우리는 희석 및 농약 제형 지원 몰리 굳게 감사합니다. 우리는 또한 실험 설계에 도움을 프로 빗 분석 지침 트로이 앤더슨과 재커리 아델 감사합니다. 이 연구는 부분적으로 곤충학 재단 상으로 버지니아 해충 관리 장학금 기금에 의해 지원되었다.

참고 :이 프로토콜은 별도로 침대 버그 계란과 첫 령충을 치료하기위한 두 개의 살충제 분석을 포함한다. 두 프로토콜은 동일한 살충제를 사용하여 수행 하였다 그러나, 프로토콜은 살충제 노출을 보장하기 용이 시료를 조작하도록 구성 할 수 있었다. 1. 계란 디핑 살충제 분석 <ol><li> 식민지에서 성관계를 잘 자란 성인 여성 침대 버그를 잡아 당겨 필터 종이 페트리 접시로 여성 (5-10)를 배치합니다. 살충제 분석을위한 충분한 계란이 될 수 있도록하기 위해 적어도 10 복제가 있습니다. 암컷 매일 계란을 마련했다 있는지 확인합니다. <ol><li> 그들이 알을 낳는되면, 페트리 접시 (6cm × 5cm)에서 암컷을 매일 새 필터 종이 새로운 배양 접시에 넣어 및 이전 및 새로운 배양 접시에 날짜를 기록. </li><li> 분석을 시작하기 전에 오일에 4 세에 계란을 허용합니다. 배아 개발하는 동안 살충제의 변화에 ​​대한 민감도는이야오 계란 나이를 통제하는 것이 중요하다. D의 광주, 60 % RH, 27 ° C : 12시 12분 L 모든 삶의 단계를 잡으십시오. </li></ol></li><li> 계란이 적절하게 숙성 한 후, 소프트 - 팁 집게를 사용하여 필터 논문에서 조심스럽게 침대 버그 알을 제거합니다. 부드럽게 집게를 사용하여 여과지에 부착 된 계란의 바닥을 긁어 부드럽게 던지고 침대 벌레 알을 제한하기 위해 계란 많은 압력을 가하지 않고 잡아. </li><li> 내부 플라스틱 배양 접시의 각각의 그룹으로 제거 침대 버그 알을 놓습니다. 직물 연화제 시트와 외부에 각각 페트리 접시의 바닥을 문질러 침대 버그 계란 마리의 정전기를 제한합니다. 한 번에 침대 버그 계란의 치료 그룹 (그룹당 5 ~ 10 알). 한 그룹에게 복제를 고려하고이 분석을위한 복제 적어도 다섯 개 (또는 그 이상)를 사용합니다. </li><li> 5 가지 농도 (의 범위를 얻기 위해 살충제의 연속 희석을 준비 0.21-21 μL / mL의 이미다클로 프리드 (0.1 %) / β-cyfluthrin (0.5 %) 및 제어를위한용제 (수돗물)와 솔루션 만. 침지 분석을위한 충분한 볼륨을 각 농도의 20 ㎖를 확인합니다. </li><li> 35 mL의 회선 절단 원심 분리 튜브 (50 mL)의 내측 차단 휠 액세서리와 회전 공구를 사용하고 원심 분리 튜브 (직경 = 2.54 cm)는 알루미늄과 같은 회전 공구를 사용하여 뚜껑에 구멍을 잘라 산화 돌 ​​액세서리를 연마. 캡 안전하게 튜브 (도 1)에 나사되도록 절단 할 때, 캡의 가장자리에 5cm 남기기. </li><li> 캡에 맞게 충분히 큰 사각형으로 미세 메쉬 컷 (~ 5cm 2). 원심 분리 튜브의 캡을 사용하여 원심 분리기 튜브에 어떠한 충돌을 제거 단단히 메쉬 스크류. </li><li> 원심 분리기 튜브의 내부에 메쉬에 페인트 브러시를 사용하여 침대 버그 계란의 그룹 (하나의 복제)를 놓습니다. 5 초 동안 살충제 농도로 절단 원심 분리기 튜브의 내부에 침대 버그의 그룹을 찍어. </li><li> 일에서 원심 분리기 튜브를 제거전자 살충제 솔루션입니다. 