저자는 이러한 연구와 지방 조직 생체 검사를 제공 하기 위한 보스톤 의료 센터에서 외과 직원에 그들의 참여에 대 한 자원 봉사자 감사 하 고 싶습니다. 박사 Gokce HL081587, HL114675, 및 HL126141 건강 (NIH)의 국가 학회에 의해 지원 됩니다. 박사 Farb NIH에서 지원 K23 HL135394를 부여.

프로토콜 및 여기에 설명 된 예제에서 보스톤 대학 학교의 약 기관 검토 위원회 (IRB, 프로토콜 #H-25644)를 승인 했다 고 헬싱키 선언에 따라 실시 했다. 참여 하기 전에 서 면된 동의 제공 하는 모든 과목.
 1. 솔루션의 준비 및 마이크로 유리 뉼 <ol><li>준비 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic 산 성 염 (HEPES) 솔루션. 1 L에 대 한 8.059 g, NaCl 0.298 g, KCl 0.296 g MgSO 4 분해 &#8226; 7 H 2 O, 0.235 g CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O, 0.16 g KH 2 포 4, 950 mL에 0.01 g EDTA, 1.081 g D-포도 당, 및 2.383 g HEPES 산 이온 물입니다. 이온을 제거 된 물 1 L에 볼륨을 확인 합니다. PH를 7.4 NaOH를 사용 하 여 조정 합니다. HEPES 버퍼 7 일 4에서 저장 될 수 있다 ° c.</li>
	<li>소금 버퍼 재고 x 20을 준비합니다. 1 L에 대 한 추가 143.8 g NaCl, KCl 7.0 g, 5.9 g MgSO 4 및 7.4 g CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O 900 mL의 증류수에. 이온을 제거 된 물 1 L에 볼륨을 확인 합니다. 4 재고 솔루션을 저장 ° c.</li>
	<li>버퍼 재고 x 20을 준비합니다. 1 L 26.8 g NaHCO 3 및 0.2 g EDTA·2H 2 O 이온된 물 900 mL에 추가 합니다. 이온을 제거 된 물 1 L에 볼륨을 확인 합니다. 4 재고 솔루션을 저장 ° c.</li>
	<li>생리 실험 동안 사용할 KREBS 솔루션을 준비 합니다. 1 L, 이온된 물 900 mL, 버퍼 재고 x 20의 50 mL, 50 mL 소금 버퍼 솔루션, 0.99 g D-포도 당 및 0.16 g KH 2 포 4 x 20의 추가. PH를 7.4 HCl을 사용 하 여 조정 합니다. 버퍼의 pH를 유지 하려면 지속적으로 저 어와 파라핀으로 또는 지속적으로 거품.
	<ol><li>확인 전화 20 분 마다 매일 KREBS 솔루션 신선한 게.</li>
	</ol></li> <li>마이크로 유리 뉼 상용 바늘/피 펫 끌어당기는 사람을 사용 하 여 40-240 µ m의 내부 직경을 확인. 유리 뉼의 크기는 고립 된 혈관 (50-350 µ m)의 내부 직경의 크기에 의해 결정 됩니다. 또는, 미리 정해진된 크기의 마이크로-유리 뉼 구입.</li>
</ol> 2. 시 약의 준비 <ol><li>준비 아 세 틸 콜린 (Ach, 10 -2 M, 재고 솔루션). 18.29 g 10 mL 이온된 물에 용 해. 1 mL aliquots-80 ° c.에 재고 솔루션 (10 -2 M)의 저장 다음 작업 농도를 연속적으로 희석 실험의 날: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 M.</li>
