게 열 블록 침구 마우스 케이지를 놓습니다. </li><li> 두피를 소독 머리와 에탄올과 요오드를 면도 전기 면도기를 설정합니다. </li><li> 70 % 에탄올로 귀 바, stereotax의 입 홀드를 닦아냅니다. </li><li> 5 μL 해밀턴 주사기를 사용하여 바이러스 벡터 (1 X 10 6 바이러스 입자 / μL)의 5 μl를 수립하고 stereotax에 주사기 홀더에 설정합니다. </li><li> 마이크로파 가열 패드 나에 전기 패드를 켜stereotax에 차 장소. 화상의 위험을 줄이기 위해 깨끗한 흡수성 패드로 커버. 마우스 모니터 체온 (97-99.5 ° F 사이) 자주 절차를 걸쳐. </li><li> 케타민 (100 mg / kg)과 xylazine (20 MG / kg)의 혼합물로 마우스를 (22-35g 사이의 무게) 주입. 마우스가 마취되면, 핀치 꼬리 끝은 마우스의 반사를 확인하고 마우스가 적절하게 마취 있는지 확인하기 위해 어떤 움직임이나 반응에 유의한다. </li><li> 눈과 귀 사이의 머리를 면도. </li><li> 에탄올과 요오드 살균면 도포를 번갈아 면도 헤드를 청소합니다. </li><li> stereotax에 가열 패드에 마우스를 전송합니다. </li></ol> 2. 바이러스 성 벡터의 정위 미세 주입 <ol><li> 수술을 통해 멸균 장갑을 착용 할 것. 장갑은 비 멸균 표면을 만져 어느 시점에서 오염 된 경우 장갑을 변경합니다. </li><li> 제로 치아 바, 귀 막대 저울. </li><li> 치아 줄에 이빨을 설정합니다. </li><li> 총구에 고정합니다. 방도를 강구 또는 수염 이동하는 경우MENT 언제든지 지적이다, 케타민 (100 mg / kg)과 xylazine (20 MG / kg)의 혼합물 IP 부스터 선량 (~ 0.05 cc) 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 귀 막대에 고정합니다. </li><li> PuraLube로 눈을 윤활. </li><li> 바로 메스 귀 뒤에 열린 두피를 잘라. </li><li> 피부 껍질 떨어져 두개골에서의 두피의 모서리에 장소 불독 클립. 브레 그마 및 람다 쉽게 볼 수 있어야합니다. </li><li> 브레 그마에서 람다에 제대로 봉합을가 똑바로 정렬됩니다. 봉합은 머리의 비뚤어진 재조정 위치됩니다. </li><li> stereotax의 모든 설정이 제로되어 있는지 확인합니다. </li><li> 브레 그마의 장소에 바늘 끝을 넣어. </li><li> 브레 그마 및 람다 모두의 모든 좌표를 측정합니다. 이 복부 / 지느러미, 측면 / 내측과 전방 / 후방 좌표를 포함합니다. </li><li> 브레 그마 및 람다의 복부 좌표가 각각 0.02 mm 이내가 될 때까지 머리를 조정합니다. </li><li> 일단 (M / L) 측면 / 중간 좌표로 내측 브레 그마에서 나가 정렬. 확인왼쪽과 오른쪽은 각각 0.02 mm 내에서 정렬됩니다. </li><li> 브레 그마에서 거기에서 다시 중심 바늘 끝은 원하는 후방 / 전방 좌표 (A / P) 후방 / 전방 방향으로 이동합니다. </li><li> 필요한 경우, 각 한 방향으로 바늘과 stereotax가 잠겨 있는지 확인합니다. (- 1.52 + /) 왼쪽 M / L 좌표로 가서 </li><li> 시추공을 뚫은 후 참조로 사용하는 두개골의 상단 복부 위치를 측정합니다. </li><li> 원하는 좌표에서 멸균 드릴 비트를 사용하여 시추공을 뚫습니다. 바늘이 두개골을 중단 입력 할 수 있는지 확인하십시오. </li><li> 원하는 복부 좌표에 바늘을 낮 춥니 다. </li><li> 일단 좌표 딥 0.015 mm은 바이러스 벡터에 대한 작은 포켓을 만드는 ~ 10 초 동안 아래에 도달한다. </li><li> ~ 0.1 μL / min의 속도로 바이러스 벡터의 원하는 볼륨을 주입한다. 