이 연구는 기초 과학 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 2016R1A2B4013467)를 통해 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 사역의 과학, ICT 및 미래 계획 2016에 의해 투자 하 고 또한 한국 기초 과학 지원 연구소 연구 프로그램 (프로젝트 번호: C36707).

1입니다. DMMTAV 의 합성
<ol><li>
화학 준비 및 어 금 니 비율 혼합 DMAV, 나2, S 및 H2이렇게4 참고: DMAV: 없음2S:H2이렇게4 = 1:1.6:1.6<ol>
<li>5.24 g DMAV 40 mL 이온된과 N2의 분해-제거 (적어도 30 분 동안 제거) 50 mL 원심 분리기 튜브에 물.</li>
		<li>나2S·9H2O 50 ml 이온과 N2의 14.41 g을 용 해 하 여 Na2S 시 약 준비-250 mL 플라스 크에 물 제거.</li>
		<li>그래서4 시 약 40 mL에 집중된 한 황산 (96%)의 3.3 mL를 추가 하 여 이온 H2와 N2준비-50 mL 원심 분리기 튜브에서 물 제거. 참고: DMAV의 마지막 어 금 니 비율: 없음2S:H2등4 = 1:1.6:1.6 1,,34,,815.</li>
		<li>250 mL 플라스 크 (1.1.2 단계)에 포함 된 없음2S 솔루션 50 mL를 DMAV 솔루션 (1.1.1 단계)의 준비 40 mL를 추가 합니다. DMAV 제거 물 10 mL와 함께 들어 있는 튜브를 헹 구 고 뿐만 아니라 250 mL 플라스 크에 이것을 추가.</li>
		<li>유리 튜브 장착 3 홀 고무 마 개와 함께 플라스 크를 닫습니다. 유리를 사용 하 여 튜브 N2 가스 유입, 유출, 변조 및 H2이렇게4 솔루션 입구, 각각. 즉시 플라스 크를 닫은 후 플라스 크에 N2 가스 흐름을 허용 합니다. 참고: 가스 압력 없이 튀는 반응 솔루션의 표면 흐름 유지 되어야 한다.</li>
		<li>산 성 저항 튜빙 H2의 유리 튜브 등4 솔루션 입구 그래서 H2의 준비 된 40 mL를 추가 하려면 50 mL 주사기와 연결4 솔루션 (1.1.3 단계). 그래서 H2의 40 mL를 추가4 솔루션, 천천히 그리고 stepwise 방식에서. 주의: 황산, 추가 시 흰색 가스 생성 됩니다; 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>정기적으로 황산을 추가 하는 동안 플라스 크에서 반응 혼합물의 색상 변화를 모니터링 합니다. 그래서 H2의 상품 4-5 mL의 간격 유지4. 혼합물은 흰색 흐린 솔루션 이어야 한다. 참고: 즉각적인 노란색 강 수 집중된 한 황산의 빠른 추가 인해 나타날 수 있습니다.</li>
		<li>반응 솔루션 단계 1.1.4의 시작 이후 1 시간 서 있다 확인 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DMMTAV 추출 액체-액체 추출 방법을 사용 하 여
	<ol>
<li>1 시간 후 반응 솔루션을 diethyl 에테르의 약 200 mL를 포함 하는 separatory 깔때기에 붓는 다.</li>
		<li>자 지를 전환 하 여 여러 번 가스를 방출 하는 5-10 분에 대 한 퍼 널을 흔들어. 참고: 합성된 DMMTAV diethyl 에테르 (0.713 g·mL-1)의 상위 계층에 전송 됩니다. 주의: Diethyl 에테르 가스 해로울 수 있습니다; 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>비 커에 반응 솔루션을 수집 하 고 별도로 수집 diethyl 에테르 DMMTAV 병에 포함 된. 다시 동일한 separatory 깔때기에에서 반응 솔루션을 놓고 신선한 diethyl 에테르 reshaking의 약 200 mL를 추가 합니다. 단계 1.2.2-1.2.3 세 번 반복 합니다.</li>
		<li>다시, 동일한 separatory 깔때기로 1.2.3 단계에서 수집 된 diethyl 에테르를 부 어 고 추가 약 100 mL N2-이온된 수를 제거. 5-10 분 동안 흔들어 하 고 N2를 삭제-이온된 수와 순수성을 위해 diethyl 에테르의 몇 mL를 제거. (최소 내경 160 m m) 및 50 mm의 최소 높이 유리 페 트리 접시에 나머지 diethyl 에테르를 수집 합니다.</li>
		<li>종 변화를 방지 하기 위해 N2 분위기 장갑 상자에 유리 페 트리 접시를 전송 합니다. 주의: 용 매는 통과 상자의 콘센트를 통해 진공 펌프에 뽑아 하지 있는지 확인 합니다.</li>
		<li>Dimethylmonothioarsinate의 백색 침전까지 건조 (crystalized DMMTAV) 유리 페 트리 접시에 형성 된다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
합성된 DMMTAV 및 스토리지의 확인
	<ol>
<li>받아 crystalized DMMTAV의 백색 침전 및 측정 하 고 그것의 총 무게를 기록. 주의: 황화 수소 가스의 흡입을 방지 하기 위해 통풍이 잘 연기 후드 나 글로브 박스를 사용 합니다.</li>
		<li>디졸브 crystalized DMMTAV N2의 50 ml-이온된 수를 제거 하 고 노란색 침전 0.2 µ m 주사기 필터를 통해 필터링.</li>