	<li>Papaverine (2 x 10 -2 M, 재고 솔루션)를 준비합니다. 0.07517 g 10 mL 이온된 물에 용 해. 준비 재고 솔루션 및 저장소-80에 10 µ L aliquots ° C. 직렬 실험의 하루에 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 M를 희석.</li>
	<li>는 Endothelin 1 (외 1, 2 x 10 -5 M, 재고 솔루션)를 준비합니다. 1%의 1 mL에 50 µ g endothelin-1 녹 BSA/PBS. 1 mL aliquots-80 ° c.에 재고 솔루션 (2 x 10 -5 M)의 저장 실험 실험의 하루에 10 -10 M의 작업 농도를 희석의 날.</li>
	<li>시 약 중-20 ° C에 저장 또는 냉장고의 종류에 따라 사용할 수 있는, 하지만 하지 6 개월 이상-80 ° C까지.</li>
</ol> 3. 지방 조직 수집 및 선박 준비 <ol><li>모집 비만 남자와 여자 (몸 질량 색인 (BMI) &#8805; 35 k g/m ², 나이 &#8805; 18 년) 보스톤 의료 센터 (BMC)에서 비만 수술 프로그램에 등록. 40 과목의 총이이 실험에 참가 했다.</li>
	<li>계획된 bariatric 수술 하는 동안 작업을 수행 하는 외과 의사에 의해 피하와 내장 지방 조직 샘플을 수집.
	<ol><li>수확은 피하 지방 조직을 더 낮은 복 부 벽에서 내장 지방 그레이터 omentum에서 각각. 전형적인 지방 조직 샘플 크기 3-10 mg의 조직에서 변화 한다.</li>
		<li>장소 조직을 즉시 차가운 HEPES 버퍼 ph 7.4와 최대 24 h. 4 ° C에서 저장소 솔루션 
		참고: 또한, 지방 arterioles 다른 유형의 헤 르 니 아 수리 등 성형 수술, 수술 중 뿐만 아니라 마른 개인에서 얻어질 수 있다 그리고 또한 수 트랜스 피부 복 부 지방 패드 생 검을 통해 피하 디포에서 biopsied 6.</li>
	</ol></li> <li>주변 지방과 결합 조직 (50-350 µ m intraluminal 직경, 길이 2-3 m m) 작은 지방 arterioles에서 제거 신중 하 게 조직 해 부 현미경, 마이크로-가 위 및 마이크로 집게를 사용 하 여,.</li>
	<li>Arterioles 유리 모 세관 펫에 cannulating 전에 작은 나일론 또는 실크 봉합을 사용 하 여에 모든 지점에서 넥타이. 신중 하 게 해 부하는 arterioles 되 벽의 사소한 손상 원인 중요 한 기능 변경 이후.
	빛과 열으로 <ol><li>최소화 배 노출 혈관 확장을 일으킬 수 있습니다. 그것은 때로는 어려울 수 있습니다 venules arterioles 구별, 이후 혈관의 끝 물에 의해 혈관의 크기 및 평활 근 음색을 식별 합니다. Arterioles는 일반적으로 더 작은 이며 venules에 비해 더 큰 톤.</li>
	</ol></li> <li>기관 챔버 준비. 천천히 KREBS 솔루션 10 mL 주사기를 사용 하 여 유리 모 세관 펫 및 고무 튜브를 작성.</li>
	<li>고무 튜브 채워지고 유리 모 세관 펫 챔버 내에 장기 KREBS 솔루션에 잠긴, 일단 안전 하 게 보안된 펫에 arterioles cannulate와 나일론 되의 두 끝을 묶어 또는 실크 봉합 사 매듭 신중 하 게.</li>
	<li>KREBS 솔루션과 장기 챔버를 채워 최대 2 mL.</li>
	<li>거꾸로 현미경 (배율 10 배 / 0.25 목표)와 함께 무대에 기관 실 확보 및 비디오 카메라.</li>
