Name: capillary electrophoresis separation of monoclonal antibody isoforms using a neutral capillary
Uploaded: 2017-01-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary at JoVE.com

The authors thank Wiley for the granted permission to use the concepts of the following publication for this tutorial. Carlos E. Espinosa-de la Garza, Francisco C. Perdomo-Ab&#250;ndez, Jes&#250;s Padilla-Calder&#243;n, Jaime M. Uribe-Wiechers, N&#233;stor O. P&#233;rez, Luis F. Flores-Ortiz, Emilio Medina-Rivero: Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis. Electrophoresis. 2013. 34. 1133-1140. Copyright Wiley-VCH Verlag GmbH &amp; Co. KGaA. This work was supported by CONACyT, Mexico, grant 230551.

솔루션 1. 준비 <ol><li> BGE 솔루션을 준비합니다. <ol><li> 0.05 %로 이루어지는 용액 100㎖를 제조 하였다 (m / v)의 하이드 록시 프로필 메틸 셀룰로오스 (HPMC), 200 mM의 ε-N - 아미노 카프로 산 (EACA)와 30mm의 리튬 아세테이트. 주 : HPMC는 점탄성 폴리머이기 때문에, 유리 비이커에 분말을 부어 물 80 mL를 첨가하고 마지막으로 교반 막대를 추가한다. 일반적으로 남아있는 시약을 계속 추가합니다. 그것은 눈 자극을 일으킬 수있는 리튬 아세테이트를 취급 할 때는 보안경을 착용한다. </li><li> 50 % (v / v)로 아세트산으로 4.8 ± 0.1의 pH 값으로 조정한다. 용액을 5 분 동안 안정하고 필요에 따라 조정할 수 있습니다. </li><li> 메스 플라스크에 100 ㎖의 최종 부피를 만들기 위해 물을 추가합니다. </li><li> 0.2 ㎛의 세공 크기를 갖는 친수성 막을 통과 필터. </li><li> 최대 7 일 동안 2-8 ℃에서 보관하십시오. </li></ol></li><li> 내부 표준을 준비합니다. <ol><li> 1 mL의 준비1 % (m / v)로 히스타민 이루어지는 용액. </li><li> 0.2 ㎛의 세공 크기를 갖는 친수성 막을 통과 필터. </li><li> 최대 1 일 동안 2-8 ℃에서 보관하십시오. </li></ol></li></ol> 2. 샘플 준비 <ol><li> 1 mg / ml의 최종 농도로 트리스 완충액 (50 mM의 트리스 (히드 록시 메틸) 아미노 메탄, pH를 8.0)으로 희석 된 단클론 항체의 샘플을 180 μL를 준비한다. </li><li> 1 % (m / v)의 히스타민의 20 μl를 추가합니다. </li><li> 혼합하고 5 초 동안 1,000 XG에 원심 분리기. </li><li> 보편적 인 유리 병 내부에 마이크로 병을 놓습니다. </li><li> 마이크로 바이알에 샘플을 전송하고 보편적 인 유리 병 캡. 기포를 도입하는 것을 방지하기 위해 위쪽으로 시료를 분배. </li><li> 최대 1 일 동안 2-8 ℃에서 보관하십시오. </li><li> 샘플 입구 트레이 (시료 용액을 포함하는 마이크로 바이알)와 보편적 인 병을 놓습니다. </li></ol> CE 시스템 3. 준비. <ol><li> CE 시스템 청소. 참고 : 실시 일먼지 나 이물질이 축적 유래의 전류 누설을 방지하기 위해 적어도 일주일 절차이다. 그러나, 용도에 따라 (예를 들면, 점도가 증가 또는 높은 염 농도 증가 점도 시료와 BGE 사용) 전극 및 개방 레버 교차 오염 샘플 캐리 오버를 방지하기 위해 더 자주 세정 될 필요로 할 수있다. <ol><li> 은 CE 기기의 전원 스위치를 끄고 전면 도어를 엽니 다. </li><li> 물에 적신 부직포 와이프와 함께, 샘플 유지 시스템 (샘플 버퍼 트레이), 카트리지 커버, 클램프 바, 인터페이스 블록과 전극을 샘플 커버의 표면을 청소합니다. 과 절차를 반복 에탄올을 묻혀 닦아 사용하기 전에 건조. </li><li> 철저하게 물을 개방 레버를 씻어. 부직포 닦아 자신의 표면을 청소합니다. 과 절차를 반복 에탄올을 묻혀 닦아 설치하기 전에 건조. </li><li> 주의 광섬유 케이블의 양단 청소물에 적신 마이크로 화이버 천으로 사라져. 에탄올에 적신 천으로 절차를 반복합니다. </li></ol></li><li> 카트리지 어셈블리. <ol><li> 패키지에서 새로운 중립 모세관 (50 μm의 내경)를 제거합니다. </li><li> 테이프 워크 벤치에 모세관 보호 튜브의 한쪽 끝을 아래로. , 풀다 똑바로 튜브에서 모세관을 당기십시오. </li><li> 워크 벤치에 테이프 나 종이 스틱 다음과 같이 측정 마크를 추가 길이 검출기 (30cm), 출구 단부에 모세관 창 (0.2 cm) 길이 (10cm) (즉, 40.2 cm 전체 길이에, 30.0 cm 유효 길이). </li><li> 참조 논문에서 0.2 cm 측정 마크 모세관 창을 맞 춥니 다. 테이프로 모세관을 수정하고 모세관이 측정 마크 외부 2mm를 종료 표시합니다. </li><li> 클 리빙 돌의 평면 가장자리를 사용하여 하나의 직선 운동에 모세관 입구 끝 부분에있는 보호 캡 (창에서 최종 먼)를 잘라.<ol><li> 모세관 내부 코팅에 영구적 인 손상을 방지하기 위해 물이 가득 덮인 보편적 인 유리 병에 모세관 끝을 담가. 이 절차를 모세관 말단 이상 1 분 동안 대기에 노출 될 때마다 반복한다. </li></ol></li><li> 카트리지의 출구 측에 모세관 입구 끝을 삽입합니다. </li><li> 밀어 모세관 창 카트리지 창을 중심으로 될 때까지 필요에 따라 카트리지를 통해 모세관을 당기십시오. </li><li> 카트리지 창에 구멍 플러그 (100 μm의 X 200 μm의)를 삽입합니다. 주 : 빛의 화이트 소스에 노출되면 흰색 빛이 창을 통해 전달되었는지 확인합니다. 