저자 댄 Firl, 크리스 코베트 및 제시 DENSON, 박사 과정에 감사드립니다. 자금 조달이 SR에 NIH NINDS R01 NS060765에 의해 제공되었다, LJ에 P30 코 브레 파일럿 프로그램 및 뉴 멕시코 대학의 LJ에 아동 건강 서명 프로그램.

시설 보호 및 사용위원회 모두 보스턴 아동 병원에서 뉴 멕시코 건강 과학 센터의 대학은 모든 실험 절차를 승인했다. 참고 : 이전 절차, 인감을 시작으로, 살균 및 모든 수술기구 및 수술 커튼 압력솥. 또한, 0.125 %의 bipivucaine 0.1 ㎎ / ㎏ 부 프레 노르 핀을 포함하여 멸균 유리 병에서 수술 후 약물을 준비합니다. 또한 무균 리포 폴리 사카 라이드 (LPS) 용액을 제조 : 0.04 ㎎ / ㎖ LPS (0111 : B4) 에반의 파란색 색소를 희석 포함 멸균 식염수에 있습니다. 1. 마취 <ol><li> 3 % 이소 플루 란 평형 70 %, 질소 30 %와 산소의 혼합물로 배아 일 18 (E18) 임신 한 스프 라그 돌리 래트에 마취를 유도한다. </li><li> 유도 챔버에서 쥐를 제거하고 37 ℃로 설정 드리 워진 수술 순환 담요에 쥐 부정사를 놓습니다. 코 콘에 마취를 전송하고 isoflura을 감소2 % NE 수준. </li><li> 부드럽게 각막 건조를 방지하기 위해 각각의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 절차 중에 연속적으로 온도, 호흡 속도 및 동물의 심박수를 모니터링. 모자 생리는 절차 전반에 걸쳐 안정적으로 유지해야합니다. </li></ol> 2. 수술 준비 및 스크럽 <ol><li> 사용 작은 동물 가위는 하복부에있는 모든 머리를 제거합니다. 젖꼭지 새김 또는 라이브 태어난 새끼의 미래 간호를 위해 자극 할 수 면도기 발진이 발생하지 않도록주의 직사각형 패턴으로 면도. </li><li> 멸균 면봉으로 포비돈 - 요오드 및 70 % 에탄올 스크럽의 응용 프로그램을 번갈아 복부 피부를 준비합니다. 포비돈 - 요오드 및 70 % 에탄올 각 패션을 교대로 배를 적용하도록 스크럽을 반복합니다. 건조 보자. </li><li> 발가락 - 핀치 반사의 부재를 통해 마취의 깊이를 확인합니다. 통증 자극 및 반사의 부재 하에서, 1 % 이소 플루 수준을 감소시킨다. </li><li> 멸균 된 수술 타월을 사용하여,동물 드레이프. 그들이 자궁 뿔 혈액 순환을 방해하지 동안 흡수 관개 유체의 양을 최대화하도록 적절한 각도로 커튼을 배치주의한다. </li></ol> 3. 복부 개복술 <ol><li> 메스를 사용하여 제조 된 복부 피부에서 3cm의 중간 선 절개를합니다. 직설적 위 복부 근막에서 표피층 해부. 집게 수술 가위를 사용하여, 복부 근막 층을 상승 및 복강에 접근하기 위해 원격 교육의 무혈성 알바의 절개를. </li><li> 절개의 외부에 수술 거즈를 놓고 멸균 식염수로 적신. 복부에 무딘 집게와 외부의 압력을 사용하여 부드럽게 복강에서 자궁 뿔을 제거하고 젖은 거즈에 배열합니다. </li><li> 조심스럽게 엉킴을 방지하고 창자에 문의하십시오. 태아 개별 양수 주머니 사이에서만 근육 조직에 연락하여 집게를 사용하여 정렬합니다.노출과 무딘 절개를 사용하여 4 자궁 동맥을 격리 할 것. 참고 : 케어는 자궁 동맥을 해부주의해야합니다. 주변 조직과 혈관 자체는 매우 섬세하다. 산모의 혈관 손상은 출혈의 원인, 그리고 심한 경우, 태아 및 산모 사망 할 수 있습니다. </li></ol> 동맥류 클립 4. 배치 <ol><li> 각각의 자궁 동맥에 쥐 30 G 동맥류 클립을 놓습니다. 