저자는 E를 공급 6 월의 미들 감사드립니다 faecalis 균주 및 지침 박테리아 문화. C. 엘레은 연구 기반 프로그램의 NIH 사무소 (P40 OD010440)에 의해 자금 지원 CGC에 의해 제공되었다.

선충류 성장 미디어 1) 준비 (NGM) <ol><li> 50 판을 만들기 위해 1.5 g 염화나트륨 8.5 g 초순수 한천과 1 Lflask 1.25 g의 펩톤을 추가합니다. </li><li> 플라스크에 dH보다 2 O의 487.5 ML을 추가합니다. 알루미늄 호일의 조각으로 플라스크의 입구를 혼합 커버 부드럽게 소용돌이. </li><li> 표준 조건 (121 PSI, 120 ° C, 20 분)에서 고압 증기 멸균하여 솔루션을 소독. </li><li> 솔루션 수욕에서 45 ° C로 냉각 할 수 있습니다. </li><li> 5 MG / ML 주식 솔루션 (에탄올에 용해), 500 μL 1 M 염화칼슘, 500 μL 1 M 황산 마그네슘, 12.5 ML KPO 4 버퍼 (54.15 g에서 500 μL 콜레스테롤 : 솔루션에 순서대로 다음을 추가 dH보다 2 O 500 ML에있는 KH 2 PO 4 17.8 g K 2 HPO 4)와 같은 18 설명했다. </li><li> 멸균 피펫을 사용하여 각 60mm의 폴리스티렌 페트리 접시에 한천 용액 10ml를 추가합니다. 미디어 실내 온도 overn에서 고화 할 수 있습니다광명. </li></ol> B 국물 E. 2) 준비 대장균 미디어 <ol><li> 다섯 100 ML 문화를 만들기 위해 비커에 Bacto 트립 톤, 2.5 g 효모 추출물, 5.0 g 염화나트륨 5.0 g을 추가합니다. </li><li> 500 ML의 최종 볼륨에 멸균 증류수를 추가합니다. 용질이 용해 될 때까지 교반하면서, 핫 플레이트에 솔루션을 가열한다. </li><li> 다섯 개의 유리 병 (최소 200 ML 볼륨)에 B 국물 100 ㎖를 붓는다. </li><li> 표준 조건 (121 PSI, 120 ° C 20 분)에서 고압 증기 멸균하여 솔루션을 소독. </li><li> B 국물을 사용하기 전에 실온으로 냉각 할 수 있습니다. </li></ol> 3) 시드 C. 엘레 유지 보수 플레이트 <ol><li> NGM 플레이트 1 주일 이상 상온에서 건조 할 수 있도록 한 후, E. 몇 식민지로 한 100 ML B 국물 문화를 접종 대장균 (OP50). </li><li> E. 성장 37 ° C 하룻밤 대장균 문화. </li><li> 피펫 하나, 둘, 방울 (약 10081, L) OP50 문화의 각 NGM 플레이트의 중앙 위에. 플레이트는 일반적으로 뚜껑면을 쌓아됩니다. (시드) 피펫 팅 할 때, 스택의 하단에있는 접시에 문화를 pipetting하여 시작합니다. 각 스택을 당신의 방법을 작동합니다. 그것은 문화가 너무 가까이 접시의 가장자리에 접근하지 않는 것이 중요하기 때문에, 파종 후 판을 움직이지보십시오. </li><li> 시드 플레이트 사용하기 전에 적어도 한 주 동안 상온에서 건조하도록 허용합니다. </li><li> 시드 플레이트는 실온에서 밀폐 된 플라스틱 용기에 (반전) 저장됩니다. </li></ol> 4) C. 유지 엘레 균주 <ol><li> 잘 먹이 C를 유지하려면 엘레 주식은 매 3-4 일 새로운 시드 NGM 플레이트에 세 L4S 또는 임신하는 성인, 어린이, 유아를 이동하는 선택 웜을 사용합니다. </li><li> 매장 플레이트 (반전) 바람직 인큐베이터 안에 15에서 - 22 ° C. 기술 분석에서 문화는 20 ° C. ℃에서 보관 하였다 elegans의 발달은 온도에 따라 달라집니다. maintena로온도가 증가 NCE, 발달 단계 사이의 시간은 줄어 듭니다. </li></ol> 트립신 소이 한천 (TSA) E. 5) 준비 faecalis 문화 미디어 <ol><li> 열판에, 교반하면서 50 판을 만들려면, 플라스크에 멸균 증류수 500 mL를 측정하고 종기에 가져다. </li><li> 플라스크에 가루 TSA 한천 20 g을 솔루션을 용해 할 수 있습니다. </li><li> 표준 조건 (121 PSI, 120 ° C 20 분)에서 고압 증기 멸균하여 솔루션을 소독. </li><li> 솔루션 수욕에서 45 ° C로 냉각 할 수 있습니다. </li><li> 멸균 피펫을 사용하여 각 60mm의 폴리스티렌 페트리 접시에 한천 용액 10ml를 추가합니다. 