	<li>1 kHz의 샘플링 레이트에서 실시간에 스트리밍 가장자리 탐지 소프트웨어에 설정 (1 프레임/초).</li>
	<li>연결할 가압된 튜브의 한쪽 채워진된 압력 저수지 microbubbles, 무료로 KREBS 솔루션으로 거품 실험 오류를 발생할 수 있습니다. 기관 실에 가압된 튜브의 다른 쪽을 연결.</li>
	<li>깨끗 한 배관 압력 트랜스듀서에 KREBS 솔루션 가득 압력 저수지를 연결.</li>
	<li>제어이 두 저수지의 높이 조절 하 여 내부 luminal 흐름; 따라서 때 저수지에 배치 됩니다 같은 높이, 아니 내 luminal 흐름 발생 합니다.</li>
	<li>이러한 모든 프로세스가 완료 되 면 설정 37에 온도 유지 하기 위해 블록 및 소프트웨어 프로그램을 난방 ° C. 지속적으로 perfuse KREBS 솔루션과 선박 및 5% CO 2, 21% O 2와 N 74%의 가스 혼합 aerate 2 전체 실험 절차에 걸쳐 7 , 8.</li>
	<li>원하는 압력 insi 달성 하기드의 격리 된 선박 루멘 점차적으로 압력 제어 장치 묘 인터페이스 패널에서 내 피 층 손상을 방지 하기 위해 느린 속도로 이렇게 통해 intraluminal 압력 (5 mmHg, 매 5 분)를 증가. 
	참고: 압력 60 mmHg에 도달 하면, 20-30 분 평형 기간 필요 선박 안정 합니다. 모든 혈관 기능 연구 60 mmHg, pH 7.4에서 37 ° C에서 수행 됩니다. 7</li></ol> 4. 지방 Microvascular 함수의 평가 참고: 일반적으로, 많은 되 종속 내 피 혈관 확장 (흐름 유도)에 생리 적인 응답에 elicited 수 및 약리 자극 (Ach 유도).
<ol><li>흐름 중재, 종속 내 피 혈관 확장 <ol><li>가압, 다음 나머지 (디)에서 지방 되의 직경을 기록. 이 휴식 기준 직경으로 불린다.</li>
		<li>미리 endothelin 1의 1 µ L을 추가 하 여 ~ 55% 휴식 기준 직경 (Dp)의 혈관을 수축 (동부 표준시-1, 10 &#8722; 10 M) 목욕 및 효과 대 일 분 대기에 직접. 상태를 막혀서 미리 원하는 ~ 55%에 도달 될 때까지이 과정을 반복.</li>
		<li>압력 차이 평균 intraluminal 압력을 변경 하지 않고 선박에 걸쳐 개발 될 수 있도록 유도 지방 조직 arterioles, 평등 하 고 반대 방향의 intraluminal 공간으로 연속 흐름을 사전 수축, 다음 60 mmHg의. 
		참고: 예를 들어 한 저수지 높이 10 cm에 의해 이동 하는 경우 다른 하나 필요를 압력 기울기를 변경 하 고 따라서 intraluminal 유량 변경 10 cm에 의해 이동 해야 합니다. 더 정확한 흐름 속도 측정 바란다면 양적 유량 시스템 실험 설정에 적용할 수 있습니다.</li>
		<li>흐름 중재 팽창 측정 흐름 유도의 개시 후 3-5 분. Intraluminal 흐름 (압력 기온 변화도)의 수준 수 범위의 0-100 cmH 2 오 증가 압력 기온 변화도의 각 증가 Δ10 cmH 2 O 100 cmH 2 오의 최대 5-6 분 마다 
		참고: 안정 층 류는 루멘에서 유도 하기 위하여 두 마이크로 유리 정 팁 크기 필요가 arterioles;의 내부 직경에 매우 가까울 그렇지 않으면, 루멘 내의 난 류를 생산 하 고 원치 않는 측정 오류를 유발.</li>
		<li>흐름-중재 팽창 평가, 다음 돌아가기 압력 저수지 같은 높이 (60 mmHg).</li>
