The author is grateful for the assistance of Mrs. Sharon Spana (University of Sydney) in rodent monitoring, handling and experimentation. The authorwould like to thank Prof. Jonathan Stone and Dr. Dan Johnstone for the assistance in the preparation of this manuscript. PhD funding support has been provided by University of Sydney and Australian Center for Excellence in Vision.

윤리 문 : 프로토콜은 5657 # AEC 시드니 대학의 동물 관리 가이드 라인을 따른다. 마취 동물 윤리위원회 (시드니 대학, AEC # 5657)에 의해 승인되었다. 1. 장비 준비 <ol><li> 실시간 피부 온도 추적을 사용합니다. 컴퓨터에 스위치, 데이터 수집 하드웨어. </li><li> 열기 온도 레코딩 소프트웨어 및 온도 ° 30 ~ 35 사이의 C로 설정하고 매 100 밀리 초에 샘플링 주파수를 조정합니다. </li><li> 옵션 : 코어 온도를 보장하기 위해 삽입 직장 온도계가 37.5 ° C에서 안정적으로 유지. </li></ol> 수동 혈압계 2. 교정 <ol><li> 250~550그램 쥐에 대한 크기 2 커프를 sphygmomanometer.Use하는 신생아 팔 커프를 연결합니다. 어댑터는 혈압계 커프에 튜브를 연결하는 것이 필요할 수있다. </li><li> 하나의 공기 방출 밸브를 느슨하게하거나 적응로부터 커프 튜브를 분리하여 커프를 수축나. 더 압력을 확인하지하면 튜브에 남아 및 압력계의 바늘은 타원형 / 사각형 안에 제로에 달려있다. </li><li> 배관, 압력계와 팔목 사이의 압력을 확인합니다. 이 압력계 100 mmHg로 표시 될 때까지 인플레이션 전구의 부드러운 펌프 커프를 부풀려. 압력이 일정하게 유지 확인. 천천히 공기 방출 값을 개방함으로써 커프를 수축. </li></ol> 3. 동물 준비 참고 : 어두운 적응을 필요로 빛 부상을 받아야하는 원격 허혈 전날 밤입니다 동물. 가벼운 손상을받은 동물은 어두운 양육 (12 시간 빛을 : 어두운주기 (5 룩스)) 필요 <ol><li> 깨어 또는 anesthetised 설치류 중 하나에서 원격 허혈을 수행합니다. 동물이 건강한 근육이 있는지 확인합니다. 적절한 근육의 존재가 확인하기 위해 위 뒷다리를 곤란하여이를 확인합니다. 가벼운 부상에 대한 RIP에 의한 보호는 생후 6 개월까지 앉아있는 쥐에서 테스트되었습니다. </li><li> R에 대한 Anesthetised 준비IP <ol><li> 60 ㎎ / ㎏ 케타민 5 ㎎ / ㎏ 자일 라진의 복강 내 주사로 쥐를 주입한다. 다리 연장하고 다리의 하부에 피부를 집어 마취 깊이를 확인한다. 이 깊이 anesthetised 경우 동물은 더 반사가 없습니다. 마취 동안 각막 건조를 방지하기 위해 인공 눈물을 적용합니다. </li><li> 열 패드 또는 37.5 ° C의 일정 체온을 유지하기 위해 온수 배관을 순환하는 하나의 래트를 놓는다. 낮은 사지 &#39;발 패드면이 위를 향하도록하여 발생하기 쉬운 위치에 쥐를 놓습니다. 어느 쪽의 오른쪽 또는 왼쪽 사지 원격 허혈을 거칠 수있다. </li></ol></li><li> RIP 깨어 준비 참고 : 동물 실험 두 사람이 필요합니다 잠에서 깨어. 