미디어 하룻밤 실온에서 고화 할 수 있습니다. </li></ol> 트립신 간장 국물 (TSB) E. 6) 준비 faecalis 문화 미디어 <ol><li> 교반하면서 250 문화 튜브를 만들려면 철판에 플라스크 따뜻한에 멸균 증류수 500 mL를 측정합니다. </lI&gt; <li> 플라스크에 TSB 한천 분말 15 g을 분말 용해 할 수 있습니다. </li><li> 표준 조건 (121 PSI, 120 ° C 20 분)에서 고압 증기 멸균하여 솔루션을 소독. </li><li> 무균 5 ML 테스트 튜브에 솔루션을 실내 온도까지 냉각 할 수 있도록, 다음, 피펫 2 ㎖. </li></ol> 7) E.에 대한 스트렙토 마이신과 뇌 심장 주입 (BHI) 미디어의 준비, faecalis 문화 <ol><li> 플라스크에 멸균 증류수 500 mL를 측정하고 열판에, 교반하면서, 종기에 가져다. </li><li> 플라스크에 BHI 배지 26g을 추가하고 솔루션을 용해 할 수 있습니다. </li><li> 표준 조건 (121 PSI, 120 ° C 20 분)에서 고압 증기 멸균하여 솔루션을 소독. </li><li> 솔루션 ° C의 물을 욕조에 45 식히십시오. </li><li> 무균 기술을 사용하여, 10 MG / ML 스트렙토 마이신 원액과 혼합하는 소용돌이의 0.5 ML를 추가합니다. </li><li> 각 60mm의 폴리스티렌 페트리 접시에 솔루션의 10 ML을 추가합니다. </li><l난&gt; 허용 미디어 하룻밤 실온에서 응고합니다. 4에서 보관 플레이트 (반전) ° 사용하기 전에 몇 시간까지 C. </li></ol> 8) E. 유지 faecalis 균주 <ol><li> E.을 유지하기 faecalis 주식은 별도의 트립신 간장 한천 (TSA) 판에 연속 개별 식민지에 멸균 루프를 사용합니다. </li><li> 37 ° C에서 하룻밤 문화를 성장. 몇 주 동안 실온에서 밀폐 된 가방이나 상자에 보관 플레이트 (반전). </li></ol> 9) E. 준비 EIW 분석 실험을위한 faecalis 플레이트 <ol><li> E.의 식민지로 2 ML TSB 문화를 접종 faecalis 37에서 밤새 품어 ° C. </li><li> E.의 피펫 20 μL faecalis의 준비된 BHI - 스트렙토 마이신 플레이트의 중앙 위에 문화, 37 밤새 품어 ° C. </li></ol> 10) E. 준비 EIW 분석 실험 (제어 플레이트)에 대한 대장균 플레이트 <ol><li> 100 ML의 B-동생을 접종E.의 식민지 일 문화 대장균 OP50 37 ° C에서 하룻밤 배양 </li><li> 피펫 20 시드되고 NGM 플레이트의 중앙 위에 OP50 문화의 μL 및 시드 플레이트 하룻밤 실온에서 건조 할 수 있습니다. </li></ol> 벌레 분석 11) 계란 <ol><li> 15을 선택 - 20 개최 - L4 C. 준비된 BHI-연쇄상 - E.에서 박테리아의 잔디밭의 중앙 위에 엘레 간스 (그림 1) faecalis 플레이트. BHI 판에 OP50을 많이 전송하지 않도록주의해야합니다. NGM-OP50 플레이트 컨트롤에 L4S의 같은 번호를 선택합니다. </li><li> 20 ℃에서 40 시간 동안 번호판을 품어 </li><li> 20 % 표백제 솔루션을 준비합니다. 증류수의 적절한 볼륨 상업용 표백제 (6.0 % 차아 염소산 나트륨)을 섞는다. </li><li> 플라스틱 뚜껑에 열 별개의 위치 (웜이나 세균 판)에 표백제 용액 10 μL 방울을 추가합니다. </li><li> 웜 픽을 사용하여 각 표백제 드롭으로 한 웜을 전송합니다. 의 부드럽게 소용돌이 팁웜은 선택의 끝을 (해부 현미경 물방울을보고 확인) 씻어 않았는지 확인하기 위해 표백 액에 선택합니다. </li><li> 벌레가 알을 (그림 2) 추방 오픈 버스트 때까지 표피 약 10 분 또는 분해 할 수 있습니다. 판에서 계란을 전송하지 않도록주의하십시오. </li><li> 해부 현미경 사용, 표백제의 각 드롭 계란을 계산합니다. </li></ol>