		<li>그런 다음 즉시 상공에서 솔루션을 제거 하 여 되 고 챔버를 세척 하 고 신선한 KREBS 솔루션으로 대체. 이 챔버 내에 중단된 되는 방해 하지 않는 만큼 주의 이루어집니다.</li>
		<li>3-4 회 20-30 분, 또는 격리 된 선박 휴식 기준 지름에 반환 될 때까지이 과정을 반복.</li>
	</ol></li> <li>중재 하는 아 세 틸 콜린, 내 피-종속, 엷게 <ol><li>지방 되는 휴식 기준 직경에 반환은, 미리 수축 endothelin-1 (동부 표준시-1, 10 를 투여 하 여 배 ~ 55% &#8722; 10 M) 위의 섹션에서에서 설명한 대로 4.1.2 목욕에 직접.</li>
		<li>사전 수축에 따라 순차적으로 수용 체 중재 하는, 산화 질소 주 작동 근 (Ach, 10 -5 M에 10 -9) 직접 목욕 하는 아 세 틸 콜린의 증가 복용량 (2 µ L)를 관리. 각 복용량의 관리 후 arteriolar 직경 5 분에 있는 변화를 기록.</li>
		<li>배 최종 Ach 복용량의 관리를 다음 대 지에 도달 했습니다 일단 워시는 용기 3-4 회 KREBS 솔루션. 복구 하 고 초기 직경 휴식을 반환 선박에 대 한 20-30 분을 허용 합니다. 장기 의회에서 pH를 유지 하려면 변경 KREBS 솔루션 15 분 마다</li>
	</ol></li> <li>품 어 되 N w-니트로-l-아르기닌 메 틸 에스테 르 (L 이름, 10 -4 M), 30 분, 산화 질소 synthase의 억제제 및 다음 반복 4.2.1 및 4.2.2 특성의 상대적 기여도를 Ach 중재 혈관을 산화 질소.</li>
	<li>목욕에 직접 papaverine (10 10 -4 M를 -8)의 증가 복용량의 순차적 행정에 의해 endothelium 독립 혈관 (혈관 부드러운 근육 기능) 및 선박 생존 능력을 평가합니다. 혈관 직경, 반환 하거나 papaverine (즉 적절 한 혈관)에 대 한 응답 휴식 기준선 (디) 직경을 초과 하지 않습니다, 선박 비 가능한 고려 하 고 데이터 요소를 삭제.</li>
</ol> 5. 데이터 분석 및 계산 <ol><li>계산 혈관 반응성. 데이터 표현에 대 한 백분율 혈관 혈관 직경 기준 차이 대 한 계정 및 다음 수식을 사용 하 여 계산을 사용 하 여: % 혈관 (DT-Dp/디-Dp) × 100 = DT는 주어진된 시간 (최대에 기록 된 직경 지름), Dp입니다 vasoconstriction 에이전트 (즉 추가 후 기록. ET-1 유도 축의 직경), 고 디 바로 앞 vasoconstriction 에이전트 (휴식 초기 직경)의 추가 기록입니다. 9</li> <li>Ach, papaverine, 또는 외-1 최대 응답 (EC 50)의 50%를 elicits 의해 정의 될 수 있는 농도 주 작동 근에 혈관 확장 및 vasoconstriction 감도 (복용량 응답) 정의 자형 매개 변수 및 플롯, 앞에서 설명한 대로. 10 참고: 지방이 많은 microvessels의 혈관의 관찰자 간 재현성 연구는 0.99의 높은 상관 계수 (CC) (n = 10 배 실험) 우리의 실험실에.</li></ol>
 6. 통계 분석 <ol><li>익스프레스 연속 측정 ± SEM.를 의미 이 일반적으로 배포 하는 경향이. 반복 측정 양방향 ANOVA에 의해 지방 arterioles 혈관 반응성 분석.</li>
	<li>또는 처리 그룹 사이 복용량 응답을 누적 혈관에 대 한 음모의 곡선 (AUC) 아래 영역을 비교합니다. 모든 경우에 P 고려 &#60; 0.05 통계적.</li>
</ol>