		<li>가정 사용된 DMAV 로 총 DMMTAV, 즉≈9, 649 mg As·로 변환 됩니다 L-1 ≈1 mg· DMMTAV 재고 솔루션을 희석 L-1 과 ≈40 µg· L-1 분무 이온화를 사용 하 여 검증 분석에 대 한 질량 Spectromtery (ESI-석사)와 HPLC-ICP-MS, 각각.</li>
		<li>DMMTAV 긍정적인 이온 모드에서 m/z 155 또는 부정적인 이온 모드 (표 1)에서 m/z 153 ESI MS11,16 와 조각을 사용 하 여의 m/z 를 분석 합니다. 참고: m/z (표 1)의 참조 값을 참조 합니다.</li>
		<li>HPLC-ICP-MS11,,1617 를 사용 하 여 적절 한 eluent 조건 재고 솔루션에서 DMMTAV 의 크로마를 분석 하 고 확인 하는 주요 피크에 설명 된 보존 기간에서 발견 되는 문학입니다. 참고: 합성된 DMMTAV 의 순 결 해야 계산 단계 1.3.5에서에서 분석 결과 사용 하 여.</li>
		<li>산 성 소화11 후 ICP-MS를 사용 하 여 총 비소 농도 분석 하 고 희석 요인 및 다음 방정식에서 순도 사용 하 여 합성된 DMMTAV 재고 솔루션에 진정한 DMMTAV 농도 계산: 농도 (µg·로 분석 된 총 L-1) · 희석 비율 · 순도 (%) = DMMTAV 재고 솔루션 (µg·에서에서 진정한 DMMTAV 농도 L-1)</li>
		<li>추가 양적 speciation 분석18어둠 속에서 4 ° C에서 DMMTAV 재고 솔루션을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. DMDTAV 의 합성
<ol><li>
화학 준비 및 어 금 니 비율 혼합 DMAV , 나2, S 및 H2이렇게4 참고: DMAV: 없음2S:H2이렇게4 = 1:7.5:7.5<ol>
<li>1.38 g 40 이온된 물 50 mL 원심 분리기 튜브에서에 DMAV 의 분해.</li>
		<li>나2S·9H2O 250 mL 플라스 크에 물 50 mL 이온된의 18.01 g을 용 해 하 여 Na2S 시 약을 준비 합니다.</li>
		<li>그래서 이온된 물 40 mL에 집중된 한 황산 (96%)의 4 개 mL를 추가 하 여4 시 약 50 mL 원심 분리기 튜브에 포함 된 H2를 준비 합니다. 참고: DMAV의 마지막 어 금 니 비율: 없음2S:H2등4 = 1:7.5:7.51,,34,,815.</li>
		<li>250 mL 플라스 크 (단계 2.1.2)에 포함 된 없음2S 솔루션 50 mL를 DMAV 솔루션 (2.1.1 단계)의 준비 40 mL를 추가 합니다. 이온된 수 10 mL와 DMAV 를 포함 하는 튜브를 헹 구 고 뿐만 아니라 250 mL 플라스 크에 이것을 추가.</li>
		<li>그래서 H2의 준비 된 40 mL를 추가4 솔루션 (2.1.3 단계) 천천히 그리고 플라스 크에 stepwise 방식에서.</li>
		<li>정기적으로 황산을 추가 하는 동안 플라스 크에서 반응 혼합물의 색상 변화를 모니터링 합니다. 그래서 H2의 상품 4-5 mL의 간격 유지4. 혼합 백색/황색 흐린 솔루션 이어야 한다. 참고: 즉각적인 노란색 강 수 집중된 한 황산의 빠른 추가 인해 나타날 수 있습니다. 주의: 황산, 추가 시 흰색 가스 생성 됩니다; 통풍이 잘 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>덮 음 없이 하룻밤 플라스 크에서 반응 솔루션을 유지 관리 합니다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
고체 상 추출 (SPE) 메서드를 사용 하 여 DMDTAV 추출
	<ol>
<li>밤새 서 반응 후 반응 솔루션 C18 주사기를 사용 하 여 트랩 하려면 실리 카 기반 SPE를 입력 필터 합성 수 지에 DMDTAV . 주의: 환기가 연기 후드를 사용 합니다.</li>
		<li>0.77 g 염화 아세테이트 이온 물 1 L에 용 해 하 여 10 m m 염화 아세테이트 (pH 6.3)을 준비 합니다. C18 주사기 (단계 2.2.1) 추출 흡착된 DMDTAV를 통해 충분 한 양의 10 m m 염화 아세테이트 elute. 필터링 된 암모늄 아세테이트 페 트리 접시 (최소 내경 160 m m)와 최소 높이 50 m m의 유리에서를 수집 합니다.</li>
		<li>종 변화를 방지 하기 위해 N2 분위기 장갑 상자에 유리 페 트리 접시를 전송 합니다. 주의: 용 매는 통과 상자의 콘센트를 통해 진공 펌프에 뽑아 하지 있는지 확인 합니다.</li>
		<li>Dimethyldithioarsinate의 백색 침전 될 때까지 건조 (crystalized DMDTAV) 유리 페 트리 접시에 형성. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
합성된 DMDTAV 및 스토리지의 확인
	<ol>
<li>Crystalized DMDTAV의 백색 침전을 측정 기록의 총 무게를 측정. 주의: 황화 수소 가스의 흡입을 방지 하기 위해 통풍이 잘되는 증기 두건 또는 장갑 상자를 사용 합니다.</li>
		<li>디졸브 crystalized DMDTAV N2의 50 ml-제거 이온된 물 50 mL 튜브, 원심 및 어떤 침전 0.2 µ m 주사기 필터를 통해 필터링.</li>
