우리는 실험실에서 기술을 구현하는 그들의 도움을 로잔의 대학 병원 센터의 세균학 연구소의 기술자 감사합니다.

이 프로토콜 개발 도구 루틴으로서 구현되기 전에 본원의 연구 개발 프로세스 및 윤리 규칙에 따라 확인되었다. 염화 암모늄 적혈구 - 용균 절차에 의한 혈액 문화 세균 펠렛의 1 준비 <ol><li> 이후 원심 분리에 대한 긍정적 인 혈액 배양의 준비. <ol><li> 혈액 배양 뚜껑을 소독. 병의 뚜껑에 70 % 에탄올을 추가하고 구울 수 있습니다. 참고 : 층류 후드에서이 단계를 수행하지 마십시오. </li><li> 층류 후드에 병을 이동합니다. 20 G 주사기와 혈액 배양 5 ㎖를 수집합니다. </li><li> 멸균 물 (H 2 O)의 45 ML을 포함하는 50 ㎖의 원심 분리 관에 혈액 배양의 5 ML을 추가하고 샘플을 섞는다. </li></ol></li><li> 용해 원심 분리하여 혈액 배양 세균 펠렛의 제조. <ol><li> RT에서 10 분 동안 1,000 XG에서 샘플을 원심 분리기. </li><li> 레모실험실 진공 펌프 (주로 H 2 O 및 혈액 세포를 포함) 상등액을했습니다. </li><li> 용액 (0.15 M NH4Cl 등, 1 ㎜ KHCO 3) 용균 수제 암모늄 클로라이드 1 ㎖에 펠렛을 재현 탁. 긁어 튜브 텍싱하여 펠릿을 분해하고 실온에서 10 분 동안 140 XG에서 샘플을 원심 분리기. </li><li> 주로 적혈구 파편이 포함 된 상층 액을 버린다. <ol><li> 펠릿 출혈성 남아 있다면, 상기 잔류 적혈구 세포를 용해하고, 펠릿을 세척 및 멸균 증류수 H 2 0 2 ㎖에 펠렛을 재현 탁. 실온에서 10 분 동안 140 XG에서 샘플을 원심 분리기 상층 액을 버린다. </li></ol></li><li> H 2 O의 200 μL에 펠렛을 재현 탁 </li></ol></li><li> 다양한 선택과 비 선택 한천 미디어에 혈액 문화의 하위 문화. <ol><li> 20 G 주사기와 혈액 배양 1 ㎖를 수집합니다. </li><li> 혈액 배양 INT 1 방울을 접종혈액 한천, 초콜릿 한천, McConkey의 한천 Schaedler 한천에 네 사분면 오. </li><li> 5 % CO 2 분위기에서 37 ° C에서 혈액 한천와 초콜릿 한천 플레이트를 품어, 정상적인 분위기에서 McConkey 한천 및 혐기성 상태에서 Schaedler 한천 플레이트. </li><li> 다른 매체에 세균의 성장을 따르십시오. </li><li> 세균의 순도를 확인합니다. </li></ol></li></ol> MALDI-TOF MS에 의해 2 식별 <ol><li> 혈액 펠릿에서 직접 확인. <ol><li> 전송 한 MALDI 대상 접시에 혈액 펠릿의 μL와 42 ° C 가열 플랫폼에서 말리면. </li><li> 1 ㎕의 70 % 포름산으로 샘플을 오버레이와 42 ° C 가열 플랫폼에서 말리면. </li><li> MALDI 매트릭스의 1 ㎕의 시료를 오버레이 및 42 ° C 가열 플랫폼에서 말리면 (α-시아 노 - 사 - 히드 록 아세토 니트릴 - 2.5 % 트리 플루오로 아세트산 50 %에서 산의 포화 용액). </li><li> MAL에 진행제조 업체에 의해 기술 된 바와 같이 MALDI-TOF MS 시스템과 DI-TOF MS 분석. </li><li> 식별 점수 (점수 &lt;2 인스턴스) 종 레벨에서 유효하지 않은 경우, 피 펠릿 시료 단백질 추출을 수행한다. </li></ol></li><li> 혈액 배양 펠릿에서 단백질을 추출 후 확인. <ol><li> RT에서 2 분 동안 13,000 XG에 70 % 에탄올 1 ml의 원심 분리와 펠렛의 20 μl를 섞는다. </li><li> 뜨는을 취소하고 70 % 포름산 25 ㎕의 펠릿 100 % 아세토 니트릴의 25 μl를 추가합니다. 소용돌이 적극적으로 펠릿을 재현 탁합니다. 소용돌이로 교반하기 전에 피펫 팁을 나누어서 힘든 알약을 재현 탁. </li><li> 실온에서 2 분 동안 13,000 XG에 원심 분리기. 