저자 댄 Firl, 크리스 코베트 및 제시 DENSON, 박사 과정에 감사드립니다. 자금 조달이 SR에 NIH NINDS R01 NS060765에 의해 제공되었다, LJ에 P30 코 브레 파일럿 프로그램 및 뉴 멕시코 대학의 LJ에 아동 건강 서명 프로그램.

시설 보호 및 사용위원회 모두 보스턴 아동 병원에서 뉴 멕시코 건강 과학 센터의 대학은 모든 실험 절차를 승인했다. 참고 : 이전 절차, 인감을 시작으로, 살균 및 모든 수술기구 및 수술 커튼 압력솥. 또한, 0.125 %의 bipivucaine 0.1 ㎎ / ㎏ 부 프레 노르 핀을 포함하여 멸균 유리 병에서 수술 후 약물을 준비합니다. 또한 무균 리포 폴리 사카 라이드 (LPS) 용액을 제조 : 0.04 ㎎ / ㎖ LPS (0111 : B4) 에반의 파란색 색소를 희석 포함 멸균 식염수에 있습니다. 1. 마취 <ol><li> 3 % 이소 플루 란 평형 70 %, 질소 30 %와 산소의 혼합물로 배아 일 18 (E18) 임신 한 스프 라그 돌리 래트에 마취를 유도한다. </li><li> 유도 챔버에서 쥐를 제거하고 37 ℃로 설정 드리 워진 수술 순환 담요에 쥐 부정사를 놓습니다. 코 콘에 마취를 전송하고 isoflura을 감소2 % NE 수준. </li><li> 부드럽게 각막 건조를 방지하기 위해 각각의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 절차 중에 연속적으로 온도, 호흡 속도 및 동물의 심박수를 모니터링. 모자 생리는 절차 전반에 걸쳐 안정적으로 유지해야합니다. </li></ol> 2. 수술 준비 및 스크럽 <ol><li> 사용 작은 동물 가위는 하복부에있는 모든 머리를 제거합니다. 젖꼭지 새김 또는 라이브 태어난 새끼의 미래 간호를 위해 자극 할 수 면도기 발진이 발생하지 않도록주의 직사각형 패턴으로 면도. </li><li> 멸균 면봉으로 포비돈 - 요오드 및 70 % 에탄올 스크럽의 응용 프로그램을 번갈아 복부 피부를 준비합니다. 포비돈 - 요오드 및 70 % 에탄올 각 패션을 교대로 배를 적용하도록 스크럽을 반복합니다. 건조 보자. </li><li> 발가락 - 핀치 반사의 부재를 통해 마취의 깊이를 확인합니다. 통증 자극 및 반사의 부재 하에서, 1 % 이소 플루 수준을 감소시킨다. </li><li> 멸균 된 수술 타월을 사용하여,동물 드레이프. 그들이 자궁 뿔 혈액 순환을 방해하지 동안 흡수 관개 유체의 양을 최대화하도록 적절한 각도로 커튼을 배치주의한다. </li></ol> 3. 복부 개복술 <ol><li> 메스를 사용하여 제조 된 복부 피부에서 3cm의 중간 선 절개를합니다. 직설적 위 복부 근막에서 표피층 해부. 집게 수술 가위를 사용하여, 복부 근막 층을 상승 및 복강에 접근하기 위해 원격 교육의 무혈성 알바의 절개를. </li><li> 절개의 외부에 수술 거즈를 놓고 멸균 식염수로 적신. 복부에 무딘 집게와 외부의 압력을 사용하여 부드럽게 복강에서 자궁 뿔을 제거하고 젖은 거즈에 배열합니다. </li><li> 조심스럽게 엉킴을 방지하고 창자에 문의하십시오. 태아 개별 양수 주머니 사이에서만 근육 조직에 연락하여 집게를 사용하여 정렬합니다.노출과 무딘 절개를 사용하여 4 자궁 동맥을 격리 할 것. 참고 : 케어는 자궁 동맥을 해부주의해야합니다. 주변 조직과 혈관 자체는 매우 섬세하다. 산모의 혈관 손상은 출혈의 원인, 그리고 심한 경우, 태아 및 산모 사망 할 수 있습니다. </li></ol> 동맥류 클립 4. 배치 <ol><li> 각각의 자궁 동맥에 쥐 30 G 동맥류 클립을 놓습니다. 