This study was supported by a grant from the Dutch Kidney Foundation (KJPB 08.0003). 
Carolien Rothuizen is acknowledged for her contribution to the study. Hoang Pham is acknowledged for his assistance with the pathology work-up.

모든 실험은 라이덴 대학 의료 센터의 동물 복지위원회에 의해 승인되었다. 1. 동물 준비 및 마취 <ol><li> 3-4%의 이소 플루 란으로 가득 연속 마취 유도 챔버에서 마우스 (1-3 개월)를 마취. </li><li> 목 및 전기 면도기를 이용하여 좌측 상부 다리의 내측부의 복부 측면을 면도 모발을 제거 테이프의 조각을 사용한다. </li><li> 두 눈에 눈 연고를 적용합니다. </li><li> 코 환기 마스크가 고정되는 가열 담요에 동물을 배치합니다. 접착 테이프를 사용하여 코 마스크에 머리를 흥분시키는. <ol><li> 다음 흐름에 산소가 풍부한 공기 세트를 사용하여 1.5 내지 2.0 %의 농도로 이소 플루 란을 전달 : 공기 0.3 L / min로 100 % 산소 / 분 0.2 L. 마취 깊이를 평가하고 필요한 경우 이소 플루 란의 농도를 조정 발가락 사이 피부 핀치. </li></ol></li><li> 동물을 흥분시키는누운 자세에서 약 37 ° C로 설정되어 모든 사지에 접착 테이프로 가열 담요. </li><li> 0.1 mg을 투여로 염화나트륨 0.9 %에 용해 된 부 프레 노르 핀을 주입 / 동물의 측면에서 0.9 % NaCl을 멸균 피하 0.5ml를 함께 kg이다. </li><li> 준비된 지역에 클로르헥시딘 팅크 0.5 %를 적용합니다. </li></ol> 2. 피부 절개 <ol><li> 외과 의사를 향해 머리를 가진 현미경으로 동물을 배치합니다. </li><li> 마이크로 가위를 사용하여 복부 목의 중간 선에서 약 1.5 cm의 종 절개를합니다. </li><li> 집게로 침샘을 잡고는 부분적으로 상처 밖에까지 두개쪽으로 오른쪽 침샘을 대체. </li></ol> 3. 해부 및 정맥 준비 <ol><li> 확인하고 퉁명스럽게 확산하여 혈관 주위 조직으로부터 완전히 오른쪽 외부 경정맥의 dorsomedial 분기를 해부 단지longside 및 혈관의 방향. </li><li> 해부 정맥 주위에 루프 (10.0 봉합)을 배치하고 잠​​금없이 하나의 매듭을 적용합니다. </li></ol> 4. 흉쇄 근육을 제거 <ol><li> 집게를 사용하여, 퉁명스럽게 그 국경을 따라 확산에 의해 그 주변에서 오른쪽 흉쇄 근육을 해부하다. 격리 된 근육에서 열린 포셉 한 쌍을 놓고는 6.0 봉합사와 근위 및 원위 결찰. 이어서, cauterizer를 사용 근육 절개. </li></ol> 5. 해부 및 경동맥 준비 <ol><li> 확인하고 집게를 사용하여 오른쪽 경동맥을 해부하다. 동맥의 조작에 도움이 동맥 주위에 6.0 봉합 실을 배치합니다. </li><li> 같은 말단 및 근위 가능한 혈관 클램프를 적용합니다. </li><li> 전문 마이크로 가위를 사용하여 약 1mm의 동맥의 중간에 세로 절개를합니다. </li><li> 린스헤파린 용액과 동맥 [100 IU / ㎖] 선박이 피가 깨끗해질 때까지. </li><li> 측정 및 폭을 혈관 클램프 [1.1 mm]을 일치시킬 필요 절개의 길이를 조정한다. </li></ol> 정맥 6. 