연구 지원 Schulze 가족 재단 (A.S.B.)에 의해 수행 되었다.

여기에서 설명한 모든 방법을 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 메이 요 클리닉에 의해 승인.
 1. 경직의 필수 구성 요소 및 재현성 <ol><li>디자인의 사후 보장, 좋은 연구실 관행 항상에 있으며 어떤 동물 이전 IACUC (또는 유사한 위원회)에 의해 내부 승인을의 국가 기준에 따라 실험에 참여. 
	참고:이 프로토콜은 임상 충실 한 접근을 유지 하도록 설계 되었습니다. 따라서, 재료, 악기와 관련 된 기술 설명 패션 인 간에 있는 임상 기준에 동일 합니다. 예를 들어, 엄격한 무 균 기법을 따라 하 고 만료 된 재료는 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>실험 설정에이 방법론의 재현성을 지원 하기 위해 내부 표준 운영 절차를 개발 하 고 돼지 품종, 체중, 성별, 그리고 별도 동료 사이 나이에 변화에 대 한 제어. 
	참고:이 프로토콜의 디자인 무게 38-53 kg. 돼지의 사용에 근거 했다</li>
</ol> 2. 수술 동물 관리 <ol><li>절차에 앞서 1 일 5mg/kg에서 주어진 예방 근육 (IM) ceftiofur, 관리.</li>
	<li>빠른 고체 음식 동물 및 미용 치료, 즉 기름 목욕, 절차 이전 12 h에서 동물을 제한.</li>
	<li>메신저 tiletamine 및 zolazepam, 5 mg/kg, 그리고 IM xylazine, 2 mg/kg.에서 Telazol으로 주어를 사용 하 여 프로시저의 1 시간 이내 뽑기 일반 마 취</li>
	<li>일단 유도, 관리 피하 (SC), 지속적인 buprenorphine 릴리스 (SR), 0.18 mg/kg.에서 주어진</li>
	<li>귀 정 맥 카 테 터를 배치 하 고 급속 한 순서 배치 endotracheal 튜브 삽 관 법 수행.</li>
	<li>펄스 속도도 모니터링 기능 산소와 심장 박동 모니터를 혀에 심장 박동 연결.</li>
	<li>경향이 위치에 동물 놓고 전기 클리퍼를 사용 하 여 등을 통해 피부를 클립 합니다. 머리 중간 코로나 평면에 중간 화살 비행기에서 고 경도를 견 갑 골 쪽이 성 례의 정점에서 연장 대형, 양자 영역 클립. 접착 테이프를 사용 하 여 머리와 부동성 피부 제거.</li>
	<li>스크럽 클리핑된 영역 최대 3 번 따뜻한 물과 비누로 하 고 보풀 수건을 사용 하 여 피부 건조.</li>
	<li>마크 양자 해부학 적 랜드마크 수술 마킹 펜을 사용 하 여. 마지막 늑 골, 장 골 볏, spinous 프로세스, 및 가로 프로세스 표시. 
	참고: 마지막 늑 골, 장 골 볏, 및 가로 프로세스를 표시 하 여 요 추 척추는 경계선의 우량한, 열 등 한, 및 측면 경계를 따라 각각. 이 프로토콜은 액세스 및 관심의 모든 허리 DRG의 주입 가이드 설계 되었습니다. 참고로, 우수한 장 골 볏 정렬 L3 또는 L4 척추 수준.</li>
	<li>요원 스위트 전송에 대 한 따뜻한 담요와 동물 커버.</li>
</ol> 3. 신 제품군에 위치 <ol><li>부드럽게 리프트와 위치는 경향이 동물 수정된 큰 자비 롭 동물에 슬링 패딩된 복 조리개와. 
	참고: 복 부 조리개 수 있습니다 복 부의 압력에서 감소에 대 한 척추의 인간의 수술 하는 동안 사용 된 윌슨 프레임 비슷합니다. 차례 차례로,이 자가 척추 혈관에서 출혈 감소 합니다. 슬링은 다리 주변 신경 충돌에서 동물을 보호 하는 패딩된 구멍을 통해 자유롭게 걸 수 있기 때문에 유리 하다. 그러나, 때문에 슬링 프레임 금속, 그것 해야 합니다 수 채워집니다 전기 합선 및 실수로 동물 화상을 방지 하기 위해 절연. 담요 롤 동물의 크기에 따라 편안한 자세에서 머리와 목의 위치에 배치 될 수 있습니다.</li>
	<li>유지 전신 1-3%를 사용 하 여 효과를 적정 (IH) isoflurane 흡입. 안과 연 고와 눈을 축 축 하 게 하 고 부드럽게 그들 닥 쳐 테이프.</li>
	<li>중요 한 기호 문서 온도, 혈압, 심장 박동, 및 산소 모니터링 장소 라인. 환기 capnography 모니터링할.</li>
	<li>왼쪽 이나 오른쪽 견 갑 골 위에 접착제, 일회용 electrosurgical 분산 전극 배치.</li>
	<li>관리 따뜻하게 Lactated 벨 &#39; 귀 정 맥 카 테 터를 통해 유지 보수 체액으로 s. 5-10 mL/kg의 비율로 체액을 제공/h.</li>
	<li>흉부 및 자 궁 경부 지역 위에 강제 공기 데우는 장치를 놓고 마지막 갈비뼈를 포함 하지 마십시오.</li>
</ol> 4. 살 균 준비의 요원에 대 한 필드 왼쪽 양면 사출 참고:이 시점에서 엄격한 살 균 방식 진행.
<li>준비 0.7% 요오드 povacrylex 및 74% 이소프로필 알코올의 제조 업체에 따라 다양 한 응용 프로그램 시작 하는 요 추 척추 overlying 피부 <ol>&#39; s 지시. 가이드 바늘 나중 메 마른 패션에 배치 될 수 있도록 antisepsis 표시 가로 프로세스 과거 중간 코로나 비행기 쪽으로 확장 하 여 계획 된 주입의 옆에 응용 프로그램을 lateralize.</li>
	<li>표시 요 추 spinous 프로세스에 따라 중간 이상 되는 계획 된 절 개 사이트를 대략적으로 직사각형 패션에 일회용 외과 수건 장소.</li>
	<li>적용 항균 접착제 incise 요원 수건을 통해 드러 워 진 그리고 피부. 장소에 커튼을 클램프와 요원 필드 휘장 가장자리 확장.</li>
	<li>보안 요원 필드와 모니터링 기술자 사이 슬링의 머리에서 기둥에 수직 드 레이프.</li>
	흡입 및 무 균 커튼을 클램핑 함으로써 요원 분야 내 electrosurgery <li>보안 라인. 살 균 필드 튜브 및 와이어의 무료 끝 통과.</li>
</ol> 5. 피부 절 개 및 Subperiosteal 해 부 <ol><li>중간 선 따라 허리 spinous 프로세스를 만져 하 고 3 연속 척추 수준 식별.</li>
	<li>#15 메스를 사용 하 여 절 개 드 레이프 spinous 프로세스에 직접 후부를 통해 8-12 cm 중간 화살 절 개를 엽니다. Hemostasis 거 즈 tamponade monopolar electrosurgery를 사용 하 여 유지. 
	참고: 관리는 하지에서 벗어나고 정중 선 절 개가 paraspinal 근육에서 출혈을 제한 하기 때문에 앞쪽 방향에서 고급은 취해야 한다. 정기적인 촉진 spinous 프로세스에 대 한 발전을 촉진 한다. Weitlaner, Meyerding, 또는 Gelpi 브래킷으로 자체 유지 수 있습니다 배치 되며 위치 해 부를 촉진 하는 데 필요한. 흡입은 가시성을 유지 하는 데 사용 됩니다.</li>
	<li>피하 조직 및 지방 thoracolumbar 근 막에 도달할 때까지 monopolar electrosurgery를 사용 하 여 해 부. 만져 thoracolumbar 근 막 깊이 spinous 프로세스와 spinous 프로세스 사이 supraspinous 인 대 확장을 노출 하는 중간에 따라 근 막 잘라. 
	참고: thoracolumbar 근 막 조직, aponeurotic 칼 집으로는 간접, 중간 방향 측면에서 interweaves 결합 조직 입자로 식별 됩니다. 이 시점에서, 절 개 3 spinous 프로세스 해 부 분야의 센터 내 맞춤 centermost spinous 프로세스와 완벽 하 게 볼 수 있습니다 수 있도록 우수한 또는 열 등 한 방향으로 길게 할 수 있습니다.</li>
	<li>#15 블레이드를 사용 하 여 각 spinous 프로세스에 후부 supraspinous 인 대를 통해 2 m m 깊은 parasagittal 절 개 배치. Spinous 프로세스의 후부 표면의 왼쪽된 3 분의 1에 따라 각 절 개 배치.</li>