개인 태반을 포함한 자궁 혈관의 근위부와 원위부 펄스, 그리고 어두워을 포함하여 혈액의 흐름의 중단을 확인합니다. 노출 된 뿔과 거즈와 전체 수술 부위를 덮고 멸균 식염수로 관개. 관개 약 10 분마다 촉촉한 필드를 유지하기 위해주의하십시오. </li><li> 60 분 후, 거즈를 제거하고 필드 관개. 자궁 뿔과 혈관이 충분히 성공 클립 제거를 위해 적신되어 있는지 확인합니다. 부드럽게 집게를 사용하여 각 동맥류 클립을 제거합니다. 용기 외상, 그리고 MAINT의 원인이되지 않도록주의제거시 아인 조직의 무결성. </li><li> 철저히 양수 주머니에서 거즈의 길잃은 스레드를 제거 돌보는, 자궁 뿔과 필드 관개. </li></ol> 양막 주머니에있는 리포 폴리 사카 라이드 5. 주입 <ol><li> 각각의 양막 낭의 기지에서, 단지, 태반 판에 전방 양수에 희석 에반의 파란색 염료와 LPS (4 μg의 / SAC)의 100 μl를 주입. 안정화 및 사출을위한 최적의 위치에 각각의 양막을 회전 무딘 집게를 사용합니다. 희석 에반의 청색 염료는 적절한 주사기 배치 및 주입을 확인에 도움이되는 조영제입니다. 참고 : 내 양수 주입을위한 연결 8mm 31 G 바늘 만 사용 초 미세 0.3 ml의 인슐린 주사기. 큰 게이지 바늘을 사용하면 만성 양수 감소, 태아 사망과 임신의 재 흡수가 발생합니다. 주사기를 제거하여 양수 누출 소량의 mitig 될 수 있습니다양막 낭에 직접 압력에 의해 ated. 일부 쥐의 태아는 양수 과소증의 정도를 허​​용 할 수 있습니다. 그러나, 큰 게이지 바늘, 또는 만성 유체 누설의 결과 우발적 천자, 태아 손실과 심한 경우 결과, 이웃 임신의 손실이 구멍에서 급성 양수 손실. </li><li> 뿔 멸균 식염수로 3 배 자궁 관개. </li></ol> 6. 개복술 닫기 <ol><li> 집게를 사용하여 조심스럽게 복강에 자궁 뿔을 반환합니다. 양막 낭과 중간 선 절개 사이에 충분한 공간을 확보, 실행 3-0 실크 봉합사를 사용하여 musculofascial 층 모서리를 다시 근사. 근육 절개를 닫는 동안 양막 낭의 위치를​​ 인식한다. 로 또는 주머니를 봉합하지에주의하십시오. </li><li> 피부 층을 폐쇄, 실행 3-0 실크 봉합사를 이용하여, 스킨 층을 다시 근사. 주 : 개복술이 허용하는 연속 봉합의 두 층을 닫아야합니다피부와 임신의 증가와 근육의 확장. 연속 봉합 고르게 분포 상처 장력을 허용. 여러 매듭 자극하고 쉽게 마취에서 회복에 쥐가 씹을 수있는 바와 같이 중단 봉합 덜 요구된다. 수술 스테이플 원하는되지 않습니다. 수술 매듭의 꼬리는 매우 짧은 (&lt;3mm)를 절단해야한다. </li><li> 26 G 바늘을 사용하여 0.125 % bupivacaine을 피하 감겨 가장자리 1ml를 주입한다. 목덜미에서 kg의 부 프레 노르 핀 피하 0.1 mg을 하나의 복용량을 / 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 이소 플루 란과 수건 건조 쥐 필요를 끕니다. 깨끗한 집 케이지에 놓고 마취에서 회복을 모니터링 할 수 있습니다. 저체온이되지 않는 쥐를 확인합니다. </li></ol> 7. 수술 후 회복 및 관리 <ol><li> 새끼가 (약 E22 또는 E23) 출생 때까지 매일 한 후 72 시간 동안 쥐에게 매일 8 ~ 12 시간을 모니터합니다. 부 프레 노르 핀의 q8-12의 시간 / 72 시간의 추가 투여를 관리하거나 IACUC에 의해 결정으로 PRN. </li><li> 고통, 불편, 질 출혈이나 수술 부위에서 출혈의 흔적이 쥐를 모니터링합니다. 