내고 <ol><li> 근위 이미 준비 정맥의 혈관 클램프를 적용하고 정맥 주위 봉합 실을 배치합니다. </li><li> 이전에 배치 된 10.0 봉합사를 사용하여 가능한 한 원심 정맥을 봉합 실에 배치하고 결찰하는 haemostat를 사용하여 정맥에 부드러운 꼬리 견인을 적용합니다. </li><li> 결찰에 단지 근위 가위를 사용하여 정맥을 잘라. </li><li> 혈관 집게를 사용하여 부드럽게 혈관의 내강을 열고 헤파린 솔루션 [100 IU / ㎖]로 씻어. </li></ol> 문합 제 1 항에 창조 <ol><li> 여섯 O &#39;에서 봉합 다음에 12시 위치에 2 평방 노트를 사용하여 중단 된 봉합사 (10.0)과 동맥 정맥을 연결합니다시계 위치입니다. 그것은 자신의 축 주위를 회​​전 할 수없이 동맥에 정맥을 연결해야합니다. 외과 적 노출을 개선시키기 위해 동물을 돌린다. </li><li> 정맥 주위 봉합 실을 놓고 haemostat를 사용하여 부드러운 측면 견인을 적용합니다. </li><li> 동일한 단속 봉합을 사용하여 문합 표시 복부 측에 약 3-4 봉합 부가 배치하여 문합을 완료. </li></ol> 8. 헤파린 관리 <ol><li> 가열 담요를 180 ° 회전하고 왼쪽 상단 다리에 현미경을 집중한다. </li><li> 상부 다리의 중간 부분에 길이 방향으로 실행하고 피부를 통해 볼 수있는 혈관 구조를 찾아 대퇴 정맥 / 동맥 / 신경 다발을 확인합니다. 직접 길이 방법으로 대퇴 정맥으로 약 1cm의 미세 가위와 절개를합니다. </li><li> 조심스럽게 대퇴 정맥의 혈관 주위 조직을 해부하고 선량 오에 헤파린을 주입대퇴 정맥에 0.2 IU / g의 체중 바. </li></ol> 문합 제 2 항 만들기 <ol><li> 목 영역으로 돌아가 정맥 주위에 배치 된 봉합 실을 제거합니다. </li><li> 연속적으로 정맥을 통해 다시 경동맥 아래에있는 경동맥 아래를 통과 봉합 실 (6.0)을 놓습니다. (그림 1L) </li><li> 정맥 혈관 클램프를 제거합니다. </li><li> 다음으로, 동시에 혈관 클램프를 왜곡하여 절반 완료 동정맥루를 시계 방향 방식으로 경동맥의 축을 따라 180도 트위스트와 봉합 실의 끝 부분에 중간 견인을 적용합니다. </li><li> 단계 7.2에서 설명하는 것과 같은 방식으로 문합을 완료합니다. </li></ol> 10. 혈관 클램프 제거 <ol><li> 봉합 실을 제거하고 혈관이 180 ° 시계 반대 방향으로 회전 클램프. </li><li> 근위 혈관 클램프 다음 말초 혈관 클램프를 제거합니다. </li> &lt;리는&gt; 부드럽게 혈관 집게로 정맥 유출 관을 폐색하여 문합의 개통을 평가합니다. 특허 문합 경우, 사전 흡장 정맥 절에서는 박동성 방식으로 확장됩니다. 원래의 해부학 적 위치하여 집게에 대한 권리 침샘을 변경합니다. </li></ol> 11. 피부 폐쇄 및 수술 후 케어 <ol><li> 중단 봉합 (6.0)와 상부 다리의 피부를 닫습니다. </li><li> 중단 봉합 (6.0)과 목의 피부를 닫습니다. </li><li> 가열 블랭킷으로부터 동물을 제거하고 0.5 ml의 0.9 % 염화나트륨을 피하 주사. </li><li> 가열 램프 가열 어두운 새장에 동물을 놓고 완전히 복구 할 수 있습니다. 