전송 한 MALDI 대상 접시에 뜨는 ㎕의 (추출 된 단백질을 포함한다) 및 42 ° C 가열 플랫폼에서 말리면. 2.1.2에 설명 된대로 진행합니다. </li></ol></li></ol> 3 세균성 지문을 확인해자동화 된 미생물 시스템과 가스화 및 항생제 감수성 검사 <ol><li> 자동화 된 미생물 시스템과 박테리아 식별 및 AST에 대한 세균 현탁액의 준비. <ol><li> 자동화 된 미생물 시스템과 호환 멸균 0.45 % NaCl 용액 3 ㎖를 함유하는 플라스틱 관을 준비한다. </li><li> 0.6-0.8의 맥팔랜드 탁도에 대응 세균 현탁액을 얻기 위해 0.45 % NaCl 용액으로 혈액 배양 펠렛의 충분한 볼륨. 농도계 기계를 사용하여 탁도를 측정한다. 참고 : 혈액 배양 세균 펠릿의 부피는 0.6-0.8의 맥팔랜드 탁도를 달성하기 위해 50 ~ 200 μL에 따라 다릅니다. </li></ol></li><li> 제조자에 의해 설명 된대로 식별 자동화 그람 양성 (GP) 또는 그람 음성 (GN) 카드 및 그람 양성 구균 및 그람 음성 세균의 항균 감수성 테스트에 대한 자동화 된 AST 카드를 접종한다. 참고 : IdentificatioMALDI-TOF MS 식별 점수 값이&gt;이 경우 N GP 또는 GN 카드 적용되지 않습니다. 혈액 한천 (GP와 GN)와 MacConkey 한천 (GN) 접시에 세균 현탁액을 계대 배양하여 세균 현탁액의 순도를 확인합니다. </li></ol> 디스크 확산 분석하여 4 항생제 감수성 검사 디스크 확산 분석은 항균제 감수성 시험 (EUCAST, 버전 3.0 년 4 월 2013 www.eucast.org)에 관한 유럽위원회에 의해 설명된다. <ol><li> 세균 현탁액을 준비 디스크 확산 분석에 의한 항균제 감수성 시험을 수행 할 수 있습니다. <ol><li> 멸균 된 0.9 % NaCl 용액 3 ㎖를 함유 유리 튜브를 준비한다. </li><li> 0.5 맥팔랜드 탁도에 대응 세균 현탁액을 얻기 위해 0.9 % NaCl 용액에 혈액 배양 펠렛의 충분한 볼륨. 농도계 기계를 사용하여 탁도를 측정한다. 참고 : 혈액 배양의 부피세균 펠릿은 0.6-0.8의 맥팔랜드 탁도를 달성하기 위해 50 ~ 200 μL에 따라 다릅니다. </li><li> 세균 현탁액을 소용돌이. </li></ol></li><li> 뮬러 - 힌튼 한천 (MH) 또는 뮬러 - 힌튼 한천 - 까다로운 생물 한천 (MHF) 위에 세균 현탁액의 예방 접종은 (MH 5 % defibrinated 말의 혈액과 20 밀리그램 / β-니코틴 아미드 아데닌 디 뉴클레오티드의 L 보충). <ol><li> 세균 현탁액 멸균 면봉을 찍어 부드럽게 유리 튜브의 내부 벽에 면봉을 돌려 초과 액체를 제거합니다. </li><li> 세 방향 보라고하거나 자동화 플레이트 회 전자를 사용하여 MH / MHF 한천 플레이트의 전체 표면 상에 고르게 세균 현탁액을 확산. </li></ol></li><li> 접종 한천 접시에 항균 디스크의 응용 프로그램입니다. <ol><li> 수동 건조 접종 아가 플레이트의 표면 또는 감수성 디스크 디스펜서를 사용하여 밀접하게 디스크를 적용한다. </li><li> 해당 템피에서 접시를 품어rature 및 항균제 감수성 시험 EUCAST 디스크 확산법에 설명 된대로 분위기 (버전 3.0 년 4 월 2013 www.eucast.org). </li></ol></li></ol> (5) 자동 MRSA의 검출에 대한 진단 검사를 PCR 기반 <ol><li> 마이크로 피펫을 사용하여 20 초 동안 PCR 기반의 진단 테스트 키트와 소용돌이를 자동화 MRSA와 함께 제공되는 샘플 시약 병으로 혈액 배양 펠릿의 50 μl를 전송합니다. </li><li> 1 ML의 마이크로 피펫을 사용하여, 카트리지의 시험편 포트에 샘플을 조제. 자동화 된 PCR 시스템에 카트리지를 삽입하고 제조자에 의해 설명 된대로 분석을 시작합니다. </li></ol>