	<li>부드럽게 각 inc 따라 각 수준에서 supraspinous 인 대 출시5 mm 자유로움 엘리베이터를 사용 하 여 ision.</li>
	<li>Subperiosteal 비행기를 식별 하 고 각 spinous 프로세스의 측면 표면 따라 그 비행기 내에서 해 부.</li>
	<li>Subperiosteal 해 부를 수행 부드러운 되도록 병렬 방식에서 각 spinous 과정, 심지어 해 부 이루어집니다.</li>
	<li>Monopolar electrosurgery subperiosteal 해 부와 함께에서 사용 하 여 interspinous 공간 따라 paraspinal 근육 첨부 파일 incise.</li>
	<li>각 수준에서 lamina를 식별 하 고 계속 옆으로 3 노출된 척추를 연결 하는 2 zygapophyseal 관절의 측면 경계에 도달 하는 파스 라는 관절 사이의 lamina의 측면 가장자리를 도달 하는 subperiosteal 해 부 interarticularis. 
	참고: 동위 interarticularis 어떤 점에서 DRG 있는 척추 구멍의 후부 테두리입니다. 때때로, 작은 정 맥은 lamina의 후부 표면에 있는 구멍에서 발생 합니다. 이러한 정 맥 subperiosteal 해 부 동안에 파열 하는 경향이 있다. Hemostasis 바이 폴라 electrosurgery 및 뼈 왁 스는 구멍에 적용의 조합을 사용 하 여 쉽게 이루어집니다.</li>
</ol> 6. 단일 레벨 Laminotomy <ol><li>centermost lamina 사이 고 2 zygapophyseal 관절 내측으로 laminotomy의 대상 식별.</li>
	<li>추적의 열 등 한 가장자리, 꼬리 zygapophyseal 공동의 연속 열 등 관절 프로세스에 그냥 중간 지점에 lamina.</li>
	<li>를 사용 하 여 5 mm 자유로움 엘리베이터 또는 퀴 렛 lamina 및 중앙 운하의 caudalmost 가장자리 사이의 전환 만져. 
	참고:은 주의 하지 강제로 palpating 악기 앞쪽이 듀 럴 색 및 척수 연락처 것입니다. 유의 하십시오 돼지에서 척수 척추 요 추 18 과거 확장. 촉진을 촉진 하기 위하여이 지역 overlying 추가 부드러운 조직을 제거 하는 척추 디스크 rongeur를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>사용은 2 mm 최대-무, 45도 Kerrison rongeur piece-wise 패션에 뼈를 추출. 그냥 꼬리는 작은 꽃 자루의 꼬리 표면 수준에 위에 spinous 프로세스의 기지에 따라 뼈를 제거 하 고 옆으로 밖으로 그것의 전체 넓이에.</li>
	<li>사용 각도 뼈 rongeurs 뼈 제거 지원. 두고는 laminotomy 크게 완료 될 때까지 자리에 lamina에 연결 된 열 등 한 관절 과정.</li>
	<li>는 열 등 한 관절 프로세스를 자유롭게 이동 하 고 연결 된 zygapophyseal 공동 캡슐에 의해서만 확인 합니다. #11 또는 #15 블레이드를 사용 하 여 캡슐 incise.</li>
	<li>Piece-wise 패션에 열 등 한 관절 프로세스를 제거 하지만 인접 한 뛰어난 관절 프로세스를 그대로. 
	참고:는 laminotomy 완료 hemostasis 바이 폴라 electrosurgery 함께 수행 됩니다. Monopolar electrosurgery 신경 구조의 근접 때문에 사용 되지 않습니다. 본 왁 스 노출 된 뼈에서 출혈의 사이트에 따라 놓일 수 있다 고 흡수 젤라틴 스폰지 부드러운 조직 근처 hemostasis를 가져오기 위해 사용할 수 있습니다. Cottonoid 심지 묽 및 해 부에서 혈액에 유용한 도구입니다.</li>
</ol> 7. DRG의 해 부 <ol><li>피난 piece-wise 패션에 경 막 외 지방 표면에서 깊은 medially 시작 하 여 옆으로 진행. 6-10 프랑스 프레이 저 흡입 팁 양극 겸 자 및 흡입을 사용 하 여 부드러운 절 개 하 여 지방을 제거. 
	참고: 확대 확대 또는 해 현미경의 사용은 안전 하 게 철수 경 막 외 지방 하 고 세심 한 hemostasis 바이 폴라 electrosurgery를 사용 하 여 경 막 외 정 맥 총의 달성 하는 데 필요한 세부 수준을 제공 하는 데 도움이.</li>
	<li>는 Superoinferior 방향, 피부 절 개의 축에 평행으로 실행 하는 중간 선 따라 듀 럴 색을 식별 합니다. 듀 럴 색 경 막 신경 루트 소매를 볼 수 있습니다 때까지 듀 럴 색 따라 경 막 외 지방 제거.</li>
	<li>추적 듀 럴 소매 옆 및 inferiorly 경 막 외 지방 피난 하 여 확대는 DRG 주위를 볼 때까지. 
	참고: 그것의 타원형 모양 및 노란색 오렌지 색상에 대 한 DRG를 식별 합니다. 중간 허리 척추에는 DRG는 일반적으로 4-6 m m 크기, 측면 방향으로 중간에 긴 위치에 직접 열 등 또는 2-3 mm의 각 작은 꽃 자루에 중간. 무딘, 직각 신경 후크는 작은 꽃 자루를 만져 부드럽게 하는 데 사용할 수 있습니다.</li>
	인접 한 척추 신경 볼 때까지 <li>측면, DRG, 과거 경 막 외 지방을 대피. 
	참고: durotomy 발생 하면, 그것을 복구 간단한 실행 stich의 6-0 나일론 봉합 및 부드러운 마이크로 바늘 드라이버를 사용 하 여 방수 마감.</li>
</ol> 8. DRG의 주입 <ol><li>22 게이지 척수 바늘을 사용 하 여 32-게이지 대류 향상 된 배달 (CED) 바늘의 궤적을 안내 하. 피부와 paraspinal 근육 통해 22 게이지 가이드 바늘 찔린. 
	참고: CED 바늘은 조직, 일컬어 대량 흐름, 압력 기온 변화도 19 , 20 때문에 유체 대류를 달성 하도록 설계 되었습니다.</li>
	<li>목표는 DRG의 경도 축에 근접 하 고 해 부 분야의 측면 paraspinal 벽에서 신흥 바늘 팁에서 궤적을 따라 가이드 바늘.</li>
	<li>벌금 바늘 루멘은 DRG의 중심에 정렬 될 때까지 바늘 경로 조정. 
	참고: 가이드 바늘 결코가 수는 DRG 문의.</li>
	<li>멸 균 주사기로 살 균 injectate을 작성 하 고 메 마른 주입 튜브에 주사기를 연결.</li>
	<li>는 CED 바늘에 튜브를 장악 하 고 손 살 균 필드 주사기. 프로그래밍 가능한 주사기 펌프에 주사기를 연결. 
	참고: 튜브 5 피트의 길이 불 임 및 이동성 유지 되도록 준비 된다. 또한, 그것은 파라마운트 중요성 없음 기포 솔루션으로 도입 될.</li>
	<li>식 CED 바늘 팁에서 볼 때까지 injectate 사전.</li>
	<li>는 가이드 바늘 루멘 내의 CED 바늘을 배치 하 고 가이드 바늘 팁에서 나온다 때까지 천천히 CED 바늘을 사전. DRG 바늘 맞춤 동안 구멍이 되지 확인 하십시오.</li>
	<li>미세 조정 CED 팁의 최종 위치를 결정 하는 탄도의 긴 축 따라 가이드 바늘 위치.</li>
	<li>바늘 및 CED 바늘 깊이 가이드 CED 바늘의 맞춤 달성 되 면 함께 연동 바늘 허브를 사용 하 여 가이드를 확보.</li>
	<li>모든 사출 장치 연결 완전히 가이드 바늘, CED 바늘을 포함 하 여 보호 되 고 injectate와 연결 된 튜브 로드 확인.</li>
	<li>대략적인 CED 바늘 팁와 DRG에 긴 축 따라 가이드 바늘 사전.</li>
	<li>CED 바늘 팁 DRG 펑크.</li>
	<li>는 DRG의 3 차원 중심으로 CED 바늘 팁을 submerse. 
	<li>CED 졸업된 속도 볼륨의 3 단계를 사용 하 여 injectate의 제공 100 μ.</li>