동물이 완전히 회복되지 않는 경우,이 때문에 외과 영역에서 출혈에 혈역학 적 충격으로 고생하지 않도록. 이러한 부어 목 혈액의 누출로 표지판을 찾아보십시오. </li><li> bupr의 첫 번째 주사 후 약 6 시간 후enorphine, 추가로 72 시간 동안 적절한 진통을 제공하기 위해, 제조자에 의해 권장되는 투여 량의 부 프레 노르 핀 피하의 서방 성 제제의 단일 투여 량을 주입. </li></ol> (12) 조직 수확 <ol><li> 복강 투여 미다 졸람 (5 ㎎ / ㎏)을 포함 마취-혼합물, 메데 토미 (0.5 ㎎ / ㎏)과 펜타닐 (0.05 ㎎ / ㎏)과 동물을 마취. </li><li> 비 가열 된 실리콘 매트에 그것의 발과 뺨을 통해 바늘을 삽입하여 앙와위에서 동물을 흥분시키는. </li><li> 마이크로 가위와 목에 흉터를 통해 약 1.5-2.0 cm의 절개를합니다. </li><li> AVF를 해부하고, 쉽게 식별하기 위해 proximal-, 말초 동맥 및 정맥 유출 기관 주위 봉합 스레드 (6.0)를 배치합니다. </li><li> 프로토콜의 섹션 10.3에서 설명하는대로 AVF의 개통을 평가합니다. </li><li> 내측 유 개복술을 수행하여 복강을 열고마이크로 가위를 노래. <ol><li> 쇄골 라인에 꼬리 쪽부터 가위를 사용하여 왼쪽과 오른쪽 복부 갈비뼈를 잘라. 마이크로 가위를 사용하여 집게를 사용하여 두개쪽으로이 부분을 복부 흉곽의 중간 부분에 부착 이후에 대체되는 다이아 프램을 가로로 쪼개다. </li><li> 열등한 대정맥 정맥을 찾아 마이크로 가위로를 가로로 쪼개다. </li></ol></li><li> 좌심실에서 바늘 23 게이지 바늘을 삽입하고 intravasal 유체가 거의 깨끗해질 때까지 약 100 mmHg로의 압력에서 PBS로 관류. </li><li> 니들을 제거하지 않고, 현재 약 100 mmHg의 압력에서 10 분 동안 4 % 포르말린 관류. </li><li> 마이크로 가위로 동맥과 정맥 모두에 병행하여 AVF 절제 및 4 % 포르말린 용액 O / N에서 잠수함. </li></ol> 13. 조직 임베딩 및 단면 <ol><li> 제조의 protoco에 따라 파라핀하기 위해 조직을 처리엘. 프로토콜은 다음의 구성으로 적용 : <ol><li> RT에서 1 시간 동안 70 % 에탄올에 담가. 배를 반복합니다. </li><li> 실온에서 1 시간 동안 에탄올 96 %에 빠져. 배를 반복합니다. </li><li> 실온에서 1 시간 동안 에탄올 99.5 %에 빠져. 한 번 반복합니다. </li><li> 실온에서 1.5 시간 동안 에탄올 99.5 %에 빠져. </li><li> RT에서 1 시간 동안 100 % 크실렌 빠져. 한 번 반복합니다. </li><li> 62 ° C에서 1 시간 동안 Parafin에 빠져. 배를 반복합니다. </li></ol></li><li> 정맥 유출 관이 삽입 카세트에 수직 배향되도록 파라핀에 AVF를 포함. </li><li> 마이크로톰을 사용하여 각각 5 μm의 두께 부 (30) (12)로 이루어지는 직렬 섹션을 생성한다. 그런 다음 각 직렬 섹션의, 문합에 가장 가까운 지역부터 시작 질서 열두까지 위치 하나에서 시작하는 단일 장착 유리에 한 섹션을 배치합니다. </li></ol>