내부 기관 조직에 직접 원심 관을 배치하여 계란 메쉬를 건조. </li><li> 작은 미세 강모 페인트 브러시를 사용하여 원심 분리 관에서 계란의 그룹을 제거하고 깨끗한 종이 필터와 깨끗한 페트리 접시에 배치합니다. </li><li> 기록 달걀 사망률 모든 계란을 보장하기 위해 14 일 동안 (부화 실패는) 부화 할 수있는 충분한 시간이 있었다. </li><li> 애보트의 식 (- % 제어 사망 / 100 - 제어 사망률 × 100 % 테스트 사망률)를 사용하여 제어 치료 사망률에 대한 올바른. </li><li> LC (50) 값을 계산하는 분석 소프트웨어 (15)에 대응하는 농도 기록 사망률을 삽입합니다. </li></ol> 2. 먼저 탈피 살충제 분석 <ol><li> 바람직하게는 1 일전 공급, 잘 공급 침대 버그 (5 성인 남성 5 성인 여성)의 그룹을 분리하고, MATIN 제공 여과지와 페트리 접시 (6cm × 5cm)로 배치g, 계란 누워. 성인 침대 버그가 짝을 약 7-9일에 대한 알을 낳기 할 수 있습니다. 수유, 혈액 (16)을 둘러싸는 유리관에 온수를 순환 인공 공급 시스템을 사용한다. 이 연구를 위해, defibronated 토끼의 혈액을 사용합니다. </li><li> 페트리 접시에서 성인 (5cm × 6cm)를 제거하고 계란이 배양 접시 내에서 첫 번째 령충에 부화 할 수 있습니다. 침대 버그 계란은 실온에서 부화하는 것은 약 7-9일 소요됩니다. </li><li> 페인트 브러시를 사용하여 같은 나이의 unfed 첫 번째 령충를 수집합니다. 연령은 빗금 하루 매일 제 령기를 제거하고 기록함으로써 결정될 수있다. 살충제 분석까지 새로운, 깨끗한 페트리 접시에 배치합니다. 살충제 분석이 가능한 한 빨리 완료해야하므로 먼저 령 약충은, 저항하는 매우 건조하지 않습니다. </li><li> 분석을 위해, 5 가지 농도 및 제어 SOLU의 범위를 얻을 이미다클로 / β-cyfluthrin의 희석액을 제조용매 만에 기. 미국에서 베드 버그 제어 표지 배합 제품에 따라서 용매 (라벨에 따라) 물이고, 이러한 연구에 사용되었다. </li><li> 피펫 개별 여과지 상 대조군에 대한 각 살충제 농도 및 물 150 μL 씩 (# 1; 4.2 cm 직경). 여과지의 전체 가장자리와 중심을 적을 적용하여 피펫을 사용하여 전체 여과지 위에 살충제 배포. </li><li> 개별 널빤지 패널 (7cm 2)의 상부에 개별적으로 처리 필터 종이를 놓습니다. </li><li> 반면 여전히 살충제와 습식 및 페트리 접시의 반전 바닥 첫 번째 령충을 커버 개별 여과지 위에 첫 번째 령충의 릴리스 그룹 (그룹당 10-5). </li><li> 처리 된 표면을 탈출 첫 번째 령 침대 버그를 방지하기 위해 페트리 접시 위에 무게를 놓습니다. </li><li> 모두 24 시간 노출 후 처음 령 침대 버그의 기록 사망살충제 농도. </li><li> 애보트의 식 (- % 제어 사망 / 100 - 제어 사망률 × 100 % 테스트 사망률)를 사용하여 제어 치료 사망률에 대한 올바른. </li><li> LC (50) 값을 계산하는 분석 소프트웨어 (15)에 기록 사망률과 농도를 넣습니다. </li></ol>