통과하는 광은 갈색 외관이 경우, 필요에 따라 조정한다. </li><li> (순서대로 양단에 사전 설치된 튜브 너트, 페룰 및 O 링 포함) 40.2 cm의 총 모세관 길이에 대한 미리 형성된 냉매 배관에 모세관을 삽입합니다. </li><li> coolan을 통해 모세 혈관을 눌러모세관이 관의 다른면에 나타날 때까지 필요한 t 튜브. </li><li> 카트리지의 출구 측에 냉각수 튜브의 끝을 삽입하고 튜브 너트를 조이십시오. </li><li> 카트리지의 입구 측에 모세관 입구 단부를 삽입한다. </li><li> 밀고 모세관 카트리지의 입구 측에 나타날 때까지 필요에 따라 카트리지를 통해 모세관을 당긴다. </li><li> 카트리지의 입구 측에 냉각수 튜브의 끝을 삽입하고 튜브 너트를 조이십시오. </li><li> 클 리빙 돌의 평면 가장자리를 사용하여 하나의 직선 운동에 모세관 출구 단부 (창에서 가까운 끝 부분)에서 보호 캡을 잘라. </li><li> 모세관 끝 부분을 통해 밀봉 고정 클립을 삽입하고 위치에 고정하는 키를 누릅니다. 시각적으로 모세관이 종료 검사합니다. 그들도없는 경우, 절차를 반복한다. </li><li> 워크 벤치의 가장자리에 모세관 길이 템플릿을 놓습니다. </li><li> AG를 아래로 향하게하여 카트리지를 배치모세관 길이 템플릿을 ainst과 모세관 템플릿의 참조 라인으로 끝 맞 춥니 다. 모세관 계측 마크 (3.2.4 참조) 기준선과 정렬되지 않는 경우, 필요에 따라 조정한다. </li><li> 모세관 길이, 모세관에 대해 템플릿을 잡고 템플릿 기준선 아래 절단 돌 2mm의 세척 에지 사용 모세관의 양쪽 끝을 절단. </li><li> 시각적으로 모세관은 돋보기로 끝나는 검사합니다. 모세관 말단이 평활하지 않은 경우, 클 리빙 스톤의 부드러운면을 사용하여 윤기. </li><li> O 링 삽입 도구를 사용하여 개구부 플러그 구멍에 개구 O 링을 삽입한다. </li><li> 유리 병에 삽입 모세관 끝 즉시 케이스에 카트리지 케이스와 장소 카트리지에 물이 가득 덮인 보편적 인 튜브를 설치합니다. 단기 및 장기 저장에 2-8 ℃에서 보관. </li></ol></li><li> 버퍼 트레이의 제조. <ol><li> 작성하고 출장 UNIVERS를 배치버퍼 입구에서 알 튜브 및 배출 트레이 (그림 1). 샘플 수에 따라 레인 2, 3, 4 및 5의 반복 바이알 위치가 매 6 샘플 주입 하나 차선 배치 분석한다. 주 : 누설 전류를 방지하기 위해 캡 바이알 습윤 피한다. </li></ol></li></ol><img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55082/55082fig1.jpg" /> 그림 1 : 위치 및 버퍼 입구와 출구 트레이에 보편적 인 유리 병의 레벨을 입력합니다. 수준을 채우기 : 1/1 = 1400 μL, 3/4 = 1300 μL 1/2 = 1000 μL를. 요약 : W = 물, 염산은 0.1 M 염산. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55082/55082fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol start="4"><li> CE 시스템 구성 요소 어셈블리. <ol><li> 자외선 검출기를 설치합니다. </li><li> 개방 레버를 설치인터페이스 블록에 최대 눌러. </li><li> 광섬유 케이블을 설치한다. 양쪽 끝을 잡고 시계 방향으로 회전 클램프 표시 줄에 해당 끝을 삽입합니다. 자외선 검출기 다른 쪽 끝을 연결합니다. 참고 : 그 파괴의 원인이 굴곡 때문에이 절차를 수행하는 동안주의 광섬유 케이블을 처리합니다. </li><li> 장소 샘플과 샘플 유지 시스템에 버퍼 트레이 및 위치에 걸립니다. </li><li> 양단의 클램프 바가하면서 손잡이를 조여, 상기 인터페이스 블록으로 모세관 카트리지 놓고. </li></ol></li></ol> 4. 악기 방법 셋업 <ol><li> 전압, 최대 : 다음 매개 변수를 표 1에있어서, 상기 조절을 만들고 실행 및 종료 악기 방법 30.0 kV의; 현재, 최대 : 300.0 μA; 카트리지 온도 : 20.0 ° C; 샘플 보관 온도 : 10.0 ° C; UV 검출기 초기 조건 : 파장 : 214 nm 인; 데이터 속도 : 4 Hz에서; 필터 : 일반; 피크 폭 () 포인트 : 16-25; 흡광도 신호 : 직접. 참고 : 데이터 수집 속도는 좁은 분리 영역의 커버리지를 향상시키기 위해서는 25 Hz로까지 증가시킬 수있다. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="8"> 컨디셔닝 방법 시간 프로그램 </td></tr><tr><td> 시간 (분) </td><td> 행사 </td><td> 값 </td><td> 지속 </td><td> 입구 유리 병 </td><td> 아울렛 유리 병 </td><td> 개요 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 1.0 분 </td><td> BI : C1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로 </td><td> 염산 0.1 M </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 2.0 분 </td><td> BI : B1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로 </td> &lt;TD&gt; 물 </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 10.0 분 </td><td> BI : E1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로 </td><td> BGE </td></tr><tr><td> 0.00 </td><td> 별도 - 전압 </td><td> 15.0 KV </td><td> 10.0 분 </td><td> BI : D1 </td><td> BO : D1 </td><td> 0.17 최소 램프, 정상 극성 </td><td> 갈라진 </td></tr><tr><td> 10.00 </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2758 밀리바 </td><td> 10.0 분 </td><td> BI : E1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로 </td><td> BGE </td></tr><tr><td> 20.01 </td><td> 기다림 </td><td> - </td><td> 0.0 분 </td><td> BI : A1 </td><td> BO : A1 </td><td> - </td><td> 린스 팁 </td></tr><tr><td colspan="8"> 방법 시간 프로그램을 실행 </td></tr><tr><td> 시간 (분) </td><td> 행사 </td><td> 값 </td><td> 지속 </td><td> 입구 유리 병 </td><tD&gt; 아울렛 유리 병 </td><td> 개요 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 1.0 분 </td><td> BI : C1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로, 인 / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 염산 0.1 M </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 2.0 분 </td><td> BI : B1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로, 인 / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 물 </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 4.0 분 </td><td> BI : E1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로, 인 / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> BGE </td></tr><tr><td> - </td><td> 주입 - 압력 </td><td> 34 밀리바 </td><td> 20.0 초 </td><td> SI : A1 </td><td> BO : B1 </td><td> 앞으로, 재정의 </td><td> 샘플 주입 </td></tr><tr><td> - </td><td> 기다림 </td><td> - </td><td> 0.4 분 </td><td> BI : A1 </td><td> 악: A1 </td><td> / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 워시 팁 </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 별도 - 전압 </td><td> 15.0 KV </td><td> 30.0 분 </td><td> BI : D1 </td><td> BO : D1 </td><td> 0.17 최소 램프, 정상 극성 인 / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 샘플 분리 </td></tr><tr><td> 0.5 </td><td> 자동 영점 조정 </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> 30.01 </td><td> 데이터를 중지 </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> 30.02 </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 2.0 분 </td><td> BI : B1 </td><td> BO : C1 </td><td> 앞으로, 인 / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 물 </td></tr><tr><td> 32.03 </td><td> 기다림 </td><td> - </td><td> 0.0 분 </td><td> BI : A1 </td><td> BO : A1 </td><td> / 아웃 유리 병 INC (6) </td><td> 린스 팁 </td></tr><tr><td> 32.04 </td><td> 종료 </td><td> -</td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> 종료 </td></tr><tr><td colspan="8"> 종료 방법 시간 프로그램 </td></tr><tr><td> 시간 (분) </td><td> 행사 </td><td> 값 </td><td> 지속 </td><td> 입구 유리 병 </td><td> 아울렛 유리 병 </td><td> 개요 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 1.0 분 </td><td> BI : E6 </td><td> BO : E6 </td><td> 앞으로 </td><td> 염산 0.1 M </td></tr><tr><td> - </td><td> 린스 - 압력 </td><td> 2068 밀리바 </td><td> 6.0 분 </td><td> BI : F6 </td><td> BO : F6 </td><td> 앞으로 </td><td> 물 </td></tr><tr><td> - </td><td> 램프 - 오프 </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> - </td><td> 기다림 </td><td> - </td><td> 0.0 분 </td><td> BI : A1 </td><td> BO : A1 </td><td> - </td><td> 린스 팁 </td></tr></tbody></table> 표 1 : 컨디셔닝, 실행 및 종료 시간 프로그램. 5. 데이터 수집 및 처리 <ol><li> 샘플 세트를 프로그램. <ol><li> 컨디셔닝기구 방법을 사용하여 컨디셔닝 모세관 프로그램. 모세관가 처음 사용되는 경우, 네 개의 반복 과정; 그렇지 않으면 조절 방법의 두 반복 프로그램. </li><li> 주행 계기 방법을 이용하여 분석 될 시료 프로그램. </li><li> 셧다운기구 방법을 이용하여 저장을 위해 모세관 프로그램 섹션 3.2.22에 나타낸 절차를 반복한다. </li></ol></li><li> 실험을 실행합니다. </li><li> electropherograms를 내 보냅니다. </li><li> 마이그레이션 시간과 기본 주 (A)의 함유율을 계산electropherogram 프로필의 수직 드롭 라인 통합을 사용하여 차 산성 이성체. </li></ol>