봉합과 절개를 검사하고 쥐가 씹는 또는 조기에 자신의 봉합사를 제거되지 않도록주의하십시오. 매우 희귀하지만, 자신의 봉합을 손상 쥐 상처 열개의 위험이 있습니다. 주 : 때때로 쥐 침구 또는 비 식품 항목 과도한 양을 섭취 할 수 있고, 부 프레 노르 핀의 투여의 부작용으로, 피카 불린다. 아주 드문 일이지만, 쥐 파이 카 및 잠재적 이후 장폐색을 모니터링해야합니다. </li></ol> 8. 조직 가공 및 냉동 절편 <ol><li> , 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E) 출생 후의 뇌의 염색을 준비 출생 후 하루 2 (P2)에 자신의 홈 케이지에서 새끼를 제거하십시오. 수술 가위 부드럽게 쥐 새끼 목을 벨 및 사용하여 두개골에서 뇌를 제거합니다. </li><li> 인산염 완충 식염수에 4 % 파라 포름 알데히드의 7 ㎖의를 포함하는 15 ML 원뿔 튜브에 수정 뇌 드롭(PBS). 4 ° C에서 뇌를 놓고 72 시간 동안 수정. </li><li> 72 시간 후, 30 % 자당을 포함하는 멸균 PBS 용액에 두뇌를 전송 (W / V) 및 4 ℃로 돌아갑니다. 참고 : 뇌가 자당 용액에 드롭하면 그들이 저온 유지 장치에 구분 될 준비가 된 것입니다. </li><li> 빠르게 머리를 동결 및 냉동 관상 섹션의 획득을위한 저온 유지 유봉에 탑재합니다. 20 μm의 냉동 코로나 부분을 잘라 슬라이드에 탑재합니다. 확인 섹션은 연속적으로 수집됩니다. </li><li> 슬라이드는 실온에서 밤새 건조하도록 허용합니다. 저장소는 -20 ° C에서 슬라이드. </li></ol> 9. 헤 마톡 실린 및 에오신 염색 <ol><li> 실온에 슬라이드 장착 동결 절편 따뜻한하십시오. 참고 : 모든 솔루션은 신선한 준비합니다. </li><li> 2 시간 동안 50 ° C의 슬라이드 따뜻한 세트에 배치 슬라이드. </li><li> 전송 염색 랙에 슬라이드. 딥 (DDH 2 O)을 두 번 증류 탈 이온수에 10 배를 슬라이드. </li><li> 5 분 동안 100 % 헤 마톡 실린 슬라이드를 품어. 티헤 마톡 실린의 날 보라색 염색의 정도에 따라 최적화 할 수 있습니다. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 딥 (250 ml의 70 % 에탄올 + 1 ml의 진한 염산) 산 알코올 15X 슬라이드. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 2 분 동안 1 % 탄산 리튬 부화. </li><li> 딥 슬라이드 탭 H 2 O에서 4 배, 1 분 동안 2 O 깨끗한 수돗물 H에 스탠드를 할 수 있습니다. </li><li> 1 분 동안 95 % 에탄올에서 부화. </li><li> 딥 슬라이드는 100 %에서 7 배 에오신. 에오신에서 딥의 수는 분홍색 얼룩의 정도에 따라 변경 될 수있다. </li><li> 딥 슬라이드는 95 % 에탄올 5 배. </li><li> 95 % 에탄올 신선한 변화 딥 슬라이드 배. </li><li> 1 분 동안 100 % 에탄올에 슬라이드를 품어. </li><li> 1 분 동안 100 % 에탄올의 새로운 변화에 슬라이드를 품어. </li><li> 15 분 동안 100 % 크실렌에서 슬라이드를 품어. 참고 : 크실렌 단계 및흄 후드에서 발생한다 coverslipping. </li><li> 15 분 동안 크실렌의 신선한 변화에 슬라이드를 품어. </li><li> Permount와 커버 슬립과 흄 후드에서 건조 할 수 있습니다. </li><li> 이미지는 광학 현미경으로 슬라이드. </li></ol>