	<li>2 제공 4 μ μ/첫 번째 단계에 대 한 민. 두 번째 단계에 대 한 4 μ/분 8 μ를 제공 합니다. 세 번째이자 마지막 단계에 대 한 8 μ/분에 제공 하는 88 μ. 
	참고: 수 단계 사이 및 압력 평형 수 있도록 마지막 단계 후 3 분 일시 중지.</li>
	<li>최종 주입 단계와 부드럽고, 부드러운 모션에서 긴 축 따라 3 분 일시 중지 후 주입 기구 철회. 
	참고: 삽입 된 솔루션을 무색, 착 색된 염료 0.1% 무게/injectate 배포 12의 시각적 평가에 도움이 볼륨의 농도에서 솔루션에 포함 되어 있습니다. 또한, 중요 한 염료 4 &#39;, 연구 설계 injectate 배포 5의 더 평가가 필요한 경우 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.25 μ g/μ의 농도에서 솔루션에 포함 된는.</li>
</ol> 9. 폐쇄 <ol><li>동원 및 플러시 파편, 즉 뼈 파편의 사이트 폐쇄 전에 외과 사이트에 따뜻한 식 염 수 관개의 적용 3 라운드. 흡입을 사용 하 여 식 염 수와 파편. 
	참고: 세심 한 hemostasis 관개 명확 때 지켜진다. Hemostatic 에이전트 (젤라틴 스폰지)와 cottonoid이이 시간에 제거 됩니다. 모든 자료와 악기 폐쇄 이전 절 개 사이트에서 삭제 하는 확인 하십시오.</li>
	<li>폐쇄에 대 한 3 계층 기법 사용.</li>
	<li>0 봉합 사를 사용 하 여 간단 하 고, 중단, 사용 방식에서 thoracolumbar 근 막 봉합. Stich 모든 5-8 m m 방수 폐쇄를 달성 하기 위해 배치.</li>
	<li>봉합 스티치와 함께 간단 하 고, 중단, 반전 패션에 2-0 봉합 사를 사용 하 여 피하 조직 배치 모든 5-에-8mm 적절 한 강도 달성 하기 위해.</li>
	<li>실행 간단한, 0 봉합 사를 사용 하 여 피부를 닫거나 중단 패션.</li>
	<li>바늘 카운터를 사용 하 여 아무 sharps 집결을 위해</li>
	<li>관개 식 염 수와 피부, 건조 한 피부, 고 접착성 붕대 스트립 절 개 수직 배치.</li>
	<li>장소 거 즈 붕대 위에 제거 하 고 항균 최종 접착제를 연결 incise 드 레이프.</li>
</ol> 10. 수술 동물 관리 <ol><li>Extubate, 따뜻한 담요, 커버 하 고 복구 동물 수송.</li>
	<li>수술 모니터링 및 생존 수술에서 회복 기관 표준 운영 절차에 따라. 최소한, 관찰 동물 마다 15 분 의식, 시간당 전체 마 취 회복, 달성 될 때까지 두 번 매일의 반환까지 그 후.</li>
	<li>관리 IM 또는 구두 carprofen 4 mg/kg, 일단 수술 날 0에 시작 하는 5 일 동안 매일에 주어진 제공 수술 후 통증 관리. 수술 날 2에 0.18 mg/kg에서 주어진 SC buprenorphine SR, 관리.</li>
	<li>수술 날 4에 5 mg/kg에서 주어진 메신저 ceftiofur를 함으로써 수술 antisepsis 관리.</li>
	<li>수술 후 5-7 일에 붕대를 제거합니다. 일반적으로 수술 후 10-14 일에 완료 되 면 상처 치유는 봉합을 제거.</li>
	<li>연구 끝점에 도달 하면 기관 표준 운영 절차에 따라 동물을 고통 없이 안락사.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Millan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+pain:+An+integrative+review.">The induction of pain: An integrative review.</a> Prog Neurobiol. 57 (1), 1-164 (1999).</li><li>Burma, N. E., Leduc-Pessah, H., Fan, C. Y., Trang, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+chronic+pain:+Advances+and+challenges+for+clinical+translation.">Animal models of chronic pain: Advances and challenges for clinical translation.</a> J Neurosci Res. , (2016).</li><li>Pleticha, J., Maus, T. P., Beutler, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Future+directions+in+pain+management:+integrating+anatomically+selective+delivery+techniques+with+novel+molecularly+selective+agents.">Future directions in pain management: integrating anatomically selective delivery techniques with novel molecularly selective agents.</a> Mayo Clin Proc. 91 (4), 522-533 (2016).</li><li>Standring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomical basis of clinical practice. , (2005).</li><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion:+technical,+behavioral,+and+histological+observations.">Direct injection into the dorsal root ganglion: technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+long+noncoding+RNA+contributes+to+neuropathic+pain+by+silencing+Kcna2+in+primary+afferent+neurons.">A long noncoding RNA contributes to neuropathic pain by silencing Kcna2 in primary afferent neurons.</a> Nat Neurosci. 16 (8), 1024-1031 (2013).</li><li>Xu, Y., Gu, Y., Wu, P., Li, G. W., Huang, L. Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiencies+of+transgene+expression+in+nociceptive+neurons+through+different+routes+of+delivery+of+adeno-associated+viral+vectors.">Efficiencies of transgene expression in nociceptive neurons through different routes of delivery of adeno-associated viral vectors.</a> Hum Gene Ther. 14 (9), 897-906 (2003).