<ol>
	<li>Alberti, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+sepsis+and+infection+in+ICU+patients+from+an+international+multicentre+cohort+study.">Epidemiology of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study.</a> Intensive care medicine. 28, 108-121 (2002).</li><li>Angus, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Critical care medicine. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Vincent, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis+in+European+intensive+care+units+results+of+the+SOAP+study.">Sepsis in European intensive care units results of the SOAP study.</a> Critical care medicine. 34, 344-353 (2006).</li><li>Micek, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Empiric+combination+antibiotic+therapy+is+associated+with+improved+outcome+against+sepsis+due+to+Gram-negative+bacteria+a+retrospective+analysis.">Empiric combination antibiotic therapy is associated with improved outcome against sepsis due to Gram-negative bacteria a retrospective analysis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54, 1742-1748 (2010).</li><li>Seifert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+microbiological+findings+in+the+diagnosis+and+management+of+bloodstream+infections.">The clinical importance of microbiological findings in the diagnosis and management of bloodstream infections.</a> Clin Infect Dis. 48, S238-S245 (2009).</li><li>Barenfanger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+mortality+associated+with+prompt+Gram+staining+of+blood+cultures.">Decreased mortality associated with prompt Gram staining of blood cultures.</a> American journal of clinical pathology. 130, 870-876 (2008).</li><li>Munson, E. L., Diekema, D. J., Beekmann, S. E., Chapin, K. C., Doern, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+treatment+of+bloodstream+infection:+laboratory+reporting+and+antimicrobial+management.">Detection and treatment of bloodstream infection: laboratory reporting and antimicrobial management.</a> J Clin Microbiol. 41, 495-497 (2003).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+the+clinical+management+of+patients+with+Gram-negative+bacteremia+a+prospective+observational+study.">Impact of matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry on the clinical management of patients with Gram-negative bacteremia a prospective observational study.</a> Clin Infect Dis. 56, 1101-1107 (2013).</li><li>Meex, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+identification+of+bacteria+from+BacT/ALERT+anaerobic+positive+blood+cultures+by+MALDI-TOF+MS+MALDI+Sepsityper+kit+versus+an+in-house+saponin+method+for+bacterial+extraction.">Direct identification of bacteria from BacT/ALERT anaerobic positive blood cultures by MALDI-TOF MS MALDI Sepsityper kit versus an in-house saponin method for bacterial extraction.</a> Journal of medical microbiology. 61, 1511-1516 (2012).</li><li>Moussaoui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+identifies+90%+of+bacteria+directly+from+blood+culture+vials.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identifies 90% of bacteria directly from blood culture vials.</a> Clin Microbiol Infect. 16, 1631-1638 (2010).</li><li>Seng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ongoing+revolution+in+bacteriology+routine+identification+of+bacteria+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry.">Ongoing revolution in bacteriology routine identification of bacteria by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry.</a> Clin Infect Dis. 49, 543-551 (2009).</li><li>Stevenson, L. G., Drake, S. K., Murray, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+identification+of+bacteria+in+positive+blood+culture+broths+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry.">Rapid identification of bacteria in positive blood culture broths by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry.</a> J Clin Microbiol. 48, 444-447 (2010).</li><li>Croxatto, A., Prod&amp;34hom, G., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+clinical+diagnostic+microbiology.">Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical diagnostic microbiology.</a> FEMS Microbiol Rev. 36, 380-407 (2012).</li><li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+bacterial+identification+in+positive+blood+cultures+by+use+of+two+commercial+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+systems.">Direct bacterial identification in positive blood cultures by use of two commercial matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry systems.</a> J Clin Microbiol. 51, 1733-1739 (2013).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Bizzini, A., Durussel, C., Bille, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+for+direct+bacterial+identification+from+positive+blood+culture+pellets.">Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for direct bacterial identification from positive blood culture pellets.</a> J Clin Microbiol. 48, 1481-1483 (2010).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Durussel, C., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+blood-culture+bacterial+pellet+preparation+for+faster+accurate+direct+bacterial+identification+and+antibiotic+susceptibility+testing+with+the+VITEK+2+system.">A simple blood-culture bacterial pellet preparation for faster accurate direct bacterial identification and antibiotic susceptibility testing with the VITEK 2 system.</a> Journal of medical microbiology. 62, 773-777 (2013).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+and+PCR-based+rapid+diagnosis+of+Staphylococcus+aureus+bacteraemia.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry and PCR-based rapid diagnosis of Staphylococcus aureus bacteraemia.</a> Clin Microbiol Infect. , (2013).</li><li>Martiny, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+rapid+microbial+identification+directly+from+positive+blood+cultures+using+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+patient+management.">Impact of rapid microbial identification directly from positive blood cultures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry on patient management.</a> Clin Microbiol Infect. 19, E568-E581 (2013).</li><li>Stoneking, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Would+earlier+microbe+identification+alter+antibiotic+therapy+in+bacteremic+emergency+department+patients.">Would earlier microbe identification alter antibiotic therapy in bacteremic emergency department patients.</a> The Journal of emergency medicine. 44, 1-8 (2013).</li><li>Nordmann, P., Dortet, L., Poirel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+extended-spectrum-beta-lactamase-producing+Enterobacteriaceae.">Rapid detection of extended-spectrum-beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae.</a> J Clin Microbiol. 50, 3016-3022 (2012).</li></ol>