한 사람이 동물을 억제하고, 두 번째 사람은 수동 혈압계를 운영하고 있습니다. 실험자는 구속 핸들러에 부상의 위험을 증가함에 따라 절차를 수행 할 자신감이 있어야합니다. 원격 허혈을받은 쥐들은 T를 조절해야합니다O 설명서를 구속. 직관적 인 가이드 라인에 따라 수동 구속은 주에 걸쳐 5 분에서 최대 30 초에서 진행을해야합니다. 수동 구속에 순응하지 못하는 겁 많은 동물이 깨어 실험에서 제외되어야한다. 마지막으로, 수동 구속 정확하게 RIP 연구 결과를 해석하는 데 사용해야합니다 동물에게 스트레스 (잠재적으로 연구에 교란을 소개)와 가짜 코호트 (염증없이 커프의 배치)을 일으킬 가능성이있다. <ol><li> 15cm X 30-50cm의 조각으로 수건을 잘라 뒷다리의 상단에 머리를 커버, 쥐의 척추에 수직 짧은 가장자리를 놓습니다. </li><li> 쥐의 몸통 아래의 짧은 쪽을 단단히 감싸과 수건의 나머지 긴 가장자리 쥐를 포장하기 시작합니다. 앙와위에서 팔 아래 포장 동물을 고정합니다. 쥐가 왼쪽 팔에서 개최되는 경우, 수건에서 쥐의 오른쪽 다리를 무료로 제공됩니다. </li></ol></li></ol> 4. 응용 프로그램 OF 피부 온도 프로브 <ol><li> 허혈를 받아야하고, 발바닥의 피부 프로브를 배치하는 것입니다 쥐의 다리를 확장 할 수 있습니다. 온도 프로브와 피부 사이의 접촉을 극대화하기 위해 피부 프로브를 배치합니다. 단단히 발바닥에 프로브를 밀어 종이 테이프와 프로브를 부착합니다. </li><li> 온도 레코딩 소프트웨어에 온도를 추적하여 피부 프로브 위치를 확인하십시오. 피부 온도는 30-34 ° C의 사이이며 안정적으로 유지 있는지 확인하십시오. 1-2 분 동안 피부 온도를 추적. 온도가 불안정하거나 30 ° C 이하이면 피부 프로브를 조정한다. </li></ol> 5. 원격 허혈 <ol><li> 커프를 수축 및 공기압 밸브가 폐쇄되어 있는지. 다리를 확장하고 느슨하게 상단 뒷다리에 커프를 둘러싸. 위치에 느슨하게 커프를 유지하기 위해 다리와 낮은 숫자를 확장하는 집게 손가락과 엄지 손가락을 사용합니다. </li><li> 깨어 동물 incre 160 mmHg로, 그리고에 anesthetised 동물의 커프 압력을 올립니다180 mmHg로에 커프 압력 ASE. 주 : 래트 anesthetised 혈압 120-140 mmHg의 범위 때 의식 160 mmHg로 상승한다. 정확한 압력에 도달하면 타이머와 발 온도 녹음을 시작. 참고 : 발 온도가 일정한 압력의 5 분 후 2 ° C에 의해 드롭해야한다. </li><li> 허혈에 걸쳐 동물의 &quot;무릎&quot;위의 커프의 위치를​​ 유지합니다. 커프 압력은 몇 분 후 드롭을 시작합니다, 또는 쥐의 사지는 이동합니다. </li><li> 반복적으로 펌핑의 원하는 커프 압력 반복적 인 짧은 버스트를 유지하기 위해 짧은 버스트로 인플레이션 전구 펌프 </li><li> 원격 허혈 5 분 내지 15 일 동안 연속적으로 전달 될 수있다. 허혈 재관류 프로토콜은 중간에 5 분 재관류 5 분 허혈이 기간을 포함한다. </li><li> 공기압 밸브를 풀어 커프 압을 수축. 허혈 프로 걸쳐 온도 변화를 확인로토콜. 커프를 놓습니다. </li><li> 부상 실험을 계속합니다. 마취의 영향 하에서 동물을 열 패드 상에 배치 될 필요가있다. 외래까지 동물을 모니터링하기 위해 계속합니다. 동물 산책 할 때까지 하우징에 반환 할 수 없습니다. </li></ol> 6. 가벼운 부상 - 망막 변성 모델 <ol><li> 다크 동물 하룻밤 (12 ~ 15 시간)을 적용. 