		<li>가정 사용된 DMAV 로 총 DMDTAV, 즉≈2, 539 mg As·로 변환 됩니다 L-1 ≈1 mg· DMDTAV 재고 솔루션을 희석 L-1 과 ≈40 µg· ESI-MS와 HPLC-ICP-MS, 각각 사용 하 여 확인 분석을 위해 L-1</li>
		<li>M/z DMDTAV 사용 하 여 ESI MS11,16 조각 긍정적인 이온 모드에서 m/z 171 또는 부정적인 이온 모드 (표 1)에서 m/z 169의 분석. 참고: m/z (표 1)의 참조 값을 참조 합니다.</li>
		<li>HPLC-ICP-MS11,,1617 를 사용 하 여 적절 한 eluent 조건 재고 솔루션에서 DMDTAV 의 크로마를 분석 하 고 피크에 설명 된 보존 기간에서 발견 된다 확인 문학입니다. 참고: 합성된 DMDTAV 의 순 결 해야 계산 단계 2.3.5에서에서 분석 결과 사용 하 여.</li>
		<li>산 성 소화11 후 ICP-MS를 사용 하 여 총 비소 농도 분석 하 고 다음 방정식으로 희석 요인 및 순도 사용 하 여 합성된 DMDTAV 재고 솔루션에 진정한 DMDTAV 농도 계산: 농도 (µg·로 분석 된 총 L-1) · 희석 비율 · 순도 (%) = 재고 솔루션 (µg· DMDTAV 의 진정한 DMDTAV 농도 L-1)</li>
		<li>추가 양적 speciation 분석18어둠 속에서 4 ° C에서 DMDTAV 재고 솔루션을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Suzuki, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylthioarsenicals+as+arsenic+metabolites+and+their+chemical+preparation.">Dimethylthioarsenicals as arsenic metabolites and their chemical preparation.</a> Chem. Res. Toxicol. 17, 914-921 (2004).</li><li>Kuroda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolite+of+dimethylarsinic+acid+is+highly+toxic+and+genotoxic.">Microbial metabolite of dimethylarsinic acid is highly toxic and genotoxic.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 198, 345-353 (2004).</li><li>Naranmandura, H., Iwata, K., Suzuki, K. T., Ogra, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+metabolism+of+four+different+dimethylated+arsenicals+in+hamsters.">Distribution and metabolism of four different dimethylated arsenicals in hamsters.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 245, 67-75 (2010).</li><li>Naranmandura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+toxicity+of+arsenic+metabolites+in+human+bladder+cancer+EJ-1+cells.">Comparative toxicity of arsenic metabolites in human bladder cancer EJ-1 cells.</a> Chem. Res. Toxicol. 24, 1586-1596 (2011).</li><li>Wallschlager, D., London, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+methylated+arsenic-sulfur+compounds+in+groundwater.">Determination of methylated arsenic-sulfur compounds in groundwater.</a> Environ. Sci. Technol. 42, 228-234 (2008).</li><li>Zhang, J., Kim, H., Townsend, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+for+assessing+thioarsenic+formation+potential+in+sulfidic+landfill+environments.">Methodology for assessing thioarsenic formation potential in sulfidic landfill environments.</a> Chemosphere. 107, 311-318 (2014).</li><li>Shimoda, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proposal+for+novel+metabolic+pathway+of+highly+toxic+dimethylated+arsenics+accompanied+by+enzymatic+sulfuration,+desulfuration+and+oxidation.">Proposal for novel metabolic pathway of highly toxic dimethylated arsenics accompanied by enzymatic sulfuration, desulfuration and oxidation.