</li><li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion.">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li><li>Mason, M. R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons.">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li><li>Jelicic Kadic, A., Boric, M., Kostic, S., Sapunar, D., Puljak, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+intraganglionic+injection+of+calcium/calmodulin-dependent+protein+kinase+II+inhibitors+on+pain-related+behavior+in+diabetic+neuropathy.">The effects of intraganglionic injection of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II inhibitors on pain-related behavior in diabetic neuropathy.</a> Neurosci. 256, 302-308 (2014).</li><li>Greenberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of neurosurgery. , (2010).</li><li>Yu, H., Fischer, G., Hogan, Q. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AAV-mediated+gene+transfer+to+dorsal+root+ganglion.">AAV-mediated gene transfer to dorsal root ganglion.</a> Methods Mol Biol. 1382, 251 (2016).</li><li>Yaksh, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacology+and+toxicology+of+chronically+infused+epidural+clonidine+HCL+in+dogs.">Pharmacology and toxicology of chronically infused epidural clonidine HCL in dogs.</a> Toxicol Sci. 23 (3), 319-335 (1994).</li><li>Federici, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+technique+for+spinal+cord+delivery+of+therapies:+demonstration+of+procedure+in+gottingen+minipigs.">Surgical technique for spinal cord delivery of therapies: demonstration of procedure in gottingen minipigs.</a> J Vis Exp. (70), e4371 (2012).</li><li>Lee, J. H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+porcine+model+of+traumatic+thoracic+spinal+cord+injury.">A novel porcine model of traumatic thoracic spinal cord injury.</a> J Neurotrauma. 30 (3), 142-159 (2013).</li><li>Raore, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cervical+multilevel+intraspinal+stem+cell+therapy:+assessment+of+surgical+risks+in+Gottingen+minipigs.">Cervical multilevel intraspinal stem cell therapy: assessment of surgical risks in Gottingen minipigs.</a> Spine. 36 (3), e164 (2011).</li><li>Riley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraspinal+stem+cell+transplantation+in+amyotrophic+lateral+sclerosis:+A+phase+I+safety+trial,+technical+note,+and+lumbar+safety+outcomes.">Intraspinal stem cell transplantation in amyotrophic lateral sclerosis: A phase I safety trial, technical note, and lumbar safety outcomes.</a> Neurosurg. 71 (2), 405-416 (2012).</li><li>Olmarker, K., Holm, S., Rosenqvist, A., Rydevik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+nerve+root+compression.++A+model+of+acute,+graded+compression+of+the+porcine+cauda+equina+and+an+analysis+of+neural+and+vascular+anatomy.">Experimental nerve root compression. A model of acute, graded compression of the porcine cauda equina and an analysis of neural and vascular anatomy.</a> Spine. 16 (1), 61-69 (1991).</li><li>Bobo, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convection-enhanced+delivery+of+macromolecules+in+the+brain.">Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain.</a> Proc Natl Acad Sci U.S.A. 91 (6), 2076-2080 (1994).</li><li>Lonser, R. R., Sarntinoranont, M., Morrison, P. F., Oldfield, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Convection-enhanced+delivery+to+the+central+nervous+system.">Convection-enhanced delivery to the central nervous system.</a> J Neurosurg. 122 (3), 697-706 (2015).</li><li>Shen, J., Wang, H. Y., Chen, J. Y., Liang, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+analysis+of+normal+human+lumbar+dorsal+root+ganglion+by+3D+MR+imaging.">Morphologic analysis of normal human lumbar dorsal root ganglion by 3D MR imaging.</a> AJNR Am J Neuroradiol. 27 (0195–6108 (Print)), 2098-2103 (2006).</li><li>Pleticha, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimally+invasive+convection-enhanced+delivery+of+biologics+into+dorsal+root+ganglia:+validation+in+the+pig+model+and+prospective+modeling+in+humans.">Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans.</a> J Neurosurg. 121 (4), 851-858 (2014).</li></ol>