<ol>
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저자는 공개 아무것도 없어.

AVF는 혈액 투석 치료의 아킬레스로 간주됩니다. 불행하게도, AVF는 여전히 실패 8-10의 높은 숫자에서 겪고있다. 기본 메커니즘에 대한 광범위한 연구에도 불구하고, 정확한 병태 생리는 알려져 있지 않다. AVF 실패 수많은 쥐 모델은 이미 문헌 2,3,11,12에 기재되어있다. 그러나, 이러한 모델 중 어느 것도 대부분의 임상 상황에서 사용되는 동맥 측 문합 구성에 정맥 끝을 통합하지 않습니다. 얻어진 혈역학 프로필 혈관 재 형성에 중요한 역할 때문에 매우 적합하다. 또한, 모델의 일부 임상에서 사용되지 동맥 및 정맥 2,11 간의 연결 합성 커프를 사용했다. 임상 적 관련성을 개선하기 위해, 우리는 따라서 동맥 측 문합에 일방적 정맥 끝이 jugu의 지점 사이에 작성된 쥐 모델을 개발중단 봉합 6 LAR 정맥과 경동맥. 이 모델에서 중요한 histomorphological 변화는 외부를 포함하여 궁극적으로 AVF 실패로 이어지는, 리모델링 및 진보적 내막의 증식이 관찰되었다. 수술의 중요한 측면은 마취 프로토콜이다. 이 마취의 장기간를 얻기위한 안전하고 쉬운 방법으로는, 이소 플루 란 흡입 마취를 사용하는 것이 좋습니다. 후자는 전체 절차는 3 시간까지 걸릴 수있는 트레이닝 단계에 특히 중요하다. 동정맥루 이송 유출 정맥에 필요한 공간을 생성하기 위해, 동측 흉쇄 근육 절개 할 필요가있다. 수술하는 동안 처리 용기에 대하여, 혈관 해부 집게를 사용하여 평활하게 수행되어야한다. 전문 혈관 직선 집게의 사용은 연구입니다때문에 둥근 팁을 직접 취급 및 혈관의 조작 그들은 더 정밀도를 제공하고 덜 기계적 손상을 생산하는 한 ecommended. 봉합 실의 사용은 지혈 결합 용기 루프는이 절차는 직접적인 도움없이 수행 될 수 있으므로 매우 중요하다 제 손으로 사용할 때 최적의 방법으로 조직을 제시에서 또한 안전 조직 처리에 도움을 수있다. 의심 할 여지없이, 절차의 가장 어려운 단계는 동맥과 정맥 사이의 봉합 게재 위치입니다. 이 AVF의 조기 실패로 이어질 수있는 문 합부의 축소로 이어질 것 같이주의를, &quot;앞&quot;- 측에 문합의 &quot;뒤로&quot;- 측을 봉합하지 않도록주의해야합니다. 이를 방지하기 위해, 그들을 분리하기 위해 용기의 두 벽 사이의 혈관 핀셋의 선단 위치. 기술적 어려움은이 모델의 제한으로 간주 될 수있다. 그러나, 우리는 일 생각하지 않습니다이 과정에서 현재 가장 널리 3,6를 사용하는 모델보다 더 도전입니다. 계산 된 표본 크기는 동물 사이뿐만 아니라 개입의 &#39;힘&#39;의 변화에​​ 의존하지 않는 한 그것은 미래 연구를위한 표본의 크기에 일반적인 발언을하기는 어렵습니다. 우리는 (때문에 AVF의 기술적 인 실패의 연구에서 드롭 마우스 제외) 약 10 생쥐의 그룹 크기가 AVF 실패의 특정 유전자의 역할에 초점을 연구하기에 충분해야한다고 추정한다. 최근에, 우리는 13 개조 쥐 AVF에서 엘라스틴의 역할에 대한 연구에서 10 동물의 평균 그룹 크기와 의미있는 결과를 얻을 수 있었다. 우리의 쥐 모델의 한 측면은 추가 논의가 필요합니다. 말기 신장 질환 환자에서 요독 환경이 정맥 내막 hyperplasi을 포함한 혈관 질환의 다수에 기여하는 것으로 알려져있다혈액 투석 접근 수술 14-16로도 이전. 이 본 모델은 요독 환경을 통합하지 않습니다. 따라서, 만성 신부전 (17)의 모델의 결합은 또한 본 뮤린 모델의 유효성을 개선하기 위해 유용한 부가적인 단계가 될 것이다.