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저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

성공적으로이 분석을 수행에서 가장 중요한 단계는 1) C. 잘 자란 주식을 사용하여 분석 플레이트, 3 엘레, 2) 배양 세균의 한 종류)를 정확하게 식별은 E.에 노출 L4 벌레를 개최 faecalis, 4) E.에 노출 시간을 유지 시간을 표백 모든 시련과 5 일관성 faecalis)는 계란 붕괴를 방지하기 위해 10 분 초과하지 않아야합니다. 이 분석을 위해 건강하?...

Caenorhabditis의 엘레, 현미경, 무료 - 생활 거위는 전통적으로 인간 때문에 투명 해부학, 잘 특성화 개발, 완벽하게 배열 된 게놈, 짧은 세대 시간 및 유전 상동의 발달 및 세포 신호 전달 과정을 연구하는 데 사용되는 모델 생물이다 . 더 최근에, C. 엘레 환경 독성학 및 선천성 면역 10, 11 분야의 모델 생물이되었다. 이러한 자기 비옥 자웅 동체 웜 계란에서 부화 2 ~ 3 일 이내에 성적으로 성숙된다. 수명주기, C. 동안 엘레 성인기에 도달하기 전에, 네 애벌레 단계 (L1-L4)를 통해 전달합니다. 하나의 고립 된 자웅 동체 피크 다산 3 일 안에 평균 300 자식을 생성 할 수 있습니다. 생식 성숙 C.에 엘레 자웅 동체는 수정란이 마련되기 전에 몇 시간 동안 자궁 내에서 유지됩니다.한 번에 자궁에 저장된 계란의 정상적인 수 (피크 생산력 중) 열 사이에 다섯 12. 자궁에 계란의 수는 계란 생산의 속도와 달걀 누워의 속도의 함수이다. 수정란은 외음부 (13)의 개구부 주위에 배치 여섯 외음부 근육의 수축에 의해 자궁에서 추방된다. 자웅 동체 특정 motorneurons (HSN)의 따라서 VC motorneurons 근육 수축에 영향을 미치는 외음부 근육 위에 시냅스와 계란을 낳는 행동 5,7,13,14합니다. 자궁 계란의 추방은 신경과 근육의 조정 활동으로 인해 발생합니다. C.의 실험실 문화 엘레은 일반적으로 비병원성 대장균 OP50의 다이어트에 발생합니다. 자연 환경, C.에게있는 엘레 같은 병원성 박테리아와 같은 음식 소스의 다양한 접촉, 그 잠재적으로 유해 할 수 있습니다. 유해한 물질에 노출되었을 때환경, C. 환경이 더 유리한 될 때까지 elegans의 계란을 유지합니다. 아마이 계란 보존 그들의 자손을 보호하기 위해 노력합니다. 웜 (EIW) 분석, C.이 계란 엘레은 잠재적으로 병원성 세균, 환경에서 발견되는 엔테로 faecalis에 노출되어 있습니다. E.의 병원성 형태에 노출 faecalis는 C의 지속적인 창자 감염, 심지어 사망을 일으킬 수 있습니다 엘레 15. 병원성 세균의 다른 형태의 노출이 계란 유지 16,17에 영향을 미치는 것으로 알려져있다, 그러나 효과는 정량화되지 않았습니다. E.의 또한 약간 병원성의 효과는 변종 faecalis는 계란을 낳는 행동에 즉시 치명적인없는 긴장이 연구되지 않았습니다. EIW 분석 실험 C의 자궁에 남아 계란의 수를 계산 포함 엘레 4. 비록 C. 엘레투명, 자궁에 축적 계란 그대로 동​​물의 정량화하기 어려울 수 있습니다. EIW 분석은 임신하는 성인 C. 표백 포함 시간의 고정 기간 동안 세균에 노출 된 엘레 간스. 표백제 솔루션은 뒤에 계란을 떠나 외부 큐티클을 녹인다. 계란은 보호 껍질의 존재로 인해 표백제의 효과 굴절입니다. 표백 후, 하나는 아주 쉽게 표백에 벌레의 자궁에서 풀어 계란의 수를 계산 할 수 있습니다. 기술 분석은 한 번에 자궁에 계란의 수를 정량화 할 수있는 간단하고 저렴하고 빠른 방법입니다, 따라서 E의 효과를 정량화 계란 유지에 faecalis. 이 분석은 계란 보존에 박테리아, 환경 독소 또는 약물의 다른 종류의 효과를 정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 분석은 세균의 병원성에 대한 화면으로 사용할 가능성이있다.

<table><tbody><tr><td>Agar, ultrapure</td><td>Affymetrix</td><td>10906</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Peptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211677</td><td></td></tr><tr><td>Bacto Tryptone</td><td>Becton Dickinson</td><td>211705</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion dehydrated medium</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>781781</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;, N2 strain</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Alfa Aesar</td><td>A11470</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;C. elegans&lt;/em&gt;</td><td>Tritech Research Inc.