개인 태반을 포함한 자궁 혈관의 근위부와 원위부 펄스, 그리고 어두워을 포함하여 혈액의 흐름의 중단을 확인합니다. 노출 된 뿔과 거즈와 전체 수술 부위를 덮고 멸균 식염수로 관개. 관개 약 10 분마다 촉촉한 필드를 유지하기 위해주의하십시오. </li><li> 60 분 후, 거즈를 제거하고 필드 관개. 자궁 뿔과 혈관이 충분히 성공 클립 제거를 위해 적신되어 있는지 확인합니다. 부드럽게 집게를 사용하여 각 동맥류 클립을 제거합니다. 용기 외상, 그리고 MAINT의 원인이되지 않도록주의제거시 아인 조직의 무결성. </li><li> 철저히 양수 주머니에서 거즈의 길잃은 스레드를 제거 돌보는, 자궁 뿔과 필드 관개. </li></ol> 양막 주머니에있는 리포 폴리 사카 라이드 5. 주입 <ol><li> 각각의 양막 낭의 기지에서, 단지, 태반 판에 전방 양수에 희석 에반의 파란색 염료와 LPS (4 μg의 / SAC)의 100 μl를 주입. 안정화 및 사출을위한 최적의 위치에 각각의 양막을 회전 무딘 집게를 사용합니다. 희석 에반의 청색 염료는 적절한 주사기 배치 및 주입을 확인에 도움이되는 조영제입니다. 참고 : 내 양수 주입을위한 연결 8mm 31 G 바늘 만 사용 초 미세 0.3 ml의 인슐린 주사기. 큰 게이지 바늘을 사용하면 만성 양수 감소, 태아 사망과 임신의 재 흡수가 발생합니다. 주사기를 제거하여 양수 누출 소량의 mitig 될 수 있습니다양막 낭에 직접 압력에 의해 ated. 일부 쥐의 태아는 양수 과소증의 정도를 허​​용 할 수 있습니다. 그러나, 큰 게이지 바늘, 또는 만성 유체 누설의 결과 우발적 천자, 태아 손실과 심한 경우 결과, 이웃 임신의 손실이 구멍에서 급성 양수 손실. </li><li> 뿔 멸균 식염수로 3 배 자궁 관개. </li></ol> 6. 개복술 닫기 <ol><li> 집게를 사용하여 조심스럽게 복강에 자궁 뿔을 반환합니다. 양막 낭과 중간 선 절개 사이에 충분한 공간을 확보, 실행 3-0 실크 봉합사를 사용하여 musculofascial 층 모서리를 다시 근사. 근육 절개를 닫는 동안 양막 낭의 위치를​​ 인식한다. 로 또는 주머니를 봉합하지에주의하십시오. </li><li> 피부 층을 폐쇄, 실행 3-0 실크 봉합사를 이용하여, 스킨 층을 다시 근사. 주 : 개복술이 허용하는 연속 봉합의 두 층을 닫아야합니다피부와 임신의 증가와 근육의 확장. 연속 봉합 고르게 분포 상처 장력을 허용. 여러 매듭 자극하고 쉽게 마취에서 회복에 쥐가 씹을 수있는 바와 같이 중단 봉합 덜 요구된다. 수술 스테이플 원하는되지 않습니다. 수술 매듭의 꼬리는 매우 짧은 (&lt;3mm)를 절단해야한다. </li><li> 26 G 바늘을 사용하여 0.125 % bupivacaine을 피하 감겨 가장자리 1ml를 주입한다. 목덜미에서 kg의 부 프레 노르 핀 피하 0.1 mg을 하나의 복용량을 / 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 이소 플루 란과 수건 건조 쥐 필요를 끕니다. 깨끗한 집 케이지에 놓고 마취에서 회복을 모니터링 할 수 있습니다. 저체온이되지 않는 쥐를 확인합니다. </li></ol> 7. 수술 후 회복 및 관리 <ol><li> 새끼가 (약 E22 또는 E23) 출생 때까지 매일 한 후 72 시간 동안 쥐에게 매일 8 ~ 12 시간을 모니터합니다. 부 프레 노르 핀의 q8-12의 시간 / 72 시간의 추가 투여를 관리하거나 IACUC에 의해 결정으로 PRN. </li><li> 고통, 불편, 질 출혈이나 수술 부위에서 출혈의 흔적이 쥐를 모니터링합니다. 