완전 확산 바이러스 벡터에 대한 3 분을 기다립니다. 바늘 끝 0.015 mm를 올리고 추가로 2 분을 기다립니다. </li><li>반대 방향으로 바늘을 (각도 주사하는 경우) 찍어. 다시 두개골의 상단에 대한 참조로 복부 위치를 기록합니다. </li><li> (양자 주사하는 경우) 반대편에 바이러스 벡터를 주입하는 첫 번째면에서 같은 단계를 반복합니다. </li><li> 멸균면 도포 구 끝의 나무 끝​​을 사용하여 밀봉하는 두 구멍 뼈 왁스를 적용합니다. </li><li> 두피를 봉합. </li><li> 상처 영역에 신경 차단을 적용합니다. </li><li> 45 분 복구하는 열 블록 따뜻하게 새장에 stereotax에서 마우스와 장소를 제거합니다. </li><li> 등 통증의 징후를 모니터 : 전체 활동이나 불안을 감소 음식과 물 소비를 증가 또는 발성 감소했다. 부 프레 노르 핀은 (0.05-0.2 ㎎ / ㎏) 필요한 경우 통증 일주일 동안 매일 두 번 관리 할 수​​ 있습니다. 사용 가능한 대안은 다음을 포함한다 : meperidine (20-60 ㎎ / ㎏), pentazocine (10 ㎎ / ㎏), nalbuphine (4-8 ㎎ / ㎏). </li></ol> 3. 에어컨 장소 설정 : AcquisitioN, 멸종, 그리고 차후 <ol><li> 단두대 문 60 초 이니 기간 동안 3 챔버 위치 기본 설정 장치 (메드 어소 주식 회사, 세인트 알 반스, VT, USA)의 중앙 챔버에 넣고 쥐가 닫힙니다. </li><li> 이니, 오픈 단두대 문을 한 후에는 MedPC IV 소프트웨어 (메드 어소 주식 회사)를 사용하여 기록되는 각 챔버에 소요되는 시간 1,200 초 동안 모든 3 챔버 쥐 무료로 탐사를 할 수 있습니다. </li><li> 사전 테스트 기간 동안 자신의 실적에 따라 조절 챔버에 마우스를 할당합니다. 기본 사전 테스트 기간 동안 최소 선호했다 구획 이후 삼일 동안 편견 디자인 페어 약물 관리를 사용하여. </li><li> 초 주입 직후 1,200 아침 세션과 할당 된 챔버를 한정, 향후 3 컨디셔닝 일 동안, 코카인 (IP 10 ㎎ / ㎏)과 쥐를 주입. 세션 후 자신의 홈 케이지에 마우스를 반환합니다. 4 시간 후 (식염수 쥐를 주입 0.01 ML / G체중)와 1,200 초 오후 세션에 대한 반대 챔버를 한정. </li><li> 인수 테스트하기 위해, 단두대 문 중앙 챔버의 장소 마우스는 60 초 이니 기간 동안 폐쇄. 오픈 단두대 문 MedPC IV 소프트웨어 (메드 어소 시에이 츠, 주식 회사)에 의해 기록 된 모든 실에서 보낸 시간 1200 초 동안 무료로 탐사를 허용합니다. 코카인 한 쌍이 챔버에서 보낸 시간의 양의 생리 식염수 쌍 챔버에서 보낸 시간의 양을 뺀 기본 설정을 계산합니다. </li><li> 장소 환경 설정을 소화하기 위해, 취득을위한 시험 후 24 시간을 시작하기 적어도 2 시간으로 구분하여 동일한 장치에서 매일 무료 탐사의 두 20 분 세션에 쥐를 노출합니다. 모든 챔버에서 보낸 시간을 다시 기록해야하고 초기 CPP의 크기는 각 멸종 세션과 비교해야한다. </li><li> 쥐가 파에 대한 여부를 환경 설정을 평가하여 약물 유발 환경을 소멸 여부를 확인연속 멸종 일에 걸쳐 ticular 챔버 인수 기본 점수에 비해 크게 낮다. </li><li> 코카인의 프라이밍 용량 (5 ~ 10 ㎎ / kg, IP)과 쥐를 재개하고 무료 탐사를 허용하는 장치에 다시 노출하고 각 구획에 소요되는 시간을 기록합니다. </li><li> Euthasol 안락사 솔루션 (150 ㎎ / ㎏) 관리 할 수​​ 있습니다. Transcardially 4 % paraformaldehyde (PFA)로 마우스를 붓는다하고 정확한 microinjection의 배치를 확인하기 위해 조직 학적 검사를 수행합니다. </li></ol>