저자는 그들이 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

종래 양성 혈액 배양 진단 방법에 비해, 염화 암모늄 용해 원심 분리 방법을 이용하여 세균 펠렛의 빠른 획득은 24 시간 및 48 시간에 24 의한 AST를보고 할 때 (도 1 및 16에 의해 식별을보고하는 시간을 단축 3). 적절한 항생제 치료의 도입은 빠른 혈류 감염으로 고통받는 환자의 결과를 향상시키기 위해 중요한 것이다. 따라서, 약 8-16 시간에서 얻은 빠?...

입원 환자의 혈류 감염 및 패혈증은 질병률과 사망률의 중요한 원인이다. 따라서, 감염 혈액과 관련된 사망률은 입원 환자의 37 %로 약 14 %에서 관찰되며, 중환자 실 환자의 1 ~ 35 %로 증가 할 수 있습니다. 감염원의 신속한 식별 최적 항균 치료를 안내와 항균 치료 4,5의 성공적인 결과를 증가시키는 중추적이다. 양성 혈액 배양에서 그람 얼룩의 신속한 분석은 이미 항균 요법 6,7하지만 감염원의 정확한 식별 적응에 큰 영향을 갖는 환자에게 가장 적합한 항생제 치료를 제공해야한다. 예를 들어, 다른 항생제 치료법은 장내 및 그람 염색으로 구별하기 어려운 구균 균혈증 다음으로 구현되어야한다. 마찬가지로, 종의 식별 레프엘은 8-락탐을 β하기 위해 증가 된 저항성을 염색체의 AmpC 유전자를 코딩하는 그람 음성 장내 세균을 검출하는 데 필요합니다. 긍정적 인 혈액 배양으로, 기존의 진단 방법은 생화학 검사, 다른 선택 배지에 성장과 자동화 된 미생물 식별 시스템을 포함한 다양한 방법으로 추가 배양 전에 식별 몇 시간을 필요로 다른 한천 접시에 감염원을 배양하는 것입니다. 종래의 진단 방법의 결과 시간은 약 1-3일이다. 미생물의 신속한 식별을위한 매트릭스 보조 레이저 탈착 / 이온화 비행 시간 형 질량 분석 (MALDI-TOF) 기술의 출현은 신속 양성 혈액으로부터 직접 또한 아가 플레이트상에서 성장한 콜로니로부터 미생물하지만을 식별하는 새로운 도구를 제공했다 문화 (그림 1) 9-12. 목혈액 배양에서 감염원을 확인하기 MALDI-TOF의 전자의 사용은 크게 몇 분 대신 전통적인 방법에 의해 요구되는 시간과 일에 결과 시간을 단축하고있다. Croxatto 외. (13)에 의해 논의 된 바와 같이, MALDI-TOF 식별 효율은 미생물의 순도 및 양을 포함하여 다른 매개 변수에 의존한다. 이 두 기준은 쉽게 한천 플레이트에 성장 이산 식민지에서 얻은하지만, MALDI-TOF 식별을 방해 할 수있는 여러 세포와 단백질 구성 요소를 포함하는 혈액 배양 등 복잡한 시료에서 세균 농축 및 정제를위한 사전 분석 치료를해야합니다. 혈액 배양에서 다양한 미생물 &#39;분리 방법이 세균 추출 9,14, 혈청 분리 방법 10 사포닌 또는 다른 중성 세제 방법을 포함하여 다수의 연구에서 사용 된, 용해 원심 분리 방법 12 </s까지&gt; 등 sepsityper 키트 상업적으로 솔루션을 제공합니다. 우리의 세균학 진단 ​​실험실은 MALDI-TOF에 의한 박테리아와 효모의 빠른 식별 및 자동 식별 시스템 (그림 2) 15를 허용 염화 암모늄 적혈구 - 용해를 기반으로 간단한 혈액 배양 세균 펠렛 제제를 개발했다. 이 혈액 문화 펠릿 준비 또한 그람 염색 등의 직접 다운 스트림 애플리케이션을위한 샘플을 제공, 같은 메티 실린 내성 Staphyloccocus 구균의 신속한 검출 (MRSA)에 대한 POCT-PCR들과 함께 항생제 감수성 검사와 같은 자동화 된 PCR 기반의 진단 테스트 자동화 된 AST 시스템 및 / 또는 한천 플레이트에 디스크 확산 분석 (그림 3)에 의해. Prod&#39;hom 등에 의해 설명 된 바와 같이이 작품에서, 우리는 혈액 배양 세균 펠렛의 제조를위한 여러 단계를 설명합니다. 15 (그림 4). 우리는 또한 탈 것서기관 혈액 배양 펠릿에서 수행 할 수있는 주요 응용 프로그램의 세 가지에 대한 프로토콜 : 자동 장내 세균에 대한 시스템 16 및 포도상 구균 및 자동 PCR-와 MALDI-TOF 15, 식별 (ID) 및 항생제 감수성 검사 (AST)에 의해 확인 MRSA (17)의 검출에 기초하여 진단 테스트.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1130">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:268px;">20 needle gauge&#160;</td>
			<td style="width:268px;">Terumo, Leuven, Belgium</td>
			<td style="width:239px;">NN-2038R</td>
			<td style="width:355px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>352070</td>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Ammonium chlorure</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>101145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Potassium hydrogen carbonate</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>60340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>F0507</td>
			<td>Flammable, corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">a-Cyano-4-hydroxycinnamic acid</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>70990</td>