봉합과 절개를 검사하고 쥐가 씹는 또는 조기에 자신의 봉합사를 제거되지 않도록주의하십시오. 매우 희귀하지만, 자신의 봉합을 손상 쥐 상처 열개의 위험이 있습니다. 주 : 때때로 쥐 침구 또는 비 식품 항목 과도한 양을 섭취 할 수 있고, 부 프레 노르 핀의 투여의 부작용으로, 피카 불린다. 아주 드문 일이지만, 쥐 파이 카 및 잠재적 이후 장폐색을 모니터링해야합니다. </li></ol> 8. 조직 가공 및 냉동 절편 <ol><li> , 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E) 출생 후의 뇌의 염색을 준비 출생 후 하루 2 (P2)에 자신의 홈 케이지에서 새끼를 제거하십시오. 수술 가위 부드럽게 쥐 새끼 목을 벨 및 사용하여 두개골에서 뇌를 제거합니다. </li><li> 인산염 완충 식염수에 4 % 파라 포름 알데히드의 7 ㎖의를 포함하는 15 ML 원뿔 튜브에 수정 뇌 드롭(PBS). 4 ° C에서 뇌를 놓고 72 시간 동안 수정. </li><li> 72 시간 후, 30 % 자당을 포함하는 멸균 PBS 용액에 두뇌를 전송 (W / V) 및 4 ℃로 돌아갑니다. 참고 : 뇌가 자당 용액에 드롭하면 그들이 저온 유지 장치에 구분 될 준비가 된 것입니다. </li><li> 빠르게 머리를 동결 및 냉동 관상 섹션의 획득을위한 저온 유지 유봉에 탑재합니다. 20 μm의 냉동 코로나 부분을 잘라 슬라이드에 탑재합니다. 확인 섹션은 연속적으로 수집됩니다. </li><li> 슬라이드는 실온에서 밤새 건조하도록 허용합니다. 저장소는 -20 ° C에서 슬라이드. </li></ol> 9. 헤 마톡 실린 및 에오신 염색 <ol><li> 실온에 슬라이드 장착 동결 절편 따뜻한하십시오. 참고 : 모든 솔루션은 신선한 준비합니다. </li><li> 2 시간 동안 50 ° C의 슬라이드 따뜻한 세트에 배치 슬라이드. </li><li> 전송 염색 랙에 슬라이드. 딥 (DDH 2 O)을 두 번 증류 탈 이온수에 10 배를 슬라이드. </li><li> 5 분 동안 100 % 헤 마톡 실린 슬라이드를 품어. 티헤 마톡 실린의 날 보라색 염색의 정도에 따라 최적화 할 수 있습니다. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 딥 (250 ml의 70 % 에탄올 + 1 ml의 진한 염산) 산 알코올 15X 슬라이드. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 2 분 동안 1 % 탄산 리튬 부화. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 1 분 동안 95 % 에탄올에서 부화. </li><li> 딥 슬라이드는 100 %에서 7 배 에오신. 에오신에서 딥의 수는 분홍색 얼룩의 정도에 따라 변경 될 수있다. </li><li> 딥 슬라이드는 95 % 에탄올 5 배. </li><li> 95 % 에탄올 신선한 변화 딥 슬라이드 배. </li><li> 1 분 동안 100 % 에탄올에 슬라이드를 품어. </li><li> 1 분 동안 100 % 에탄올의 새로운 변화에 슬라이드를 품어. </li><li> 15 분 동안 100 % 크실렌에서 슬라이드를 품어. 참고 : 크실렌 단계 및흄 후드에서 발생한다 coverslipping. </li><li> 15 분 동안 크실렌의 신선한 변화에 슬라이드를 품어. </li><li> Permount와 커버 슬립과 흄 후드에서 건조 할 수 있습니다. </li><li> 이미지는 광학 현미경으로 슬라이드. </li></ol>