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저자는 공개 아무것도 없어.

멸종과 복직 단계를 포함 CPP와 함께 바이러스 성 벡터의 정위 microinjection을 통해 지역적 및 시간적 특정 유전자 제거 중독성이 같은 행동의 세 가지 단계에 유전자의 특정 기여 조사 할 수 있습니다. 기존 크레-LoxP 시스템을 활용하여 달성 조건부 녹아웃 시공 - 일시적으로 제한 유전자 제거를 위해 제공하고 있지만, stereotaxically floxed 생쥐의 개별 뇌 영역에 Cre 호텔 - 재조합을 microinjecting은 언제 어...

코카인은 매우 강화 각성제이다. 반복 노출에 따라 여러 가지 분자 및 세포 적응이 강박의 결과로 생각된다 보상 관련 뇌 회로에서 발생하는 약물 추구 심각한 임상 문제 1 포즈 재발의 높은 속도를 자극하는 행동을. 코카인은 유전자 발현을 조절하여이 오래 지속 행동 효과를 발휘한다. 만성 코카인 사용에서 발생 적응을 연구, 전임상 설치류 모델은 광범위하게 사용되어왔다. 하나의 모델은 에어컨 장소 환경 설정 (CPP) 패러다임이다. 이 모델은 이전에 중립적 환경과 코카인의 보람 속성 간의 배운 협회의 발전을 포함한다. 특정 챔버 코카인의 여러 쌍 후, 동물은 자유롭게 코카인 페어링 비 코카인 한 쌍이 환경을 탐색 할 수 있습니다 그리고 그들은 약 한 쌍이 함을 선호하는 경우, 그들은 코카인 유도 plac에 인수했다고하는전자 환경. 또한, 멸종 훈련 기간에 따라,이 패러다임은 코카인을 추구하는 행동의 특정 컨텍스트 회복을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 중독성 모방보다 정확하게 생각되는 장기 코카인에 의한 행동 및 분자 소성 2,3과 자기 관리 (SA) 연구하는 데 사용되는 정신 과민성, 같은 중독성이 같은 행동의 다른 행동 모델에 비해 와 같은 인간에있는 행동, CPP 패러다임은 코카인 상황에 맞는 학습 4를 연구하는 간단한 절차입니다. CPP 프로토콜은 편리 유사 약물 갈망과 재발 5-7과 어떤 인간에서 발생하는 측면 요점을 되풀이 것으로 추정된다 약물 추구 행동과 약물을 기본 메커니즘을 조사 할 수 SA에 멸종과 복직 단계를 포함하도록 확장 할 수 있습니다 - 그리고 큐 유발 재발 8-10. 하나의 메커니즘 그게 기초가수집, 멸종, 그리고 복직 등 CPP의 서로 다른 단계의 각각의 특징이다 코카인 유도 행동 가소성은 다른 뇌 영역 내에서 유전자 발현의 고유 한 서명의 활성화이다. 직접 행동 변화를 코카인 유도 중재 보상 관련 뇌 영역 내에서 어떤 유전자 테스트하기 위해, 지역적으로 고유의 방식으로 선택적으로 조작 할 수있을 때 유용합니다. 이 달성하는 한 가지 방법은 표현 Cre 호텔 재조합이 LoxP 사이트 (floxed 마우스)에 의해 측면 표적 유전자를 생쥐의 서로 다른 뇌 영역에, 정위 수술을 사용하는 재조합 adenoassociated 바이러스 (rAAV) 벡터를 microinject하는 것입니다. 이 방법은 언제, 어디서 유전자가 면역 반응은 11-13 유발하지 않고, 모두 분할 및 비 나누어 뉴런에서 소작하는 동안 매우 정확한 시간적 및 지역 제어 할 수 있습니다. 이 수준의 제어는 floxed 쥐에게 w를 사육 전통적인 크레-LoxP 기술에 중요한 이점을 나타냅니다점에서, 내생 유전자 프로모터의 통제하에 Cre 호텔 재조합을 표현하는 i 번째 마우스는 타이밍과 유전자 삭제 분포는보다 긴밀하게 조정할 수 있습니다. 또한, 바이러스 벡터를 매개로 유전자 녹아웃은 기존의 녹아웃 전략을 사용하여 발생할 수있는 발달 보상 효과를 우회. 