무엇보다도이 프로젝트에 참여한 어머니 들께 진심으로 감사드립니다. 다음으로, 우리는 샘플링 절차, 마취과 의사, 간호사 마취 전문의 및 외과 간호사를 돕고 촉진 한 모든 인원을 인정합니다. 이 프로젝트는 남유럽 노르웨이 지역 보건 당국과 노르웨이의 여성 건강, 오슬로 대학 자문단 및 오슬로 대학 병원이 제공하는 지역 기금으로 기금을 마련하지 않고는 불가능했을 것입니다.

이 연구는 오슬로 대학 병원의 데이터 보호 관리 및 노르웨이 남부 의료 보건 연구 윤리위원회 (2419/2011)의 승인을 받았습니다. 모든 참가자는 포함시 서면 동의서에 서명했습니다. 1. 준비 사항 참고 : 절차 일정은 그림 1에 요약되어 있습니다. <img alt="그림 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig1.jpg" /> 그림 1 : 4- 용기 시료 채취 절차에 관련된 타이밍과 인원을 설명하는 순서도. 하나의 색상은 한 사람을 나타냅니다. 방법에 대한 자세한 설명은 프로토콜에 나와 있습니다. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55847/55847fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 직원 <ol><li&gt; 초음파 측정을 수행하는 고도로 숙련 된 태아 의학 전문가, 수술을 담당하는 산부인과 의사, 산과 의사 중 한 명과 샘플을 채취하는 간호사 두 명, 혈액 가스 분석을 담당하는 조교 1 명, 연속적으로 그리고 수집 직후 다른 샘플. 참고 :보다 고급 수집 태반 조직의 경우, 추가 사람이 필요합니다. </li></ol></li><li> 장비 <ol><li> 장비, 얼음 콜드 1 M 인산염 완충 식염수 (PBS) 50 ML, 차가운 RNA 안정 솔루션 25 ML과 최적의 절단 온도 화합물 (OCT) 0.5 ML의 5 ML을 준비합니다. vacutainers 및 튜브를 표시합니다. 장비의 임시 목록을 참조하십시오. </li></ol></li></ol> 2. 모성 특성 <ol><li> 모성 임상 및 비 임상 특징을 포함하여 기록하고 관련 질문과 저를 반복하십시오.인도시 체중을 포함한 유지 관리비. 제왕 절개 전에 절식 기간을 기록하고 수술 중 저혈압 증상을 기록하십시오. 참고 : 세계 임신 협동 조합 (COLAB)의 최신 간행물에보고 된 최소한의 산모 임상 데이터 세트를 포함하십시오. 이 기사는 또한 연구 집단을 선정 할 때 매우 중요한 몇 가지 측면을 포함하고 있으므로 연구를 계획하는 동안 다루어야합니다 18 . </li><li> 민족, 나이 및 체질량 지수 (BMI)를 포함한 부계 특징을 기록하는 것을 고려하십시오. </li></ol> 3. 초음파 <ol><li> 단식 상태의 여성과 함께 배달 당일 도플러 초음파 검사를 수행하십시오. 대동맥과 대정맥의 압박을 피하기 위해 태아의 정지 상태에서 여성을 반 앙복 자세로 검사하고 관심 부위와 약간 반대 방향으로 기울입니다. 에서 출력 모니터링디스플레이상의 기계적 및 열적 인덱스에 의한 강도. </li><li> 탯줄 정맥 <ol><li> 태아 복부의 시상 또는 사시 절제로 제대 정맥을 시각화하십시오. 눈에 보이는 가지 이전에 복부 제대 정맥의 직선 부분에서 내부 혈관 직경을 측정합니다. 정규 B 모드를 사용하고 혈관 직경을 측정하기 위해 수직 인 오손 각도에서 혈관을 가시화하고 박동 직경 변화의 영향을 최소화하기 위해 이후의 측정을위한 몇 가지 최적의 프레임을 유지합니다. <ol><li> 측정을 5 ~ 10 배 (19)를 반복합니다. </li></ol></li><li> 동일한 사이트에서 도플러 초음파를 사용하고 시간 평균 최대 속도 (TAMX)를 측정하기 위해 가능한 한 낮은 주입 각도 (항상 &lt;30 °)를 얻기 위해 프로브를 조정하십시오. 3 - 5 초 (비 맥동 흐름)의 속도를 구하십시오. </li></ol></li><li> 자궁 동맥 <ol><li> 도플러 사용자궁 동맥이 내 장골 동맥에서 분지 된 직후에 외 골반 동맥을 가로 지르는 동안 자궁 동맥을 시각화하는 초음파입니다. 이 부위에서 프로브를 조정하여 낮은 발병 각도 (항상 &lt;30 °)를 얻고 TAMX를 측정하십시오. 3 개의 심장주기의 평균 속도로 속도를 구하십시오. </li><li> 동일한 위치에서 TAMX가 측정되는 것과 같은 위치에서 수직 각도를 얻지는 않을 것이므로 직경 측정을위한 위치에 가깝게 직경 측정을위한 정확한 각도를 얻기 위해 용기를 원위리로 따라 가십시오. 컬러 도플러 초음파로 평가 한 바에 따라이 부위 이전에 눈에 보이는 혈관이 분지되면 직경 측정을 제외하십시오. <ol><li> 정규 B 모드를 사용하고 혈관 직경을 측정하기 위해 수직 인 오손 각도에서 혈관을 가시화하고 박동 직경 변화의 영향을 최소화하기 위해 이후의 측정을위한 몇 가지 최적의 프레임을 유지합니다. </li><li> 측정을 5 ~ 10 배 (19)를 반복합니다. </li></ol></<html> li&gt; </ol></li><li> 태반의 위치를 ​​기록하십시오. </li></ol> 4. 