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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes.">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li><li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation.">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice.">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 .</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

미숙아 뇌증 때문에 부상의 메커니즘을 중복 병인, 신경 발달 시간 코스, 인간의 뇌 네트워크 형성의 복잡함의 복잡한 상호 작용의 동물 모델 어렵고, CNS의 다양한 표현형은 인간의 미숙아에서 명백한 모욕. 나서도 EoP는 특정 세포 형 취약점과 관련된 (즉, 미성숙 희소 돌기 아교 세포) (21)뿐만 아니라 다양한 발달 조절 경로 (즉, 서브 플레이트, 막 수송과 수용체 서브 유닛) <s...

37주 추정 재태 연령 1 일 이전에 미국에서 태어난 신생아의 12 % 이상, 미숙아에서 주 산기 뇌 손상 (PBI)는 영구 장애의 중요한 원인이다. PBI는 미숙아에서 미숙아도 되나 뇌증 (나서도 EoP)는 전체 중추 신경계 (CNS)에 영향을줍니다. 중추 신경계 손상은 종종 자궁에서 시작하고, 융 모양 막염 및 저산소증과 패혈증과 같은 산후 합병증을 포함하여 출산 과정에 의해 악화된다. 전신 모욕에서 PBI는 신경 발달을 변경하고 감정 조절, 메모리 및 집행 기능 1, 2에 영향을 미치는 뇌성 ​​마비, 간질,인지 지연과 수많은 신경 정신 장애로 이어집니다. 많은 진전이 이루어지고 있지만, 제한된 이해는 조산에서 중추 신경계 손상의 세포 및 분자 결과가 조기를 태어나는 아이들의 신경 학적 후유증의 무리로 변환하는 방법으로 남아있다. 지식 뒷다리의 부족실시간 CNS 부상 심각도의 진단 및 신흥 개입의 정보를 투여 ERS. 또한이 취약한 환자 인구 연령에 적합한 치료 전략이 애매 남아있다. 자궁 내 염증은 극단적 인 미숙아에서 매우 일반적인 3 복잡한 태아 - 모체 - 태반 염증 폭포를 포함한다. 자궁 내 감염은 흔히 무증상이다. 급성 염증, 또는 조직 학적 융 모양 막염과 일치하는 특정 태반 연구 결과는, 태아 염증 반응의 주요 결정 요인이며, 조산 3-5과 관련된 뇌 손상과 일치합니다. 사실, 태아 염증 반응은 조산의 장기 성과에 대한 별개의 임상 적 의미를 가지고있다. 재태 연령 (SGA) 또는 사람 감염을 경험하기위한 작은 유아 신경 학적 결손의 3,4에 매우 취약하다. 융 모양 막염은 전형적인 병리학 적 진단 다음 조산이다 <sup&gt; 6, 7, 및 조직 학적 검사는 매우 조산 4 태어난 영아에서 태반의 70 %에서 염증의 징후를 보여준다. 또한, 융 모양 막염는 2 년 8에서인지 장애와 연관되어있다. 매우 조기 태어난 신생아의 태반에서 모체의 혈관 underperfusion의 증거는 어린 시절 9 뇌성 마비와 연관되어있다. 융 모양 막염 및 태반 관류 결함의 시너지 효과는 물론 나이 10, 11 2 년에이 환자 집단에서 비정상적인 신경 학적 결과의 현저하게 높은 위험에 의해 설명된다. 병원체에 의한 염증과 관련된 인간의 전신 태반 관류 결함 및 융 모양 막염을 모방하기 위해, 우리는 쥐의 내 양수 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)과 결합 산전 일시적인 전신 저산소 - 허혈 (TSHI)의 모델을 개발했다. 우리의 목표는, 자궁 내 염증을 포함하는 단독 쥐 12-16에서 TSHI 우리의 모델을 적용하는 것이 었습니다조산과 관련된 중추 신경계 손상의 임상 모델링을 용이하게한다. TSHI 혼자 희 돌기 혈통 세포, 대뇌 피질의 신경 세포의 지속적인 손실을 공개했다, 태아 뇌 손상 (16)과 일치 부상 등급 패턴으로 이어지는 진보 허혈성 간격으로, 세포 사멸을 증가하고, 염증성 사이토 카인의 수준을 상승. 그들은 17 ~ 19 나이이 모델의 허혈성 구성 요소에 대한 수정은 또한 쥐의 메모리 인코딩, 단기 및 장기 기억과 온화한 근골격계 변경에 적자를 증명하고있다. 사실, 우리는 이전에 TSHI + LPS의 조합이 희소 돌기 아교 세포 및 신경 세포의 손실, 축삭 손상, 세포의 염증과 기능 이상 (20)를 포함 나서도 EoP의 병태 생리 학적 특징을 되풀이되었습니다 것을 증명하고있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" >
	<tbody>
		<tr >
			<td >Saline Solution, 0.9%</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >S8776</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LPS 011B4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Evan&#39;s Blue Dye</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical gloves</td>
			<td>Biogel</td>
			<td>40870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OR Towels</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>287000-008</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PDI Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>06-669-62</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mini Arco Rechargeable Clippers</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>CL8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Betadine surgical scrub</td>
			<td>Purdue Products L.P.</td>
			<td>67618-151-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eye Lubricant</td>
			<td>Refresh Lacri Lube</td>
			<td>00023-0312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blunt Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-8100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6808</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Surgical Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14002-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td>25G 5/8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>30G 1</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton-tipped Applicators</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>23-400-114</td>
			<td>Small, 6 inch sterile</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle Holders</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600109</td>
			<td>12.5 CM STR</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vessel Clips</td>
			<td>Kent Scientific Corp.</td>
			<td>INS600120</td>
			<td>30G Pressure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3-0 Perma Hand Silk Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>1684G</td>
			<td>Black braided, 3-0 (2 metric), 18&#34;, non-absorbable,&#160; PS-1 24mm needle, 3/8 circle</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>328438</td>
			<td>0.3cc 3mm 31G</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pentobarbital</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bupivacaine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lithium Carbonate</td>
			<td>Acros Chemicals</td>
			<td>554-13-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48311-703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801521</td>
			<td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801601</td>
			<td>Surgipath Eosin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylenes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Permount</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>SP15-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coverglass</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-548-5P</td>
			<td>Fisher Finest Premium Coverglass</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling encephalopathy of prematurity using prenatal hypoxia-ischemia with intra-amniotic lipopolysaccharide in rats