없음; 저자는이 연구에 관련 된 충돌의 관심 있다.

우리는 DRG 통해 laminotomy 및 건강 한 큰 동물성 종에 있는 intraganglionic 주입 수술 노출 하는 방법을 설명 하고자 특히, 돼지. 설치류, 유사한 방법 자세한 12 되어 있으며 기존의 pharmacologic 요원 8,10 및 바이러스 성 벡터 6,7,,912 DRG를 제?...

지 루트 신경 절 (DRG)은 척추 칼럼을 따라 위치한, 신경 해부학 개별 컬렉션. 각 DRG 특정 신체 영역에서 인코딩 및 주변 자극 중앙 신경 시스템 (CNS)를 릴레이 하는 기본 감각 뉴런을 포함 합니다. 예를 들어, 관절염의 통증에는 통증 수용 체는 관절에 대 한 위치 인식 유해 자극 때 시작 됩니다. 이 과정은 불린다 nociception. 유해 자극의 장기 인식 만성 통증 1이끌어 낸다.
만성 통증 한 목표 intraganglionic 주입 3등 DRG, 진통제의 대상된 배달에 대 한 유용한 방법을 개발 하는 전 임상 연구 2 의 빈번한 주제 이다. 그러나, DRG는 범위 내에서 보 니 척추 foramina 4의 거주 때문에 접근 하기 어려운. 몇몇 그룹은 성공적으로 설치류 5,6,7,8,,910에서 척추 수술을 통해이 장애물을 극복 했다.
클리닉, laminectomy 일반적인 척추 작업이 며 그로 인하여 척추 운하 11unroofing 척추 lamina의 외과 제거를 가리킵니다. 그러나 DRG에 대 한 직접 액세스를 감당할 수술 기법의 설치류 5,12에 성공 했다,, 번역 관련 구조의 크기에 비현실적인 고려 차이 그 영향을 어떻게 있을 수 있습니다. 약 동학 또는 기술적 타당성 13,14. 예를 들어 한 연구 T10 3.0, 7.0, 그리고 쥐, 돼지, 및 인간, 각각 158.2 m m에 가로 척수 직경 결정. 따라서, 큰 동물 신경 구조의 더 나은 대략 인간의 차원 모델.
돼지, Raore 그 외 여러 intraspinal 주사 16자 궁 경부 척수에 대 한 액세스를 다단계 laminectomy를 사용. 절차 잘 용납 되었다 고 단계 나 임상 실험 대 등 수술 결과 문서화 17을 했다. 이 결과 기술적 타당성 및 인간에서 안전의 예측으로 큰 전 임상 동물 모델의 지속적인된 사용을 권장합니다.
날짜 하려면, 아무 상세한 방법론 외과 접근 및 큰 동물 종에서 DRG의 주입에 대 한 존재 합니다. 이 변환 간격을 좁히는, 우리 보고 DRG 노출 및 돼지에 laminotomy 통해 주입에 대 한 프로토콜. 표준 신경외과, 악기, 기술과 재료를 사용 했다 하 고 메서드가 현대 외과 연습을 모방 하도록 설계 되었습니다. 우리 intraganglionic 주입 허리 DRG에 대 한 용액을 사용 하 여 설명 하 고 수술 하루 21 조직학 통해 배달 확인.

<table><tbody><tr><td>Large humane animal sling</td><td>Britz &amp;amp; Company</td><td>002539</td><td>Modified to include abdominal aperture</td></tr><tr><td>Adhesive patient return electrode - 9 inch</td><td>Medtronic</td><td>E7506</td><td>-</td></tr><tr><td>Ranger blood &amp;amp; fluid warming system</td><td>3M</td><td>24500</td><td>-</td></tr><tr><td>Lactated Ringer&#039;s fluid</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-09</td><td>-</td></tr><tr><td>Force air warming device</td><td>3M</td><td>77500</td><td>-</td></tr><tr><td>Duraprep solution with applicator, 26 mL (0.7% iodine povacrylex, 74% isopropyl alcohol)</td><td>3M</td><td>8630</td><td>-</td></tr><tr><td>Sterile disposable surgical towels</td><td>Medline</td><td>MDT2168286</td><td>-</td></tr><tr><td>Ioban 2 incise drape</td><td>3M</td><td>6651EZSB</td><td>-</td></tr><tr><td>Disposable suction canister and tubing</td><td>Medline</td><td>DYND44703H</td><td>-</td></tr><tr><td>Button switch electrosurgical monopolar pencil</td><td>Medtronic</td><td>E2450H</td><td>-</td></tr><tr><td>Fine smooth straight bipolar electrosurgical forceps, 4 1/2 inch</td><td>Bovie</td><td>A826</td><td>-</td></tr><tr><td>#15 blade</td><td>Miltex</td><td>4-315</td><td>-</td></tr><tr><td>#11 blade</td><td>Miltex</td><td>4-311</td><td>-</td></tr><tr><td>4 x 4 surgical gauze</td><td>Dynarex</td><td>3262</td><td>-</td></tr><tr><td>Weitlaner self-retaining retractor, 8 inch</td><td>Miltex</td><td>11-618</td><td>-</td></tr><tr><td>Meyerding self-retaining retractor, 1 x 2 3/8 inch</td><td>Sklar</td><td>42-2078</td><td>-</td></tr><tr><td>Gelpi self-retaining retractor, 7 inch</td><td>Sklar</td><td>60-6570</td><td>-</td></tr><tr><td>Freer elevator, 5 mm</td><td>Medline</td><td>MDS4641518F</td><td>-</td></tr><tr><td>Bone wax</td><td>Ethicon</td><td>W31G</td><td>-</td></tr><tr><td>Spurling intervertebral disc rongeur, 3 mm</td><td>Sklar</td><td>42-2852</td><td>-</td></tr><tr><td>Spurling 45-degree, up-biting Kerrison rongeur, 2 mm</td><td>Medline</td><td>MDS4052802</td><td>-</td></tr><tr><td>Leksell angled rongeur, 2 mm</td><td>Sklar</td><td>40-4097</td><td>-</td></tr><tr><td>Gelfoam, size 50</td><td>Pfizer</td><td>AZL32301</td><td>-</td></tr><tr><td>Cottonoid patty</td><td>Medtronic</td><td>8004007</td><td>-</td></tr><tr><td>Frazier suction tip, 6 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2006</td><td>-</td></tr><tr><td>Frazier suction tip, 10 Fr</td><td>Sklar</td><td>50-2010</td><td>-</td></tr><tr><td>Dandy blunt right angle nerve hook</td><td>Medline</td><td>MDS4005220</td><td>-</td></tr><tr><td>Nylon suture, 6-0</td><td>Ethicon</td><td>697G</td><td>-</td></tr><tr><td>Castroviejo smooth micro needle holder</td><td>Medline</td><td>MDG2428614</td><td>-</td></tr><tr><td>22 gauge Quinke point spinal needle</td><td>Halyard Health</td><td>18397</td><td>-</td></tr><tr><td>32 gauge CED needle with locking Luer hub</td><td>See comments</td><td>n/a</td><td>As in: Pleticha, J., Maus, T.P., Christner, J.A., Marsh, M.P., Lee, K.H., Hooten, W.M., Beutler, A.S. Minimally invasive convection-enhanced delivery of biologics into dorsal root ganglia: validation in the pig model and prospective modeling in humans. Technical note. J Neurosurg. 121(4), 851-8 (2014).</td></tr><tr><td>Polyethylene tubing, 5 feet</td><td>Scientific Commodities</td><td>BB31695-PE/05</td><td>-</td></tr><tr><td>Monoject syringe, 3 mL</td><td>Kendall</td><td>SY15352</td><td>-</td></tr><tr><td>NanoJet syringe pump</td><td>Chemyx</td><td>10050</td><td>-</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>-</td></tr><tr><td>Fast Green FCF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7252</td><td>-</td></tr><tr><td>Bulb irrigation syringe</td><td>Medline</td><td>DYND20125</td><td>-</td></tr><tr><td>Fine-toothed Adson forceps</td><td>Medline</td><td>MDS1000212</td><td>-</td></tr><tr><td>Vicryl suture, 0</td><td>Ethicon</td><td>J603H</td><td>-</td></tr><tr><td>Vicryl suture, 2-0</td><td>Ethicon</td><td>J317H</td><td>-</td></tr><tr><td>Needle counter</td><td>Medline</td><td>NC20FBRGS</td><td>-</td></tr><tr><td>Steri-strip skin closure, 1/2x4 inch</td><td>3M</td><td>R1547</td><td>-</td></tr></tbody></table>