자기 관리와 정신 과민성 등의 별도의 단계를 포함하는 행동 패러다임에 재하 적용 할 수있는 특정 유전자의 역할을 평가하기 위해 floxed 생쥐의 두뇌로, 여기 rAAV - Cre 호텔의 microinjection에 설명되어 코카인 CPP,뿐만 아니라. 예를 들어, 우리 연구실은 코카인 정신 과민성 14 카 V 1.2 L-타입 칼슘 2 + 채널의 역할을 연구하는 rAAV - Cre 호텔 기술을 활용하고있다. 특히, rAAV - Cre 호텔은 보여주기 위해 유전자 인코딩 칼슘 V 1.2 floxed과 생쥐의 핵의 accumbens (NAC)에 미세 주입 한 해당 CA V </suB&gt; 1.2이 지역 중재에 정신 과민성 14,15의 발현 단계 행동. 정신 과민성 캘리포니아 V 1.3 L-타입 칼슘 2 + 채널의 역할을 평가할 때 그 floxed 유전자를 가진 마우스가 존재하지 않는 경우, rAAV - Cre 호텔 전략을 사용할 수 없습니다, 우리의 경험이었다. 조건부 마우스가 관심의 특정 유전자가 존재하지 않는 경우 따라서, rAAV - Cre 호텔을 사용의 제한 자체를 제공합니다. 그러나 우리는 칼슘 V 1.3 채널 14,15의 역할을 검토했던 것처럼 표현의 siRNA가 최저 목표 유전자로 사용할 수 있습니다 rAAVs. floxed 생쥐의 분리 된 뇌 영역에 rAAV - Cre 호텔을 Microinjecting하고 CPP 패러다임을 테스트하는 다양한 중독과 같은 행동의 단계와 그들이 어디 행동하는을 중재 특정 유전자에 조사 할 수 있습니다. 이 패러다임의 사용은 본질적으로 반복 코카인 투여 BR을 탈취하는 방법에 대한 우리의 이해에 주었AINS 보상 회로는 중독 상태 1,16,17로 이어질 것을 분자 신호 전달 경로와 유전자 발현의 부적응 변화를 일으키는.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conditioned place preference activity chambers</td>
			<td>Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA</td>
			<td>MED-CPP-MS</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic alignment system for mouse</td>
			<td>David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA</td>
			<td>model 900</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td>Hamilton Company, Reno, Nevada, USA</td>
			<td>7634-01</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-Cre-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7016</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rAAV2-GFP</td>
			<td>Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA</td>
			<td>7004</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic microinjection of viral vectors expressing cre recombinase to study the role of target genes in cocaine conditioned place preference