4 혈관 혈액 샘플링 참고 : 절차 일정은 그림 1에 나와 있으며 샘플 개요는 그림 2에 나와 있습니다. <img alt="그림 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig2.jpg" /> 그림 2 : 태반 혈관 및 표본 추출 사이트의 개략도. 4 혈관 샘플링 방법에서 혈액 샘플은 자궁 정맥, 요골 동맥 (자궁 동맥의 대용 물) 및 제대 동맥 및 정맥에서 가져옵니다. 자궁 동맥과 제대 정맥의 혈류는 초음파로 측정됩니다. 태반의 조직 샘플을 수집합니다. 삽화 : Øystein H. Horgmo, 오슬로 대학.5847fig2large.jpg &quot;target =&quot;_ blank &quot;&gt;이 그림의 확대 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. <ol><li> 안전 절차 <ol><li> 작업장의 모든 인원에게 장갑, 수술 용 양복, 마스크 및 모자를 착용하십시오. </li><li> 외과 의사 및 연구 인력에게 외과 수술 용 복장, 마스크, 모자, 가운 및 이중 장갑을 착용하십시오. 안경은 옵션입니다. </li><li> 혈액 샘플을 장갑으로 취급하는 직원을 제공하십시오. </li><li> 태반 샘플을 장갑과 외과 용 마스크로 다루는 요원을 제공하십시오. 균질화에는 후드 사용이 필요합니다. </li></ol></li><li> 수술실에서의 준비 <ol><li> 브리핑을하고 수술 시작 전 샘플링을 돕는 모든 요원에게 장비를 건네주십시오. </li><li> 필요한 말초 동맥 및 정맥 접근을 도와 줄 마취과 의사이자 마취과 간호사와 상담하십시오.샘플링 전에 액체를 정맥 내 투여하지 마십시오. </li><li> 요골 동맥을 조력하는 사람에게 주사 바늘없는 세 개의 주사기 (10 mL)를 전 대퇴 정맥 샘플과 보조 주사기 (20 mL와 10 mL 중 한 개)와 혈액 가스 주사기 (헤파린과 함께) 한 사람에게 준다. </li><li> 수술 필드에 2 개의 멸균 주사기 (20 mL), 5 개의 멸균 주사기 (10 mL), 3 개의 &quot;나비 바늘&quot;및 2 개의 혈액 가스 주사기를 준비하십시오. </li></ol></li><li> 혈관에 접근. <ol><li> 제왕 절개 전에 표준 절차를 따라 말초 정맥 주사 (iv) 접근을 보장하십시오. 참고 : 전두엽 정맥은이 부위에서 샘플을 추출하기 쉽기 때문에 바람직합니다. </li><li> 초음파 또는 촉진에 의해 손목에서 요골 동맥을 국소화하십시오. 피하 리도카인 진통제 0.5 mL에 따라 요골 동맥에 동맥을 삽입한다. 삽입이 3 회 실패한 경우이 사이트에서 샘플링을 포기합니다.여자가 삽입 중에 통증을 느낀다. 참고 : 표준 절차에 따라 제왕 절개 수술 절차를 수행하십시오. 샘플링 절차에 필요한 조정 만 아래에 밑줄이 그어져 있습니다. </li></ol></li><li> 모성 혈액 샘플 참고 : 자궁 절개 전에 세 모체 혈액 샘플 (자궁 정맥, 요골 동맥 및 전두 정맥)을 동시에 얻습니다. <ol><li> 자궁 정맥 들어, 복강을 열고 복벽을 들어 올리고 자궁 앞쪽에 자궁 정맥의 주요 가지를 드러내는 견인기를 사용합니다. 태반과 같은면의 자궁 정맥 분지에서 혈액을 채취하거나 태반이 자궁 정중선에 위치하면 가장 두드러진 정맥을 사용하십시오. <ol><li> 자궁 정맥의 혈액 가스 주사기에 버터 플라이 바늘을 약 30도 각도로 삽입하고 부드러운 흡입을 피하여 혈액을 채취합니다.용혈. 나비 바늘의 iv 위치를 조심스럽게 고정한 채로 채워진 혈액 가스 주사기를 20 mL와 10 mL 주사기로 연속적으로 교체하십시오. 참고 : 최적의 접근은 선택한 자궁 정맥의 반대쪽에 서있을 때 가장 잘 보장됩니다. </li></ol></li><li> 요골 동맥의 경우, 동맥 내에서 흡인을하십시오. 첫 번째 5 mL를 버리고 혈액 가스 분석을 위해 헤파린 주사기에서 3 mL를 흡입 한 다음 두 개의 주사기 (20 + 10 mL)에서 3 mL를 흡입합니다. </li><li> 대퇴 정맥을 위해서는 정맥 카테터에서 천천히 흡인하십시오. 첫 번째 5 mL를 버리고 세 개의 주사기 (10 mL)로 30 mL를 흡입하십시오. </li><li> 복부 폐쇄를 시작하기 전에 자궁 정맥의 샘플링 위치를 최종 검사하십시오. </li></ol></li><li> 태아 혈액 샘플 <ol><li> 아이가 태어 났을 때 즉시 제대를 고정 시키거나 태반을 옮기지 않고 제대 동맥으로부터 혈액을 배출하십시오. 기지 시작혈액 가스 분석을위한 주사기를 사용하고 가능한 경우 3 개의 10 mL 주사기를 따르십시오. </li><li> 동맥 표본이 확보되면 제대 정맥 (혈액 가스 및 20 + 10mL 주사기)에서 표본 추출하기 전에 코드를 클램프하고 조산사에게 아이를 넘겨줍니다. 