</td><td>T3308</td><td></td></tr><tr><td>Culture plates for &lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt;</td><td>Fisher Scientific-Fisherbrand</td><td>875713</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli &lt;/em&gt;(OP50)</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>http://www.cbs.umn.edu/cgc</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. faecalis&lt;/em&gt; strains</td><td></td><td></td><td>provided by J. Middleton. All isolates were confirmed as enterococci</td></tr><tr><td colspan="4">by observing growth on enterococcosel agar (BBL) and in 6% NaCl broth;</td></tr><tr><td colspan="4"> &lt;p&gt;all strains grew at 44.5 &amp;ordm;C and were catalase negative and hydrolyzed esculin. A simplified&amp;nbsp;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;dichotomous key based on pigmentation and fermentation reactions for six sugars&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;(arabinose, mannitol, methyl-&amp;alpha;-D-glucopyranoside (MGP), ribose, sorbose and sorbitol) allowed&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;presumptive identification of all &lt;em&gt;E&lt;/em&gt;. &lt;em&gt;faecalis&lt;/em&gt; strains (Efs lacks pigmentation and is arabinose, MGP&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;and sorbose negative and sorbitol, mannitol and ribose positive). All presumptive Efs strains&amp;nbsp;&lt;/span&gt;&lt;span style=&quot;line-height: 1.6em;&quot;&gt;were confirmed using the API 20 STREP system (Biomerieux).&lt;/span&gt;&lt;/p&gt; </td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Motic</td><td>SMZ 168B</td><td>any microscope with transmitted illumination and 50X magnification should be sufficient</td></tr><tr><td>Streptomycin sulfate</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP910-50</td><td></td></tr><tr><td>Tryptic Soy Agar (Soybean-Casein Digest Agar Medium), Difco</td><td>Becton Dickinson</td><td>236950</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase Soy Broth (Soybean-Casein Digest Medium), BBL</td><td>Becton Dickinson</td><td>211768</td><td></td></tr><tr><td>Yeast extract</td><td>Acros</td><td>61180-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

measuring the effects of bacteria on c. elegans behavior using an egg retention assay