관심 선택적으로 녹아웃 유전자 뚜렷한 마우스 뇌 영역에 크레 재조합을 표현하는 재조합 adenoassociated 바이러스 (rAAV) 벡터를 Microinjecting은 기존의 방법에 비해, 유전자 삭제의 강화 시간적 및 지역적 특정 제어 할 수 있습니다. 조건부 삭제는 floxed 유전자를 운반 쥐 특정 유전자 프로모터의 통제하에 표현 Cre 호텔 재조합이 정위 microinjection의 관심의 실험 정해진 시간 지점에서 분리 된 뇌 영역의 대상을 허용하는 짝짓기 마우스에 의해 달성 될 수 있지만. 코카인 에어컨 장소 환경, 그리고 자기 관리 또는 철회, 멸종 및 / 또는 회복 단계를 포함 할 수 정신 과민성 등의 코카인 행동 패러다임의 맥락에서,이 기술이 별개로 표적 유전자의 독특한 공헌을 탐험에 특히 유용합니다 코카인에 의한 소성의 행동 모델의 단계. 특히,이 기술은 시간에 걸쳐 행동에 대한 그들의 공헌을 테스트하는 행동의 개별 단계에서 표적 유전자를 선택적으로 제거 할 수 있습니다. 궁극적으로,이 이해는 습관성 행동의 각 단계에서 자신을 제시 가장 강력한 위험 요소를 해결하는 것이 가장 수 있습니다 더 많은 표적 치료 할 수 있습니다.

CPP 미세 주입 생쥐에 CPP를 수행 한 후, 하나는 제어 주입의 코호트 (rAAV-GFP) 마우스는 일반적으로 약물 쌍 챔버 (그림 1A, 1B)에 대한 선호도를 획득했는지 확인해야합니다. 마우스는 코카인 환경 (염분 쌍 챔버에 소요되는 코카인 한 쌍이 실을 뺀 시간에 소요되는 시간)이 기준 기본 점수 (그림 1B, 대 B)에 비해 유의하게 높은 경우 특정 챔버에 대한 선호도...

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Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

이 문서에서는 마우스의 뇌에 바이러스 벡터를 microinject하고 수집, 멸종 위기 및 회복 단계를 포함하는 에어컨 장소 환경 패러다임에서 테스트하는 방법에 대해 설명합니다.

크레 재조합이 코카인 컨디셔닝 장소 환경에있는 표적 유전자의 역할을 연구하는 표현 바이러스 성 벡터의 정위 미세 주입

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

stereotaxic-microinjection-viral-vectors-expressing-cre-recombinase

Research

JoVE Journal

Behavior

18.5K 조회수.  Weill Cornell Graduate School of Biomedical Sciences. 이 문서에서는 마우스의 뇌에 바이러스 벡터를 microinject하고 수집, 멸종 위기 및 회복 단계를 포함하는 에어컨 장소 환경 패러다임에서 테스트하는 방법에 대해 설명합니다.

비디오: Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an entire gene expression pathway by inducing destruction and/or inhibiting translation of these targets. Several miRNAs play key roles in maintaining neuronal structure and function and in higher-level brain functions, and methods are sought for manipulating their levels for exploring these functions. Here, we present a direct in vivo method for examining the cognitive consequences of enforced miRNAs excess in mice by stereotactic injection of miRNA-encoding virus particles. Specifically, the current protocol involves injection into the hippocampal CA1 region, which contributes to mammalian memory consolidation, learning, and stress responses, and offers a convenient injection site. The coordinates are measured according to the mouse bregma and virus perfusion is digitally controlled and kept very slow. After injection, the surgery wound is sealed and the animals recover. Lentiviruses encoding silencers of the corresponding mRNA targets serve to implicate the specific miRNA/target interaction responsible for the observed effect, with na&iuml;ve mice, mice injected with saline and mice injected with "empty" lentivirus vectors as controls. One month post-injection, the animals are examined in the Morris Water Maze (MWM) for assessing their navigation learning and memory abilities. The MWM is a round tank filled with colored water with a small platform submerged 1 cm below the water surface. Steady visual cues around the tank allow for spatial navigation (sound and the earth's magnetic field may also assist the animals in navigating). Video camera monitoring enables measuring the route of swim and the time to find and amount the platform. The mouse is first taught that mounting the hidden platform offers an escape from the enforced swimming; it is then tested for using this escape and finally, the platform is removed and probe tests examine if the mouse remembers its previous location. Repeated tests over several consecutive days highlight improved performance of tested mice at shorter latencies to find and mount the platform, and as more direct routes to reach the platform or its location. Failure to show such improvement represents impaired learning and memory and/or anxiety, which may then be tested specifically (e.g. in the elevated plus maze). This approach enables validation of specific miRNAs and target transcripts in the studied cognitive and/or stress-related processes.