참고 : 자발적으로 분리하지 않은 경우 출산 후 몇 초 내에 모든 제대 시료를 수집하고 태반 을 제자리에 놓습니다. </li><li> 후기 코드 고정에 관한 노르웨이의 권장 사항을 따르십시오. 고민이 된 어린이의 경우 즉시 코드를 조이고 자르십시오. 조산사 및 신생아 전문의에게 아이를 넘겨주십시오. </li></ol></li><li> 혈액 샘플 취급 <ol><li> 나머지 혈액 샘플을 준비하면서 혈액 가스 주사기를 얼음에 담아 혈액 가스 분석기에서 5 분 이내에 분석하십시오. </li><li> 혈액 샘플을 즉시 vacutainers로 옮기고 얼음 위에 올려 놓기 전에 1-2 분 동안 로커에 플라스마 튜브를 놓습니다. 혈청 튜브를 노동에 맡기십시오.30 분 동안 정착하기위한 벤치. 참고 : 5 개의 사이트 모두에서 양질의 품질을 유지하기 위해 동시에 샘플을 준비해야하기 때문에 이것은주의가 필요한 절차에서 중요한 단계입니다. </li><li> 가능한 한 빨리 플라스마 샘플을 원심 분리기에 넣고 30 분 이내에 6 ° C, 2,500 xg에서 20 분간 원심 분리하십시오. </li><li> 30 분 후, 2,500 x g에서 10 분간 실온에서 혈청 샘플을 원심 분리한다. </li><li> 분주는 혈장없는 혈장을 보장하기 위해 펠렛 위에 뜨는 0.5 ML을 떠나, 2 ML cryo 튜브에 신중하게 뜨는. </li><li> 샘플을 -80 ° C에 보관하십시오. </li></ol></li></ol> 5. 태반 조직의 수집 <ol><li> 태반이 납품 된 후 가능한 한 빨리 얼음으로 냉각 된 절개 트레이에 내려 놓습니다. 가장 긴 직경과 직경을 90도까지 사진 으로 찍고 측정하십시오. </li><li> 태반 무게를 잰다. </li><li> 무게, 두 직경, 모든 g를 기록하십시오.로스 병리학, 탯줄에 혈관 수 및 배달에서 태반을 얼음 위에 놓았을 때까지의 시간 간격. 참고 : 임상 적으로 표시된 경우 병리 검사에 태반을 보냅니다. </li><li> 산모 표면이 위로 향한 태반을 놓고 솔직한 병리학 영역을 피하면서 태반의 각 사분면에 무작위로 위치한 4 - 5 개의 샘플링 사이트를 확인합니다. 가위를 사용하여 탈모기를 제거하여 산모 표면에서 3 - 5mm 떨어진 곳을 잘라냅니다. 각 사이트에서 1 ~ 2cm 3 조각의 융모 조직을 수집합니다. </li><li> 콜드 1M PBS 50 ML에서 부드럽게 수집 된 조직을 씻으십시오. 각 샘플링 사이트와 분액에서 여러 조각으로 나눕니다. 참고 : 태반 조각의 크기는 계획된 분석에 따라 달라집니다. </li><li> 0.1 - 0.5 cm 3 티슈 샘플의 분취 량을 5 개의 냉동 튜브에 첨가하고 액체 질소로 급속 냉동하십시오. </li><li> RNA 안정화 용액 25 mL와 함께 0.1 - 0.2 cm 3 의 작은 조각을 튜브에 첨가한다. 4시에 쇼핑6, 24 시간 동안 RNA 안정화 용액을 폐기하고 그것을 대체하십시오. 얼다. </li><li> OCT 0.5 mL가 달린 5 개의 cryo tube에 0.5 cm 3의 조각을 넣고, OCT로 위로 올려 놓고 혼합하고 동결시킨다. </li><li> 분석 할 때까지 시료를 -80 ° C에 보관하십시오. 참고 : Burton et al. 계획된 분석에 따라 태반 샘플링의 실용적인 측면에 대한 훌륭한 개요를 제공합니다. 20 microvillous 및 기초 막 분리에 대한 나머지 조직을 제조하고, 진공 흡착 방식에 의해 탈락 조직을 수집하기 위해 고려한다. 21 , 22 </li></ol> 6. 신생아의 특성 <ol><li> Apgar- 점수 (1, 5 및 10 분), 성별, 체중, 길이, 재태 연령 및 신생아 집중 치료실 (입원 기간 및 결과)에 대한 입원을 포함하여 신생아 특성을 기록하십시오. </li><li> 인체 측정, 공기 치환에 의한 신생아 신체 조성 측정 고려또는 X-ray 흡광도 측정법으로 측정 할 수 있습니다. 23 , 24 </li></ol> 7. 계산 <ol><li> 방사형 및 자궁 동맥에서 유사한 혈액 조성을 가정하고 자궁 평활근 정 농도 차이를 계산하십시오. 자궁 동정맥 농도 차이 = C A - C V 정맥 - 동맥 농도 차이 = C v - C a 여기서 C는 첨자가있는 농도 : A, 요골 동맥; V, 자궁 정맥; v 배꼽 정맥과 배꼽 동맥. </li><li> 체적 유량, mL / min (Q)을 계산하시오. <img alt="방정식 1" src="/files/ftp_upload/55847/55847eq1.jpg" /> 여기서 D는 혈관 직경 (cm)이고, TAMX는 시간 평균 최대 속도이고, h는 공간 혈액 속도 프로파일의 계수입니다. 제대 정맥의 계수로 0.5를 사용하고자궁 동맥 (25), (26) 0.6. </li><li> Fick의 원리에 따라 태반 섭취량과 출산량을 계산하십시오 : 자궁 입구 섭취 = ( C A - C V ) x Qm 태아 흡수 = (C의 V - C가) x Q f 아래 첨자 : m, 모성 및 f, 태아. </li></ol>