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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+term+chorioamnionitis+unraveling+causes+of+adverse+neurological+outcomes.">A mouse model of term chorioamnionitis unraveling causes of adverse neurological outcomes.</a> Repro Sci. 18, 900-907 (2011).</li><li>Bergeron, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+matter+injury+and+autistic+like+behavior+predominantly+affecting+male+rat+offspring+exposed+to+group+B+streptococcal+maternal+inflammation.">White matter injury and autistic like behavior predominantly affecting male rat offspring exposed to group B streptococcal maternal inflammation.</a> Devel Neurosci. 35, 504-515 (2013).</li><li>Uchida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ureaplasma+parvum+lipoprotein+multiple+banded+antigen+on+pregnancy+outcome+in+mice.">Effects of Ureaplasma parvum lipoprotein multiple banded antigen on pregnancy outcome in mice.</a> J Reprod Immunol. 100, 118-127 .</li></ol>

저자가 공개하는 게 없다.

미숙아 뇌증 때문에 부상의 메커니즘을 중복 병인, 신경 발달 시간 코스, 인간의 뇌 네트워크 형성의 복잡함의 복잡한 상호 작용의 동물 모델 어렵고, CNS의 다양한 표현형은 인간의 미숙아에서 명백한 모욕. 나서도 EoP는 특정 세포 형 취약점과 관련된 (즉, 미성숙 희소 돌기 아교 세포) (21)뿐만 아니라 다양한 발달 조절 경로 (즉, 서브 플레이트, 막 수송과 수용체 서브 유닛) <s...

37주 추정 재태 연령 1 일 이전에 미국에서 태어난 신생아의 12 % 이상, 미숙아에서 주 산기 뇌 손상 (PBI)는 영구 장애의 중요한 원인이다. PBI는 미숙아에서 미숙아도 되나 뇌증 (나서도 EoP)는 전체 중추 신경계 (CNS)에 영향을줍니다. 중추 신경계 손상은 종종 자궁에서 시작하고, 융 모양 막염 및 저산소증과 패혈증과 같은 산후 합병증을 포함하여 출산 과정에 의해 악화된다. 전신 모욕에서 PBI는 신경 발달을 변경하고 감정 조절, 메모리 및 집행 기능 1, 2에 영향을 미치는 뇌성 ​​마비, 간질,인지 지연과 수많은 신경 정신 장애로 이어집니다. 많은 진전이 이루어지고 있지만, 제한된 이해는 조산에서 중추 신경계 손상의 세포 및 분자 결과가 조기를 태어나는 아이들의 신경 학적 후유증의 무리로 변환하는 방법으로 남아있다. 지식 뒷다리의 부족실시간 CNS 부상 심각도의 진단 및 신흥 개입의 정보를 투여 ERS. 또한이 취약한 환자 인구 연령에 적합한 치료 전략이 애매 남아있다. 자궁 내 염증은 극단적 인 미숙아에서 매우 일반적인 3 복잡한 태아 - 모체 - 태반 염증 폭포를 포함한다. 자궁 내 감염은 흔히 무증상이다. 급성 염증, 또는 조직 학적 융 모양 막염과 일치하는 특정 태반 연구 결과는, 태아 염증 반응의 주요 결정 요인이며, 조산 3-5과 관련된 뇌 손상과 일치합니다. 사실, 태아 염증 반응은 조산의 장기 성과에 대한 별개의 임상 적 의미를 가지고있다. 재태 연령 (SGA) 또는 사람 감염을 경험하기위한 작은 유아 신경 학적 결손의 3,4에 매우 취약하다. 융 모양 막염은 전형적인 병리학 적 진단 다음 조산이다 <sup&gt; 6, 7, 및 조직 학적 검사는 매우 조산 4 태어난 영아에서 태반의 70 %에서 염증의 징후를 보여준다. 또한, 융 모양 막염는 2 년 8에서인지 장애와 연관되어있다. 매우 조기 태어난 신생아의 태반에서 모체의 혈관 underperfusion의 증거는 어린 시절 9 뇌성 마비와 연관되어있다. 융 모양 막염 및 태반 관류 결함의 시너지 효과는 물론 나이 10, 11 2 년에이 환자 집단에서 비정상적인 신경 학적 결과의 현저하게 높은 위험에 의해 설명된다. 병원체에 의한 염증과 관련된 인간의 전신 태반 관류 결함 및 융 모양 막염을 모방하기 위해, 우리는 쥐의 내 양수 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)과 결합 산전 일시적인 전신 저산소 - 허혈 (TSHI)의 모델을 개발했다. 우리의 목표는, 자궁 내 염증을 포함하는 단독 쥐 12-16에서 TSHI 우리의 모델을 적용하는 것이 었습니다조산과 관련된 중추 신경계 손상의 임상 모델링을 용이하게한다. TSHI 혼자 희 돌기 혈통 세포, 대뇌 피질의 신경 세포의 지속적인 손실을 공개했다, 태아 뇌 손상 (16)과 일치 부상 등급 패턴으로 이어지는 진보 허혈성 간격으로, 세포 사멸을 증가하고, 염증성 사이토 카인의 수준을 상승. 그들은 17 ~ 19 나이이 모델의 허혈성 구성 요소에 대한 수정은 또한 쥐의 메모리 인코딩, 단기 및 장기 기억과 온화한 근골격계 변경에 적자를 증명하고있다. 사실, 우리는 이전에 TSHI + LPS의 조합이 희소 돌기 아교 세포 및 신경 세포의 손실, 축삭 손상, 세포의 염증과 기능 이상 (20)를 포함 나서도 EoP의 병태 생리 학적 특징을 되풀이되었습니다 것을 증명하고있다.