<ol>
	<li>Bruno, V., Battaglia, G., Nicoletti, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+advent+of+monoclonal+antibodies+in+the+treatment+of+chronic+autoimmune+diseases.">The advent of monoclonal antibodies in the treatment of chronic autoimmune diseases.</a> Neurol. Sci. 31, 283-288 (2011).</li><li>Liu, H., Gaza-Bulseco, G., Faldu, D., Chumsae, C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+monoclonal+antibodies.">Heterogeneity of monoclonal antibodies.</a> J. Pharm. Sci. 97 (7), 2426-2447 (2008).</li><li>Creamer, J. S., Oborny, N. J., Lunte, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+analysis+of+therapeutic+proteins+by+capillary+and+microchip+electrophoresis.">Recent advances in the analysis of therapeutic proteins by capillary and microchip electrophoresis.</a> Anal. Methods. 6 (15), 5427-5449 (2014).</li><li>Fekete, S., Guillarme, D., Sandra, P., Sandra, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic,+Electrophoretic,+and+Mass+Spectrometric+Methods+for+the+Analytical+Characterization+of+Protein+Biopharmaceuticals.">Chromatographic, Electrophoretic, and Mass Spectrometric Methods for the Analytical Characterization of Protein Biopharmaceuticals.</a> Anal. Chem. 88 (1), 480-507 (2016).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+identity,+charge+variants,+and+disulfide+isomers+of+monoclonal+antibodies+with+capillary+zone+electrophoresis+in+an+uncoated+capillary+column.">Analysis of identity, charge variants, and disulfide isomers of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in an uncoated capillary column.</a> Anal. Chem. 82 (8), 3222-3230 (2010).</li><li>He, Y., Isele, C., Hu, W., Ruesch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+analysis+of+charge+variants+of+monoclonal+antibodies+with+capillary+zone+electrophoresis+in+dynamically+coated+fused-silica+capillary.">Rapid analysis of charge variants of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in dynamically coated fused-silica capillary.</a> J. Sep. Sci. 34 (5), 548-555 (2011).</li><li>Zhao, S. S., Chen, D. D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+capillary+electrophoresis+in+characterizing+recombinant+protein+therapeutics.">Applications of capillary electrophoresis in characterizing recombinant protein therapeutics.</a> Electrophoresis. 35 (1), 96-108 (2014).</li><li>&#352;t&#283;p&#225;nov&#225;, S., Ka&#353;i&#269;ka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+impurities+and+counterions+of+pharmaceuticals+by+capillary+electromigration+methods.">Determination of impurities and counterions of pharmaceuticals by capillary electromigration methods.</a> J. Sep. Sci. 37 (15), 2039-2055 (2014).</li><li>&#352;t&#283;p&#225;nov&#225;, S., Ka&#353;i&#269;ka, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+applications+of+capillary+electromigration+methods+to+separation+and+analysis+of+proteins.">Recent applications of capillary electromigration methods to separation and analysis of proteins.</a> Anal. Chim. Acta. 933, 23-42 (2016).</li><li>Espinosa-de la Garza, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+recombinant+monoclonal+antibodies+by+capillary+zone+electrophoresis.">Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis.</a> Electrophoresis. 34 (8), 1133-1140 (2013).</li><li>Staub, A., Guillarme, D., Schappler, J., Veuthey, J. L., Rudaz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intact+protein+analysis+in+the+biopharmaceutical+field.">Intact protein analysis in the biopharmaceutical field.</a> J. Pharm. Biomed. Anal. 55 (4), 810-822 (2011).</li><li>Altria, K. D., Altria, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Troubleshooting.">Troubleshooting.</a> Methods in Molecular Biology, Vol 52. Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation and Applications. , (1996).</li><li>Ma, S., Nashabeh, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+protein+therapeutics+by+capillary+electrophoresis.">Analysis of protein therapeutics by capillary electrophoresis.</a> Chromatographia. 53 (5), 75-89 (2001).</li><li>Jaccoulet, E., Smadja, C., Prognon, P., Taverna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+electrophoresis+for+rapid+identification+of+monoclonal+antibodies+for+routine+application+in+hospital.">Capillary electrophoresis for rapid identification of monoclonal antibodies for routine application in hospital.</a> Electrophoresis. 36 (17), 2050-2056 (2015).</li></ol>