<ol>
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저자는 공개 또는 보고서 이해 충돌 있다.

해 부 및 주위 조직에서 지방 arterioles의 절연 기술 프로토콜 세부 사항에 주의 함께 시간과 노동 집약적인 과정 수. 있습니다 서 절차 세심 한 기술과 부드러운 근육 또는 내 피 손상을 방지 하기 위해 특수 해 부 기구는 microvasculature의 레이어를 셀 필요 합니다. Arteriolar 벽에도 작은 실수로 구멍 intraluminal 가압 및 실패 한 실험에서 결과 방지할 수 있습니다. 또한, cannulation arterioles 봉합 활용의 그릇...

Videomicroscopy 작은 arterioles 생활 인체 ex vivo에서제거의 조절과 기능 검사를 활용 하는 유용한 기술입니다. 우리 연구소는 microvasculature에 다양 한 많은 microenvironments의 효과 특성을 다른 지방 조직 구획에서 작은 microvessels에 밖으로 해 부에 집중 했다. 이 기술의 주요 장점은 인체에서 제거 하는 혈관 기능 유지와 생 시간을 몇 분 안에 쉽게 시험 될 수 있다. 생리 적인 조건 유사 하 고 과거 압력 마이크로 유리 뉼 많은 비보에 특성을 정리를 통해 intraluminal 공간에서 유지 관리를 꾸준히. 1 , 2 또한, 자동된 가장자리 감지 소프트웨어와 신뢰할 수 있는 videomicroscopy 설정 endothelium 종속-독립적인 vasodilator 및 vasoconstrictor 용량 절연의 질적 및 양적 평가 대 한 허용 물리적 및 약리 자극에 대 한 응답에서 실시간, 허용 빠른 생리 적 평가에서 선박. 3 다른 microvascular 기법 와이어 myography 적은 시간이 소요 되며 힘 변환기에 의해 다양 한 agonists 긴장 응답을 측정 하는 경향이 사용할 수 있습니다.
본 연구실은 비만는 맥 관 구조에 다른 지방 조직 도메인의 효과에 초점을 맞추고 혈관 부전 사이의 관계를 검사 하는 videomicroscopy를 적용 하 고 있다. 내부-복 부 내장 지방의 축적으로 중앙 adiposity adipocytokine 생산, 대사 장애, 및 cardiometabolic 위험에 가장 밀접 하 게 연결 되었습니다. 프로 atherogenic cytokines 및 adipokine dysregulation의 과잉 생산으로 지방 조직 장애는 이러한 프로세스에 연루 강력 하지만 특정 규제 분자 및 치료 목표는 크게 남아 postulated이 되었습니다. 알려지지 않은. 4 또한, 현지 지방 조직 수준, 모 세관 진공 및 장애인된 관류에 지방 조직 pseudohypoxia 및 대사 dysregulation 연결 되었습니다. 심혈 관 질환 지방 조직 장애의 결과 수 있습니다 가설 진화입니다. 지방에서 특히 중앙/내장 adiposity, 가능성이 함께 협회에서에서 발표 하는 프로 atherogenic 중재자 홍보 내 피 기능 장애 및 병원 성 혈관 변화 될 수 있는 많은 맥 관 구조에 로컬로 명단 및 사용 하 여 검출 된 여기에 방법을 설명합니다. 5
고립 된 지방 조직 arterioles의 기능 평가 이상과 인간의 비만에 혈관 장애에 기여 하는 분자 메커니즘의 이해를 얻기 위해 유용한 방법입니다. 지방 서비스 센터 관련 장애에 기여 하는 메커니즘을 조사, endothelium 종속을 검사 하는 방법을 개발 했습니다 및-microvasculature의 독립적인 vasodilatory 응답 각종 규제의 식을 평가 하 고 bariatric 수술의 때에 뚱뚱한 과목에서 얻은 내장과 피하 (SC) 지방 조직 표본 쌍된에 후보자.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Chemical Name</td>
			<td style="width:159px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Acetylcholine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A6625</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">G5767</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Endothelin-1</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E7764</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8217;,N&#8217;-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E3889</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E9884</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">HEPES</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">H3784</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:352px;">Nw-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">N5751</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">M7506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride (KCL)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3911</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P5655</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Papaverine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3510</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S6014</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S7653</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:132px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:127px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Forceps</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td>Zeiss Achromat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Laboratory tubing</td>
			<td>Euro-Pharm</td>
			<td>250100306F999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle/pippette puller</td>
			<td>David kopf instruments</td>
			<td>720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ophthalmic monofilament nylon suture</td>
			<td>Surgical specialties</td>
			<td>A7756N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scissors</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>150000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vessel Chamber</td>
			<td>DMT</td>
			<td>VAS v.2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy

비만 대사 및 심혈 관 질환의 발전에 밀접 하 게 연결 된다, 그러나 약간이 프로세스를 제어 하는 메커니즘에 대 한 알려져 있다. 그것은 국부 적으로 그리고 체계적으로, 중앙/내장 adiposity와 협회에서 특히 지방 조직에서 발표 프로 atherogenic 중재자 병원 성 혈관 변화를 촉진 수 있습니다 그리고 개념 심혈 관 질병이 있을 수 있습니다 가상은 지방 조직 장애의 결과 진화 하 고 있습니다. 여기, 우리는 그대로 작은 인간의 arterioles 살아있는 인간을 대상의 지방 창 고에서 제거의 vasodilator 및 vasoconstrictor 응답의 분석을 포함 하는 videomicroscopy의 독특한 방법을 설명 합니다. Videomicroscopy는 응답을 vivo에서 조건 압력된 시스템을 사용 하 여 약리학 또는 생리 적 자극으로 격리 된 microvessels의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 기술은 이상과 지방 조직 환경 내에서 로컬로 혈관 장애에 기여 하는 분자 메커니즘의 이해를 얻기 위해 유용한 방법입니다. 또한, 지방 조직 microvasculature에 이상 또한 조직의 질병으로 연결 되었습니다. 우리는 뚱뚱한 주제에 있는 창 고 전용 혈관 응답 검사에이 기술을 적용. 우리는 증가 흐름을 두 개의 서로 다른 많은 플랫폼에서 동일한 개인에서 bariatric 수술 동안 격리 지방 arterioles (50-350 µ m 내부 직경, 길이 2-3 m m)에서 아 세 틸 콜린 endothelium 종속 엷게 평가. 우리는 내장 지방에서 arterioles 피하 창 고에서 고립 된 선박에 비해 장애인된 endothelium 종속 엷게 전시 시연 했다. 연구 결과 내장 microenvironment는 조직의 질환 메커니즘을 증가 내장 adiposity를 연결 하는 임상 관측에 관련 될 수 있는 혈관 내 피 기능 장애와 관련 된 것이 좋습니다. Videomicroscopy 기술은 다른 지방 창 고에서 관 고기 검사 하 고 결과 비교 하 여 비만 대사 장애의 다른 정도 가진 개인에 걸쳐 사용할 수 있습니다. 메서드 또한 임상 내정간섭에 응답에 경도 혈관 반응 검사를 사용할 수 있습니다.

우리 연구소는 endothelium 종속 검사를 videomicroscopy를 사용 하 고 있다 고-지방 조직 arterioles의 vasocontractile 기능 뿐만 아니라 독립적인 혈관, 피하와 내장 지방 비만 인간의에서 격리. 특성 실험 설정 그림 1A에 표시 됩니다. 지방 조직 arterioles 두 유리 모 세관 펫 사이 일시 중단 하 고 챔버 내에 장기 그림 1B와 같이 봉합과 장소에 ?...