<table><tbody><tr><td>Saline Solution, 0.9%</td><td>Sigma</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>LPS 011B4</td><td>Sigma</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Evan&#039;s Blue Dye</td><td>Sigma</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Surgical gloves</td><td>Biogel</td><td>40870</td><td></td></tr><tr><td>OR Towels</td><td>Cardinal Health</td><td>287000-008</td><td>Sterile</td></tr><tr><td>PDI Alcohol Prep Pads</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>Mini Arco Rechargeable Clippers</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>CL8787</td><td></td></tr><tr><td>Betadine surgical scrub</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Eye Lubricant</td><td>Refresh Lacri Lube</td><td>00023-0312</td><td></td></tr><tr><td>Blunt Forceps</td><td>Roboz</td><td>RS-8100</td><td></td></tr><tr><td>Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-6808</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>F.S.T.</td><td>14002-16</td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>BD</td><td>309628</td><td>1 ml</td></tr><tr><td>Needle</td><td>BD</td><td>305122</td><td>25G 5/8</td></tr><tr><td>Needle</td><td>BD</td><td>305128</td><td>30G 1</td></tr><tr><td>Cotton-tipped Applicators</td><td>Fisherbrand</td><td>23-400-114</td><td>Small, 6 inch sterile</td></tr><tr><td>Cotton Gauze Sponge</td><td>Fisherbrand</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Needle Holders</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS600109</td><td>12.5 CM STR</td></tr><tr><td>Vessel Clips</td><td>Kent Scientific Corp.</td><td>INS600120</td><td>30G Pressure</td></tr><tr><td>3-0 Perma Hand Silk Sutures</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td>Black braided, 3-0 (2 metric), 18&quot;, non-absorbable,&amp;nbsp; PS-1 24 mm needle, 3/8 circle</td></tr><tr><td>Insulin Syringes</td><td>BD</td><td>328438</td><td>0.3 cc 3 mm 31G</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lithium Carbonate</td><td>Acros Chemicals</td><td>554-13-2</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Microscope Slides</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Leica</td><td>3801521</td><td>Surgipath Gill II Hematoxylin</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Leica</td><td>3801601</td><td>Surgipath Eosin</td></tr><tr><td>Xylenes</td><td>Fisherbrand</td><td>X3S-4</td><td>Histological Grade</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisherbrand</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Coverglass</td><td>Fisherbrand</td><td>12-548-5P</td><td>Fisher Finest Premium Coverglass</td></tr></tbody></table>

modeling encephalopathy of prematurity using prenatal hypoxia-ischemia with intra-amniotic lipopolysaccharide in rats

미숙아 뇌증 (나서도 EoP)이 가장 좋은 사전 번역 목표에. 조산과 관련된 이상이 중추 신경계 (CNS)를 포괄하는 용어이며, 조산과 관련된 뇌 손상에 대한 새로운 치료 전략을 발견, 나서도 EoP의 전임상 모델은 유사한 메커니즘을 포함해야 산전 글로벌 부상으로 인간의 관찰과 모성 - 태반 - 태아 시스템의 여러 구성 요소를 포함한다. 이상적으로, 모델은 성숙 동물에 기능 적자의 비슷한 스펙트럼을 생산하고 병태 생리의 여러 측면을 요점을 되풀이한다. 초기 조산의 병원체에 의한 염증과 관련된 인간의 전신 태반 관류 결함, 태반 underperfusion 및 / 또는 융 모양 막염을 모방하기 위해, 우리는 내 양수 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)과 결합 산전 일시적인 전신 저산소증 - 허혈 (TSHI)의 모델을 개발했다. 임신 스프 라그 돌리 쥐에서, TSHI 자궁 동맥 폐색 O를 통해N 배아 일 18 (E18)는 태아에 CNS 손상 증가와 연관된 그레이딩 태반 underperfusion 결함을 유도한다. 내 양수 LPS 주사와 결합하면 태반 염증이 증가하고, 중추 신경계 손상은 관련 백질, 보행 및 이미징 이상으로 복잡해집니다. 태아 TSHI 및 TSHI + LPS 산전 모욕은 신경 세포, 희소 돌기 아교 세포와 축삭, 서브 플레이트의 손실, 매우 태어난 아이들에서 관찰 된 것과 모방 성인 동물의 기능 적자의 손실을 일으키는 원인이되는 자궁 모욕을 recapitulating 포함 있어서는 Eop 모델의 기준을 몇 가지 충족 조기. 또한,이 모델은 발산 부상 유형에 의해 유도 된 염증의 해부 수 있습니다.