			<td>Acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>271004</td>
			<td>Flammable, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>T6508</td>
			<td>Corrosive, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 60 instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27202</td>
			<td>automated microbial system instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-positive (GP) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21342</td>
			<td>automated GP&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-P580 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>22233</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-negative (GN) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21341</td>
			<td>automated GN&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-N242 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>413391</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Xpert MRSA</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>&#160;GXMRSA-100N-10</td>
			<td>nucleic acid amplification technology MRSA</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">GeneXpert IV instrument</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>GXIV-4-D</td>
			<td>nucleic acid amplification technology instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Microflex LT MALDI-TOF MS instrument</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>BDAL microflex LT/SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MSP 96 target&#160; steel BC</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>280799</td>
			<td>MALDI target plate</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Densitometer Densicheck instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MALDI Sepsityper kit 50</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>8270170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mac Conkey agar</td>
			<td>Biolife, Milano, Italy</td>
			<td>4016702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mueller-Hinton agar</td>
			<td>Oxoid, Hampshire, England</td>
			<td>CM0337</td>
			<td>Mueller-Hinton agar (MH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MHF agar</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>43901</td>
			<td>Mueller-Hinton agar-fastidious organisms agar (MHF)</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD columbia III agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254071</td>
			<td>blood agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD chocolate agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254089</td>
			<td>chocolate agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD schaedler agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254084</td>
			<td>Schaedler agar</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a blood culture pellet for rapid bacterial identification and antibiotic susceptibility testing