MicroRNAs have significant roles in brain structure and function. Here we describe a method to enforce hippocampal miRNA over-expression using stereotactic injection of an engineered miRNA-expressing lentivirus. This approach can serve as a relatively rapid way to assess the in vivo effects of over-expressed miRNAs in specific brain regions.

의 정위 주입 MicroRNA의 발현 마우스 해마 CA1 영역으로 렌티 바이러스 및 행동 결과의 평가

MicroRNAs (miRNAs) are small regulatory single-stranded RNA molecules around 22 nucleotides long that may each target numerous mRNA transcripts and dim an ...

연구

행동분석학

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Fat Preference: A Novel Model of Eating Behavior in Rats

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to this multifactorial disorder is the consumption of a high fat diet, a behavior that has been shown to increase both caloric intake and body fat content. However, the elements regulating preference for high fat food over other foods remain understudied.
To overcome this deficit, a model to quickly and easily test changes in the preference for dietary fat was developed. The Fat Preference model presents rats with a series of choices between foods with differing fat content. Like humans, rats have a natural bias toward consuming high fat food, making the rat model ideal for translational studies. Changes in preference can be ascribed to the effect of either genetic differences or pharmacological interventions. This model allows for the exploration of determinates of fat preference and screening pharmacotherapeutic agents that influence acquisition of obesity.

Dietary fat content influences both energy intake and body fat composition in mammals. By examining rats&#8217; preference for high fat food in a series of choice experiments, it is possible to test genetic differences and pharmacological interventions on their preference for high fat food.

지방 성향 : 먹는 행동의 소설 모델 쥐에

Obesity is a growing problem in the United States of America, with more than a third of the population classified as obese. One factor contributing to ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

절차 흰쥐의 파블로프 에어컨 알코올 추구 행동의 상황에 의한 갱신을 준수합니다

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as appropriate models, partly because the response to behaviorally relevant stimuli and the circuitry parsing stimulus-action outcomes is astonishingly similar between humans and rodents. In studying molecular substrates of complex behaviors, the microinjection of reagents that modify, augment, or silence specific systems is an invaluable technique. However, it is crucial that the microinjection site is precisely targeted in order to aid interpretation of the results. We present a method for the manufacture of surgical implements and microinjection needles that enables accurate microinjection and unlimited customizability with minimal cost. Importantly, this technique can be successfully completed in awake rodents if conducted in conjunction with other JoVE articles that covered requisite surgical procedures. Additionally, there are many behavioral paradigms that are well suited for measuring motivation. The progressive ratio is a commonly used method that quantifies the efficacy of a reinforcer to maintain responding despite an (often exponentially) increasing work requirement. This assay is sensitive to reinforcer magnitude and pharmacological manipulations, which allows reinforcing efficacy and/ or motivation to be determined. We also present a straightforward approach to program operant software to accommodate a progressive ratio reinforcement schedule.

Rodents are an appropriate model to investigate the molecular substrates of behavior and complex psychiatric disorders. Brain microinjection in awake rodents can be used to elucidate disease substrates. An efficient and customizable brain microinjection method as well as the execution of an operant paradigm that quantifies motivation is presented.