즉시 원격 허혈 조절 또는 가짜 원격 허혈 (동물의 구속) 음식과 물과 방풍 하우징 장소 동물을 다음과 같습니다. </li><li> 24 시간 동안 오전 9시에 방풍 하우징 위에있는 형광등 (1,000 LUX)에 전환합니다. 빛 노출 후 7 일 동안 순환 조명을 어둡게하는 동물을 반환합니다. </li></ol> 7. 후 원격 허혈 절차 <ol><li> 전위도 (ERG)와 비전의 평가 : 참고 : ERG 설정 및 플래시 프로토콜은 Brandli 스톤 (26)을 따랐다. <ol><li> 다크 하룻밤 동물을 적용 (12 ~ 15 시간). 아래의붉은 조명이 케타민과 자일 라진의 복강 내 주사 (60 ㎎ / ㎏, 5 ㎎ / ㎏, 각각)에 의해 동물을 마취 차단하여주십시오. 동형 (아트로핀 황산염 1.0 %), 각막 마취 (proxymetacaine 0.5 %). </li><li> 각막 수화를 적용 (카보 머 폴리머) 눈은 각막 즉시 삭제합니다. 각막 수화를 유지하기 위해 20 분 간격으로 눈 겔을 적용한다. </li><li> 안정적인 에르그 녹음을 돕기 위해 안구 주위에 느슨하게 묶여 스레드를 그립니다. 직장 프로브를 사용하여 온도를 모니터링 및 37-37.5 ℃에서 동물의 체온을 유지한다. </li><li> Ganzfeld 적분 구 내부의 머리를 놓습니다. 참고 : Ganzfeld가 눈에 LED가에서 균일 한 오순절 깜박을 제공하는 완전히 프로그램 빛 자극이다. </li><li> 가볍게 각막 감동 주문품 4mm 백금 양극과 입에 삽입 2mm 직경 AG / AgCl을 펠릿 전극을 사용하여 전위도를 기록한다. 스테인리스 바늘에 양전극을 참조엉덩이에 피하 삽입. </li><li> 2 kHz의 수집 속도 0.3-1,000 Hz에서 (-3 dB)의 대역 통과 설정으로 녹음 신호 (AD 악기). 안정적인 에르그 녹음 녹음을 시작하기 전에 대상에게 10 분 어두운 적응에 동물을 설립 한 후. </li><li> 앞서 Brandli 스톤 (26)에 의해 설명 된 플래시 프로토콜을 따르십시오. <ol><li> 플래시 지속 시간을 프로그램 (우리는 깜박 기간이 1 ~ 2 밀리 초를 사용), 그리고 -4.4 로그 스코틀랜드 cd.sm -2 2.0에 자사의 강도를 설정합니다. 망막 기능을 측정하기 위해 밝은 플래시 (2.0 로그 스코틀랜드의 cd.sm -2, 1 MS)를 사용합니다. 본 연구에서는 제어, 빛 부상 RIP 빛 부상 사이의 비교입니다. </li></ol></li></ol></li></ol> 8. TUNEL 분석 <ol><li> 페노바르비탈 과다 복용 (100 ㎎ / ㎏)의 복강 내 주사하여 동물을 안락사. 명백히하다 눈을 4 % 파라 포름 알데히드에 고정한다. </li><li> cyroprotecting 전에 PBS에 눈을 씻으십시오눈 하룻밤 자당 30 %에서 (W / V). 10월 화합물의 눈을 포함하고 저온 ​​유지 장치를 사용하여 20 μm의 시상 부분으로 잘라. </li><li> Maslim 등의 프로토콜 다음 DAPI 염색과 망막 섹션에 TUNEL 분석을 수행합니다. (27) </li><li> 망막의 TUNEL 카운트에 대한 형광 현미경을 사용합니다. TUNEL 세포는 외부 핵 층 (ONL)에서 기록되었다; 감광체 핵을 포함하는 망막의 최 외층. 본 연구에서는 TUNEL 수는 각 치료 그룹 (5) 눈으로, 각각의 눈에 대한 중으로 하였다. </li><li> 비교 통계 그룹에 일원 분산 분석을 사용하여 제어, 가벼운 부상, 가벼운 부상 + RIP 쥐의 의미합니다. </li></ol>