기능 혈관 통로 도관은 살아 남기 위해 만성 혈액 투석에 의존 신부전 환자를위한 매우 중요하다. 동정맥루 (AVF)의 건설은 현재 혈관 액세스를 위해 바람직한 선택이 될 것입니다. 그러나 AVF 합병증 만성 혈액 투석 환자의 주요 사망 원인을 구성한다. 광범위한 과학적 노력에도 불구하고, 소설의 어느 것도 AVF 내구성의 상당한 개선 될 않았다 AVF 액세스 관련 합병증을 줄이기 위해 접근합니다. 이 실망 진행의 일부 혈액 투석 액세스 실패의 기본 기전 불완전한 이해에 관한 것이다. 밀접하게 인간의 병리를 모방 AV 접속 실패, 동물 모델의 병태 생리를 해명하기 위해 가장 중요하다. 이러한 관점에서뿐만 아니라 동물 종뿐만 아니라, 문 합부 필요한 항 coagulatory 요법 기간 서지 후 후속공예 계정 하나에주의해야한다. 큰 동물은 새로운 치료 전략을 개발 목표로 개입 연구에 가장 적합한 반면, 뮤린 모델 의한 형질 전환 마우스의 가용성 AV 액세스 실패를 기본 분자 메커니즘에서 더 파악할 수있는 큰 잠재력을 가지고있다. 또한, 마우스의 수많은 큰 동물의 사용과 비교하여 낮은 비용으로 이러한 목적을 위해 사용될 수있다. AVF 장애 제 뮤린 모델 Kwei 및 동부 알.이이 모델 2004에 기술되었다에서 avfs는 경동맥 및 혈관 내 카테터를 사용하는 엔드 투 엔드 방식으로 경정맥을 이용하여 구성 하였다. 엔드 - 투 - 엔드 구성 및 혈관 내 카테터의 존재는 인간에서 avfs이 모델의 유효성을 제한하지만이 모델에서 avfs 초기 정맥 적응을 연구하는 것이 유용 할 수있다. 개선 AVF 모델은 Castier과 등에 의해 소개되었다. (3)하는 말에경동맥 경정맥 측에 접속된다. 그러나, 혈액 투석 환자에서 avfs 보통 동맥 측 정맥 끝 anatomizing 의해 구성된다. 이 유로 (4) 내의 혈역학 적 프로파일을 결정하기 때문에 AVF의 정확한 구성은 AV 액세스 모델의 중요한 특성이다. 후자는 장애 및 내막 증식증 (1H)의 후속 개발 내피 중요한 기여. 인간 6에서 사용 된 바와 같이 새로운 쥐 모델은 최근에 동일한 해부학 적 구성으로 개발되었다. 이 모델에서 AVF 중단 봉합 경동맥 측 외부 경정맥의 분기 단부 anastomosing하여 C57BL / 6 마​​우스에서 생성된다. 본 논문에서는 복잡한 기전을 해명보고자 뮤린 모델의 보급을 촉진하기 위해서,이 모델의 미세 수술 절차에 집​​중혈액 투석 접근 실패.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="697">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:247px;">Dissecting microsocpe</td>
			<td style="width:219px;">Leica</td>
			<td style="width:117px;">M80</td>
			<td style="width:115px;"></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Forceps</td>
			<td>Medicon</td>
			<td>07.61.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vascular forceps</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>JFL-3D.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vascular forceps</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>D-5a.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>SS/45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro scissor 5 mm blade</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro scissor 2 mm blade</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>15000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Scissor</td>
			<td>Medicon</td>
			<td>05.12.21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Clip applier 1</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>CAF-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vascular clamp 1</td>
			<td>S&#38;T</td>
			<td>B-1V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Clip applier 2</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>FE572K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vascular clamp 2</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>FE740K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Hemostatic forceps</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>BH110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10.0 sutures</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>G1117041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">6.0 sutures</td>
			<td>BBraun</td>
			<td>768464</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Cauterizer</td>
			<td>Fine science tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Needle holder</td>
			<td>Medicon</td>
			<td>11.82.18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ocular ointment</td>
			<td>Pharmachemie</td>
			<td>41821101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Chlorhexidine tincture 0,5%</td>
			<td>Leiden University Medical Center</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Heparin</td>
			<td>Leo Pharma</td>
			<td>012866-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Buprenorphin</td>
			<td>RB Pharmaceuticals&#160;</td>
			<td>283732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Isoflurane</td>
			<td>Pharmachemie</td>
			<td>45,112,110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Anesthesia mask</td>
			<td>Maastricht university</td>
			<td>custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Midazolam</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>AAAC6877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dexmedetomidine</td>
			<td>Orion</td>
			<td>141-267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fentanyl</td>
			<td>Bipharma</td>
			<td>15923002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Continuous anaesthetic induction chamber</td>
			<td>Vet-tech solutions</td>
			<td>AN010R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel murine model of arteriovenous fistula failure: the surgical procedure in detail

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the exact pathophysiology remains unknown. In order to unravel the pathophysiology a murine model of AVF-failure was developed in which the configuration of the anastomosis resembles the preferred situation in the clinical setting. A model was described in which an AVF is created by connecting the venous end of the branch of the external jugular vein to the side of the common carotid artery using interrupted sutures. At a histological level, we observed progressive stenotic intimal lesions in the venous outflow tract that is also seen in failed human AVFs. Although this procedure can be technically challenging due to the small dimensions of the animal, we were able to achieve a surgical success rate of 97% after sufficient training. The key advantage of a murine model is the availability of transgenic animals. In view of the different proposed mechanisms that are responsible for AVF failure, disabling genes that might play a role in vascular remodeling can help us to unravel the complex pathophysiology of AVF failure.