E18에서 TSHI + LPS에 이어, 헤 마톡 실린과 에오신 염색 중요한 병리학 태반 둘 이상 (도 1) 및 뇌 (도 2)을 보여준다. E19과 E21에 검사의 태반은 탈락과 미로에 걸쳐 미세 출혈 및 괴사와 심하게 부종이다. 중요한 염증성 침윤 및 증가 된 혈관도 관찰된다. (P2)에 조사 뇌는 뇌실 공개뿐만 아니라 흰색 물질과 서브 플레이트 신경 세포의 손실은 가짜에 비해. 이전에, 우리는 TSHI + L...

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Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats

Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

Encephalopathy of prematurity (EoP) is a term that encompasses the central nervous system (CNS) abnormalities associated with preterm birth. To best ...

modeling-encephalopathy-prematurity-using-prenatal-hypoxia-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K 조회수.  University of New Mexico. Encephalopathy of prematurity encompasses the central nervous system abnormalities associated with injury from preterm birth. This report describes a clinically relevant rat model of in utero transient systemic hypoxia-ischemia and intra-amniotic lipopolysaccharide administration (LPS) that mimics chorioamnionitis, and the related impact of infectious stimuli and placental underperfusion on CNS development.

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Mouse Models of Periventricular Leukomalacia

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature infants and the most common antecedent of cerebral palsy. PVL is characterized by periventricular white matter damage with prominent oligodendroglial injury. Hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation are the primary causes of PVL. We use P6 mice to create models of neonatal brain injury by the induction of hypoxia/ischemia with or without systemic infection/inflammation with unilateral carotid ligation followed by exposure to hypoxia with or without injection of the endotoxin lipopolysaccharide (LPS). Immunohistochemistry of myelin basic protein (MBP) or O1 and electron microscopic examination show prominent myelin loss in cerebral white matter with additional damage to the hippocampus and thalamus. Establishment of mouse models of PVL will greatly facilitate the study of disease pathogenesis using available transgenic mouse strains, conduction of drug trials in a relatively high throughput manner to identify candidate therapeutic agents, and testing of stem cell transplantation using immunodeficiency mouse strains.

We established mouse models of periventricular leukomalacia (PVL), the predominant brain injury in premature infants characterized by periventricular white matter lesions. Hypoxia/ischemia with/without systemic infection are the primary causes of PVL. Unilateral carotid ligation and hypoxia exposure with/without lipopolysaccharide injection creates PVL-like lesions in P6 mice.

Periventricular Leukomalacia의 마우스 모델

We describe a protocol for establishing mouse models of periventricular leukomalacia (PVL). PVL is the predominant form of brain injury in premature ...

연구

신경과학

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

Perinatal 국소 빈혈의 Hypoxic 허혈성 뇌증 모델

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

생물학

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

신생아 저산소 - 허혈성 뇌증의 돼지 모델

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

의학

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI brain injury by studying neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated (i.e., normal) mice. During the study, Rice-Vannucci&#39;s method was used to induce neonatal HI brain damage in postnatal day 7-10 (P7-10) mice. The HI operation was performed on the pups by unilateral carotid artery ligation and exposure to hypoxia (8% O2 and 92% N2 for 90 min). One week after the operation, the damaged brains were evaluated with the naked eye through the semi-transparent skull and were categorized into subgroups based on the absence (&#34;no cortical injury&#34; group) or presence (&#34;cortical injury&#34; group) of cortical injury, such as a lesion in the right hemisphere. On week 6, the following neurobehavioral tests were performed to evaluate the cognitive and motor functions: passive avoidance task (PAT), ladder walking test, and grip strength test. These behavioral tests are helpful in determining the effects of neonatal HI brain injury and are used in other mouse models of neurodegenerative diseases. In this study, neonatal HI brain injury mice showed motor deficits that corresponded to right hemisphere damage. The behavioral test results are relevant to the deficits observed in human neonatal HI patients, such as cerebral palsy or neonatal stroke patients. In this study, a mouse model of neonatal HI brain injury was established and showed different degrees of motor deficits and cognitive impairment compared to non-operated mice. This work provides basic information on the HI mouse model. MRI images demonstrate the different phenotypes, separated according to the severity of brain damage by motor and cognitive tests.

We performed unilateral carotid artery occlusion on postnatal day 7-10 CD-1 mouse pups to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of HI brain injury. We studied neurobehavioral functions in these mice compared to non-operated normal mice.