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Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

7.4K 조회수.  Boston University School of Medicine. Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

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Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Microvascular 및 내피 기능의 비 침습적 평가

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

연구

의학

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite fluorescent in situ elements through the optical fibers, and then record some of the emitted photons, via the same optical fibers. The light source is a laser that sends the exciting light through an element within the fiber bundle and as it scans over the sample, recreates an image pixel by pixel. As this scan is very fast, by combining it with dedicated image processing software, images in real time with a frequency of 12 frames/sec can be obtained.
We developed a technique to quantitatively characterize capillary morphology and function, using a confocal fluorescence videomicroscopy device. The first step in our experiment was to record 5 sec movies in the four quadrants of the tumor to visualize the capillary network. All movies were processed using software (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paris France) that performs an automated segmentation of vessels around a chosen diameter (10 &mu;m in our case). Thus, we could quantify the 'functional capillary density', which is the ratio between the total vessel area and the total area of the image. This parameter was a surrogate marker for microvascular density, usually measured using pathology tools.
The second step was to record movies of the tumor over 20 min to quantify leakage of the macromolecular contrast agent through the capillary wall into the interstitium. By measuring the ratio of signal intensity in the interstitium over that in the vessels, an 'index leakage' was obtained, acting as a surrogate marker for capillary permeability.

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In this paper, we present a method to analyze tumor microvessels in vivo using dynamic contrast-enhanced fluorescence videomicroscopy. Two quantitative parameters were acquired: functional capillary density reflecting the vascularity of the tumor, and index leakage reflecting the leakiness of the endothelial wall.

형광 공 초점 Videomicroscopy를 사용하여 종양 혈관의 생체 내 이미징

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

견갑골 갈색 지방 조직의 Cerenkov 발광 이미징

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and time-consuming. In addition, serial blood or urine samples are required, with the associated stress for the experimental animals. A recent technique significantly reduces the investment in time and resources, minimizing the invasiveness and the animal stress, but being equally valid as the traditional approaches. The method measures transcutaneously renal function. Using an optical device and the exogenous renal marker fluorescein isothiocyanate (FITC)-sinistrin, this technique is capable of measuring the elimination kinetics of the marker through the skin. With neither blood nor urine samples nor the associated laboratory assays needed, the results of the transcutaneous measurement are almost instantaneously available. The method has been already validated in different species and successfully applied in several models of renal pathology. Moreover, due to its minimally invasive characteristics, it is suitable for sequential measurements within the same animal. Here is provided a detailed protocol to carry out the transcutaneous assessment of renal function in rodents.

Determination of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional procedures to measure this parameter are cumbersome and require a large investment of time. Here we describe a faster and minimally invasive method to determinate GFR transcutaneously.

의식 설치류에서 신장 기능의 경피 평가

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the development of obesity-associated complications such as type 2 diabetes. To quantitatively and qualitatively investigate the immune cell subsets in human AT deposits, we have developed a flow cytometry approach. The stromal vascular fraction (SVF), containing the immune cells, is isolated from subcutaneous and visceral AT biopsies by collagenase digestion. Adipocytes are removed after centrifugation. The SVF cells are stained for multiple membrane-bound markers selected to differentiate between immune cell subsets and analyzed using flow cytometry. As a result of this approach, pro- and anti-inflammatory macrophage subsets, dendritic cells (DCs), B-cells, CD4+ and CD8+ T-cells, and NK cells can be detected and quantified. This method gives detailed information about immune cells in AT and the amount of each specific subset. Since there are numerous fluorescent antibodies available, our flow cytometry approach can be adjusted to measure various other cellular and intracellular markers of interest.

This article describes a method to analyze immune cell content of adipose tissue by isolation of immune cells from adipose tissue and subsequent analysis using flow cytometry.