The author has nothing to disclose.

설치류 뒷다리 허혈 성공적 수동 혈압계로 유도하고 망막 광 수용체에 신경 전달 커프 하였다. 가벼운 부상 9,28에서 광 수용체의 허혈성 조절에 의한 보호와 일치 발견. 기본적으로 원격 허혈 조직에 대한 간단한 산소 부족이 발생합니다. 따라서, 원격 허혈 양상은 허혈성 조절 또는 대안이라고 허혈 내성, 저산소 전처리, 어느 정도, 무산소 운동에 많은 유사점이있다...

대부분의 생존, 아마도 모든 대사 스트레스에 직면 조직 치사 허혈 1,2- 주기로 사전 조절함으로써 개선 될 수있다. 실용적인 측면에서 허혈 (IP)은 조직의 경험 등 후속 허혈성 모욕으로 더 심한 스트레스, 전 치사 허혈 조직의 노출이다. 동물 모델에서 IP는 뇌, 망막, 심장과 폐 3-6에 눈에 띄는 보호 기능을 제공합니다. 대응하여, 뇌졸중 환자에서 관찰은 이전 일과성 허혈 발작과 임상 결과 더 -7,8- 사이의 링크를 보였다. IP는 또한 비 허혈성 손상 (9)에서 망막 광 수용체를 보호합니다. 다양한 조직 및 부상의 IP의 효과는 모든 조직에 존재하는 세포 생존의 타고난 메커니즘을 활성화하는 것을 의미한다. 심근 허혈은 상향 조절을 통해 보호 효과가 제안되었다아데노신의 방출을 통해 또는 미토콘드리아 ATP 10,11 칼륨 채널의 개구를 통해 다수의 대사 경로를 조절하는 것으로 알려져 저산소증 유도 성 인자 (HIF)의. 아데노신 릴리스와 ATP의 칼륨 채널은 현재까지 허혈성 조절의 신경 메커니즘에 대한 연구가 안티 흥분 독성 (excitotoxicity), 항 세포 사멸 및 항 염증 경로 (12, 13)에 대한 수정에 초점을 맞추고있다, 뇌허혈에 연루되어 있지만. 전반적으로, 신경 세포를 보호하는 허혈성 컨디셔닝 분자 프로세스 이해가 제한된다. 원격 허혈 양상 시도는 덜 중요한 조직에 허혈을 생성하여 먼 매우 중요한 장기 (심장, 뇌, 폐)를 상태로. 뒷다리를 사용하여 원격 허혈 (RIP)은 뇌졸중 14-17의 설치류 모델에서 신경 것으로 입증되었다. 우리에 의해 기술 된 방법은 간단하고 신뢰할 수있는 비 침습적 PROT를 제공RIP를 유도 ocol. RIP 프로토콜의 대부분은 상부 뒷다리에 위치한 대퇴 동맥을 용이하게 식별 및 수술 클램핑 지혈대 애플리케이션에 액세스 할 수있는 것으로 추정하기 때문에, 뒷다리를 포함한다. 뇌 및 피부 보호의 연구 침습 사지 허혈 연구에서 허혈 사타구니 인대에서 대퇴 동맥을 분리하고 대퇴 동맥 2,15,18 클램핑에 의해 유도된다. 사지 중있는 절삭이나 대퇴 동맥 클램핑으로 인한 허혈은 펄스의 감소, 감소 산소화 및 피부 온도의 저하를 포함 사지에서의 변화에​​ 의해 확인되었다. 원격 허혈은 레이저 도플러 또는 도플러 초음파 17-19을 사용하여 펄스의 손실에 의해 확인 될 수있다. 피부 온도는 관계 20,21 비선형이지만 도플러 대안으로 사용될 수있다. 정확한 온도 기록은 실험실과 캔의 흔한쉽게 원격 허혈성 연구에 혼입 될 수있다. 수술을 클램핑하는 대퇴 대안 지혈대를 사용하여 허혈의 유도이다. 지혈대 응용 프로그램은 선박 클램핑 달성에 필적 허혈을 생산; Kutchner 등. 비 침습적 지혈대에 클램핑 침습 대퇴 동맥을 비교하고 두 방법 피변 허혈 (18)의 성형 모델 사지 혈류 감소 피부 손상을 중지하였습니다. 다리 또는 팔 하나를있는 절삭 및 수축기 혈압 위의 커프 압력을 제기하는 돼지와 인간 17,19,22 허혈성 손상에 대한 보호 것으로 밝혀졌다. 다른 지혈대는 허혈성 혈압 커프 또는 탄성 밴드 17,22,23의 사용을 포함 원격 유도에 접근한다. 그러나, 허혈을 유도하는 탄성 밴드를 사용하는 방법은 안전하지 않은, 압력의 비 조절 양에 잠재적으로 상승시켜주는500 mmHg의 이상 압력 상승과 사지는 인간 (24)에 기록된다. 또한, 탄성 밴드를 사용하지 허혈은 에반스 블루 염료, 근섬유 투과성 (25)의 생체 마커에 의해 평가로, 밴드 (23)의 제거 다음 쥐의 근육 손상으로 이어집니다. 대조적으로, 지혈대에 제어 압력의 전달은 혈압계 17,19,22,26 접속 혈압계를 사용하여 달성 될 수있다. 본 연구에서는, 감광체 변성 광 손상 모델은 원격 허혈의 신경 보호 효능을 입증하기 위해 사용되었다. 원격 허혈 가벼운 부상 직전 유도, 망막 기능 검사에 의해 확인으로 후속 광 수용체의 변성을 방지했다. 첨부 된 동영상은 비 침습 원격 허혈의 적용을 설명한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Gold series DuraShock Hand Aneroid Sphygmomanometer</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>DS56</td>
			<td>Manual Sphygmomanometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neonate [size 2] 1 Tube, 10 Pack</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-102-1&#160;</td>
			<td>Limb blood pressure cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer lock adaptor</td>
			<td>Welch Allyn</td>
			<td>5082-178</td>
			<td>Adaptor for neonatal cuff</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermistor pod</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>ML 309</td>
			<td>skin tempertature unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin temperture probe</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>MLT 422/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerlab, 4 channel acquistion hardware</td>
			<td>AD Instruments</td>
			<td>PL 35044</td>
			<td>Skin temperature recorder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homeothermic blanket system with flexible probe</td>
			<td>Harvard Appartus</td>
			<td>507222F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Towel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional: awake remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflo - 100% Isoflurane -250 ml</td>
			<td>Abbot Animal Health</td>
			<td>05260-05</td>
			<td>optional: inhaltion anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamil - ketamine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylium - Xylazine 100 mg/ml - 50 ml</td>
			<td>Troy Laboratories Pty Ltd</td>
			<td></td>
			<td>optional: injectable anaesthetic remote ischemia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