<ol><li>Sabou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bed+bugs+reproductive+life+cycle+in+the+clothes+of+a+patient+suffering+from+Alzheimer%27s+disease+results+in+iron+deficiency+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Bed bugs reproductive life cycle in the clothes of a patient suffering from Alzheimer's disease results in iron deficiency anemia.</a> Parasite. 20, (2013).</li>
<li>Reinhardt, K., Kempke, D., Naylor, R. A., Siva-Jothy, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+to+bites+by+the+bedbug%2C+Cimex+lectularius%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Sensitivity to bites by the bedbug, Cimex lectularius.</a> Med. Vet. Entomol. 23, 163-166 (2009).</li>
<li>Leverkus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bullous+allergic+hypersensitivity+to+bed+bug+bites+mediated+by+IgE+against+salivary+nitrophorin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+invest.+entomol%22%5BJournal%5D)">Bullous allergic hypersensitivity to bed bug bites mediated by IgE against salivary nitrophorin.</a> J. invest. entomol. 126, 91-96 (2006).</li>
<li>Fletcher, C. L., Ardern-Jones, M. R., Hay, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+bullous+eruption+due+to+multiple+bed+bug+bites%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Widespread bullous eruption due to multiple bed bug bites.</a> Clin. Exp. Dermatol. 27, 74-75 (2002).</li>
<li>Pritchard, M. J., Hwang, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2734207/">Severe anemia from bedbugs.</a> Can. Med. Assoc. J. 181, 287-288 (2009).</li>
<li>Goddard, J., de Shazo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+effects+of+bed+bug+attacks+%28Cimex+lectularius+L%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Psychological effects of bed bug attacks (Cimex lectularius L).</a> Am. J. Med. 125, 101-103 (2012).</li>
<li>Harlan, H. J. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/263133743_Bed_Bugs_101_the_Basics_of_Cimex_lectularius">Bed bugs 101: the basics of Cimex lectularius.</a> Am. Entomol. 52, 99-101 (2006).</li>
<li>Pinto, L. J., Cooper, R., Kraft, S. K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPinto%2C+LJ+%22Bed+Bug+Handbook%3A+The+Complete+Guide+to+Bed+Bugs+and+Their+Control%22">Bed Bug Handbook: The Complete Guide to Bed Bugs and Their Control</a>. , Pinto & Associates, Inc.. Mechanicsville, MD, USA. (2007).</li>
<li>Toloza, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+patterns+of+insecticide+resistance+in+eggs+and+first+instars+of+Triatoma+infestans+%28Hemiptera%3A+Reduviidae%29+from+Argentina+and+Bolivia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential patterns of insecticide resistance in eggs and first instars of Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) from Argentina and Bolivia.</a> J. Med. Entomol. 45, 421-426 (2008).</li>
<li>Cueto, G. M., Zerba, E. N., Picollo, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+pyrethroid+resistance+in+eggs+of+Pediculus+humanus+capitis+%28Phthiraptera%3A+Pediculidae%29+from+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Evidence of pyrethroid resistance in eggs of Pediculus humanus capitis (Phthiraptera: Pediculidae) from Argentina.</a> J. Med. Entomol. 45, 693-697 (2008).</li>
<li>Ho, S. H., Goh, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deltamethrin+as+a+potential+ovicidal+pyrethroid+against+Plutella+xylostella+L%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+let%22%5BJournal%5D)">Deltamethrin as a potential ovicidal pyrethroid against Plutella xylostella L.</a> Toxicol. let. 22, 161-164 (1984).</li>
<li>Bell, C. H., Hole, B. D., Evans, P. H. The occurrence of resistance to phosphine in adult and egg stages of strains of Rhyzopertha dominica (F.)(Coleoptera: Bostrichidae). J. Stored Prod. Res. 13, 91-94 (1977).</li>
<li>Campbell, B. E., Miller, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insecticide+Resistance+in+Eggs+and+First+Instars+of+the+Bed+Bug%2C+Cimex+lectularius+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Insecticide Resistance in Eggs and First Instars of the Bed Bug, Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae).</a> Insects. 6, 122-132 (2015).</li>
<li>Price, L. A., Mills, K. A. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0022474X88900082">The toxicity of phosphine to the immature stages of resistant and susceptible strains of some common stored product beetles, and implications for their control.</a> J. Stored Prod. Res. 24, 51-59 (1988).</li>
<li>Robertson, J. L., Preisler, H. K., Russel, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobertson%2C+JL+%22PoloPlus%3A+Probit+and+Logit+Analysis+User%27s+Guide%22">PoloPlus: Probit and Logit Analysis User's Guide</a>. , LeOra Software. Petaluna, CA, USA. (2003).</li>
<li>Montes, C., Cuadrillero, C., Vilella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+of+a+laboratory+colony+of+Cimex+lectularius+%28Hemiptera%3A+Cimicidae%29+using+an+artificial+feeding+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Maintenance of a laboratory colony of Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae) using an artificial feeding technique.</a> J. Med. Entomol. 39, 675-679 (2002).</li>
<li>Brogdon, W. G., McAllister, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplification+of+adult+mosquito+bioassays+through+use+of+time-mortality+determinations+in+glass+bottles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Mosq.+Control.+Assoc%22%5BJournal%5D)">Simplification of adult mosquito bioassays through use of time-mortality determinations in glass bottles.</a> J. Am. Mosq. Control. Assoc. 14, 159-164 (1998).</li>
<li>Katarzyna, K., Saddler, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+and+larval+nutrition+on+phenotypic+expression+of+insecticide-resistance+in+Anopheles+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of age and larval nutrition on phenotypic expression of insecticide-resistance in Anopheles mosquitoes.</a> PLoS One. 8 (3), (2013).</li>
<li>Outram, I. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/248283593_Factors_affecting_the_resistance_of_insect_eggs_to_sulphuryl_fluoride-I_The_uptake_of_sulphuryl-35S_fluoride_by_insect_eggs">Factors affecting the resistance of insect eggs to sulphuryl fluoride-II: the distribution of sulphuryl-35 S fluoride in insect eggs after fumigation.</a> J. Stored. Prod. Res. 3, 353-358 (1967).</li>
</ol>