쥐 뇌 미세 주입은 분자 기판 동기를 행동을 연구하기 위해

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence2. In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Place and Response Learning in the Open-field Tower Maze

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for examining how rats learn to use a place- or response-learning to successfully navigate in an open-field arena. Additionally, this protocol describes how the OFTM differs from other behavioral maze paradigms that are commonly used to study spatial learning in rodents. The OFTM described in this article was adapted from the one previously described by Cole, Clipperton, and Walt (2007). Specifically, the OFTM was created to test spatial learning in rodents without the experimenter having to consider how &#8220;stress&#8221; might play a role as a confounding variable. Experiments have shown that stress-alone can significantly affect cognitive function1. The representative results section contains data from an experiment that used the OFTM to examine the effects of estradiol treatment on place- and response-learning in adult female Sprague Dawley rats2. Future studies will be designed to examine the role of the hippocampus and striatum in place- and response-learning in the OFTM.

The Open-field Tower Maze (OFTM) is a maze created to study the behavioral and neural mechanisms of spatial learning (e.g., place- or response-learning) in rats. This maze is especially useful for experimenters who want to use a non-stressful maze paradigm to investigate spatial learning in their research.

오픈 필드 타워 미로를 취하게하고 응답 학습

This protocol describes how the Open-field Tower Maze (OFTM) paradigm is used to study spatial learning in rodents. This maze is especially useful for ...

Reinstatement of Drug-seeking in Mice Using the Conditioned Place Preference Paradigm

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to acquire a conditioned place preference in a drug-paired compartment, and after the post-conditioning test, they perform several sessions to extinguish the established preference. The CPP permits the evaluation of the conditioned rewarding effects of drugs related to environmental cues. Then, the extinguished CPP can be robustly reinstated by the non-contingent administration of a priming dose of the drug, and by exposure to stressful stimuli. Both methods will be explained here. When the animal reinitiates the behavioral response, a reinstatement of the conditioned reward is considered to have taken place.
The main advantages of this protocol are that it is non-invasive, inexpensive, and simple with good validity criteria. In addition, it allows the study of different environmental manipulations, such as stress or diet, which can modulate relapse into drug seeking behaviors. However, one limitation is that if the researcher aims to explore the motivation and primary reinforcing effects of the drug, it should be complemented with self-administration procedures, as they involve operant responses of animals.

This protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse. This procedure permits the measurement of relapse in laboratory animals, considering the impact of drug-associated environmental cues as craving and relapse in abstaining addicts is currently the focus of drug-abuse treatment programs.

The present protocol describes the Conditioned Place Preference (CPP) as a model of relapse in drug addiction. In this model, animals are first trained to ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

쥐에 갈망의 부 화를 측정 하기 위한 바른된 장소 설정 프로토콜

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Assessing the Coherence of Parents' Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with parents. This paper focuses on such a method, namely Five-Minute Speech Sample-Coherence (FMSS-Coherence). In this method, a parent is asked to speak for five uninterrupted minutes about her/his child and their relationship. The resulted narrative is coded for coherence, namely the extent to which the parent provides&#160;in the narrative&#160;a clear, consistent, multidimensional and well-supported portrayal of the child. FMSS-Coherence is based on attachment research that shows that the coherence of parents&#8217; narratives is indicative of the quality of the parent-child relationship and child adjustment. It overcomes the limitations of attachment narrative measures which are typically labor intensive. FMSS-Coherence is less nuanced than extant attachment narrative measures. Yet, studies of families from different cultural backgrounds, across different child ages and in the context of typically developing children as well as children with special needs suggest that coherence can be reliably evaluated using the FMSS procedure. Furthermore, parents&#8217; FMSS-Coherence is associated with parenting quality and children&#8217;s socio-emotional adjustment. Thus, it holds promise for researchers and practitioners who seek a relatively time- and cost-effective method for assessing the coherence of parents&#8217; narratives regarding their child.

Assessing the Coherence of Parents&#039; Short Narratives Regarding their Child Using the Five-Minute Speech Sample Procedure

This paper introduces a method for assessing the coherence of parents' short narratives regarding their child and their relationship using the five-minute speech sample procedure.

5분 음성 샘플 절차를 사용하여 자녀에 관한 부모의 짧은 이야기의 일관성 평가

Valid and efficient measures for assessing the quality of parent-child relationships are needed to facilitate research and evidence-based practice with ...