문합 (그림 1)의 생성 후, 개통은 곧 혈관 집게로 정맥 유출 관을 폐색에 의해 평가되어야한다. 문합 특허 때, 폐색에 혈관 계통의 근위 명확하게 박동성 방식으로 확장한다. 또한 명백 적외선 투시 효과적으로 혈관 조영술로 함수 (NIRF) (도 2) 근처하여 확인된다. 수술의 실패는 (그림 2)에 도시되어 같은 문합의 폐쇄로 이어질 수 있습니다. 이 오류가 너무 좁 문합 영역 용기 토션 불충분 헤파린 투여 또는 뒷면에 문합의 전면을 연결하는 실수 봉합 위치에 의해 야기 될 수있다. 조직 학적 수준에서 AVF 혈관 리모델링 과정이 모델을 이용하여 연구를 매끄럽게 할 수있다. AVF 혈관 리모델링의 결과로 발생혈류 및 압력 증가. 마우스에서,이 반응은 수술 후 제 2 주 내강 영역의 증가로 이어지는 (예를 들면, 외측으로 개조) 둘레의 증가에 의해 특징된다. 이 두 주 후, 내강 면적은 점진적으로 인해 외부 리모델링과 내막의 지속적인 농축에 정지 감소한다. 이러한 진보적 협착 병변의 형성은 수술 후 사주에 AVF의 50 %의 폐색을 초래한다. 이 단계에서는, 특허 AVF에서 혈관 반응 적절한 분석이 여전히 가능하므로 따라서에서 avfs 수확 최적 시점은 수술 후 이주에있을 것이다. 수술 후 이주의 정맥 유출 기관의 면역 염색에 실패 인간에서 avfs도 7에서 관찰 내막의 세포 구획은 주로 알파 - 평활근 액틴 (α-SMA) 양성 세포 (그림 3)으로 구성되어 있음을 보여준다. 복잡성의 관점에서<html> 미세 수술 절차는, 상기 마우스의 비율 절차의 기술적 장애 이해 할수 현실적이다. 우리의 손에서, 절차의 성공률은 처음에 67 %였다. 하지만, 상기 교육이 비율은 97 %까지 증가 하였다. 고장의 주요 원인은 급성 혈전증 (27 %) 및 ​​anesthesia- 관련 사망 (13 %),이어서 출혈 (60 %)이었다. 충분한 훈련 후 수술을 약 1 시간에 수행 될 수있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/53294/53294fig1.jpg" /> 수술 그림 1. 상세 계획 (A - T). AVF의 성공적인 창조를위한 중요한 단계. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53294/53294fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 2 다시 &quot;SRC =&quot;/ 파일 / ftp_upload / 53294 / 53294fig2.jpg &quot;/&gt; 그림 특허 및 폐색에서 avfs 2. 육안 사진. (A) 원위부 경동맥의 혈관 클램프와 특허 AVF. (B)는 AVF는 흡장. (흰색 화살표)가 혈액 흐름의 방향을 나타낸다. (C) 근처 적외선 투시를 사용하여 시연 특허 AVF. (빨간색 화살표) 동맥을 나타냅니다. (파란색 화살표) 정맥 유출 관을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53294/53294fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <img alt="그림 3" src="/files/ftp_upload/53294/53294fig3.jpg" /> 작동이되지 않는 상태 제어 선박에 비해 14 일에서 AVF의 정맥 유출 관의 그림 3. 조직 학적 염색과 (A - B). 형태 학적 개요 헤 마톡 실린, phloxin 및 SAFF를 사용하여론은 14 일 AVF 작성 후 용기 둘레 내막 증식증 개발에 명확한 증가를 나타내는. (C - D) 면역 조직 화학 염색은 세포의 대부분은 내막 과형성을 제시 긍정적 알파 평활근 액틴임을 입증. (L) 루멘; (IH) 내막 증식; 스케일 바 :. 200 μm의 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53294/53294fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

동정맥루 실패의 소설 쥐 모델 : 세부 수술

The arteriovenous fistula (AVF) still suffers from a high number of failures caused by insufficient remodeling and intimal hyperplasia from which the ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

12.9K 조회수.  Leiden University Medical Center. Here we present a murine model of arteriovenous fistula (AVF) failure in which a clinically relevant anastomotic configuration is incorporated. This model can be used to study the pathophysiology and to test possible therapeutic interventions.

비디오: A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

A Novel Surgical Approach for Intratracheal Administration of Bioactive Agents in a Fetal Mouse Model

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and acquired diseases. Apart from congenital or inherited abnormalities with the requirement for long-term expression of the delivered gene, several non-inherited perinatal conditions, where short-term gene expression or pharmacological intervention is sufficient to achieve therapeutic effects, are considered as potential future indications for this kind of approach. Candidate diseases for the application of short-term prenatal therapy could be the transient neonatal deficiency of surfactant protein B causing neonatal respiratory distress syndrome1,2 or hyperoxic injuries of the neonatal lung3. Candidate diseases for permanent therapeutic correction are Cystic Fibrosis (CF)4, genetic variants of surfactant deficiencies5 and &alpha;1-antitrypsin deficiency6.
Generally, an important advantage of prenatal gene therapy is the ability to start therapeutic intervention early in development, at or even prior to clinical manifestations in the patient, thus preventing irreparable damage to the individual. In addition, fetal organs have an increased cell proliferation rate as compared to adult organs, which could allow a more efficient gene or stem cell transfer into the fetus. Furthermore, in utero gene delivery is performed when the individual's immune system is not completely mature. Therefore, transplantation of heterologous cells or supplementation of a non-functional or absent protein with a correct version should not cause immune sensitization to the cell, vector or transgene product, which has recently been proven to be the case with both cellular and genetic therapies7.
In the present study, we investigated the potential to directly target the fetal trachea in a mouse model. This procedure is in use in larger animal models such as rabbits and sheep8, and even in a clinical setting9, but has to date not been performed before in a mouse model. When studying the potential of fetal gene therapy for genetic diseases such as CF, the mouse model is very useful as a first proof-of-concept because of the wide availability of different transgenic mouse strains, the well documented embryogenesis and fetal development, less stringent ethical regulations, short gestation and the large litter size.
Different access routes have been described to target the fetal rodent lung, including intra-amniotic injection10-12, (ultrasound-guided) intrapulmonary injection13,14 and intravenous administration into the yolk sac vessels15,16 or umbilical vein17. Our novel surgical procedure enables researchers to inject the agent of choice directly into the fetal mouse trachea which allows for a more efficient delivery to the airways than existing techniques18.