저자는 공개 아무것도 없어.

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

빈대는 인간 호스트 1, 2, 3, 4, 5, 6에서 혈액 손실, 피부 자극, 불면증, 우울증, 불안을 일으킬 수있는 중요한 도시 해충이다. 침대 버그를 제거하고 제어하는 비용은 높은 종종 시간은 해충 방제 회사 (7)에 의해 집에 여러 개의 방문이 필요합니다. 여러 방문은 보통 때문에 침대 버그의 비밀 행동을 죽이는과 관련된 어려움 필요합니다. 특히, 침대 벌레 알은 그들의 작은 크기와 껍질로 태아 보호의 제어가 곤란하다. 현재 미국 전역의 많은 해충 방제 기업에 대한 일반적인 관행은 화학 살충제를 사용하여 침대 버그에 대한 가정을 치료하는 것입니다. 이것은 잘 알려져계란을 제어하기 어려운 것으로, 많은 회사들은 재 치료 8 2 주 기간을 구현 하였다. 첫 번째 령이 등장하고 소문 살충제로 죽일 쉽게 될 수 있도록이 침대 버그 달걀을 부화 할 수있는 충분한 시간이 있습니다. 그러나, 침대 버그 계란, 첫 번째 령충에 대한 액체 살충제의 효능을 평가하는 연구의 부족이있다. 곤충 계란 많은 농업 해충 이외에 빈대 이외 도시 해충으로 제어 할 수있는 가장 어려운 수명 단계로 설명되었다. 몇 가지 연구가 살충제 저항성을보고하면서 이러한 어려움의 대부분은 껍질에 기인하고있다. 계란 단계에서 저항, 배추 11 xylostella, 10 capitis Triatoma의 infestans 9 Pediculus humanus에 Rhyzopertha의 도미니카 (12)를 기록하고있다 <em&gt; CIMEX lectularius (13), 복수 저장 제품 딱정벌레 (즉 Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus입니다 및 Rhyzopertha의 도미니카). 14 껍질 통해 살충제 침투와 관련된 계란 스테이지 미성숙 단계뿐만 아니라 합병증 저항성의 발달은 이러한 성장 단계에 대한 살충 효과 생물 검정에 대한 요구를 필요로한다. 이 프로토콜은 일반적인 침대 버그의 계란과 첫 번째 령 단계에서 살충제의 효과를 결정하기위한 단계별 절차를 제공하고, CIMEX는 lectularius. 이들 프로토콜 모두는 LC (50) 값의 정량화를 허용하는 농도 - 반응 분석이다. 농도 - 반응 분석은 일반적으로 그러나이 프로토콜은 쉽게 베드 버그 계란, 첫 번째 령충 그룹을 치료에 적용되어, 독성 연구에 사용됩니다. 이러한 분석은 적용 할 수있다다양한 곤충 종의 계란과 미성숙 한 삶의 단계에 대한.