미숙아 뇌증 (나서도 EoP)이 가장 좋은 사전 번역 목표에. 조산과 관련된 이상이 중추 신경계 (CNS)를 포괄하는 용어이며, 조산과 관련된 뇌 손상에 대한 새로운 치료 전략을 발견, 나서도 EoP의 전임상 모델은 유사한 메커니즘을 포함해야 산전 글로벌 부상으로 인간의 관찰과 모성 - 태반 - 태아 시스템의 여러 구성 요소를 포함한다. 이상적으로, 모델은 성숙 동물에 기능 적자의 비슷한 스펙트럼을 생산하고 병태 생리의 여러 측면을 요점을 되풀이한다. 초기 조산의 병원체에 의한 염증과 관련된 인간의 전신 태반 관류 결함, 태반 underperfusion 및 / 또는 융 모양 막염을 모방하기 위해, 우리는 내 양수 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)과 결합 산전 일시적인 전신 저산소증 - 허혈 (TSHI)의 모델을 개발했다. 임신 스프 라그 돌리 쥐에서, TSHI 자궁 동맥 폐색 O를 통해N 배아 일 18 (E18)는 태아에 CNS 손상 증가와 연관된 그레이딩 태반 underperfusion 결함을 유도한다. 내 양수 LPS 주사와 결합하면 태반 염증이 증가하고, 중추 신경계 손상은 관련 백질, 보행 및 이미징 이상으로 복잡해집니다. 태아 TSHI 및 TSHI + LPS 산전 모욕은 신경 세포, 희소 돌기 아교 세포와 축삭, 서브 플레이트의 손실, 매우 태어난 아이들에서 관찰 된 것과 모방 성인 동물의 기능 적자의 손실을 일으키는 원인이되는 자궁 모욕을 recapitulating 포함 있어서는 Eop 모델의 기준을 몇 가지 충족 조기. 또한,이 모델은 발산 부상 유형에 의해 유도 된 염증의 해부 수 있습니다.