The authors Carlos E. Espinosa-de la Garza, Rodolfo D. Salazar-Flores, N&#233;stor O. P&#233;rez, Luis F. Flores-Ortiz and Emilio Medina-Rivero are employees of Probiomed S.A. de C.V., which is developing, manufacturing and marketing biosimilar products. All authors are involved in the development of biosimilar products for Probiomed.

실시 CZE가 성공 확률을 높이기 위해 모노클로 날 항체 분석 할 때이 튜토리얼에서, 우리는 적절한 방법의 중요성을 강조 표시합니다. CZE가 일상적으로 사용하는 경우에는, 문제가 필연적으로 발생한다 (12). 최상의 결과를 얻으려면, 그들이 극복하고 어려운 단계 문제를 해결하는 분석가 도움이 될 것 같은 프로토콜을 통해 포함 된주의 사항을 따르는 것이 중요합니?...

단일 클론 항체 (단클론 항체는)으로 인해 여러 가지 만성 및 퇴행성 질환 일에 대해 행동하는 능력에 관심을 증가 biotherapeutic 단백질이다. 다른 생체 분자와 마찬가지로, 모노클로 날 항체가 (최종 제품에 생합성에서, 예) 수명주기의 모든 단계에서 여러 가지 물리 화학적 변형을 받아야하는 경향이있다. 이러한 변형을 포함하지만 이에 한정되지 않는다 : 탈 아미드 화, 글리코 실화, 산화, 폐환 반응, 이성화 반응, 응집 단백질 분해 절단이. 따라서, 극한 이성체를 해결할 수있는 분석 기법은 품질 사양을 설정하기 위해 모노클로 날 항체 얼룩이 안정성을 모니터링 할 필요가있다. 모세관 전기 영동 (CE)는 배경 전해질 (BGE)로 채워진 좁은 용융 실리카 튜브 (μm의 범위)의 outinside 실시 고성능 분리 기술이다. 전계의인가시에, 충전 분자 (30,000 V까지)의는 반대 전하 (즉, 전기 구동 분리)와 전극으로 이동한다. CE에서 높은 전압의 사용은 전통적인 겔 전기 우수한 고속 분석 및 증가 된 효율을 허용한다. 모세관 영역 전기 영동 (CZE)는 통상적으로 제품의 품질 평가 3-9에 대한 생물 약제 산업에 사용되는 CE 기반 기술이다. CE의 다른 모드 (예, 모세관 전기 영동, 모세관 등전점 포커싱) 또는 크로마토 기반의 방법과는 달리, CZE은 그 나라의 상태 (10)에 가까운 모노클 고유의 이질성의 분석을 허용 변성제 고체상 인터페이스를 사용하지 않고 수행 될 수있다 . 단클론 항체 동종의 CZE 분리는 친수성 고분자 (중립 모세관)으로 피복 용융 실리카 모세관 내부의 발생 전하, 질량, 크기 및 형상 (또는 유체 역학적 부피) (11)에 의해 지배되고 서로 다른 전기 영동 이동성을 기반으로한다. 단클론 항체 잔기 때 검출이들은 동원 214 내지 4에서 자외선 (UV) 흡수 검출기에 의해 감지 된 검출 윈도우를 통과한다. 이러한 분석 기술의 성공적인 구현은 전 실험 기간 동안 세부 적절한주의에 달려있다. 궁극적으로 지속적인 실패와 좌절로 이어지는 분석을 수행하기 위해 비용과 시간을 증가시킬 것이다, 그렇지 않으면 연기. 여기서는 용액 및 시료 CE 시스템 설정 악기 방법, 데이터 수집의 제제의 제조에 대한 상세한 설명을 통해 CZE 의해 단클론 이질성 성공적인 분석을 수행하는 단계별로 제시하고, 처리. 이 가이드의 목적을 위해, 재조합 완전 인간 항 종양 괴사 인자 알파 (TNFα 항) 단클론 항체 단백질 모델로서 사용된다; 그러나,이 프로토콜은 쉽게 간단한 수정을 고려하여 다른 단백질의 분석을 위해 사용자 정의 할 수 있습니다. 에이dditionally 몇 가지 권장 사항은 잠재적 인 문제가 제안 완화합니다. 독자는 엄격하게 증가 할 것이다 성공 확률로, 제안 된 프로토콜을 따르도록 권장합니다.

<table><tbody><tr><td>Glacial acetic acid</td><td>Tecsiquim</td><td>AT0035-7</td><td></td></tr><tr><td>ACS grade hydrochloric acid</td><td>J.T. Baker</td><td>9535-05</td><td></td></tr><tr><td>Histamine dihydrochloride</td><td>Fluka</td><td>53300</td><td></td></tr><tr><td>(Hydroxypropyl) methyl cellulose&amp;nbsp;</td><td>Fluka</td><td>09963</td><td></td></tr><tr><td>Lithium acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>517992</td><td></td></tr><tr><td>6-Aminocaproic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2504</td><td></td></tr><tr><td>eCAP Tris Buffer, 50.0 mM,&amp;nbsp; pH 8</td><td>Beckman Coulter</td><td>477427</td><td></td></tr><tr><td>PA 800 Plus Pharmaceutical Analysis System</td><td>Beckman Coulter</td><td>A66528</td><td></td></tr><tr><td>eCAP Neutral capillary&amp;nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>477441</td><td></td></tr><tr><td>Vial, Micro, 200 &amp;micro;l</td><td>Beckman Coulter</td><td>144709</td><td></td></tr><tr><td>Universal Vial Caps</td><td>Beckman Coulter</td><td>A62250</td><td></td></tr><tr><td>Universal Vials</td><td>Beckman Coulter</td><td>A62251</td><td></td></tr><tr><td>Cable, Optics, UV/Vis</td><td>Beckman Coulter</td><td>144093</td><td></td></tr><tr><td>UV/Vis Detector Module</td><td>Beckman Coulter</td><td>144733</td><td></td></tr><tr><td>Cartridge Assembly Kit, Blank</td><td>Beckman Coulter</td><td>144738</td><td></td></tr></tbody></table>

capillary electrophoresis separation of monoclonal antibody isoforms using a neutral capillary

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The biological activity of these proteins depends on their physicochemical properties. The use of high-performance techniques like chromatography and capillary electrophoresis has been described for the analysis of physicochemical heterogeneity of mAbs. Nowadays, capillary zone electrophoresis (CZE) technique constitutes one of the most resolutive and sensitive assays for the analysis of biomolecules. Besides, the electro-driven separation in CZE is governed by extensive properties of matter and offers the advantage of analyzing proteins close to their native state. However, the successful implementation of this technique for routine analysis depends on the skills of the analyst at the critical steps during sample and system preparation. The purpose of this tutorial is to detail the steps to succeed in the CZE analysis of mAbs. Further, this protocol can be used for the development and improvement of skills of the personnel involved in protein analytical chemistry laboratories.