<ol>
	<li>Jansson, T., Powell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+placenta+in+fetal+programming:+underlying+mechanisms+and+potential+interventional+approaches.">Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches.</a> Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).</li><li>Hanson, M. A., Gluckman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+developmental+conditioning+of+later+health+and+disease:+physiology+or+pathophysiology.">Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology.</a> Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).</li><li>Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+placenta+project:+it's+time+for+real+time.">The human placenta project: it's time for real time.</a> Am J Obstet Gynecol. 213, 3-5 (2015).</li><li>Battaglia, F. C., Regnault, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+and+metabolism+of+amino+acids.">Placental transport and metabolism of amino acids.</a> Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).</li><li>Hay, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental-fetal+glucose+exchange+and+fetal+glucose+metabolism.">Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).</li><li>Woollett, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Transport+of+maternal+cholesterol+to+the+fetal+circulation.">Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation.</a> Placenta. 32, 218-221 (2011).</li><li>Prenton, M. A., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Umbilical+vein-artery+and+uterine+arterio-venous+plasma+amino+acid+differences+(in+the+human+subject).">Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject).</a> J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).</li><li>Cetin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+erythrocyte+amino+acids+in+mother+and+fetus.">Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus.</a> Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).</li><li>Filshie, G. M., Anstey, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+arachidonic+acid+in+plasma+and+tissues+of+patients+near+term+undergoing+elective+or+emergency+Caesarean+section.">The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section.</a> Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).</li><li>Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+and+importance+of+fetal+lactate+in+the+human+placenta+-a+new+hypothesis.">The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis.</a> J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).</li><li>Prendergast, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+production+by+the+human+placenta+in+vivo.">Glucose production by the human placenta in vivo.</a> Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).</li><li>Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplacental+arteriovenous+gradients+for+glucose,+insulin,+glucagon+and+placental+lactogen+during+normoglycaemia+in+human+pregnancy+at+term.">Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term.</a> Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).</li><li>Zamudio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoglycemia+and+the+origin+of+hypoxia-induced+reduction+in+human+fetal+growth.">Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth.</a> PLoS One. 5 (1), 8551 (2010).</li><li>Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+glucose+transfer:+a+human+in+vivo+study.">Placental glucose transfer: a human in vivo study.</a> PLoS One. 10 (2), 0117084 (2015).</li><li>Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+uteroplacental+release+of+placental+growth+factor+and+soluble+Fms-like+tyrosine+kinase-1+in+normal+and+preeclamptic+pregnancies.">In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies.</a> Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).</li><li>Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uteroplacental+arterio-venous+difference+in+soluble+VEGFR-1+(sFlt-1),+but+not+in+soluble+endoglin+concentrations+in+preeclampsia.">Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia.</a> Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).</li><li>Brar, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uteroplacental+unit+as+a+source+of+elevated+circulating+prorenin+levels+in+normal+pregnancy.">Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy.</a> Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).</li><li>Myatt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategy+for+standardization+of+preeclampsia+research+study+design.">Strategy for standardization of preeclampsia research study design.</a> Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).</li><li>Kiserud, T., Rasmussen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+repeat+measurements+affect+the+mean+diameter+of+the+umbilical+vein+and+the+ductus+venosus.">How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).</li><li>Burton, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+sample+collection+for+placental+research.">Optimising sample collection for placental research.</a> Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).</li><li>Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+preparation+of+paired,+syncytial,+microvillous+and+basal+membranes+from+human+placenta.">Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta.</a> Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).</li><li>Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+contents+of+phospholipids,+cholesterol,+and+lipid+peroxides+in+decidua+basalis+in+women+with+preeclampsia.">Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 180 (3), 587-592 (1999).</li><li>Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthropometric+estimation+of+neonatal+body+composition.">Anthropometric estimation of neonatal body composition.</a> Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).</li><li>Ellis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-composition+assessment+in+infancy:+air-displacement+plethysmography+compared+with+a+reference+4-compartment+model.">Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model.</a> Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).</li><li>Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portal+and+umbilical+venous+blood+supply+to+the+liver+in+the+human+fetus+near+term.">Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).</li><li>Acharya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+validation+of+uterine+artery+volume+blood+flow+measurement+by+Doppler+ultrasonography+in+pregnant+sheep.">Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).</li><li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate-glutamine+cycle+and+exchange+in+the+placenta-fetus+unit+during+late+pregnancy.">Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy.</a> Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).</li><li>Tuckey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+synthesis+by+the+human+placenta.">Progesterone synthesis by the human placenta.</a> Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).</li><li>Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+metabolic+response+to+maternal+starvation.">Fetal metabolic response to maternal starvation.</a> Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).</li><li>Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+effect+on+fetal+glucose+utilization.">Insulin effect on fetal glucose utilization.</a> Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).</li><li>Bujold, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+supporting+that+the+excess+of+the+sVEGFR-1+concentration+in+maternal+plasma+in+preeclampsia+has+a+uterine+origin.">Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).</li><li>Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+emerging+role+of+mTORC1+signaling+in+placental+nutrient-sensing.">The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing.</a> Placenta. 33, 23-29 (2012).</li><li>Cetin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+transport+of+amino+acids+in+normal+and+growth-restricted+pregnancies.">Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, 50-54 (2003).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