E18에서 TSHI + LPS에 이어, 헤 마톡 실린과 에오신 염색 중요한 병리학 태반 둘 이상 (도 1) 및 뇌 (도 2)을 보여준다. E19과 E21에 검사의 태반은 탈락과 미로에 걸쳐 미세 출혈 및 괴사와 심하게 부종이다. 중요한 염증성 침윤 및 증가 된 혈관도 관찰된다. (P2)에 조사 뇌는 뇌실 공개뿐만 아니라 흰색 물질과 서브 플레이트 신경 세포의 손실은 가짜에 비해. 이전에, 우리는 TSHI + L...

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Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

11.2K 조회수.  University of New Mexico. Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

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Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

마우스의 모델링 스트로크 - 필라멘트 모델 중간 대뇌 동맥 폐색

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

연구

의학

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

과 양전자 방출 단층 촬영을 이용하여 비 침습적 영상 및 뇌허혈의 분석 생활 쥐<sup&gt; (18)</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they typically rely upon lengthy and costly in vivo animal challenge studies. A number of in vitro assays have been developed to aid in measuring prion species barriers, thereby reducing animal use and providing quicker results than animal bioassays. Here, we present the protocol for a rapid in vitro prion conversion assay called the conversion efficiency ratio (CER) assay. In this assay cellular prion protein (PrPC) from an uninfected host brain is denatured at both pH 7.4 and 3.5 to produce two substrates. When the pH 7.4 substrate is incubated with TSE agent, the amount of PrPC that converts to a proteinase K (PK)-resistant state is modulated by the original host&#8217;s species barrier to the TSE agent. In contrast, PrPC in the pH 3.5 substrate is misfolded by any TSE agent. By comparing the amount of PK-resistant prion protein in the two substrates, an assessment of the host&#8217;s species barrier can be made. We show that the CER assay correctly predicts known prion species barriers of laboratory mice and, as an example, show some preliminary results suggesting that bobcats (Lynx rufus) may be susceptible to white-tailed deer (Odocoileus virginianus) chronic wasting disease agent.

Assessing Transmissible Spongiform Encephalopathy Species Barriers with an In Vitro Prion Protein Conversion Assay

Measuring the barrier to the interspecies transmission of prion diseases is challenging and typically involves animal challenges or biochemical assays. Here, we present an in vitro prion protein conversion assay with the ability to predict species barriers.

와 전염성 해면상 뇌증 종 장벽 평가<em&gt; 체외</em&gt; 프리온 단백질 변환 분석

Studies to understanding interspecies transmission of transmissible spongiform encephalopathies (TSEs, prion diseases) are challenging in that they ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics disturbance in affected cells. Diffusion weighted magnetic resonance imaging (MRI) identifies regions that are damaged, potentially irreversibly, by hypoxia-ischemia. Alterations in glucose utilization in the affected tissue may be detectable by positron emission tomography (PET) imaging of 2-deoxy-2-(18F)fluoro-&#7429;-glucose ([18F]FDG) uptake. Due to the rapid and variable nature of injury in this animal model, acquisition of both modes of data must be performed simultaneously in order to meaningfully correlate PET and MRI data. In addition, inter-animal variability in the hypoxic-ischemic injury due to vascular differences limits the ability to analyze multi-modal data and observe changes to a group-wise approach if data is not acquired simultaneously in individual subjects. The method presented here allows one to acquire both diffusion-weighted MRI and [18F]FDG uptake data in the same animal before, during, and after the hypoxic challenge in order to interrogate immediate physiological changes.