<table><tbody><tr><td>Petri dishes</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>08-757-105</td><td>Plastic</td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>Whatman</td><td>1001-042</td><td></td></tr><tr><td>Featherweight forceps</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>4750</td><td></td></tr><tr><td>Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)</td><td>Bayer CropScience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)</td><td>FMC Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tube</td><td></td><td>06-443-18</td><td>50 mL; flat-top threaded</td></tr><tr><td>Fine mesh</td><td></td><td>7250C</td><td></td></tr><tr><td>KimWipe</td><td></td><td>06-666A</td><td>11 cm x 21 cm</td></tr><tr><td>Small paint brush</td><td></td><td></td><td>Any small paint brush</td></tr><tr><td>Hardboard panels</td><td></td><td></td><td>Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store</td></tr><tr><td>Metal weights</td><td></td><td></td><td>Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface</td></tr></tbody></table>

a method for evaluating insecticide efficacy against bed bug, cimex lectularius, eggs and first instars

해충에 대한 살충제의 표준 독성 평가는 주로 성인 곤충에 실시하고 있습니다. 평가는 용량 또는 살충제의 농도 증가 사망률 증가 용량 - 반응 또는 농도 - 반응 곡선에 기초한다. 표준 치사 농도 (LC 50)과 치사량 (LD 50) 테스트 인구의 50 %의 사망률을 초래할 테스트는 계란과 조기 령 또는 nymphal 단계와 같은 비 성인 곤충 생활 단계에 대한 살충제의 독성을 평가하기 위해 도전 할 수있다 . 그러나이 정보는 제어 및 치료 노력에 영향을 미치는 모든 침대 버그 삶의 단계에서 살충제의 효과를 이해하는 데 필수적이다. 이 프로토콜은 침대 버그 계란에 대한 수정 된 표준 찍기 생물 검정 및 nymphal 첫 번째 령충 치료에 대한 연락처 살충 분석을 사용합니다. 이러한 분석은 또한 살충제 평가를 위해 50 LC 값을 정량화하는 농도 - 반응 곡선을 생성한다.

계란은 이미다클로 프리드 / β-cyfluthrin의 5 가지 농도 (μL / ㎖)로 감소 하였다. 첫 번째 령충은 이미다클로 프리드 / β-cyfluthrin의 다섯 가지 농도 (그림 2)의 처리 표면에 배치했다. 할란, 리치몬드, 에픽 센터 (표 1) : 우리는 C. lectularius의 세 가지 다른 집단을 사용했다. 할란 변형은 피?...

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A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars

살충제의 평가는 종종 성인 곤충보다는 미성숙 단계에 대해 목표로하고 있습니다. 여기, 우리는 첫 번째 nymphal 침대 버그 단계에 대한 비교와 함께 침대 버그 계란에 대한 살충제를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 프로토콜은 비 성인의 삶의 단계에서 살충제의 효능을 평가하기 위해 다른 곤충에 따라 조정 될 수있다.

베드 버그에 대해 살충제 효능을 평가하는 방법에있어서,<em&gt; CIMEX lectularius</em&gt;, 계란과 첫 령충

Standard toxicity evaluations of insecticides against insect pests are primarily conducted on adult insects. Evaluations are based on a dose-response or ...

a-method-for-evaluating-insecticide-efficacy-against-bed-bug-cimex

Research

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Environment

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug, Cimex lectularius, Eggs and First Instars

11.3K 조회수.  University of Florida.  살충제의 평가는 종종 성인 곤충보다는 미성숙 단계에 대해 목표로하고 있습니다. 여기, 우리는 첫 번째 nymphal 침대 버그 단계에 대한 비교와 함께 침대 버그 계란에 대한 살충제를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 프로토콜은 비 성인의 삶의 단계에서 살충제의 효능을 평가하기 위해 다른 곤충에 따라 조정 될 수있다. 

비디오: A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The disease is initiated by feeding activities of the invasive beech scale insect, Cryptococcus fagisuga, which creates entry points for infection by one of the Neonectria species of fungus.&#160;Without scale infestation, there is little opportunity for fungal infection. Using scale eggs to artificially infest healthy trees in heavily BBD impacted stands demonstrated that these trees were resistant to the scale insect portion of the disease complex1.&#160;Here we present a protocol that we have developed, based on the artificial infestation technique by Houston2, which can be used to screen for scale-resistant trees in the field and in smaller potted seedlings and grafts.&#160;The identification of scale-resistant trees is an important component of management of BBD through tree improvement programs and silvicultural manipulation.