도 2는 200 mM의 EACA, 30mm의 리튬 아세테이트의 전형적인 전류 프로파일을 도시 트리스 완충액 (50 mM의, pH를 8.0)로 희석 한 항 - TNFα 단클론 항체 샘플을 사용하여 pH 4.8 BGE. 관찰 될 수있는 바와 같이, 전류는 분석에 걸쳐 안정하고 30 내지 35 μA의 값 사이에서 발진 할 수있다. 검출 된 피크가 히스타민 내부 표준에 대응한다 그림 3은 빈 샘플의 CZE의 elec...

Watch this Scientific Journal Video about Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary at JoVE.com

Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Here, we present a comprehensive capillary zone electrophoresis protocol for the assessment of intrinsic physicochemical heterogeneity of monoclonal antibodies as a quality attribute.

중립 모세관을 사용하여 단일 클론 항체 동종의 모세관 전기 영동 분리

Biotherapeutic proteins, such as monoclonal antibodies (mAbs), are feasible alternatives for the treatment of chronic-degenerative diseases. The ...

capillary-electrophoresis-separation-monoclonal-antibody-isoforms

Research

JoVE Journal

Biochemistry

12.6K 조회수.  Unidad de Investigación y Desarrollo, Probiomed S.A. de C.V.. Here, we present a comprehensive capillary zone electrophoresis protocol for the assessment of intrinsic physicochemical heterogeneity of monoclonal antibodies as a quality attribute.

비디오: Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary

Highly Sensitive and Quantitative Detection of Proteins and Their Isoforms by Capillary Isoelectric Focusing Method

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides an alternative strategy, capillary isoelectric focusing (cIEF), with many advantages compared to conventional immunoblotting. This is an antibody-based, automated, rapid, and quantitative method in which a complete western blotting procedure takes place inside an ultrathin capillary. This technique does not require a gel to transfer to a membrane, stripping of blots, or x-ray films, which are typically required for conventional immunoblotting. Here, proteins are separated according to their charge (isoelectric point; pI), using less than a microliter (400 nL) of total protein lysate. After electrophoresis, proteins are immobilized onto the capillary walls by ultraviolet light treatment, followed by primary and secondary (horseradish peroxidase (HRP) conjugated) antibody incubation, whose binding is detected through enhanced chemiluminescence (ECL), generating a light signal that can be captured and recorded by a charge-coupled device (CCD) camera. The digital image can be analyzed and quantified (peak area) using software. This high throughput procedure can handle 96 samples at a time; is highly sensitive, with protein detection in the picogram range; and produces highly reproducible results because of automation. All of these aspects are extremely valuable when the quantity of samples (e.g., tissue samples and biopsies) is a limiting factor. The technique has wider applications as well, including screening of drugs or antibodies, biomarker discovery, and diagnostic purposes.

Capillary isoelectric focusing is an antibody-based, ultrasensitive, high throughput technique, enabling detailed characterization of proteins and their isoforms from extremely small biological samples. The following describes a protocol for detection and quantification of specific proteins and their isoforms in an automated and robotized manner.

단백질 및 모 세관 전자 초점 방법으로 그들의 Isoforms의 매우 민감하고 정량적 검출

Immunoblotting has become a routine technique in many laboratories for protein characterization from biological samples. The following protocol provides ...

연구

생화학

Isolation and Characterization Of Chimeric Human Fc-expressing Proteins Using Protein A Membrane Adsorbers And A Streamlined Workflow

Laboratory scale to industrial scale purification of biomolecules from cell culture supernatants and lysed cell solutions can be accomplished using affinity chromatography.&#160;While affinity chromatography using porous protein A agarose beads packed in columns is arguably the most common method of laboratory scale isolation of antibodies and recombinant proteins expressing Fc fragments of IgG, it can be a time consuming and expensive process.&#160;Time and financial constraints are especially daunting in small basic science labs that must recover hundreds of micrograms to milligram quantities of protein from dilute solutions, yet lack access to high pressure liquid delivery systems and/or personnel with expertise in bioseparations. Moreover, product quantification and characterization may also excessively lengthen processing time over several workdays and inflate expenses (consumables, wages, etc.).&#160;Therefore, a fast, inexpensive, yet effective protocol is needed for laboratory scale isolation and characterization of antibodies and other proteins possessing an Fc fragment.&#160;To this end, we have devised a protocol that can be completed by limited-experience technical staff in less than 9 hr (roughly one workday) and as quickly as 4 hr, as opposed to traditional methods that demand 20+ work hours. Most required equipment is readily available in standard biomedical science, biochemistry, and (bio)chemical engineering labs, and all reagents are commercially available.&#160;To demonstrate this protocol, representative results are presented in which chimeric&#160;murine galectin-1 fused to human Fc (Gal-1hFc) from cell culture supernatant was isolated using a protein A membrane adsorber.&#160;Purified Gal-1hFc was quantified using an expedited Western blotting analysis procedure and characterized using flow cytometry. The streamlined workflow can be modified for other Fc-expressing proteins, such as antibodies, and/or altered to incorporate alternative quantification and characterization methods.

Compared with traditional affinity chromatography using protein A agarose bead-packed columns, protein A membrane adsorbers can significantly speed laboratory-scale isolation of antibodies and other Fc fragment-expressing proteins.&#160;Appropriate analysis and quantification methods can further accelerate protein processing, allowing isolation/characterization to be completed in one workday, instead of 20+ work hours.

단백질 A 멤브레인 흡착제 및 간소화된 워크플로우를 사용하여 키메라 인간 Fc 발현 단백질의 격리 및 특성화

Laboratory scale to industrial scale purification of biomolecules from cell culture supernatants and lysed cell solutions can be accomplished using ...