The method presented here uses simultaneous positron emission tomography and magnetic resonance imaging. In the cerebral hypoxia-ischemia model, dynamic changes in diffusion and glucose metabolism occur during and after injury. The evolving and irreproducible damage in this model necessitates simultaneous acquisition if meaningful multi-modal imaging data are to be acquired.

마우스 대뇌 저산소증 - 허혈 동안 동시 PET / MRI 영상

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA thrombolysis) rarely produces benefits in mechanical occlusion-based experimental models, which dominate preclinical stroke research. This split between the bench and bedside suggests the need to employ tPA-responsive models in preclinical stroke research. To this end, a simple and tPA-reactive thrombotic stroke model is invented and described here. This model consists of transient occlusion of the unilateral common carotid artery and delivery of 7.5% oxygen through a face mask in adult mice for 30 min, while maintaining the animal rectal temperature at 37.5 &#177; 0.5 &#176;C. Although reversible ligation of the unilateral carotid artery or hypoxia each suppressed cerebral blood flow only transiently, the combination of both insults caused lasting reperfusion deficits, fibrin and platelet deposition, and large infarct in the middle cerebral artery-supplied territory. Importantly, tail-vein injection of recombinant tPA at 0.5, 1, or 4 hr post-tHI (10 mg/kg) provided time-dependent reduction of the mortality rate and infarct size. This new stroke model is simple and can be standardized across laboratories to compare experimental results. Further, it induces thrombosis without craniectomy or introducing pre-formed emboli. Given these unique merits, the tHI model is a useful addition to the repertoire of preclinical stroke research.

Thromboembolic stroke models are vital tools for optimizing the recanalization therapy. Here we report a murine thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxic-ischemic (tHI) insult, which triggers thrombosis and infarction, and responds favorably to tissue plasminogen activator (tPA)-mediated fibrinolysis in a therapeutic window similar to those in stroke patients.

과도 대뇌 저산소증 - 허혈을 기반으로 혈전 성 뇌졸중 모델

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

Circumscribed Capsular Infarct Modeling Using a Photothrombotic Technique

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for white matter stroke has hampered research investigations. Here, we describe a novel method for creating a circumscribed capsular infarct that minimizes damage to neighboring gray matter structures. We used pre-surgery neural tracing with adeno-associated virus-green fluorescent protein (AAV-GFP) to identify somatotopic organization of the forelimb area within the internal capsule. The adjustment of light intensity based on different optical properties of gray and white matter contributes to selective destruction of white matter with relative preservation of gray matter. Accurate positioning of optical-neural interface enables destruction of entire forelimb area in the internal capsule, which leads to a marked and persistent motor deficit. Thus, this technique produces highly replicable capsular infarct lesions with a persistent motor deficit. The model will be helpful not only to study white matter stroke (WMS) at the behavioral, circuit, and cellular levels, but also to assess its usefulness for development of new therapeutic and rehabilitative interventions.

This manuscript describes a modeling technique of capsular infarct. Here we utilized a modified photothrombotic technique with low intensity of light after pre-surgery target mapping. Using this technique, we created a circumscribed capsular infarct model with persistent motor impairment.

Photothrombotic 기술을 이용하여 외접 캡슐 경색 모델링

Recent increase in the prevalence rate of white matter stroke demands specific research in the field. However, the lack of a pertinent animal model for ...

Preparation of Decellularized Kidney Scaffolds in Rats

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs to replace diseased or damaged organs. Scaffolds are needed to facilitate the generation of three-dimensional organs or tissues using differentiated stem cells in vivo. In this report, we describe a novel method for developing vascularized scaffolds using decellularized rat kidneys. Eight-week-old Sprague-Dawley rats were used in this study, and heparin was injected into the heart to facilitate flow into the renal vessels, allowing heparin to perfuse into the renal vessels. The abdominal cavity was opened, and the left kidney was collected. The collected kidneys were perfused for 9 h using detergents, such as Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate, to decellularize the tissue. Decellularized kidney scaffolds were then gently washed with 1% penicillin/streptomycin and heparin to remove cellular debris and chemical residues. Transplantation of stem cells with the decellularized vascular scaffolds is expected to facilitate the generation of new organs. Thus, the vascularized scaffolds may provide a foundation for tissue engineering of organ grafts in the future.

