이 프로토콜은 독방 꿀벌에 대한 살충제의 부작용을 예측하고 완화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 유충이 조항의 잔류 농약에 먹이를 먹는 것을 시뮬레이션하는 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 Osmia excavata의 생물학적 특성이 사회적 꿀벌에 비해 독특하기 때문에 중요하며 O.excavata, 특히 유충에 대한 연구는 거의 수행되지 않았습니다.
공급 튜브를 준비하려면 전기 권선 철을 사용하여 2 밀리리터 원심 분리 튜브의 뚜껑에 직경 0.3 밀리미터 구멍을 펀치하십시오. 살충제를 준비하려면 기술 등급의 살충제를 아세톤에 용해시켜 밀리리터 당 10 밀리그램의 스톡 용액을 얻은 다음 용액의 구배 희석을 다섯 가지 이상의 농도로 수행하십시오. 다음으로, 대량 사육 프로그램에서 조항과 새로 부화 한 Osmia excavata 유충이 포함 된 플라스틱 꿀벌 튜브를 구입하십시오.
부드러운 브러시를 사용하여 유충을 부드럽게 분리하고 둥지 내의 공급 크기 및 세포 위치에 따라 암컷 유충을 선택한 다음 선택한 암컷 유충과 함께 직경 60 밀리미터의 페트리 접시에 균일 한 크기 조항을 놓고 사용하기 위해 따로 보관하십시오. 살충제 처리를 진행하기 전에 조항을 저울질하십시오. 살충제로 조항을 처리하려면 먼저 살충제 용액의 양을 측정하십시오.
그런 다음 선택한 고르게 크기의 조항을 희석 된 살충제 용액에 10 초 동안 담그십시오. 살충제로 조항을 처리 한 후 살충제 용액의 부피를 다시 측정하십시오. 멸균 작업 테이블의 조항을 공기 건조 한 후 구멍이있는 준비된 원심 분리 튜브에 추가하십시오.
다음으로, 60 마리의 암컷 유충의 무게를 측정하고 부드러운 브러시를 사용하여 유충을 자연적으로 건조 된 공급물의 표면으로 옮기고 튜브 당 하나의 유충을 첨가합니다. 상대 습도가 65 ~ 75 % 인 섭씨 25 플러스 또는 영하 2 도의 어둠 속에서 성장 챔버에서 유충을 후퇴시킵니다. 급성 치사 독성 시험의 경우, 48 시간 동안 치료 및 대조 조항에 배치 된 후 유충의 사망률을 측정하십시오.
다음으로, 곤충 사육 48 시간 후에 남아있는 조항을 계량하여 각 유충이 소비하는 공급량을 결정한 다음이 공식을 사용하여 각 유충이 섭취 한 비율과 각 조항의 살충제 함량에 따라 각 유충이 소비하는 각 농도의 살충제 복용량을 계산하십시오. 치명적인 독성 테스트의 경우, 애벌레 발달 기간을 측정하기 위해 검은 빛 램프 아래에서 누에 고치를하는 동안 매일 O.excavata를 관찰하십시오. 그런 다음 애벌레 체중 증가를 결정하기 위해 치료 14 일 후에 유충의 무게를 측정하십시오.
다음으로, 섭취 14 일 후에 남은 식량을 계량하여 섭취 한 음식의 소비 및 전환 효율을 계산하십시오. 그리고 방제 꿀벌이 성인으로 출현 할 때 작은 가위를 사용하여 누에 고치를 저격하여 망토의 수를 조사하십시오. 급성 치사 독성 시험은 O.excavata 유충에 대한 클로르피리포스의 LD50 값이 꿀벌 당 0.001 마이크로그램이라는 것을 보여주었다.
치사하 독성 시험에서, 투여량이 증가함에 따라, 유충 체중 증가, 소비 및 섭취된 음식의 전환 효율의 지수 값은 치료를 위해 감소하였고, 대조군에 비해 가장 낮은 값은 꿀벌 당 0.013 마이크로그램의 클로르피리포스에서 관찰되었다. 반대로, 가장 연장된 유충 발달 기간은 대조군 처리와 비교하여 꿀벌 당 0.016 마이크로그램의 클로르피리포스에서 관찰되었다. 클로르피리포스가 에클로션 속도에 미치는 영향에 대한 평가는 클로르피리포스의 섭취된 투여량과 O.excavata의 에클로션 속도 사이에 유의한 부정적인 선형 관계를 나타냈다.
섭취 된 복용량이 대조군 치료의 복용량보다 꿀벌 당 0.02 마이크로 그램을 초과했을 때 폐색률은 상당히 낮았다. 이 프로토콜에서는 테스트 오류를 최소화하기 위해 균일한 크기의 조항을 스크리닝하는 것이 중요합니다. 이 기술은 살충제가 독방 꿀벌의 성인 비행 및 번식력에 미치는 영향을 탐구하여 낮은 회복률과 인구 감소의 문제를 해결하는 데 도움이됩니다.