생체공학

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the antibody needs to distinguish between highly related structures (e.g., a normal protein and a mutated version thereof). The current way of generating such discriminative mAbs involves extensive screening of multiple Ab-producing B cells, which is both costly and time consuming. We propose here a rapid and cost-effective method for the generation of discriminative, fully human mAbs starting from human blood circulating B lymphocytes. The originality of this strategy is due to the selection of specific antigen binding B cells combined with the counter-selection of all other cells, using readily available Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). Once specific B cells are isolated, cDNA (complementary deoxyribonucleic acid) sequences coding for the corresponding mAb are obtained using single cell Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) technology and subsequently expressed in human cells. Within as little as 1 month, it is possible to produce milligrams of highly discriminative human mAbs directed against virtually any desired antigen naturally detected by the B cell repertoire.

We describe a method for the production of human antibodies specific for an antigen of interest, starting from rare B cells circulating in human blood. Generation of these natural antibodies is efficient and rapid, and the antibodies obtained can discriminate between highly related antigens.

희귀 한 항 원 특정 B 세포 혈액 순환에서 구별 인간 단일 클론 항 체의 생성

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

면역학 및 감염병학

Purification and Analytics of a Monoclonal Antibody from Chinese Hamster Ovary Cells Using an Automated Microbioreactor System

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using Chinese hamster ovary (CHO) cells, culture and process conditions must be optimized to maximize antibody titers and achieve target quality profiles. Typically, this optimization uses automated microscale bioreactors (15 mL) to screen multiple process conditions in parallel. Optimization criteria include culture performance and the critical quality attributes (CQAs) of the monoclonal antibody (mAb) product, which may impact its efficacy and safety. Culture performance metrics include cell growth and nutrient consumption, while the CQAs include the mAb's N-glycosylation and aggregation profiles, charge variants, and molecular weight. This detailed protocol describes how to purify and subsequently analyze HCCF samples produced by an automated microbioreactor system to gain valuable performance metrics and outputs. First, an automated protein A fast protein liquid chromatography (FPLC) method is used to purify the mAb from harvested cell culture samples. Once concentrated, the glycan profiles are analyzed by mass spectrometry using a specific platform (refer to the Table of Materials). Antibody molecular weights and aggregation profiles are determined using size exclusion chromatography-multiple angle light scattering (SEC-MALS), while charge variants are analyzed using microchip capillary zone electrophoresis (mCZE). In addition to the culture performance metrics captured during the bioreactor process (i.e., culture viability, cell counts, and common metabolites including glutamine, glucose, lactate, and ammonia), spent media is analyzed to identify limiting nutrients to improve the feeding strategies and overall process design. Therefore, a detailed protocol for the absolute quantification of amino acids by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) of spent media is also described. The methods used in this protocol take advantage of high-throughput platforms that are compatible for large numbers of small-volume samples.

A detailed protocol for the purification and subsequent analysis of a monoclonal antibody from harvested cell culture fluid (HCCF) of automated microbioreactors has been described. Use of analytics to determine critical quality attributes (CQAs) and maximizing limited sample volume to extract vital information is also presented.

자동화된 미생물체 시스템을 사용하여 중국 햄스터 난소 세포의 단일 클론 항체의 정화 및 분석

Monoclonal antibodies (mAbs) are one of the most popular and well-characterized biological products manufactured today. Most commonly produced using ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. However, similar to other antibody-based protein assays, optimization of capillary-based immunoassay parameters, such as protein concentration, antibody dilution, and exposure time is an important prerequisite to the generation of meaningful and reliable data. Measurements must fall within the linear range of the assay where changes in signal are directly proportional to changes in lysate concentration. The process of choosing appropriate lysate concentrations, antibody dilutions, and exposure times in the human bronchial epithelial cell line, BEAS-2B, is demonstrated here. Assay linearity is shown over a range of whole cell extract protein concentrations with p53 and &#945;-tubulin antibodies. An example of signal burnout is seen at the highest concentrations with long exposure times, and an &#945;-tubulin antibody dilution curve is shown demonstrating saturation. In addition, example experimental results are reported for doxorubicin-treated cells using optimized parameters.

A capillary-based immunoassay using a commercial platform to measure target proteins from total protein preparations is demonstrated. In addition, assay parameters of exposure time, protein concentration, and antibody dilution are optimized for a cell culture model system.

절차 및 자동화 된 모 세관 전기 이동 기반 Immunoassay 방법에 대 한 중요 한 최적화 전략

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...

생물학

Capillary Electrophoresis (CE)

Source: Laboratory of Dr. B. Jill Venton - University of Virginia
Capillary electrophoresis (CE) is a separation technique that separates molecules in an electric field according to size and charge. CE is performed in a small glass tube called a capillary that is filled with an electrolyte solution. Analytes are separated due to differences in electrophoretic mobility, which varies with charge, solvent viscosity, and size. Traditional electrophoresis in gels is limited in the amount of voltage that can be applied because Joule heating effects will ruin the gel and the separation. Capillaries have a large surface area-to-volume ratio and thus dissipate heat better. Therefore, the voltages applied for a capillary electrophoresis experiment are quite large, often 10,000&#8211;20,000 V.
Capillary electrophoresis is useful for high-performance separations. Compared to liquid chromatography, CE separations are often faster and more efficient. However, capillary electrophoresis works best to separate charged molecules, which is not a limitation of liquid chromatography. CE has a greater peak capacity than high-performance liquid chromatography (HPLC), meaning the separations are more efficient and more peaks can be detected. The instrumentation can be very simple. However, HPLC is more versatile and many stationary and mobile phases have been developed for different types of molecules.