<html> 태반 4 혈관 샘플링 방법은 세 가지 주요 목적과 관련이 있습니다. 첫째, 우리의 포도당과 아미노산 연구에 의해 입증 된 것처럼 특정 물질이 어떻게 모체 측의 태반에 흡수되어 제대혈과 태아로 옮겨지는지를 연구하는데 사용될 수 있습니다. 둘째,이 방법은 프로게스테론 결과에 의해 입증 된 것처럼, 태반에 의해 생성되어 산모 또는 태아 순환계로 방출되는 물질을 연구하는 데 매우 관련이...

미국 국립 보건원 (National Institutes of Health)에 따르면, 태반은 인체 1 , 2 , 3 에서 가장 잘 이해되지 않는 기관입니다. 진행중인 임신에 비 윤리적 위험을 가하지 않으면 서 생체 내 에서 인간 태반 에 접근하여 연구하기가 어렵습니다. 그러므로 인간의 태반 기능에 대한 연구는 주로 시험 관내 및 생체 외 모델에 기반을두고있다. 태반 수송과 대사에 대한 이전 의 생체 내 연구의 대부분은 동물 4 , 5 , 6 에서 수행되었다. 그러나 태반의 구조와 기능은 종간에 상당히 다르기 때문에 인간에서 동물로 결과를 외삽하는 것은 신중해야한다. 인간 생체 내 (in vivo) 연구 에서 태아와 태아의 흡수 및 정상 생리학모든 조건을 가지고 있으며 , 화합물 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 의 통합 전이를 연구 한 사람은 없다. 이러한 기초 연구는 인간 태반에 대한 생체 내 연구가 가능하며 여러 목적을 달성 할 수 있음을 보여줍니다. 첫째, 현재 체외 , 체외 및 동물 연구 에서 유래 한 태반 기능의 현재 개념을 인간 환경에서 시험 할 수 있으므로 인간 태반에 대한 새롭고보다 구체적인 통찰력을 얻을 수 있습니다. 둘째, 비정상 태아 성장, 자간전증, 모성 당뇨병, 대사 증후군 및 기타 모체 대사 장애와 관련된 기능 장애 태반의 특성이 더 잘 특성화 될 수 있습니다. 셋째, 인간 생체 내 연구는 진단을 개발할 수있는 기회를 제공한다.틱 기능과 예측 도구. 이 배경에서 우리 는 생체 내 인간의 태반 기능을 조사하기 위해 생리 학적 데이터의 종합적인 수집을 목표로 삼았습니다 . 계획된 제왕 절개 동안, 우리는 자궁 정맥에 대한 복강 내 접근을 이용하여 태반의 모성 및 태아 측 (4 혈관 샘플링 방법)에서 들어오고 나가는 혈관으로부터 혈액 샘플을 수집합니다. 이 샘플은 영양소 및 기타 물질 (14)의 쌍 동정맥 농도 차이를 계산하는 데 사용됩니다. 또한 초음파를 이용하여 태반 양측의 체적 유량을 측정합니다. 따라서, 모든 화합물의 태반 및 태아 섭취를 정량화 할 수있다. 또한, 태반에 의해 방출되는 물질을 산모 및 태아 순환계 15 , 16 , 17 로 결정하는 것이 가능합니다. 결합 할 때엄마와 아이의 임상 적 매개 변수와 태반 및 기타 관련 조직의 분석을 통해이 방법은 동일한 모체 - 태아 쌍 에서 생체 내 태반 기능의 여러 측면을 통합 할 수있는 흥미 진진한 잠재력을 가지고있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1323">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:557px;">Maternal body composition</td>
			<td style="width:173px;"></td>
			<td style="width:107px;"></td>
			<td style="width:487px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Impedance scale</td>
			<td>Tanita</td>
			<td></td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ultrasound measurements&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sequoia 512 ultrasound machine</td>
			<td>Acuson</td>
			<td></td>
			<td>equipped with a curved transducer with colour and pulsewave Doppler (frequency bandwidth 2-6 MHz)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Blood samples</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Arerial cannula</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>682245</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">20cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle</td>
			<td>Termo</td>
			<td>SS-20ES</td>
			<td>or similar. 3 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">10cc Eccentric Luer Tip Syringe without Needle</td>
			<td>Termo</td>
			<td>SS-10ES</td>
			<td>or similar. 9 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5cc 6% Luer Syringe without Needle</td>
			<td>Termo</td>
			<td>SS-05S1</td>
			<td>or similar. 2 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Arterial blood gas syringe&#160;</td>
			<td>Radiometer Medical</td>
			<td></td>
			<td>or similar. 4 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile winged needle connected to flexible tubing, 21 gauge</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>450081</td>
			<td>(intended for single use).3 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacutainer tube 6 mL EDTA&#160;</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>456043</td>
			<td>or similar. Label with sample site. 10 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacutainer tube 5 ml LH Lithium Heparin Separator</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>456305</td>
			<td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vacutainer tube 6 mL Serum Clot Activator&#160;</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>456089</td>
			<td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:557px;">Vacutainer tube 3 ml&#160; 9NC Coagulation sodium citrate 3,2%</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>454334</td>
			<td>or similar. Label with sample site. 5 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cryogenic vials, 2.0 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430488</td>
			<td>or similar. Label with sample site, serum/type of plasma and ID. 90 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Marked trays to transport the syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>to transport the blood samples in the operation theatre</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Rocker</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for gentle mixing of the samples</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>in styrofoam box</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>in appropriate container</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Placenta samples</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Metal tray</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ice</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>in styrofoam box</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calibrated scale</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Metal ruler</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1 M Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1408</td>
			<td>or similar. Dilute 10 M to&#160; 1M before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">RNA stabilization solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R0901-500ML&#160;</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) compound</td>
			<td>vwr</td>
			<td>361603E</td>
			<td>or similar</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cryogenic vials, 2.0 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430488</td>
			<td>or similar. Label with sample site. content and ID. 10 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Centrifuge tubes, conical bottom 50 mL</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>227,285</td>
			<td>or similar. Label with &#34;RNA later&#34;, sample site and ID. 2 needed.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>in appropriate container</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal body composition</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calibrated scale</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Measuring tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the 4-vessel sampling approach to integrative studies of human placental physiology in vivo