remote limb ischemic preconditioning:  a neuroprotective technique in rodents

치사 허혈는 영향을받는 조직의 내생 적 메커니즘의 상향 조절을 통해 이후, 더 심한 허혈에 대한 조직을 보호합니다. 치사 허혈은 원격 조직에서 보호 메커니즘을 상향 조절하는 것으로 나타났다. 포유 동물의 뒷다리에 허혈 (5 ~ 10 분)의 짧은 기간은 뇌, 폐, 심장, 망막의 자기 보호 반응을 유도한다. 효과는 원격 허혈 (RIP)로 알려져있다. 이는 생명 유지 기관을 보호 유망한 치료 방법이며, 심장 및 뇌 손상에 대한 임상 실험하에 이미. 쥐의 특히 뒷다리 - - 허혈이 책은 사지를 만드는 제어, 최소 침습적 방법을 보여줍니다. 인간 신생아에서 사용하기 위해 개발 혈압계는 혈압 설명서에 접속 뒷다리의 상부 주위에 160 mmHg의 압력을 적용하기 위해 사용된다. 피부 온도를 검출하기위한 프로브는 ischemi을 확인하는 데 사용되는레그 동맥 압력 유도 폐색에 의한 피부 온도의 저하와 커프스의 방출을 따르는 온도 상승을 기록하여. RIP의이 방법은 밝은 빛에 의한 손상과 변성에 대한 쥐의 망막에 대한 보호를 제공한다.

160 mmHg의 위까지 상승 혈압 커프는도 1b에 명확히 본 뒷다리 혈액의 흐름을 정지. 조직의 산소의 부족은 허혈 재관류 프로토콜 (도 2)에 대한 동물의 발 온도를 감소시키는 결과. 발 온도 (33 ° C)는 커프 (32 ° C) 수축 할 때 상승 커프 압력 상승 (31 ℃)시 코어 온도보다 낮은 안정적으로 감소했다. 단일 1,000 룩스 빛 부상은 또는 원격 허혈없이 흰둥이 쥐를 제기 어두워 전달했?...

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Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

원격 허혈 (RIP)의 손상 스트레스에 대한 조절 조직의 방법이다. 우리는 5-10 분간 혈압계 커프를 팽창하여, 뒷다리에서 원격 허혈 방법을 확립했다. RIP의 신경 보호 기능은 설치류에서 망막 변성의 모델에서 입증되고있다.

원격 사지 허혈 양상 : 설치류에 신경 기술

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

remote-limb-ischemic-preconditioning-neuroprotective-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

10.9K 조회수.  University of Sydney.  원격 허혈 (RIP)의 손상 스트레스에 대한 조절 조직의 방법이다. 우리는 5-10 분간 혈압계 커프를 팽창하여, 뒷다리에서 원격 허혈 방법을 확립했다. RIP의 신경 보호 기능은 설치류에서 망막 변성의 모델에서 입증되고있다. 

