이 프로토콜은 중요하고 지속적인 부상을 초래하는 페렛에서 염증 민감 조기 뇌 손상의 첫 번째 모델을 제공하기 때문에 중요합니다. 이 기술은 조기 인간 유아에서 본 뇌 손상의 종류에 기여 하기 위해 생각 트리거 및 생화 확 적인 메커니즘의 많은 통합 하는 장기간 된 모욕을 포함. 뇌 측정 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 연구 과학자 인 카일리 코리와 학부 생 올리비아 화이트가 될 것입니다.
수술을 시작하기 30 분 전에, 부상 그룹의 키트에 킬로그램 LPS IP 당 3 밀리그램과 동물을 제어하기 위해 그램 당 세 마이크로 리터의 멸균 식염수의 동등한 볼륨을 관리 할 수 있습니다. 절차를 시작하기 전에 작은 동물 클리퍼를 사용하여 페렛의 복부 목 부위의 모든 머리카락을 직사각형 패턴으로 제거하고 피부를 염색하거나 열 발진을 일으키지 않도록주의하십시오. 면도 부위에 국소 마취를 투여하고 포비도네 요오드와 70%의 에탄올을 번갈아 가며 피부를 소독합니다.
발가락 핀치에 의해 적절한 수준의 진정을 확인한 후, 목 부위를 노출시키는 멸균, 일회용 컷 드레이프로 동물을 덮습니다. 양측 경동맥 결찰의 경우, 10번의 메스 블레이드를 사용하여 목 중앙에 1.5센티미터 의 중간선 절개를 하고 미세한 헤모스트와 곡선포스를 사용하여 왼쪽 경동맥까지 무뚝뚝하게 해부합니다. 관련 신경 혈관 번들에서 노출 된 동맥을 해부합니다.
그리고 곡선 미세 집게 한 켤레를 사용하여 동맥 아래에 멸균 5/0 실크 봉합사의 루프 10 센티미터 길이를 전달합니다. 봉합사를 반으로 자르고 두 길이의 봉합사를 단단히 묶어 동맥을 리게이트하고 매듭 사이에 적어도 2 밀리미터를 남깁니다. 봉합사 사이에 왼쪽 경동맥을 옮기고 신경을 그대로 두고 오른쪽의 해부를 반복하는 데 주의를 기울입니다.
오른쪽 경동맥을 멸균 1/8 인치 배꼽 넥타이로 뒤집을 수 있습니다. 그리고 수술 피부 클립으로 상처를 닫습니다. 그런 다음, 동물이 저산소증 전에 모니터링을 통해 적어도 30 분 동안 온도 조절 수조에서 회복할 수 있도록 하십시오.
순차저산소증, 아옥시아 및 저산소증 치료를 위해, 수조 내의 밀폐 챔버에 부상 그룹에 동물을 배치합니다. 챔버 내의 산소 농도뿐만 아니라 적어도 하나의 센티넬 동물의 직장 온도를 지속적으로 모니터링합니다. 가습된 산소와 91%의 질소로 챔버를 플러시하고 챔버 크기에 따라 분당 3~5리터의 유량을 유지합니다.
챔버의 산소 농도가 9%에 도달하면 30분 동안 계속 전달됩니다. 저산소증 처리의 끝에, 가스 공급을 80% 가습산소및 20%의 질소로 전환합니다. 30분 동안 의아옥증을 마십후, 챔버를 밀봉하고 다시 9 %의 가습 산소로 플러시하기 전에, 실내 공기와 평형하여, 노목시에 더 빨리 도달 할 수 있도록 챔버를 엽니 다.
저산소증의 이 두 번째 라운드 동안 모든 동물을 지속적으로 모니터링하여 최면을 표시하는 동물을 기록합니다. 일단 챔버에 있는 산소의 농도가 9%에 도달하면, 30 분 동안 저산소증 처리를 계속합니다. 처리의 끝에서, 오른쪽 경동맥에서 배꼽 테이프를 확인하고 풀어 곡선 포셉을 사용했습니다.
수술 용 피부 클립으로 상처를 다시 닫습니다. 그런 다음 간호 및 회복을 위해 60 분 동안 모든 키트를 질에 반환하십시오. 회복 기간이 끝나면 부상당한 동물을 6시간 동안 37~40도의 수조에 반환하여 필요에 따라 수온을 조정하여 섭씨 36~37도의 직장 온도를 유지합니다.
그런 다음 키트를 다시 질로 돌려보십시오. 적절한 실험 적 끝점에서 뇌 수확 및 고정 후, 각 뇌의 등쪽 및 복부 측면에 전자 캘리퍼의 팁을 배치하여 각 부상과 부상이없는 뇌의 높이를 측정합니다. 각 뇌의 폭을 측정하고 각 뇌의 무게를 측두엽의 가장 측면 부분에 캘리퍼의 팁을 배치합니다.
칼리퍼를 사용하여 종방향 균열, 해당 황액의 가장 뚜렷한 부분의 시작과 끝에서 모든 설시를 측정하고, 각 해당 자이루스의 가장 넓은 양상에서 모든 자이를 측정한다. 그런 다음, 칼리퍼의 한 끝을 소뇌의 가장 후방 부분에 종방향 균열의 가장 후방 지점에 놓고 캘리퍼의 다른 끝을 소뇌의 가장 후방 부분에 놓아 노출 된 소뇌의 양을 측정합니다. 이 연구에서 모욕에 노출된 6마리의 쓰레기중 34마리의 동물 중 5마리가 중상을 입었으며 4마리의 동물이 심한 부상을 입었습니다.
부상이 증가함에 따라, 현세 및/또는 후두 엽에서 자리의 협항이 관찰되며, 가장 심각한 부상을 입은 동물에서 세로 균열 및 낭포 조직 손실의 더 큰 영역의 관련 황골 단축 및 확대가 관찰됩니다. 반사 테스트 기간 동안 부상당한 동물은 부정적인 지질 택시 작업에서 회전하는 속도가 느립니다. 절벽 우회 작업의 가장자리에서 회전하는 속도가 느리고 오른쪽으로 느린 시간입니다.
좁은 통로에서 부상당한 동물은 컨트롤과 비슷한 평균 속도를 보여주지만 각 달리기 동안 속도 변화가 훨씬 큽합니다. 발과 뒷발 사이의 무게 조정 거리는 부상당한 동물에서 훨씬 더 크며, 4개의 발을 통해 유닛 발 영역당 압력이 적습니다. 오픈 필드에서 부상당한 동물은 총 거리를 줄이고, 더 자주 멈추고, 필드의 중앙에서 훨씬 더 많은 시간을 보내고 코너에서 보내는 시간을 줄입니다.
여기서, 제어 및 부상당한 동물의 대표적인 열지도를 관찰 할 수 있습니다. 동반 신경에서 동맥을 해부하고 가능한 저산소시간을 최대한 허용하십시오. 이 단계는 또한 상해를 유지하면서 동물의 대다수가 살아남을 수 있도록 합니다.
이 절차에 따라, 모든 생화학, 병리학 또는 행동 결과 평가될 수 있습니다., 일반적으로 뇌 손상의 설치류 모델로 제한 되는 평가를 포함 하 여.