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect Cryptococcus fagisuga Lind.

Beech bark disease is initiated by feeding activities of the beech scale insect that create fungal entry points in the bark.&#160;Trees that are resistant to the scale insect are also disease resistant.&#160;Here we present the protocol we have developed to screen individual beech trees for beech scale resistance.

비치 스케일 곤충에 대한 저항에 대한 미국 밤나무를 (화면에 기술<em&gt; 크립토 fagisuga</em&gt; 린드.)

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

연구

환경과학

Functional Characterization of Carboxylesterases in Insecticide Resistant House Flies, Musca Domestica

Carboxylesterase-mediated metabolism is thought to play a major role in insecticide resistance in various insects. Several carboxylesterase genes were found up-regulated in the resistant house fly strain, whereas their roles in conferring insecticide resistance remained to be explored. Here, we designed a protocol for the functional characterization of carboxylesterases. Three example experiments are presented: (1) expression and isolation of carboxylesterase proteins through a baculovirus-mediated insect Spodoptera frugiperda (Sf9) cell expression system; (2) a cell-based MTT (3-[4, 5-dimethykthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide) cytotoxicity assay to measure the tolerance of insect cells to different permethrin treatments; and (3) in vitro metabolic studies to explore the metabolic capabilities of carboxylesterases toward permethrin. The carboxylesterase gene Md&#945;E7 was cloned from a resistant house fly strain ALHF and used to construct a recombinant baculovirus for Sf9 cells infection. The cell viabilities against different permethrin treatments were measured with the MTT assay. The enhanced cell tolerance of the experimental group (Md&#945;E7-recombinant baculovirus infected cells) compared with those of the control groups (CAT-recombinant baculovirus infected cells and GFP-recombinant baculovirus infected cells) to permethrin treatments suggested the capabilities of Md&#945;E7 in metabolizing insecticides, thereby protecting cells from chemical damages. Besides that, carboxylesterase proteins were expressed in insect Sf9 cells and isolated to conduct an in vitro metabolic study. Our results indicated a significant in vitro metabolic efficiency of Md&#945;E7 toward permethrin, directly indicating the involvement of carboxylesterases in metabolizing insecticides and thus conferring insecticide resistance in house flies.

Functional Characterization of Carboxylesterases in Insecticide Resistant House Flies, Musca Domestica

Here, we present a protocol to produce house fly carboxylesterase proteins in vitro with a baculovirus mediated insect cell expression system and later functionally characterize their roles in metabolizing permethrin, thereby, conferring pyrethroid resistance by conducting cell-based MTT assay and in vitro metabolic studies.

살충제 내성 집 파리, 파리 자리 부채 에 Carboxylesterases의 기능 특성

Carboxylesterase-mediated metabolism is thought to play a major role in insecticide resistance in various insects. Several carboxylesterase genes were ...

생화학

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these insecticides against adult insects or their impact on reproductive output. However, currently available methods assess adult mortality only, limiting the selection of novel insecticides with a different mode of action. In this work, different experimental methods were examined to identify the diverse effects on the CBB under laboratory conditions. For this, green coffee fruits (GFs) were collected and disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution followed by UV light irradiation. In parallel, CBB adults from a colony were disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution. To assess fruit protection (preinfestation), the fruits were placed in plastic boxes, and the insecticides were applied. Then, the CBB adults were released at a rate of two CBBs per GF. The GFs were left under controlled conditions to evaluate CBB infestation and survival after 1, 7, 15, and 21 days. To evaluate insecticide efficacy after CBB infestation (postinfestation), CBB adults were released to the GFs in a 2:1 ratio for 3 h at 21 &#176;C. Infested fruits showing CBB adults with their abdomens partially exposed were selected and placed in 96-well racks, and the CBBs boring into the fruits were treated directly. After 20 days, the fruits were dissected, and the CBB biological stages inside each fruit were recorded. The GFs served as substrates that mimic natural conditions to evaluate toxic, chemical, and biological insecticides against the CBB.