laminotomy for lumbar dorsal root ganglion access and injection in swine

지 루트 신경 절 (DRG)는 머리 아래 모든 기본 감각 신경 세포를 포함 하는 해부학 잘 정의 된 구조. 이 사실은 만성 통증을 치료 하기 위한 새로운 치료제의 주입을 위해 DRG 매력적인 목표 합니다. 작은 동물 모델에서 laminectomy 각 DRG를 둘러싼 척추 뼈의 외과 제거를 포함 하기 때문에 DRG 주입을 용이 하 게 사용 되었습니다. 큰 동물 종, 즉, 돼지에에서 요 추 DRG의 intraganglionic 주입에 대 한 기술을 설명합니다. Laminotomy는 DRG 표준 신경외과, 악기, 기술과 재료를 사용 하 여 직접 액세스할 수 있도록 수행 됩니다. Laminectomy 통해 더 광범위 한 뼈 제거와 비교, 우리가 충분 한 DRG 액세스를 달성 하는 동안 척추 해부학을 보존 하기 위해 laminotomy를 구현 합니다. DRG 주입의 자가 진행 비 독성 염료를 사용 하 여 모니터링 됩니다. 수술 당일 21 안락사, 다음 주입의 성공 조직학의 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) intraganglionic 배포에 대 한에 의해 결정 됩니다. 우리는 프로토콜을 설명 하는 생물학으로 비활성 솔루션을 주입. 이 방법 적용된 미래에 전 임상 연구 대상 DRG 치료 솔루션을 수 있습니다. 우리의 방법론은 큰 동물성 종에 intraganglionic 작은 동물 패러다임의 translatability를 테스트 용이 해야. 또한,이 프로토콜은 그 돼지에서 DRG 주입의 전 임상 연구를 계획에 대 한 핵심 자원으로 봉사 할지도 모른다.

Injectate의 더 평가 DRG injectate의 성공적인 납품 DAPI 확산의 조직학 평가 의해 결정 됩니다. 기법 바늘 팁은 DRG의 3 차원 중심에 위치 한다. 따라서, 배달 DAPI 바늘 끝에 조직학 단면도에서 둘 다 (중앙 DRG 섹션) 근처 고 먼 (주변 DRG 섹션) 얼룩의 정도 평가 하 여 결정 됩니다. 그림 1A 및 그림 1B 한 DRG의 성공적인 주입을 나타냅니다. DAPI 얼룩 모...

Watch this Scientific Journal Video about Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine at JoVE.com

Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Intraganglionic 주입에 대 한 요 추 느 루트 신경 절 (DRG)에 대 한 액세스를 제공 하는 돼지에서 laminotomy 하는 방법을 설명 합니다. 사출 진행 intraoperatively 그리고 조직학 수술 후 21 일까지 확인 모니터링 합니다. 이 프로토콜 DRG 주입 관련 된 미래의 전 임상 연구 사용 될 수 있습니다.

Laminotomy 허리 지 루트 신경 절의 액세스 및 돼지에 주입

Dorsal root ganglia (DRG) are anatomically well defined structures that contain all primary sensory neurons below the head. This fact makes DRG attractive ...

laminotomy-for-lumbar-dorsal-root-ganglion-access-injection

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.6K 조회수.  Mayo Clinic, Translational Science Track, Mayo Graduate School. Intraganglionic 주입에 대 한 요 추 느 루트 신경 절 (DRG)에 대 한 액세스를 제공 하는 돼지에서 laminotomy 하는 방법을 설명 합니다. 사출 진행 intraoperatively 그리고 조직학 수술 후 21 일까지 확인 모니터링 합니다. 이 프로토콜 DRG 주입 관련 된 미래의 전 임상 연구 사용 될 수 있습니다.

비디오: Laminotomy for Lumbar Dorsal Root Ganglion Access and Injection in Swine

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) cases 1 and is the ultimate cause of death in patients with the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS) 2.
ALS is a devastating neurological disorder that is characterized by relatively rapid degeneration of upper and lower motor neurons. Patients ultimately succumb to the disease on average 2-5 years following diagnosis because of respiratory paralysis due to loss of phrenic motor neuron innnervation of the diaphragm 3. The vast majority of cases are sporadic, while 10% are of the familial form. Approximately twenty percent of familial cases are linked to various point mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gene on chromosome 21 4. Transgenic mice 4,5 and rats 6 carrying mutant human SOD1 genes (G93A, G37R, G86R, G85R) have been generated, and, despite the existence of other animal models of motor neuron loss, are currently the most highly used models of the disease.
Spinal cord injury (SCI) is a heterogeneous set of conditions resulting from physical trauma to the spinal cord, with functional outcome varying according to the type, location and severity of the injury 7. Nevertheless, approximately half of human SCI cases affect cervical regions, resulting in debilitating respiratory dysfunction due to phrenic motor neuron loss and injury to descending bulbospinal respiratory axons 1. A number of animal models of SCI have been developed, with the most commonly used and clinically-relevant being the contusion 8.
Transplantation of various classes of neural precursor cells (NPCs) is a promising therapeutic strategy for treatment of traumatic CNS injuries and neurodegeneration, including ALS and SCI, because of the ability to replace lost or dysfunctional CNS cell types, provide neuroprotection, and deliver gene factors of interest 9.
Animal models of both ALS and SCI can model many clinically-relevant aspects of these diseases, including phrenic motor neuron loss and consequent respiratory compromise 10,11. In order to evaluate the efficacy of NPC-based strategies on respiratory function in these animal models of ALS and SCI, cellular interventions must be specifically directed to regions containing therapeutically relevant targets such as phrenic motor neurons. We provide a detailed protocol for multi-segmental, intraspinal transplantation of NPCs into the cervical spinal cord ventral gray matter of neurodegenerative models such as SOD1G93A mice and rats, as well as spinal cord injured rats and mice 11.

Neural precursor transplantation is a promising strategy for protecting and/or replacing lost/dysfunctional cervical phrenic motor neurons in spinal cord injury (SCI) and the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS). We provide a protocol for cell delivery to cervical spinal cord ventral horn in rodent models of ALS and SCI.