비디오: Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

잠복기 모델에서 허혈성 심장 마비에 대한 유전자 전송

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

연구

의학

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

허혈성 상처 모델 생산을위한 단순화된 테크닉

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

초점 대뇌 국소 빈혈에 조기 허혈성 공차를 유도하기 위해 적절한 전처리 자극으로 양측 경동맥 동맥 폐색

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Angiogenesis in the Ischemic Rat Lung

The adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that responds to a need for enhanced lung perfusion and shows robust neovascularization. Pulmonary vascular ischemia induced by pulmonary artery obstruction has been shown to result in rapid systemic arterial angiogenesis in man as well as in several animal models. Although the histologic assessment of the time course of bronchial artery proliferation in rats was carefully described by Weibel 1, mechanisms responsible for this organized growth of new vessels are not clear. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia in the rat that leads to bronchial neovascularization. Quantification of the extent of angiogenesis presents an additional challenge due to the presence of the two vascular beds within the lung. Methods to determine functional angiogenesis based on labeled microsphere injections are provided.

The lung is perfused by both the systemic bronchial artery and pulmonary arteries. In most lung pathologies, it is the smaller systemic vasculature that shows robust neovascularization. Cessation of pulmonary blood flow promotes brisk bronchial angiogenesis. We provide surgical details of inducing left pulmonary artery ischemia that promotes bronchial neovascularization.

허혈성 쥐 폐의 혈관 신생

The  adult lung is perfused by both the systemic bronchial artery and the entire  venous return flowing through the pulmonary arteries. In most lung ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

서스펜션에 망막 색소 상피 세포를 제공하기 위해 설치류에서 망막 주사를 수행

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

마우스에서 소성을 뒷다리 이식

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. It has become important to measure a person's activities in daily life, and not just measure their capacity for activity in the structured environment of a clinic or laboratory. A wearable sensor that is now enabling measurement of daily movement is the accelerometer. Accelerometers are commercially-available devices resembling large wrist watches that can be worn throughout the day. Data from accelerometers can quantify how the limbs are engaged to perform activities in peoples' homes and communities. This report describes a methodology to collect accelerometry data and turn it into clinically-relevant information. First, data are collected by having the participant wear two accelerometers (one on each wrist) for 24 h or longer. The accelerometry data are then downloaded and processed to produce four different variables that describe key aspects of upper limb activity in daily life: hours of use, use ratio, magnitude ratio, and the bilateral magnitude. Density plots can be constructed that visually represent the data from the 24 h wearing period. The variables and their resultant density plots are highly consistent in neurologically-intact, community-dwelling adults. This striking consistency makes them a useful tool for determining if upper limb daily performance is different from normal. This methodology is appropriate for research studies investigating upper limb dysfunction and interventions designed to improve upper limb performance in daily life in people with stroke and other patient populations. Because of its relative simplicity, it may not be long before it is also incorporated in clinical neurorehabilitation practice.

This protocol describes a method to quantify upper limb performance in daily life using wrist-worn accelerometers.

가속도계를 사용하여 일상 생활에서 상지 성능을 정량화하는 방법

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

당뇨병 토끼에서의 뒷 사지의 전 임상 모델

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Remote Laboratory Management: Respiratory Virus Diagnostics

An uptick in recent pandemics (Ebola, Zika, MERS, influenza, etc.) underlines the need for a more 'nimble,' coordinated response that addresses a multitude of issues ranging from transportation, access, facilities, equipment, and communication to provider training. To address this need, we have developed an innovative, scalable, logistics-enhanced, mobile, laboratory facility for emergencies and epidemics in resource-constrained global settings. Utilizing a background in clinical operations as an academic medical center, we designed a rapidly-deployable, modular BSL-2 and BSL-3 facility with user-friendly software for tracking and management of drugs and supplies in remote regions during epidemics and outbreaks. Here, we present our intermodal, mobile, expandable shipping-container laboratory units. The design of the laboratory facilitates off-grid usage by minimizing power consumption and allowing alternate water sources. The unit's information communication technology (ICT) platform provides (i) user-friendly tablet-based documentation, (ii) enhanced tracking of patients and supplies, and (iii) integrated communication onsite with built-in telehealth capabilities. To ensure quality in remote environments, we have developed a checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for respiratory viral diagnosis using reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). As described, this innovative and comprehensive approach allows for the provision of laboratory capability in resource-limited global environments.

A rapidly-deployable, off-grid laboratory has been designed and built for remote, resource-constrained global settings. The features and critical aspects of the logistically-enhanced, expandable, multifunctional laboratory modules are explored. A checklist for a basic laboratory workflow and a protocol for a respiratory viral diagnostic test are developed and presented.