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

A method using green coffee fruits (GFs) was developed to test the toxicity of insecticides against the coffee berry borer (CBB). Insecticides or toxic substances were applied to disinfected GFs before or after CBB infestation. Insect mortality, repellency, and reproductive capacity, in addition to other parameters, were evaluated.

커피 베리 보어 hypothenemus hampei에 대한 통제제 및 살충제를 테스트하는 방법론

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

Evaluating the Effect of Pesticides on the Larvae of the Solitary Bees

Current ecological risk assessments of pesticides on pollinators have primarily considered only laboratory conditions. For the larvae of solitary bees, ingestion of provisions contaminated with pesticides may increase the mortality rate of the larvae, decrease the collection rate and the population of adult solitary bees in the next year from a demographic perspective. But there are limited studies on the effects of pesticides on the larvae of solitary bees. Therefore, understanding how pesticides influence the larvae of solitary bees should be considered an integral part of pesticide ecological risk assessment. This study presents a method to expose the larvae of solitary bee, Osmia excavata, to lethal or sublethal doses of pesticide, tracking larval weight gain, developmental duration, eclosion ability, and food consumption efficiency conversion of ingested food. To demonstrate the effectiveness of this method, the larvae of O. excavata were fed with provisions containing acute lethal and sublethal doses of chlorpyrifos. Then, the above indexes of the treated larvae were investigated. This technique helps to predict and mitigate the risk of pesticides to pollinators.

The present protocol explains a method to feed pesticide-contaminated provisions to the larvae of the solitary bees, Osmia excavata. The procedure examines the ecotoxicity of the pesticide to the larvae of the solitary bees.

살충제가 독방 꿀벌의 유충에 미치는 영향 평가

Current ecological risk assessments of pesticides on pollinators have primarily considered only laboratory conditions. For the larvae of solitary bees, ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

모니터링 살충제 저항 Bioassays

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

생물학

Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house single or multiple neurons inside, are considered to make the major contribution in responding to the chemical stimuli. By directly recording action potential in the olfactory sensillum after exposure to stimuli, single sensillum recording (SSR) technique provides a powerful approach for investigating the neural responses of insects to chemical stimuli. For the bed bug, which is a notorious human parasite, multiple types of olfactory sensillum have been characterized. In this study, we demonstrated neural responses of bed bug olfactory sensilla to two chemical stimuli and the dose-dependent responses to one of them using the SSR method. This approach enables researchers to conduct early screening for individual chemical stimuli on the bed bug olfactory sensilla, which would provide valuable information for the development of new bed bug attractants or repellents and benefits the bed bug control efforts.

Bed bugs rely on olfactory receptor neurons housed in their antennal olfactory sensilla to detect semiochemicals in the environment. Utilizing single sensillum recording, we demonstrate a method to evaluate bed bug response to semiochemicals and explore the coding process involved.

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 ​​Sensillum 기록을 사용하여

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house ...

신경과학

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such as Zika, dengue and malaria. Assays for rapid, high-throughput analyses of unformulated novel chemistries against mosquito larvae and adults are presented. We describe protocols for single point-dose and dose response assays to evaluate the toxicity of small molecule chemistries to the Aedes aegypti vector of Zika, dengue and yellow fever,&#160;the malaria vector, Anopheles gambiae and the northern house mosquito, Culex quinquefasciatus, on contact and via ingestion. As an example, we evaluated the toxicity of amitriptyline, a small molecule antagonist of G protein-coupled receptors, via larval, adult topical and adult blood-feeding assay. The protocols provide a starting point to investigate insecticide potential. Results are discussed in the context of additional experiments to explore product applications and mechanisms for delivery.

Protocols are described for assessing the toxicity of chemistries to immature and adult mosquitoes for development as new classes of larvicides, adulticides and endectocides. The protocols enable high-throughput testing of multiple chemistries at single-point dose and subsequent evaluation via dose response assay to determine toxicity on contact or via ingestion.