신생아 Hypoxic-허 혈 성 뇌 손상의 마우스 모델에서 Neurobehavioral 평가

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies of this phenomenon have been performed in either models with severe intrauterine ischemia or models with gradient degree of intrauterine hypoperfusion. No study has been performed in a model on uniform mild intrauterine hypoperfusion (MIUH). Two models have been used for studies of MIUH: a model based on suture ligation of either side of the arterial arcade formed with the uterine and ovarian arteries, and a transient model based on clipping the bilateral ovarian arteries and aorta having patency. Those two rodent models of MIUH have some limitations, e.g., not all fetuses are subjected to MIUH, depending on their position in the uterine horn. In our MIUH model, all fetuses are subjected to a comparable level of intrauterine hypoperfusion. MIUH was achieved by mild stenosis of all four arteries feeding the uterus, i.e., the bilateral uterine and ovarian arteries.
Arterial stenosis was induced by metal microcoils wrapped around the feeding arteries. Producing arterial stenosis with microcoils allowed us to control, optimize, and reproduce decreased blood flow with very little inter-animal variability and a low mortality rate, thus enabling accurate evaluation. When microcoils with an inner diameter of 0.24 mm were used, the blood flow in both the placenta and fetus was mildly decreased (approximately 30% from the pre-stenosis level in the placenta). The offspring of our MIUH model clearly demonstrates long-lasting alterations in neurological, neuroanatomical and behavioral test results.

Mild intrauterine hypoperfusion was produced by artery stenosis with metal microcoils wrapped around the uterine and ovarian arteries in rats at embryonic day 17. This procedure produced prenatal hypoperfusion and intrauterine growth restriction.

Microcoil 협와 가벼운 자궁내 Hypoperfusion의 쥐 모델

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for infants with the neurological sequela of prematurity. Ferrets are ideal candidates for modeling the preterm human brain, as they are born lissencephalic and develop gyrencephalic brains postnatally. At birth, ferret brain development is similar to a 13 week human fetus, with postnatal-day (P) 17 kits considered to be equivalent to an infant at 32&#8211;36 weeks&#39; gestation. We describe an injury model in the P17 ferret, where lipopolysaccharide administration is followed by bilateral cerebral ischemia, hypoxia, and hyperoxia. This simulates the complex interaction of prolonged inflammation, ischemia, hypoxia, and oxidative stress experienced in a number of neonates who develop brain injury. Injured animals display a range of gross injury severity, with morphological changes in the brain including narrowing of multiple cortical gyri and associated sulci. Injured animals also show slowed reflex development, slower and more variable speed of locomotion in an automated catwalk, and decreased exploration in an open field. This model provides a platform in which to test putative therapies for infants with neonatal encephalopathy associated with inflammation and HI, study mechanisms of injury that affect cortical development, and investigate pathways that provide resilience in unaffected animals.

The method describes inflammation-sensitized hypoxic-ischemic and hyperoxic brain injury in the P17 ferret to model the complex interaction between prolonged inflammation and oxidative brain injury experienced in a number of late preterm infants.

염증 과민성 후기 조저산소-허혈성 뇌 손상의 페렛 모델

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

Modeling Neonatal Intraventricular Hemorrhage Through Intraventricular Injection of Hemoglobin

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and lifelong neurological deficits. While PHH can be treated by temporary and permanent cerebrospinal fluid (CSF) diversion procedures (ventricular reservoir and ventriculoperitoneal shunt, respectively), there are no pharmacological strategies to prevent or treat IVH-induced brain injury and hydrocephalus. Animal models are needed to better understand the pathophysiology of IVH and test pharmacological treatments. While there are existing models of neonatal IVH, those that reliably result in hydrocephalus are often limited by the necessity for large-volume injections, which may complicate modeling of the pathology or introduce variability in the clinical phenotype observed.
Recent clinical studies have implicated hemoglobin and ferritin in causing ventricular enlargement after IVH. Here, we develop a straightforward animal model that mimics the clinical phenotype of PHH utilizing small-volume intraventricular injections of the blood breakdown product hemoglobin. In addition to reliably inducing ventricular enlargement and hydrocephalus, this model results in white matter injury, inflammation, and immune cell infiltration in periventricular and white matter regions. This paper describes this clinically relevant, simple method for modeling IVH-PHH in neonatal rats using intraventricular injection and presents methods for quantifying ventricle size post injection.

We present a model of neonatal intraventricular hemorrhage using rat pups that mimics the pathology seen in humans.