Cytometry 사용 하 여 인간 지방 조직에서 면역 세포의 특성

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

A Computerized Functional Skills Assessment and Training Program Targeting Technology Based Everyday Functional Skills

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a computerized functional skills training program that was paired in half of the participants with a commercially available cognitive training (CCT) program.
Non-impaired older individuals (NC) aged 60+ (n=45) and similarly aged individuals with mild cognitive impairment (MCI; n=50) were randomized to receive 12 weeks of twice-weekly computerized functional skills training (CFST) or 12 weeks of twice-weekly sessions split between CCT and CFST. Skills trained were use of an ATM; internet banking; ticket kiosk; telephone and internet prescription refill; medication management; and internet shopping. As with previous functional capacity assessments, we focus on completion time for each simulation.
51 participants completed the training program, either by mastering all 6 tasks (34) or completing 12 weeks of training. 44 more participants completed 4 or more training sessions so they were also analyzed for improvement up to their last training session. Completion time for all 6 tests significantly improved from the baseline assessment to the final training session in both groups of participants (all p&#60;0.001 with an average improvement in task completion time of 45%). Further, there was no differential improvement in MCI and NC in the 6 tests from baseline to end of training (all t&#60;1.66, all p&#62;0.12). Finally, combined CCT plus CFST did not differ from CSFT alone on any of the percent-change score measures (all t&#60;1.64, all p&#62;0.11).
Both NC and MCI groups evidenced substantial improvements in performance. CCT supplementation led to similar functional gains with half as many training sessions. The NC participants proceeded through the training fairly rapidly even without CCT supplementation; MCI participants required more training but learned equivalently. These findings suggest that even in cases with memory impairments, functional skills can be efficiently learned with training.

This training protocol uses computerized training to teach technology-related everyday functional skills. These skills include financial skills, travel and transit, as well as medication management.

전산화된 기능 기술 평가 및 교육 프로그램 대상 기술 기반 일상 기능 기술

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring apparatus and a motor to perform functional studies. These studies will allow measurement of cardiomyocyte stiffness (passive force) and its activation with different calcium (Ca2+)-containing solutions to determine, amongst others: maximum force development, myofilament Ca2+-sensitivity (pCa50), cooperativity (nHill) and the rate of force redevelopment (ktr). This method also enables determination of the effects of drugs acting directly on myofilaments and of the expression of exogenous recombinant proteins on both active and passive properties of cardiomyocytes. Clinically, skinned cardiomyocyte studies highlight the pathophysiology of many myocardial diseases and allow in vitro assessment of the impact of therapeutic interventions targeting the myofilaments. Altogether, this technique enables the clarification of cardiac pathophysiology by investigating correlations between in vitro and in vivo parameters in animal models and human tissue obtained during open heart or transplant surgery.

This protocol aims to describe step-by-step the technique of extraction and assessment of cardiac function using skinned cardiomyocytes. This methodology allows measurement and acutemodulation of myofilament function using small frozen biopsies that can be collected from different cardiac locations, from mice to men.

피부 심근세포를 이용한 심장 기능의 체외 평가

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this procedure. However, intraperitoneal islet transplantation has some limitations, including poor transplant efficacy, difficult graft detection ability, and a lack of graftectomy capability for post-transplant analysis. In this paper, "fat-covered islet transplantation", an intraperitoneal islet transplantation method that utilizes epididymal white adipose tissue, is used to assess the therapeutic effects of bioengineered islets. The simplicity of the method lies in the seeding of islets onto epididymal white adipose tissue and using the tissue to cover the islets. While this method can be categorized as an intraperitoneal islet transplantation technique, it shares characteristics with intra-adipose tissue islet transplantation. The fat-covered islet transplantation method demonstrates more robust therapeutic effects than intra-adipose tissue islet transplantation, however, including the improvement of blood glucose and plasma insulin levels and the potential for graft removal. We recommend the adoption of this method for assessing the mechanisms of islet engraftment into white adipose tissue and the therapeutic effects of bioengineered islets.

This fat-covered islet transplantation method is suitable for the detection of engrafted islets in the intraperitoneal cavity. Notably, it does not require the use of biobinding agents or suturing.

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...