</a> Trace Elem. Med. Biol. 30, 129-136 (2015).</li><li>Naranmandura, H., Suzuki, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+dimethylthioarsenicals+in+red+blood+cells.">Formation of dimethylthioarsenicals in red blood cells.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 227, 390-399 (2008).</li><li>Leffers, L., Ebert, F., Taleshi, S. M., Francesconi, A. K., Schwerdtle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+toxicological+characterization+of+two+arsenosugars+and+their+metabolites.">In vitro toxicological characterization of two arsenosugars and their metabolites.</a> Mol. Nutr. Food Res. 57, 1270-1282 (2013).</li><li>Wang, Q. Q., Thomas, J. D., Naranmandura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Important+of+being+thiomethylated:+Formation,+Fate+and+Effects+of+methylated+thioarsenicals.">Important of being thiomethylated: Formation, Fate and Effects of methylated thioarsenicals.</a> Chem. Res. Toxicol. 25, 281-289 (2015).</li><li>Kim, Y. T., Lee, H., Yoon, H. O., Woo, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+dimethylated+thioarsenicals+and+the+formation+of+highly+toxic+dimethylmonothioarsinic+acid+in+environment.">Kinetics of dimethylated thioarsenicals and the formation of highly toxic dimethylmonothioarsinic acid in environment.</a> Environ. Sci. Technol. 50, 11637-11645 (2016).</li><li>Cullen, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylated+and+thiolated+arsenic+species+for+environmental+and+health+research+-+A+review+on+synthesis+and+characterization.">Methylated and thiolated arsenic species for environmental and health research - A review on synthesis and characterization.</a> J. Environ. Sci. 49, 7-27 (2016).</li><li>Fricke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatographic+separation+and+identification+of+products+form+the+reaction+of+dimethylarsinic+acid+with+hydrogen+sulfide.">Chromatographic separation and identification of products form the reaction of dimethylarsinic acid with hydrogen sulfide.</a> Chem. Res. Toxicol. 18, 1821-1829 (2005).</li><li>Fricke, M., Zeller, M., Cullen, W., Witkowski, M., Creed, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimethylthioarsinic+anhydride:+a+standard+for+arsenic+speciation.">Dimethylthioarsinic anhydride: a standard for arsenic speciation.</a> Anal. Chim. Acta. 583, 78-83 (2007).