We developed a novel surgical approach for intratracheal administration of bioactive agents into the mouse fetus. The delivery route is more efficient in targeting the fetal mouse lungs than the commonly used intra-amniotic injection. This procedure has to date not been described in a mouse model.

태아 마우스 모델에서 Bioactive 에이전트의 Intratracheal 관리를위한 소설 외과 접근

Prenatal pulmonary delivery of cells, genes or pharmacologic agents could provide the basis for new therapeutic strategies for a variety of genetic and ...

연구

의학

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

상처 치유의 생쥐 모델

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

마우스 Aortocaval 누관의 기술적 측면

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

A Surgical Procedure for Resecting the Mouse Rib: A Model for Large-Scale Long Bone Repair

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation of the animal for surgery, opening the thoracic body wall, exposing the desired rib from the surrounding intercostal muscles, excising the desired section of rib without inducing a pneumothorax, and closing the incisions. Compared to the bones of the appendicular skeleton, the ribs are highly accessible. In addition, no internal or external fixator is necessary since the adjacent ribs provide a natural fixation. The surgery uses commercially available supplies, is straightforward to learn, and well-tolerated by the animal. The procedure can be carried out with or without removing the surrounding periosteum, and therefore the contribution of the periosteum to repair can be assessed. Results indicate that if the periosteum is retained, robust repair occurs in 1 - 2 months. We expect that use of this protocol will stimulate research into rib repair and that the findings will facilitate the development of new ways to stimulate bone repair in other locations around the body.

The overall goal of this procedure is to successfully resect a portion of bone from the rib of a mouse. The procedure was developed as a model to study large-scale long bone repair.

마우스 리브를 절제하는 수술 : 대규모 긴 뼈 수리에 대한 모델

This protocol introduces researchers to a new model for large-scale bone repair utilizing the mouse rib. The procedure details the following: preparation ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The simple murine AVF model was combined with intraluminal administration of drug solution to the venous endothelium at the same time as fistula creation. Technical aspects of this model are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The infra-renal aorta and IVC are dissected for clamping. After proximal and distal clamping, the puncture site is exposed and a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta and into the IVC. Immediately after the puncture, a reporter gene-expressing viral vector was infused in the IVC via the same needle, followed by 15 min of incubation. The intraluminal administration method enabled more robust viral gene delivery to the venous endothelium compared to administration by the external route. This novel method of delivery will facilitate studies that explore the role of the endothelium in AVF maturation and enable intraluminal drug delivery at the time of surgical operation.

After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.

마우스 동정맥루 내피에 관내 약물 전달

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

A Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation Using a Novel Magnetic Anastomosis Technique for Suprahepatic Vena Cava Reconstruction

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep learning curve. The introduction of the cuff technique for anastomosis of the portal vein (PV) and infrahepatic vena cava (IHVC) has significantly simplified the transplant procedure in rats. However, due to the short anterior wall of the recipients' suprahepatic vena cava (SHVC), the cuff technique is very difficult to use for the reconstruction of the SHVC. Most researchers in this field still use the hand-suture technique for SHVC reconstruction, which makes it the bottleneck step in rat orthotopic liver transplantation. The magnetic anastomosis technique (i.e., magnamosis) is a method of connecting two vessels using the attractive force between two magnets. Our recent study has shown that the magnetic anastomosis technique is superior to the hand-suture technique for SHVC reconstruction in rats. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using the novel magnetic anastomosis technique. In this model, the reconstruction of the PV and IHVC was performed by the standard cuff technique, while the reconstruction of the bile duct (BD) was performed by a stent technique. The hepatic re-arterialization was not performed. The magnetic anastomosis technique made SHVC reconstruction much easier and significantly shortened the anphepatic phase. After a reasonable learning curve, even researchers without advanced microsurgical skills can produce reliable and reproducible results using this rat model of OLT.