혈류 감염 및 패혈증은 질병률과 사망률의 중요한 원인이다. 균혈증 고통받는 환자의 성공적인 결과는 최적의 항생제 치료를 안내 할 수있는 감염원의 빠른 식별에 따라 달라집니다. 긍정적 인 혈액 배양에서 그람 얼룩의 분석은 신속하게 실시 이미 크게 항생제 처방에 영향을 미칠 수 있습니다. 그러나, 감염원의 정확한 식별은 여전히​​ 최적의 치료 대상을 설정할 필요가있다. 여기서 이러한 디스크 확산 분석에 의한 MALDI-TOF MS, 항생제 감수성 검사 (AST)에 의해 식별 또는 자동화 AST 시스템과 같은 여러 가지 에센셜 하류 애플리케이션 용 시료로 사용 될 수있는 양성 혈액 배양에서 간단하고 빠른 박테리아 펠렛 제제를 제시 그리고 자동으로 진단 검사를 PCR 기반. 혈액 배양 박테리아 펠릿에 직접 적용이 다른 식별 및 AST 시스템의 성능은 매우 SI이며성능 밀라 (milar)는 일반적으로 한천 플레이트에 성장 고립 식민지에서 얻을. 종래의 방법에 비해 박테리아 펠릿 신속한 취득이 크게 식별 및 AST 모두를보고하는 시간을 감소시킨다. 따라서, 다음과 같은 혈액 배양 양성, MALDI-TOF에 의한 식별은 8 내에서 각각 18 시간, 자동화 된 AST 시스템 또는 디스크 확산 분석에 의해 AST의 결과 반면 미만 1 시간 이내에보고 할 수 있습니다. 마찬가지로 신속한 PCR 기반 분석의 결과는 임상의에게 균혈증 리포트 다음, 2 시간 미만을 통신 할 수있다. 함께, 이러한 결과는 혈액 배양 박테리아 펠릿 신속한 준비 식별 및 AST 턴어라운드 시간에 따라서 혈류 감염으로 고통받는 환자의 성공적인 결과에 상당한 영향을 미치고 있음을 보여준다.

Prod&#39;hom 외. (15)에 의해 수행 된 연구에서, 78 명의 환자에서 122 양성 혈액 배양의 염화 암모늄의 용해를 원심 분리에 의해 얻어진 박테리아 펠릿은 MALDI-TOF MS로 분석 하였다. 122 긍정적 인 혈액 배양 중, 95 (77.9 %)이 올바르게 속 수준에서 종 수준과 하나 (0.8 %)에서 확인되었다. 나머지 26 (21.3 %), 혈액 배양 펠릿은 MALDI-TOF에 의한 신뢰성있는 식별을주지 않았다. 그 중, 21은 13 연쇄상 구...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing at JoVE.com

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

양성 혈액 배양에서 빠른 박테리아 펠렛 제제는 MALDI-TOF에 의해 식별, 그람 염색, 항생제 감수성 시험 및 PCR-기반 테스트와 같은 애플리케이션을위한 샘플로서 이용 될 수있다. 결과는 급속 혈류 감염으로 고통받는 환자의 결과를 개선하기 위해 임상에 통신 될 수있다.

빠른 세균의 식별 및 항생제 감수성 테스트를위한 혈액 문화 펠렛의 제조

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

preparation-blood-culture-pellet-for-rapid-bacterial-identification

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

35.4K 조회수.  University Hospital Center and University of Lausanne.  양성 혈액 배양에서 빠른 박테리아 펠렛 제제는 MALDI-TOF에 의해 식별, 그람 염색, 항생제 감수성 시험 및 PCR-기반 테스트와 같은 애플리케이션을위한 샘플로서 이용 될 수있다. 결과는 급속 혈류 감염으로 고통받는 환자의 결과를 개선하기 위해 임상에 통신 될 수있다. 