인간 태반은 여전히 utero에서 연구를 위해 매우 접근하기가 어렵습니다. 따라서 생체 내에서 인간 태반 생리학 에 대한 현재의 이해는 태반 해부학, 혈역학 및 임신 기간에있어서 종간의 다양성은 매우 높지만 동물 실험에 기반하고있다. 인간 태반 연구의 대다수는 생체 외 관류 연구 또는 시험관 내 영양막 연구입니다. 시험 관내 연구 및 동물 모델은 필수적이지만, 생체 내 인간 태반 에 대한 그러한 연구 결과의 외삽은 불확실하다. 우리 는 생체 내 에서 인간 태반 생리를 연구하고, 그 방법의 상세한 프로토콜을 제시하고자했다. 계획된 제왕 절개 도중에 자궁 절개 직전에 자궁 내 정맥에 대한 복강 내 접근을 이용하여 우리는 태반의 산모와 태아 측에서 들어오고 나가는 혈관으로부터 혈액 샘플을 채집합니다. 사기를 결합 할 때혈류량 측정을 통한 혈액 샘플의 중심 측정을 통해 태반 및 태아의 흡수 및 모든 화합물 방출을 정량화 할 수 있습니다. 또한, 동일한 모체 - 태아 쌍으로부터의 태반 조직 샘플은 운반체 밀도 및 활성 및 생체 내 태반 기능의 다른 측면의 측정을 제공 할 수있다. 이러한 4 혈관 샘플링 방법의 통합적 사용을 통해 우리는 정상 및 병리학 임신 모두에서 생체 내 태반 영양 전달 및 대사의 현재 개념을 시험 할 수 있습니다. 또한,이 방법은 태반에 의해 분비되는 물질을 모체 순환으로 확인하는 것을 가능하게하는데, 이는 태반 기능 장애의 바이오 마커 검색에 중요한 공헌을 할 수 있습니다.

4 혈관 샘플링 방법은 임상 실험에 적용 가능하며 우리는 209 명의 어머니 / 유아 쌍으로부터 혈액 샘플을 성공적으로 얻었습니다. 이 중 128 회에 우리는 또한 체적 유량을 측정했습니다. 70 마리의 모체 - 태아 쌍 ( 그림 3 )에서 모체와 태아 혈관 모두의 완벽한 4 혈관 표본 추출과 양질의 혈류 측정이 이루어졌습니다. 또한, 우리는 지금까지 30 명의 자?...

Watch this Scientific Journal Video about The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo at JoVE.com

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

우리는 장기간 생체 내 생체 태반 생리를 연구하기위한 상세한 방법을 제시합니다. 이 방법은 태아의 모체 및 태아 측에 유입 및 유출 혈관으로부터의 혈액 샘플링을 부피 혈류 및 태반 조직 샘플링의 초음파 측정치와 결합시킨다.

인간 태반 생리학의 통합 연구에 대한 4 혈관 샘플링 접근법<em&gt; In Vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Research

JoVE Journal

Medicine

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

10.5K 조회수.  Oslo University Hospital.  우리는 장기간 생체 내 생체 태반 생리를 연구하기위한 상세한 방법을 제시합니다. 이 방법은 태아의 모체 및 태아 측에 유입 및 유출 혈관으로부터의 혈액 샘플링을 부피 혈류 및 태반 조직 샘플링의 초음파 측정치와 결합시킨다. 