모기에 소설 Insecticidal 화학 물질의 독성을 테스트 하기 위한 프로토콜

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. Insecticide resistance surveillance of mosquito populations is typically done through Centers for Disease Control and Prevention (CDC) bottle bioassays or World Health Organization (WHO) tube tests. However, these methods can result in a high degree of variability in mortality data due to variable insecticide contact with&#160;the insect, the relatively small numbers of organisms tested, extensive variation in mass between populations, and constantly changing environmental conditions, leading to variable outcomes. This paper presents the topical application bioassay, adapted as a high-throughput phenotypic bioassay for both mosquitoes and fruit flies, to test large numbers of insects along&#160;a range of insecticide concentrations.
This assay 1) ensures consistent treatment and insecticide contact with every organism, 2) produces highly specific dose-response curves that account for differences in average mass between strains and sexes (which is particularly important for field-collected organisms), and 3) allows for the calculation of statistically rigorous median lethal doses (LD50), which are necessary for resistance ratio comparisons-an alternative surveillance approach from diagnostic dose mortality, which is also used for larvicide resistance surveillance. This assay will be a complementary tool for accurately phenotyping mosquito populations and, as illustrated using fruit flies, is easily adaptable for use with other insects. We argue that this assay will help fill the gap between genotypic and phenotypic insecticide resistance in multiple insect species.

We describe the methodology and importance of the topical application bioassay to measure insecticide susceptibility in mosquitoes and fruit flies. The presented assay is high-throughput, utilizes insect mass-thus allowing for calculating a mass-relativized lethal dose instead of concentration-and likely has lower variability than other similar methods.

모기 및 초파리에 대한 살충제 독성을 정량화하기위한 국소 응용 생물 검정

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. ...

Feeding Assay를 통한 Helicoverpa armigera 에 대한 식물화학적 효과 평가

Developing a Feeding Assay System for Evaluating the Insecticidal Effect of Phytochemicals on Helicoverpa armigera

Helicoverpa armigera, a lepidopteran insect, is a polyphagous pest with a worldwide distribution. This herbivorous insect is a threat to plants and agricultural productivity. In response, plants produce several phytochemicals that negatively impact the insect's growth and survival. This protocol demonstrates an obligate feeding assay method to evaluate the effect of a phytochemical (quercetin) on insect growth, development, and survival. Under controlled conditions, the neonates were maintained until the second instar on a pre-defined artificial diet. These second-instar larvae were allowed to feed on a control and quercetin-containing artificial diet for 10 days. The insects' body weight, developmental stage, frass weight, and mortality were recorded on alternate days. The change in body weight, the difference in feeding pattern, and developmental phenotypes were evaluated throughout the assay time. The described obligatory feeding assay simulates a natural mode of ingestion and can be scaled up to a large number of insects. It permits one to analyze phytochemicals' effect on the growth dynamics, developmental transition, and overall fitness of H. armigera. Furthermore, this setup can also be utilized to evaluate alterations in nutritional parameters and digestive physiology processes. This article provides a detailed methodology for feeding assay systems, which may have applications in toxicological studies, insecticidal molecule screening, and understanding chemical effects in plant-insect interactions.

저자 스포트라이트: 곤충 해충 관리를 위한 사료 분석법의 개발 및 과제 

This protocol describes the obligate feeding assay to evaluate the potentially toxic effect of a phytochemical on the lepidopteran insect larvae. This is a highly scalable insect bioassay, easy to optimize the sublethal and lethal dose, deterrent activity, and physiological effect. This could be used for screening eco-friendly insecticides.

Helicoverpa armigera에 대한 Phytochemicals의 살충 효과를 평가하기 위한 공급 분석 시스템 개발

Helicoverpa armigera, a lepidopteran insect, is a polyphagous pest with a worldwide distribution. This herbivorous insect is a threat to plants and ...

베드 버그에 대해 살충제 효능을 평가하는 방법에있어서,

요약

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비치 스케일 곤충에 대한 저항에 대한 미국 밤나무를 (화면에 기술

살충제 내성 집 파리, 파리 자리 부채 에 Carboxylesterases의 기능 특성

커피 베리 보어 hypothenemus hampei에 대한 통제제 및 살충제를 테스트하는 방법론

살충제가 독방 꿀벌의 유충에 미치는 영향 평가

모니터링 살충제 저항 Bioassays

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 Sensillum 기록을 사용하여

모기에 소설 Insecticidal 화학 물질의 독성을 테스트 하기 위한 프로토콜

모기 및 초파리에 대한 살충제 독성을 정량화하기위한 국소 응용 생물 검정

Helicoverpa armigera에 대한 Phytochemicals의 살충 효과를 평가하기 위한 공급 분석 시스템 개발

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