루게릭병과 외상 척수 상해에서 자궁암 복부 호른를 타겟팅하는 Intraspinal 세포 이식

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

연구

의학

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. Regeneration of dorsal root (DR) axons into spinal cord is prevented at the dorsal root entry zone (DREZ), the interface between the CNS and PNS. Our understanding of the molecular and cellular events that prevent regeneration at DREZ is incomplete, in part because complex changes associated with nerve injury have been deduced from postmortem analyses. Dynamic cellular processes, such as axon regeneration, are best studied with techniques that capture real-time events with multiple observations of each living animal. Our ability to monitor neurons serially in vivo has increased dramatically owing to revolutionary innovations in optics and mouse transgenics. Several lines of thy1-GFP transgenic mice, in which subsets of neurons are genetically labeled in distinct fluorescent colors, permit individual neurons to be imaged in vivo1. These mice have been used extensively for in vivo imaging of muscle2-4 and brain5-7, and have provided novel insights into physiological mechanisms that static analyses could not have resolved. Imaging studies of neurons in living spinal cord have only recently begun. Lichtman and his colleagues first demonstrated their feasibility by tracking injured dorsal column (DC) axons with wide-field microscopy8,9. Multi-photon in vivo imaging of deeply positioned DC axons, microglia and blood vessels has also been accomplished10. Over the last few years, we have pioneered in applying in vivo imaging to monitor regeneration of DR axons using wide-field microscopy and H line of thy1-YFP mice. These studies have led us to a novel hypothesis about why DR axons are prevented from regenerating within the spinal cord11.
In H line of thy1-YFP mice, distinct YFP+ axons are superficially positioned, which allows several axons to be monitored simultaneously. We have learned that DR axons arriving at DREZ are better imaged in lumbar than in cervical spinal cord. In the present report we describe several strategies that we have found useful to assure successful long-term and repeated imaging of regenerating DR axons. These include methods that eliminate repeated intubation and respiratory interruption, minimize surgery-associated stress and scar formation, and acquire stable images at high resolution without phototoxicity.

An in vivo imaging protocol to monitor primary sensory axons following dorsal root crush is described. The procedures utilize wide-field fluorescence microscopy and thy1-YFP transgenic mice, and permit repeated imaging of axon regeneration over 4 cm in the PNS and axon interactions with the interface of the CNS.

Rhizotomy 후 도설 루트 Axons의 라이브 영상

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

신경과학

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

This is a compact visual description of a combination of surgical technique and device for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. While the technique is demonstrated in the animal, the procedure is FDA-approved and currently being used for stem cell transplantation into the spinal cords of patients with ALS. While the FDA has recognized proof-of-principle data on therapeutic efficacy in highly characterized rodent models, the use of large animals is considered critical for validating the combination of a surgical procedure, a device, and the safety of a final therapy for human use. The size, anatomy, and general vulnerability of the spine and spinal cord of the swine are recognized to better model the human. Moreover, the surgical process of exposing and manipulating the spinal cord as well as closing the wound in the pig is virtually indistinguishable from the human. We believe that the healthy pig model represents a critical first step in the study of procedural safety.

Short visual description of the surgical technique and device used for the delivery of (gene and cell) therapies into the spinal cord. The technique is demonstrated in the animal but is entirely translatable and currently being used for human application.

치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 Minipigs의 절차의 데모

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

A Method of Nodose Ganglia Injection in Sprague-Dawley Rat

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located in the organs of the abdomen and thorax. The vagus nerve communicates information from stimuli such as heart rate, blood pressure, bronchopulmonary irritation, and gastrointestinal distension to the nucleus of solitary tract of the medulla. The cell bodies of the vagus nerve are located in the nodose and petrosal ganglia, of which the majority are located in the former. The nodose ganglia contain a wealth of receptors for amino acids, monoamines, neuropeptides, and other neurochemicals that can modify afferent vagus nerve activity. Modifying vagal afferents through systemic peripheral drug treatments targeted at the receptors on nodose ganglia has the potential of treating diseases such as sleep apnea, gastroesophageal reflux disease, or chronic cough. The protocol here describes a method of injection neurochemicals directly into the nodose ganglion. Injecting neurochemicals directly into the nodose ganglia allows study of effects solely on cell bodies that modulate afferent nerve activity, and prevents the complication of involving the central nervous system as seen in systemic neurochemical treatment. Using readily available and inexpensive equipment, intranodose ganglia injections are easily done in anesthetized Sprague-Dawley rats.

Afferent vagal signaling transmits important information to central nervous system from receptors located in organs of the abdomen and thorax. The nodose ganglia of vagus nerves contain many types of receptors that modulate vagal activity. This protocol describes a method of local injections of neurochemicals into the nodose ganglia.

스프 라그 - 돌리 쥐에 Nodose 신경절 주입하는 방법

Afferent signaling via the vagus nerve transmits important general visceral information to the central nervous system from many diverse receptors located ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each other anatomically, it is important to identify an appropriate model to use for the study of axon regeneration. By using a suitable model, we can formulate a specific treatment based on the severity of injury, the neuronal cell type of interest, and the desired spinal tract for assessing regeneration. Within the sensory pathway, DRG neurons are responsible for relaying sensory information from the periphery to the CNS. We present here a protocol that uses a DRG injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in the lower cervical spinal cord of an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. As demonstrated using a control virus, AAV5-GFP, we show the effectiveness of a direct DRG injection in transducing DRG neurons and tracing sensory axons into the spinal cord. We also show the effectiveness of the dorsal root crush injury in denervating the forepaw as an injury model for evaluating axon regeneration. Despite the requirement for specialized training to perform this invasive surgical procedure, the protocol is flexible, and potential users can modify many parts to accommodate their experimental requirements. Importantly, it can serve as a foundation for those in search of a suitable animal model for their studies. We believe that this article will help new users to learn the procedure in a very efficient and effective manner.

This protocol presents the use of a dorsal root ganglion (DRG) injection with a viral vector and a concurrent dorsal root crush injury in an adult rat as a model to study sensory axon regeneration. This model is suitable for investigating the use of gene therapy to promote sensory axon regeneration.

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter implantation. The technical limitation of this surgical technique lies in the finesse of the hands. The injection is rapid, especially for a trained experimenter, and since tissue disruption with this technique is minimal, repeated injections are possible; moreover immune reaction to foreign tools (e.g. catheter) does not occur, thereby giving a better and more specific read out of spinal cord modulation. Since the application of the substance is largely limited to the target region of the spinal cord, drugs do not need to be applied in large dosages, and more importantly unwanted effects on other tissue, as observed with a systemic delivery, could be circumvented1,2. Moreover, we combine this technique with in vivo transfection of nucleic acid with the help of polyethylenimine (PEI) reagent3, which provides tremendous versatility for studying spinal functions via delivery of pharmacological agents as well as gene, RNA, and protein modulators.

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a simple and rapid technique of intrathecal needle puncture for a localized transfection of siRNA in the lumbar spinal cord in mouse under short lasting light anesthesia.