비디오: The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

Roux-en-Y Gastric Bypass Operation in Rats

Currently, the most effective therapy for the treatment of morbid obesity to induce significant and maintained body weight loss with a proven mortality benefit is bariatric surgery1,2. Consequently, there has been a steady rise in the number of bariatric operations done worldwide in recent years with the Roux-en-Y gastric bypass (gastric bypass) being the most commonly performed operation3. Against this background, it is important to understand the physiological mechanisms by which gastric bypass induces and maintains body weight loss. These mechanisms are yet not fully understood, but may include reduced hunger and increased satiation4,5, increased energy expenditure6,7, altered preference for food high in fat and sugar8,9, altered salt and water handling of the kidney10 as well as alterations in gut microbiota11. Such changes seen after gastric bypass may at least partly stem from how the surgery alters the hormonal milieu because gastric bypass increases the postprandial release of peptide-YY (PYY) and glucagon-like-peptide-1 (GLP-1), hormones that are released by the gut in the presence of nutrients and that reduce eating12.
During the last two decades numerous studies using rats have been carried out to further investigate physiological changes after gastric bypass. The gastric bypass rat model has proven to be a valuable experimental tool not least as it closely mimics the time profile and magnitude of human weight loss, but also allows researchers to control and manipulate critical anatomic and physiologic factors including the use of appropriate controls. Consequently, there is a wide array of rat gastric bypass models available in the literature reviewed elsewhere in more detail 13-15. The description of the exact surgical technique of these models varies widely and differs e.g. in terms of pouch size, limb lengths, and the preservation of the vagal nerve. If reported, mortality rates seem to range from 0 to 35%15. Furthermore, surgery has been carried out almost exclusively in male rats of different strains and ages. Pre- and postoperative diets also varied significantly.
Technical and experimental variations in published gastric bypass rat models complicate the comparison and identification of potential physiological mechanisms involved in gastric bypass. There is no clear evidence that any of these models is superior, but there is an emerging need for standardization of the procedure to achieve consistent and comparable data. This article therefore aims to summarize and discuss technical and experimental details of our previously validated and published gastric bypass rat model.

Numerous studies using gastric bypass rat models have been recently conducted to uncover the underlying physiological mechanisms of Roux-en-Y gastric bypass operations. This article aims to demonstrate and discuss the technical and experimental details of our published gastric bypass rat model to understand advantages and limitations of this experimental tool.

쥐에서 Roux-EN-Y 위장 바이패스 수술

Currently, the most effective therapy for the treatment of morbid obesity to induce significant and maintained body weight loss with a proven mortality ...

연구

의학

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

인간 종양 이종 이식에서 마우스 세포의 고갈은 크게 대상 세포의 다운 스트림 분석을 향상

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

인-31 자기 공명 분광학 : 측정을위한 도구<em&gt; 생체</em인간의 골격 근육에&gt; 미토콘드리아 산화 적 인산화 능력

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ischemia and infarction in children. If left untreated, it results in a 90% mortality rate in the first year of life. In patients who survive to the adulthood, the coronary steal phenomenon and retrograde left-sided coronary flow provide a substrate for chronic subendocardial ischemia, which may lead to left ventricular dysfunction, ischemic mitral regurgitation, malignant ventricular arrhythmias, and sudden cardiac death. The average age of life-threatening presentation is 33 years and of sudden cardiac death 31 years. Therefore, surgical correction is highly recommended as soon as the diagnosis is made, regardless of age. In adult-type ALCAPA originating from the right-facing sinus of the pulmonary artery, direct re-implantation of the ALCAPA into the aorta is the more physiologically sound repair technique to re-establish the dual-coronary perfusion system and is recommended. This protocol describes the technique of direct re-implantation of adult-type ALCAPA into the aorta.

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Surgical correction of ALCAPA is highly recommended, regardless of age or the degree of intercoronary collateralization. This protocol presents a technique for the direct re-implantation of adult-type ALCAPA into the aorta to re-establish the dual-coronary perfusion. Whenever feasible, direct re-implantation is preferred to other surgical correction techniques.

폐 동맥에서 좌측 관상 동맥의 변칙 기원과 성인에서 대동맥으로 왼쪽 관상 동맥의 직접 재 주입 (좌 관상 동맥 폐동맥 이상 연결 증)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Full-root Aortic Valve Replacement by Stentless Aortic Xenografts in Patients with Small Aortic Roots

In patients with small aortic roots who need an aortic valve replacement with biological valve substitutes, the implantation of the stented pericardial valve might not meet the functional needs. The implantation of a too-small stented pericardial valve, leading to an effective orifice area indexed to a body surface area less than 0.85 cm2/m2, is regarded as prosthesis-patient mismatch (PPM). A PPM negatively affects the regression of left ventricular hypertrophy and thus the normalization of left ventricular function and the alleviation of symptoms. Persistent left ventricular hypertrophy is associated with an increased risk of arrhythmias and sudden cardiac death. In the case of predictable PPM, there are three options: 1) accept the PPM resulting from the implantation of a stented pericardial valve when comorbidities of the patient forbid the more technically demanding operative technique of implanting a larger prosthesis, 2) enlarge the aortic root to accommodate a larger stented valve substitute, or 3) implant a stentless biological valve or a homograft. Compared to classical aortic valve replacement with stented pericardial valves, the full-root implantation of stentless aortic xenografts offers the possibility of implanting a 3-4 mm larger valve in a given patient, thus allowing significant reduction in transvalvular gradients. However, a number of cardiac surgeons are reluctant to transform a classical aortic valve replacement with stented pericardial valves into the more technically challenging full-root implantation of stentless aortic xenografts. Given the potential hemodynamic advantages of stentless aortic xenografts, we have adopted full-root implantation to avoid PPM in patients with small aortic roots necessitating an aortic valve replacement. Here, we describe in detail a technique for the full-root implantation of stentless aortic xenografts, with emphasis on the management of the proximal suture line and coronary anastomoses. Limitations of this technique and alternative options are discussed.