C. elegans의 달걀 누워 동작은 같은 삼투압 1과 진동이 같은 환경 단서에 의해 영향을받습니다. 음식 C.의 총 부재 엘레은 달걀 부설을 중지하고 자신의 자궁 3 수정란을 유지합니다. 그러나 특히 다른 음식의 근원, 특히 병원성 박테리아와 계란을 낳는 행동에 엔테로 faecalis의 효과는 잘 특성화되어 있지 않습니다. 계란에서 웜 (EIW) 분석이 경우 E.에서 박테리아의 다른 유형의 효과를 정량화 할 수있는 유용한 도구입니다 faecalis, 달걀 누워 동작합니다. EIW 분석 실험 C의 자궁에 남아 계란의 수를 계산 포함 엘레 4. EIW 분석은 단계적 표백, 임신하는 성인 C.를 포함 엘레는 표피를 제거하고 동물에서 유지 계란을 분리합니다. 이전 표백, 웜 박테리아 (또는 환경 큐의 모든 유형에 노출되는) 시간의 고정 기간 동안. 표백 후, 하나는 아주 쉽게 벌레의 자궁 안에 유지 계란의 수를 계산 할 수 있습니다. E. 후 계란 보존이 분석에서 정량화 증가 faecalis 노출을 쉽게 측정 할 수 있습니다. EIW 분석은 잠재적 병원성 세균이나 환경 독소의 존재를 선별하는 데 사용할 수 있습니다 행동 분석이다. 또한, EIW 분석 계란을 낳는 행동과 같은 세로토닌과 아세틸 콜린 5-9과 같은 신경 전달 물질에 의해 조절하기 때문에 신호 전달 물질에 영향을 미치는 의약품에 대한 화면 도구가 될 수 있습니다.

이 분석은 하나의 C. 내에서 유지 계란의 수를 정량화 할 수 E.에 노출 된 후 엘레 faecalis. L4 벌레가 (자신의 외음부, 그림 1 위의 투명한 열린 공간이 특징) E.에 노출 된 연출 성인을 통해 faecalis. E.에 노출 마흔 시간 후 faecalis는 표백을 수행 하였다. 표피가 표백 액의 붕괴로, 계란 (그림 2) 더 명백하게되었다. 유지 계란의 수는 쉽게 ?...

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Measuring the Effects of Bacteria on C. Elegans Behavior Using an Egg Retention Assay

계란에서 웜 (EIW) 분석은 달걀 누워 행동을 정량화 할 수있는 유용한 방법입니다. 달걀 부설의 변화는 모델 유기체의 행동 반응 할 수 있습니다<em&gt; Caenorhabditis의 엘레</em&gt;와 같은 병원성 박테리아에 의해 생성 된 것과 같은 잠재적으로 유해한 환경 물질.

에 박테리아의 효과를 측정<em&gt; C. 엘레</em계란 보존 분석을 사용하여&gt; 행동

C. elegans egg-laying behavior is  affected by environmental cues such as osmolarity1 and  vibration2. In the total absence of food C. elegans also cease ...

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17.1K 조회수.  Fairleigh Dickinson University. 계란에서 웜 (EIW) 분석은 달걀 누워 행동을 정량화 할 수있는 유용한 방법입니다. 달걀 부설의 변화는 모델 유기체의 행동 반응 할 수 있습니다 Caenorhabditis의 엘레와 같은 병원성 박테리아에 의해 생성 된 것과 같은 잠재적으로 유해한 환경 물질.