헤모글로빈의 뇌실내 주사를 통한 신생아 뇌실내 출혈 모델링

Neonatal intraventricular hemorrhage (IVH) is a common consequence of premature birth and leads to brain injury, posthemorrhagic hydrocephalus (PHH), and ...

Early Pathological and Magnetic Resonance Detection of Cerebral Injury Using a Rat Model of Neonatal Hypoxic Ischemic Encephalopathy

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term neurodevelopmental outcomes. Early diagnosis is critical to identifying infants who may benefit from intervention; however, early diagnosis relies heavily on clinical criteria. No molecular or radiological tests have shown promise in detecting early cerebral injury. Studies have shown that magnetic resonance imaging (MRI) can show changes in both blood flow/ischemia and metabolic disruption. However, they have all been used to evaluate the secondary phase of the disease (&gt;12 h) after the onset of the injury. Early diagnosis is critical to rapidly starting therapeutic hypothermia in eligible infants, which is currently recommended to be initiated within 6 h of birth. The rat model of hypoxic-ischemic injury was developed in 1981 and has been validated and used extensively to study changes in brain perfusion, cerebral injury markers, and morphology. However, it has primarily been used as a "late model", evaluating injury several days after the initial ischemic insult. The model has been known to have poor sensitivity in evaluating reliable and reproducible early cerebral changes. The objective of this study was to develop a reliable model to study early gross morphological and radiological markers of HIE using pathological staining and cerebral magnetic resonance imaging/magnetic resonance spectroscopy.

<meta charset="utf8"></head><body>신생아 저산소성 허혈성 뇌병증의 쥐 모델을 사용한 뇌 손상의 조기 병리학적 및 자기 공명 감지

The present protocol describes a rodent model of newborn hypoxic-ischemic injury for identifying early changes in cerebral tissue by gross morphology and magnetic resonance imaging. This has benefits over existing models, which can be used to study late injury but do not allow the evaluation of reproducible early changes.

신생아 저산소성 허혈성 뇌병증의 쥐 모델을 사용한 뇌 손상의 조기 병리학적 및 자기 공명 감지

Perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) is an acute disease that may afflict newborns, resulting in variable long- and short-term ...

Modeling Posthemorrhagic Hydrocephalus of Prematurity in Rats

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) is a serious sequela of severe intraventricular hemorrhage (IVH) in very preterm infants less than 32 weeks gestational age (GA). PHHP is defined by the accumulation of cerebrospinal fluid (CSF) associated with clinical symptoms of elevated intracranial pressure (ICP). Infants with PHHP suffer lifelong shunt dependence, with half requiring repeat surgery in the first year of life and many requiring multiple additional surgeries throughout the lifespan. Prenatal chorioamnionitis predisposes preterm infants to severe IVH and the need for surgical treatment of PHHP trends with neonatal sepsis. These clinical features suggest that systemic inflammation is an integral component of PHHP pathophysiology. 
Here, we define an animal model that recapitulates all clinical aspects and essential features of PHHP in rats. The goal of this protocol is to illustrate how in utero chorioamnionitis and postnatal IVH using lysed red blood cells can be combined to yield PHHP. This preclinical approach yields progressive macrocephaly and domed craniums, elevated intracranial pressure, and ventriculomegaly that can be detected via magnetic resonance imaging (MRI) or via microscopy. In addition to sustained disruption in CSF dynamics, rats also have cognitive delay and functional disability into adulthood. Accordingly, this preclinical platform facilitates unique and unparalleled translational studies of PHHP that can incorporate molecular, cellular, biochemical, histologic, imaging, and functional outcome measures. It can also be used for rigorous analysis of the choroid plexus, ependymal motile cilia, and glymphatic system in parallel. Last, it can also be an invaluable preclinical tool for the investigation of novel surgical intervention strategies and non-surgical therapeutic approaches for the treatment of hydrocephalus.

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) can be modeled in neonatal rats by combining chorioamnionitis and intraventricular hemorrhage. The combination of these prenatal and postnatal events accurately recapitulates the clinical hallmarks of PHHP, including macrocephaly, ventriculomegaly, and elevated intracranial pressure, through the lifespan.

Posthemorrhagic hydrocephalus of prematurity (PHHP) is a serious sequela of severe intraventricular hemorrhage (IVH) in very preterm infants less than 32 ...

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

요약

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신생아 저산소성 허혈성 뇌병증의 쥐 모델을 사용한 뇌 손상의 조기 병리학적 및 자기 공명 감지

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Modeling Posthemorrhagic Hydrocephalus of Prematurity in Rats