The reconstruction of the suprahepatic vena cava (SHVC) remains a difficult step in rat orthotopic liver transplantation. In this article, we show a step-by-step protocol for SHVC reconstruction in rats using a novel magnetic anastomosis technique.

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

The rat model of orthotopic liver transplantation (OLT) is essential for transplant research. It is a very sophisticated animal model and requires a steep ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Murine Model of Central Venous Stenosis using Aortocaval Fistula with an Outflow Stenosis

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ligation of the inferior vena cava (IVC) in the outflow of the fistula, mimicking central venous stenosis. Technical aspects of this model are introduced. The aorta and IVC are exposed, following an abdominal incision. The infra-renal aorta and IVC are dissected for proximal clamping, and the distal aorta is exposed for puncture. The IVC at the midpoint between the left renal vein and the aortic bifurcation is carefully dissected to place an 8-0 suture beneath the IVC. After clamping the aorta and IVC, an AVF is created by puncturing the infra-renal aorta through both walls into the IVC with a 25 G needle, followed by ligating a 22 G intra-venous (IV) catheter and IVC together. The catheter is then removed, creating a reproducible venous stenosis without occlusion. The aorta and IVC are unclamped after confirming primary hemostasis. This novel model of central vein stenosis is easy to perform, reproducible, and will facilitate studies on AVF failure.

An aortocaval fistula was created by puncturing the murine infra-renal aorta through both walls into the inferior vena cava and was followed by creation of a stenosis in its outflow via partial ligation of the inferior vena cava. This reproducible model can be used to study central venous stenosis.

유출 협착증을 가진 Aortocaval 누공을 사용하여 중앙 정맥 협착증의 뮤린 모형

Central venous stenosis is an important entity contributing to arteriovenous fistula (AVF) failure. A murine AVF model was modified to create a partial ...

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. An aneurysm forms as a result of progressive weakening and eventual dilation of the aorta, which can rupture or tear once it reaches a critical diameter. Aneurysms of the descending aorta in the chest, called descending thoracic aortic aneurysms (dTAA), make up a large proportion of aneurysm cases in the United States. Uncontained dTAA rupture is almost universally lethal, and elective repair has a high rate of morbidity and mortality. The purpose of our model is to study dTAA specifically, to elucidate the pathophysiology of dTAA and to search for molecular targets to halt the growth or reduce the size of dTAA. By having a murine model to study thoracic pathology precisely, targeted therapies can be developed to specifically test dTAA. The method is based on the placement of porcine pancreatic elastase (PPE) directly on the outer murine aortic wall after surgical exposure. This creates a destructive and inflammatory reaction, which weakens the aortic wall and allows for aneurysm formation over weeks to months. Though murine models possess limitations, our dTAA model produces robust aneurysms of predictable size. Furthermore, this model can be used to test genetic and pharmaceutical targets which may arrest dTAA growth or prevent rupture. In human patients, interventions such as these could help avoid aneurysm rupture, and difficult surgical intervention.

We describe a surgical protocol to consistently induce robust descending thoracic aortic aneurysms in mice. The procedure involves left thoracotomy, thoracic aorta exposure, and placement of a sponge soaked in porcine pancreatic elastase on the aortic wall.

국소 엘라스타아제의 뮤린 외과 모델은 내림차순 흉부 대동맥류를 유도

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Creating Radio-cephalic Arteriovenous Fistula in the Forearm with a Modified No-Touch Technique

Autologous arteriovenous fistula (AVF) is the primary and best option to obtain vascular access for hemodialysis treatment; other options are arteriovenous graft (AVG) and central venous catheterization (CVC). The implementation of radio-cephalic autologous arteriovenous fistula (RC-AVF) in the forearm was preferred among patients with superior vascular conditions. However, there is a high rate of early fistula failure. The chosen surgical method is understood to have an effect on the maturation of the fistula. New surgical procedures such as radial artery deviation and reimplantation (RADAR) have been significantly improved for juxta-anastomotic stenosis. Nevertheless, new problems such as stenosis of arteries and narrowing of surgical indication were also found. In this report, we presented a modified no-touch technique (MNTT) to create an RC-AVF, in which the venous and arterial wall avoid devascularization and the radial artery does not sever.

We present a modified no-touch technique (MNTT) to create a radio-cephalic arteriovenous fistula (RC-AVF) in which the venous and arterial wall avoid devascularization and the radial artery does not sever.