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The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the intestine the primary location for disease. The nematode intestine structurally and functionally mimics mammalian intestines and is transparent making it amenable to microscopic study of colonization. Here we show that pathogens can cause disease and death. We are able to identify microbial mutants that show altered virulence. Its conserved innate response to biotic stresses makes C. elegans an excellent system to probe facets of host innate immune interactions. We show that hosts with mutations in the dual oxidase gene cannot produce reactive oxygen species and are unable to resist microbial insult. We further demonstrate the versatility of the presented survival assay by showing that it can be used to study the effects of inhibitors of microbial growth. This assay may also be used to discover fungal virulence factors as targets for the development of novel antifungal agents, as well as provide an opportunity to further uncover host-microbe interactions. The design of this assay lends itself well to high throughput whole-genome screens, while the ability to cryo-preserve worms for future use makes it a cost-effective and attractive whole animal model to study.

The Nematode Caenorhabditis Elegans - A Versatile In Vivo Model to Study Host-microbe Interactions

Here, we present the nematode Caenorhabditis elegans as a versatile host model to study microbial interaction.

선 충 꼬마 선 충-모델을 다양 한 비보에 호스트-미생물 상호작용 연구

We demonstrate a method using Caenorhabditis elegans as a model host to study microbial interaction. Microbes are introduced via the diet making the ...

연구

유전학

Automated Analysis of a Nematode Population-based Chemosensory Preference Assay

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection of the neural circuits underlying these behaviors, the development of robust and reproducible behavioral assays is necessary. Previous C. elegans behavioral studies have used variations of a "drop test", a "chemotaxis assay", and a "retention assay" to investigate the response of C. elegans to soluble compounds. The method described in this article seeks to combine the complementary strengths of the three aforementioned assays. Briefly, a small circle in the middle of each assay plate is divided into four quadrants with the control and experimental solutions alternately placed. After the addition of the worms, the assay plates are loaded into a behavior chamber where microscope cameras record the worms' encounters with the treated regions. Automated video analysis is then performed and a preference index (PI) value for each video is generated. The video acquisition and automated analysis features of this method minimizes the experimenter's involvement and any associated errors. Furthermore, minute amounts of the experimental compound are used per assay and the behavior chamber's multi-camera setup increases experimental throughput. This method is particularly useful for conducting behavioral screens of genetic mutants and novel chemical compounds. However, this method is not appropriate for studying stimulus gradient navigation due to the close proximity of the control and experimental solution regions. It should also not be used when only a small population of worms is available. While suitable for assaying responses only to soluble compounds in its current form, this method can be easily modified to accommodate multimodal sensory interaction and optogenetic studies. This method can also be adapted to assay the chemosensory responses of other nematode species.

We present a behavior recording setup and protocol that enables automated analysis of the nematode, Caenorhabditis elegans' preference for soluble compounds in a population-based assay. This article describes the construction of a behavior chamber, the behavioral assay protocol, and video analysis software usage.

선충 집단에 기반한 화학 감응도 선호 분석의 자동화 된 분석

The nematode, Caenorhabditis elegans' compact nervous system of only 302 neurons underlies a diverse repertoire of behaviors. To facilitate the dissection ...

행동분석학

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many historical and contemporary studies have identified thousands of lifespan-altering paradigms, including genetic mutations, transgenic gene expression, and hormesis, a beneficial, low-grade exposure to stress. With its many advantages, including a short lifespan, easy and low-cost maintenance, and fully sequenced genome with homology to almost two-thirds of all human genes, C. elegans has quickly been adopted as an outstanding model for stress and aging biology. Here, several standardized methods are surveyed for measuring lifespan and healthspan that can be easily adapted into almost any research environment, especially those with limited equipment and funds. The incredible utility of C. elegans is featured, highlighting the capacity to perform powerful genetic analyses in aging biology without the necessity of extensive infrastructure. Finally, the limitations of each analysis and alternative approaches are discussed for consideration.

Surveying Low-Cost Methods to Measure Lifespan and Healthspan in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans serve as an excellent model system with robust and low-cost methods for surveying healthspan, lifespan, and resilience to stress.