This protocol introduces a method to develop a scaffold using decellularized rat kidneys. The protocol includes decellularization and recellularization processes to confirm bioavailability. Decellularization is performed using Triton X-100 and sodium dodecyl sulfate.

쥐에 있는 세포탈구형 신장 비계의 준비

Tissue engineering is a cutting-edge discipline in biomedicine. Cell culture techniques can be applied for regeneration of functional tissues and organs ...

Analysis of Raw and Processed Cyperi Rhizoma Samples Using Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry in Rats with Primary Dysmenorrhea

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is enhanced after processing with vinegar, CR processed with vinegar (CRV) is generally used clinically. However, the mechanism by which the analgesic effect is enhanced by vinegar processing is unclear. In this study, the ultra-high pressure liquid chromatographytandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) technique was used to examine changes in the blood levels of the exogenous constituents and metabolites between CR-treated and CRV-treated rats with dysmenorrhea. The results revealed differing levels of 15 constituents and two metabolites in the blood of these rats. Among them, the levels of (-)-myrtenol and [(1R,2S,3R,4R)-3-hydroxy-1,4,7,7-tetramethylbicyclo[2.2.1]hept-2-yl]acetic acid in the CRV group were considerably higher than in the CR group. CRV reduced the level of 2-series prostanoids and 4-series leukotrienes with proinflammatory, platelet aggregation, and vasoconstriction activities and provided analgesic effects by modulating arachidonic acid and linoleic acid metabolism and the biosynthesis of unsaturated fatty acids. This study revealed that vinegar processing enhances the analgesic effect of CR and contributes to our understanding of the mechanism of action of CRV.

Here, a comparative analysis of raw and processed Cyperi rhizoma (CR) samples is presented using ultra-high performance liquid chromatography-high-resolution tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) in rats with primary dysmenorrhea. The changes in blood levels of the metabolites and the sample constituents were examined between rats treated with CR and CR processed with vinegar (CRV).

원발성 월경통이 있는 쥐에서 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법을 사용한 원시 및 처리된 Cyperi Rhizoma 샘플 분석

Cyperi rhizoma (CR) is widely used in gynecology and is a general medicine for treating women's diseases in China. Since the analgesic effect of CR is ...

쥐의 무릎 골관절염에 대한 표준화된 Tuina 조작

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its mechanism. Therefore, the manipulation of animal models of knee osteoarthritis is critical. This protocol provides a standard process for Tuina manipulation on KOA rats and a preliminary exploration of the mechanism of Tuina for KOA. The press and kneading manipulation method (a kind of Tuina manipulation that refers to pressing and kneading the specific area of the body surface) is applied on 5 acupoints around the knee joint of rats. The force and frequency of the manipulation were standardized by finger pressure recordings, and the position of the rat during manipulation is described in detail in the protocol. The effect of manipulation can be measured by pain behavior tests and microscopic findings in synovial and cartilage. KOA rats showed significant improvement in pain behavior. The synovial tissue inflammatory infiltration was reduced in the Tuina group, and the expression of tumor necrosis factor (TNF)-&#945; was significantly lower. Compared to the control group, chondrocyte apoptosis was less in the Tuina group. This study provides a standardized protocol for Tuina manipulation on KOA rats and preliminary proof that the therapeutic effects of Tuina may be related to reducing synovial inflammation and delayed chondrocyte apoptosis.

저자 스포트라이트: 쥐에서 Tuina 조작 메커니즘 이해 

We present a protocol for Tuina manipulation performed on plaster-immobilized-induced knee osteoarthritis rats. Based on the preliminary results, it suggested that the efficacy of the method relied on the reduction of inflammation and cartilage loss.

무릎 골관절염 쥐의 염증과 연골 손실을 줄이기 위한 Tuina 조작

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...