마우스의 빠른 비 침습 요추 경 막내 주사를 통해 생체 siRNA의 형질과 척수에있는 유전자 넉다운에

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

생물학

Real-Time Assessment of Spinal Cord Microperfusion in a Porcine Model of Ischemia/Reperfusion

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its incidence is still considerably high and therefore, influences patient outcome. Microcirculation plays a key role in tissue perfusion and oxygen supply and is often dissociated from macrohemodynamics. Thus, direct evaluation of spinal cord microcirculation is essential for the development of microcirculation-targeted therapies and the evaluation of existing approaches in regard to spinal cord microcirculation. However, most of the methods do not provide real-time assessment of spinal cord microcirculation. The aim of this study is to describe a standardized protocol for real-time spinal cord microcirculatory evaluation using laser-Doppler needle probes directly inserted in the spinal cord. We used a porcine model of ischemia/reperfusion to induce deterioration of the spinal cord microcirculation. In addition, a fluorescent microsphere injection technique was used. Initially, animals were anesthetized and mechanically ventilated. Thereafter, laser-Doppler needle probe insertion was performed, followed by the placement of cerebrospinal fluid drainage. A median sternotomy was performed for exposure of the descending aorta to perform aortic cross-clamping. Ischemia/reperfusion was induced by supra-celiac aortic cross-clamping for a total of 48 min, followed by reperfusion and hemodynamic stabilization. Laser-Doppler Flux was performed in parallel with macrohemodynamic evaluation. In addition, automated cerebrospinal fluid drainage was used to maintain a stable cerebrospinal pressure. After completion of the protocol, animals were sacrificed, and the spinal cord was harvested for histopathological and microsphere analysis. The protocol reveals the feasibility of spinal cord microperfusion measurements using laser-Doppler probes and shows a marked decrease during ischemia as well as recovery after reperfusion. Results showed comparable behavior to fluorescent microsphere evaluation. In conclusion, this new protocol might provide a useful large animal model for future studies using real-time spinal cord microperfusion assessment in ischemia/reperfusion conditions.

Spinal cord microcirculation plays a pivotal role in spinal cord injury. Most methods do not allow real-time assessment of spinal cord microcirculation, which is essential for the development of microcirculation-targeted therapies. Here, we propose a protocol using Laser-Doppler-Flow Needle probes in a large animal model of ischemia/reperfusion.

허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

Spinal cord injury is a devastating complication of aortic repair. Despite developments for the prevention and treatment of spinal cord injury, its ...

Advanced Imaging of Dorsal Root Ganglion Neurons for Sensory Modality Research

In Vivo Calcium Imaging of Dorsal Root Ganglia Neurons' Response to Somatic and Visceral Stimuli

A technique is described for surgically exposing the dorsal root ganglion (DRG) of the lumbar-6 in a live, anesthetized laboratory mouse, along with the protocol for in vivo calcium imaging of the exposed DRG in response to various visceral and somatic stimuli. Pirt-GCaMP6s mice or C57BL6 mice intrathecally injected with AAV viruses packaged with GCaMP6s were utilized to capture Ca2+ transients. The amplitude of these transients indicates sensitivity to specific sensory modalities. Afferent fibers originate from internal organs, with primary neuronal cell bodies in spinal or vagal ganglia. Studies on visceral nociception and acupuncture analgesia can potentially be conducted on primary sensory neurons using advanced imaging technologies like in vivo calcium imaging, allowing for the recording of neuronal activity ensembles in the intact animal during stimulation or intervention. The responses of DRG neuron ensembles to somatic and visceral stimuli applied to their corresponding receptive fields were recorded. This technique illustrates how neuronal populations react to various types of somatic and visceral stimuli. It is possible to comprehensively compare neuronal ensemble responses to different stimuli, which is a particularly valuable approach in research on visceral pain and segmental mechanisms of somatic stimulation, such as acupuncture.

The present protocol outlines in vivo calcium imaging for measuring the responses of ensembles of lumbar-6 DRG neurons to somatic and visceral stimuli. Thorough comparisons can be made among neurons responding to different stimuli. This protocol is valuable for investigating mechanisms of visceral pain and somatic stimulation, such as acupuncture.

A technique is described for surgically exposing the dorsal root ganglion (DRG) of the lumbar-6 in a live, anesthetized laboratory mouse, along with the ...

CNS 유전자 치료를 위한 어린 쥐에서 AAV9의 요추 천자 전달

Intrathecal Vector Delivery in Juvenile Rats via Lumbar Cistern Injection

Gene therapy is a powerful technology to deliver new genes to a patient for the treatment of disease, be it to introduce a functional gene, inactivate a toxic gene, or provide a gene whose product can modulate the biology of the disease. The delivery method for the therapeutic vector can take many forms, ranging from intravenous infusion for systemic delivery to direct injection into the target tissue. For neurodegenerative disorders, it is often desirable to skew transduction towards the brain and/or spinal cord. The least invasive approach to target the entire central nervous system involves injection into the cerebrospinal fluid (CSF), allowing the therapeutic to reach a large fraction of the central nervous system. The safest approach to deliver a vector into the CSF is the lumbar intrathecal injection, where a needle is introduced into the lumbar cistern of the spinal cord. This technique, also known as a lumbar puncture, has been widely used in neonatal and adult rodents and in large animal models. While the technique is similar across species and developmental stages, subtle differences in size, structure, and elasticity of tissues surrounding the intrathecal space require accommodations in the approach. This article describes a method for performing lumbar puncture in juvenile rats to deliver an adeno-associated serotype 9 vector. Here, 25-35 &#181;L of vector were injected into the lumbar cistern, and a green fluorescent protein (GFP) reporter was used to evaluate the transduction profile resulting from each injection. The benefits and challenges of this approach are discussed.

저자 스포트라이트: Assessing Intrathecal Gene Therapy Effect in Juvenile Rats

A surgical procedure is described to perform injections into the lumbar cistern of the juvenile rat. This approach has been used for the intrathecal delivery of gene therapy vectors, but it is anticipated that this approach can be used for a variety of therapeutics, including cells and drugs.

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)

Gene therapy is a powerful technology to deliver new genes to a patient for the treatment of disease, be it to introduce a functional gene, inactivate a ...

Laminotomy 허리 지 루트 신경 절의 액세스 및 돼지에 주입

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

루게릭병과 외상 척수 상해에서 자궁암 복부 호른를 타겟팅하는 Intraspinal 세포 이식

Rhizotomy 후 도설 루트 Axons의 라이브 영상

치료의 척추 배달을위한 수술 기법 : 괴팅겐 Minipigs의 절차의 데모

스프 라그 - 돌리 쥐에 Nodose 신경절 주입하는 방법

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

마우스의 빠른 비 침습 요추 경 막내 주사를 통해 생체 siRNA의 형질과 척수에있는 유전자 넉다운에

허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

In Vivo Calcium Imaging of Dorsal Root Ganglia Neurons' Response to Somatic and Visceral Stimuli

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)

Intrathecal vector delivery in juvenile rats via lumbar cistern injection(요추 수조 주입을 통한 어린 쥐의 척수강내 벡터 전달)