Full-root aortic valve replacement by stentless aortic xenograft is a viable option in patients with small aortic roots. We describe, a technique for the full-root implantation of stentless aortic xenografts, with emphasis on the management of the proximal suture line and coronary anastomoses, and discuss its limitations and alternative options.

작은 대동맥 근위 대동맥을 가진 환자에서 스텐트리스 대동맥 이식편을 이용한 대동맥 판막 치환술

In patients with small aortic roots who need an aortic valve replacement with biological valve substitutes, the implantation of the stented pericardial ...

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the body, an additional extraction procedure is commonly required to release the active constituents from raw herbs. Water decoction is a classical extraction procedure that is still broadly used in the clinical settings. Here, we propose a detailed protocol for er-xian decoction (EXD) in order to apply herbal decoctions to experimental studies. The calculation of an animal-appropriate dose is described, as well as the four main steps of EXD: soaking, water decoction, filtration, and concentration. In addition, serum-containing EXD is introduced to rats as a means of in vitro validation. Here, rats were orally administered EXD for three days. Blood samples were then collected, inactivated, centrifuged, and filtered. The serum, diluted with the culture medium, can be utilized to treat cells or tissues in vitro. For example, EXD was applied to both in vivo and in vitro studies and demonstrated that EXD enhances osteogenesis. This protocol can be used as a reference for the preparation and application of herbal medicines.

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

Here, we present the preparation of an er-xian decoction (EXD) in four steps&#8212;soaking, decoction, filtration, and concentration&#8212;and demonstrate the administration of a prepared EXD-containing serum to rats. These methods are applicable to the in vivo and in vitro study of herbal decoctions such as traditional Chinese medicines.

약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em&gt; In Vivo</em&gt; 및<em&gt; 체외에서</em&gt; 실험

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure overload-induced left ventricular hypertrophy (LVH) and its progression to heart failure. In the majority of the reported investigations, this procedure is performed with intubation and ventilation of the animal which renders it demanding and time-consuming and adds to the surgical burden to the animal. The aim of this protocol is to describe a simplified technique of minimally invasive TAC without intubation and ventilation of mice. Critical steps of the technique are emphasized in order to achieve low mortality and high efficiency in inducing LVH.
Male C57BL/6 mice (10-week-old, 25-30 g, n=60) were anesthetized with a single intraperitoneal injection of a mixture of ketamine and xylazine. In a spontaneously breathing animal following a 3-4 mm upper partial sternotomy, a segment of 6/0 silk suture threaded through the eye of a ligation aid was passed under the aortic arch and tied over a blunted 27-gauge needle. Sham-operated animals underwent the same surgical preparation but without aortic constriction. The efficacy of the procedure in inducing LVH is attested by a significant increase in the heart/body weight ratio. This ratio is obtained at days 3, 7, 14 and 28 after surgery (n = 6 - 10 in each group and each time point). Using our technique, LVH is observed in TAC compared to sham animals from day 7 through day 28. Operative and late (over 28 days) mortalities are both very low at 1.7%.
In conclusion, our cost-effective technique of minimally invasive TAC in mice carries very low operative and post-operative mortalities and is highly efficient in inducing LVH. It simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal. It can be easily performed by following the critical steps described in this protocol.

The aim of this protocol is to describe step-by-step the technique of minimally invasive transverse aortic constriction (TAC) in mice. By elimination of intubation and ventilation which are mandatory for the commonly used standard procedure, minimally invasive TAC simplifies the operative procedure and reduces the strain put on the animal.

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures prevents a number of cardiac surgeons from incorporating them into their practice. The aim of this protocol is to describe a simplified and user-friendly technique of an aortic valve-sparing root replacement (VSRR) procedure by re-implantation of the aortic valve. Proper selection of patients and limitations of the technique are discussed.
In 54 consecutive patients, normal appearing aortic valves were re-implanted in a commercially available polyester prosthesis with pre-shaped sinuses by a simplified and standardized technique. Placement of the first row of the proximal suture line, choice of the prosthesis size, and adjustment of the height of the commissures of the patient to the fixed height of the sinus portion of the prosthesis were slightly modified from the reference techniques with the aim of increasing its feasibility for use by other cardiac surgeons. Early mortality and morbidity as well as 5-year survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were collected in all patients.
Thirty-day mortality, re-sternotomy for bleeding, re-sternotomy for mediastinitis, and the incidence of stroke were very low, 1.8% for each (1 of 54). No patient required permanent pace-maker implantation. At 5 years, survival, freedom from aortic valve reoperation, and freedom from recurrent moderate regurgitation were 97.5%, 95.2%, and 91.6%, respectively.
Mid-term results of our standardized technique of re-implantation of the aortic valve for valve-sparing aortic root replacement are very good and compare with more complex techniques reported by experienced surgeons. By following the present protocol of the standardized re-implantation technique, a greater number of cardiac surgeons can perform this procedure with comparable good results.

Valve-sparing aortic root replacement has the advantage of preserving the patient&#39;s own aortic valve. The complexity of the reported techniques to date restricts their use to a limited number of cardiac surgeons. This protocol describes step-by-step a standardized technique reproducible by a greater number of cardiac surgeons.

대동맥 밸브 밸브 스페어링 대동맥에 다시 주입의 표준화 된 기술 루트 교체

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...