Caenorhabditis elegans의 수명과 건강 상태를 측정하기위한 저비용 방법 조사

The discovery and development of Caenorhabditis elegans as a model organism was influential in biology, particularly in the field of aging. Many ...

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as self-fertilizing hermaphrodites, which produce large broods of progeny-when males are present, they can produce even larger broods of cross progeny. Errors in meiosis, fertilization, and embryogenesis can be rapidly assessed as phenotypes of sterility, reduced fertility, or embryonic lethality. This article describes a method to determine embryonic viability and brood size in C. elegans. We demonstrate how to set up this assay by picking a worm onto an individual Modified Youngren's, Only Bacto-peptone (MYOB) plate, establish the appropriate timeframe to count viable progeny and non-viable embryos, and explain how to accurately count live worm specimens. This technique can be used to determine viability in self-fertilizing hermaphrodites as well as cross-fertilization by mating pairs. These relatively simple experiments are easily adoptable for new researchers, such as undergraduate students and first-year graduate students.

Measuring Embryonic Viability and Brood Size in Caenorhabditis elegans

Here, we present a general method to determine the embryonic viability and total number of embryos produced (brood) using the model organism C. elegans.

Caenorhabditis elegans의 배아 생존력 및 무리 크기 측정

Caenorhabditis elegans is an excellent model organism for the study of meiosis, fertilization, and embryonic development. C. elegans exist as ...

예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)의 식품 섭취량과 수명을 측정하기 위한 고처리량 분석

Quantifying Food Intake in Caenorhabditis elegans by Measuring Bacterial Clearance

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of Caenorhabditis elegans&#160;(C. elegans), an important parameter when studying the genetics of aging or metabolism. In most species, feeding is determined by measuring the difference between the amount of food provided and the amount left after a given time interval. The method presented here uses the same strategy to determine the feeding of C. elegans. It measures the amount of bacteria, the food source of C. elegans, cleared within 72 h. This method uses 96-well microtiter plates and has allowed the screening of hundreds of drugs for their ability to modulate food intake at a speed and depth not possible in other animal models. The strength of this assay is that it allows to measure feeding and lifespan simultaneously and directly measures the disappearance of food and, thus, is based on the same principles used for other organisms, facilitating species-to-species comparison.

저자 스포트라이트: 지독성과 HFpEF의 관계 탐구 

This protocol describes an assay to quantify Caenorhabditis elegans feeding rate based on measuring the clearance of bacteria in liquid culture.

예쁜꼬마선충( Caenorhabditis elegans )의 음식 섭취량을 세균 청소율 측정으로 정량화

Feeding is an essential biological process for an organism&#39;s growth, reproduction, and survival. This assay aims to measure the food intake of ...

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the development of more effective treatments is the relative lack of understanding of the molecular underpinnings of the effects of ethanol on behavior. The nematode, Caenorhabditis elegans (C.&#160;elegans), provides a useful model in which to generate and test hypotheses about the molecular effects of ethanol. Here, we describe an assay that has been developed and used to examine the roles of particular genes and environmental factors in behavioral responses to ethanol, in which locomotion is the behavioral output. Ethanol dose-dependently causes an acute depression of crawling on an agar surface. The effects are dynamic; animals exposed to a high concentration demonstrate an initial strong depression of crawling, referred to here as initial sensitivity, and then partially recover locomotion speed despite the continued presence of the drug. This ethanol-induced behavioral plasticity is referred to here as the development of acute functional tolerance. This assay has been used to demonstrate that these two phenotypes are distinct and genetically separable. The straightforward locomotion assay described here is suitable for examining the effects of both genetic and environmental manipulations on these acute behavioral responses to ethanol in C.&#160;elegans.

An Assay for Measuring the Effects of Ethanol on the Locomotion Speed of Caenorhabditis elegans

C. elegans is a useful model for studying the effects of ethanol on behavior. We present a behavioral assay that quantifies the effects of ethanol on the locomotion speed of crawling worms; both initial sensitivity and the development of acute functional tolerance to ethanol can be measured with this assay.