Capillary Electrophoresis: Principle, Procedure and Applications

모세관 전기 포레시스 (CE)

Source: Laboratory of Dr. B. Jill Venton - University of Virginia
Capillary electrophoresis (CE) is a separation technique that separates molecules in an ...

교육

JoVE Science Education

화학

분석 화학

An Affinity Chromatography Technique for the Purification of Monoclonal Antibodies

Source: Elgundi, Z., et al. <a href="https://app.jove.com/v/55153">Laboratory Scale Production and Purification of a Therapeutic Antibody.</a> J. Vis. Exp. (2017).
This video demonstrates a technique for purifying monoclonal antibodies from the culture supernatant obtained from an antibody-producing cell culture. The process involves using a matrix of crosslinked agarose beads with conjugated Protein A, which immobilizes the antibodies in the supernatant on the beads, allowing for effective separation from contaminants. By applying an elution buffer with low pH, the protein A-antibody interaction is loosened, facilitating the collection of antibody-containing fractions.

단클론 항체 정제를 위한 친화성 크로마토그래피 기법

1. Antibody Purification by Affinity Chromatography Using an Automated Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) System
NOTE: The following procedure can ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Immunology

Antibody-Based Technologies

Production and Purification

DFE-Based Affinity Chromatography: A Technique for Purification of 2F5 Monoclonal Antibodies from a Crude Sample Using High Ionic Strength-Based Elution Conditions

Source: Kn&#246;dler, M. et al., <a href="https://www.jove.com/v/59933">Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study</a>. J. Vis. Exp. (2019).
This video describes an affinity chromatography technique for purifying 2F5 monoclonal antibodies using the DsRed-2F5-Epitope or DFE ligands. The purified 2F5 monoclonal antibodies are essential drugs in immunotherapy.

DFE 기반 친화성 크로마토그래피: 높은 이온 강도 기반 용리 조건을 사용하여 미처리 샘플에서 2F5 단클론 항체를 정제하는 기술

Source: Kn&#246;dler, M. et al., Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case ...

Biological Techniques

Chromatography Techniques

A Capillary Electrophoresis Immunoassay for Protein Biomarker Detection

Source: Sage, J. M., et al. <a href="https://app.jove.com/v/60638">Use of Capillary Electrophoresis Immunoassay to Search for Potential Biomarkers of Amyotrophic Lateral Sclerosis in Human Platelets.</a>&#160;J. Vis. Exp.&#160;(2020)
This video demonstrates a capillary electrophoresis immunoassay protocol for detecting a protein biomarker associated with amyotrophic lateral sclerosis (ALS) from human blood platelets. Confirmation of the presence of the ALS biomarker protein is achieved through size-based separation of the platelet proteins followed by chemiluminescent detection.

단백질 바이오마커 검출을 위한 모세관 전기영동 면역분석

All procedures involving sample collection have been performed in accordance with the institute&#39;s IRB guidelines.
1. Preparation of buffers and ...

Characterization and Functional Analysis

Electrophoresis: Overview

Electrophoresis is a powerful analytical separation technique that relies on the differential migration of charged species when subjected to an electric field. The core strength of electrophoresis lies in its ability to separate high-molecular-weight species in complex mixtures. It has found widespread use in biochemistry, molecular biology, and analytical chemistry, allowing the separation of compounds like amino acids, nucleotides, carbohydrates, and proteins with excellent resolution.
There are two main formats for electrophoretic separations: slab electrophoresis and capillary electrophoresis. Slab Electrophoresis uses a gel matrix, such as agarose or polyacrylamide, which acts as a sieve, allowing molecules to move through the pores. Capillary electrophoresis employs a narrow capillary tube filled with a buffer solution, providing high-resolution separation with rapid analysis time and minimal sample requirements. Although slab electrophoresis is widely used in biochemistry and biology to separate high-molecular-mass species, capillary electrophoresis is a more recent development with several advantages.
Capillary electrophoresis is a separation technique used to analyze complex mixtures of analytes based on their differential migration rates in an applied electric field. In this method, a sample is injected into a narrow capillary tube filled with a buffered solution, and an electric field is applied to facilitate separation. The migration rate of the analyte depends on its charge and size. The smaller, more highly charged ions migrate faster than the larger, less charged ones. In capillary electrophoresis, the migration of sample components is influenced by two types of mobility: electrophoretic mobility and electroosmotic mobility. Electrophoretic mobility is the solute&#39;s response to the applied electric field, with cations moving toward the negatively charged cathode, anions moving toward the positively charged anode, and neutral species remaining stationary. Electroosmotic mobility occurs when the buffer solution moves through the capillary in response to the electric field, typically toward the cathode.
Under normal conditions, capillary electrophoresis separates cations first, followed by neutral species, and finally, the anions. This separation is based on their respective electrophoretic mobilities and electroosmotic flow velocities. Notably, all separated species are eluted from the same end of the capillary, allowing their detection using quantitative detectors. The detector signals produce an electropherogram resembling a chromatogram but feature narrower peaks.
Capillary electrophoresis is a powerful tool for qualitative and quantitative analysis of complex mixtures. It provides information similar to that obtained from other separation techniques, such as gas chromatography (GC) or high-performance liquid chromatography (HPLC).

전기영동: 개요

Electrophoresis is a powerful analytical separation technique that relies on the differential migration of charged species when subjected to an electric ...