의 로코 속도에 에탄올의 효과를 측정하는 분석<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

Alcohol use disorders are a significant public health concern, for which there are few effective treatment strategies. One difficulty that has delayed the ...

신경과학

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A non-mammalian soil round worm, Caenorhabditis elegans, is a valuable model organism for toxicology studies due to its convenience and lack of animal ethics issues compared with mammalian animal systems. In this protocol, a detailed procedure of toxicological evaluation of chemicals in C. elegans is described. A clinical anticancer drug, etoposide, which targets human topoisomerase II and inhibits DNA replication of human cancer cells, was selected as a model testing chemical. Age-synchronized C. elegans eggs were exposed to either dimethyl sulfoxide (DMSO) or etoposide, and then the growth of C. elegans was monitored every day for 4 days by the stereo microscope observation. The total number of eggs laid from C. elegans treated with DMSO or etoposide was also counted by using the stereo microscope. Etoposide treatment significantly affected the growth and reproduction of C. elegans. By comparison of the total number of eggs laid from worms with different treatment periods of chemicals, it can be decided that the reproductive toxicity of chemicals on C. elegans reproduction is reversible or irreversible. These protocols may be helpful for both the development of various drugs and risk assessment of environmental toxicants.

Measuring the Effect of Chemicals on the Growth and Reproduction of Caenorhabditis elegans

A basic protocol to evaluate the toxicity of chemicals in a model animal, Caenorhabditis elegans, is described. The method is convenient and useful for the development of pharmaceuticals as well as for the risk assessment of various environmental pollutants.

성장과 재생산 꼬마 선 충 의 화학 물질의 효과 측정

Toxicological evaluation is crucial for understanding the effects of chemicals on living organisms in basic and applied biological science fields. A ...

의학

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates. Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis behavior.
 The premise behind testing the response of the worms to an odorant is to place them in an area and observe the movement evoked in response to an odorant. Even with the many available assays, optimizing worm starting location relative to both the control and test areas, while minimizing the interaction of worms with each other, while maintaining a significant sample size remains a work in progress 1-10. The method described here aims to address these issues by modifying the assay developed by Bargmann et al.1. A Petri dish is divided into four quadrants, two opposite quadrants marked "Test" and two are designated "Control". Anesthetic is placed in all test and control sites. The worms are placed in the center of the plate with a circle marked around the origin to ensure that non-motile worms will be ignored. Utilizing a four-quadrant system rather than one 2 or two 1 eliminates bias in the movement of the worms, as they are equidistant from test and control samples, regardless of which side of the origin they began. This circumvents the problem of worms being forced to travel through a cluster of other worms to respond to an odorant, which can delay worms or force them to take a more circuitous route, yielding an incorrect interpretation of their intended path. This method also shows practical advantages by having a larger sample size and allowing the researcher to run the assay unattended and score the worms once the allotted time has expired.

C. elegans Chemotaxis Assay

A method of quantitatively evaluating the chemotactic response of Caenorhabditis elegans is described. A chemotactic index (CI) was employed as a way to precisely evaluate the response of worms to certain targets, and serve as a platform of comparison between strains and compounds of interest.

C. elegans의 주 화성 분석

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

에 박테리아의 효과를 측정

요약

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선충 집단에 기반한 화학 감응도 선호 분석의 자동화 된 분석

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Caenorhabditis elegans의 배아 생존력 및 무리 크기 측정

예쁜꼬마선충( Caenorhabditis elegans )의 음식 섭취량을 세균 청소율 측정으로 정량화

예쁜꼬마선충( Caenorhabditis elegans )의 음식 섭취량을 세균 청소율 측정으로 정량화

예쁜꼬마선충( Caenorhabditis elegans )의 음식 섭취량을 세균 청소율 측정으로 정량화

의 로코 속도에 에탄올의 효과를 측정하는 분석

성장과 재생산 꼬마 선 충 의 화학 물질의 효과 측정

C. elegans의 주 화성 분석