</li><li>Suzuki, K. T., Iwata, K., Naranmandura, H., Suzuki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+differences+between+twon+dimethylthioarsenicals+in+rats.">Metabolic differences between twon dimethylthioarsenicals in rats.</a> Toxicol. Appl. Pharmacol. 218, 166-173 (2007).</li><li>Jeong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simultaneous+analytical+method+to+determine+arsenic+speciation+using+HPLC-ICP-MS:+Arsenate,+arsenite,+monomethylarsonic+acid,+dimethylarsinic+acid,+dimethyldithioarsinic+acid,+and+dimethylmonothioarsinic+acid.">Development of a simultaneous analytical method to determine arsenic speciation using HPLC-ICP-MS: Arsenate, arsenite, monomethylarsonic acid, dimethylarsinic acid, dimethyldithioarsinic acid, and dimethylmonothioarsinic acid.</a> Microchem. J. 134, 295-300 (2017).</li><li>Li, Y., Low, C. -. K., Scott, A. J., Amal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+speciation+in+municipal+landfill+leachate.">Arsenic speciation in municipal landfill leachate.</a> Chemosphere. 79, 794-801 (2010).</li><li>Conklin, D. S., Fricke, W. M., Creed, A. P., Creed, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+pH+effects+on+the+formation+of+methylated+thio-arsenicals,+and+the+effects+of+pH+and+temperature+on+their+stability.">Investigation of the pH effects on the formation of methylated thio-arsenicals, and the effects of pH and temperature on their stability.</a> J. Anal. At. Spectrom. 23, 711-716 (2008).</li><li>Hansen, H. R., Raab, A., Jaspara, M., Milne, F. B., Feldmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sulfur-containing+arsenical+mistaken+for+dimethylarsinous+acid+[DMA(III)]+and+identified+as+a+natural+metabolite+in+urine:+major+implications+for+studies+on+arsenic+metabolism+and+toxicity.">Sulfur-containing arsenical mistaken for dimethylarsinous acid [DMA(III)] and identified as a natural metabolite in urine: major implications for studies on arsenic metabolism and toxicity.</a> Chem. Res. Toxicol. 17, 1086-1091 (2004).</li><li>Mandal, B. K., Suzuki, K. T., Anzai, K., Yamaguchi, K., Sei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+SEC-HPLC-ICP-MS+hyphenated+technique+for+identification+of+sulfur-containing+arsenic+metabolites+in+biological+samples.">A SEC-HPLC-ICP-MS hyphenated technique for identification of sulfur-containing arsenic metabolites in biological samples.</a> J. Chromatogr. B. 874, 64-76 (2008).</li><li>Bartel, M., Ebert, F., Leffers, L., Karst, U., Schwerdtle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicological+characterization+of+the+inorganic+and+organic+arsenic+metabolite+thio-DMAV+in+cultured+human+lung+cells.">Toxicological characterization of the inorganic and organic arsenic metabolite thio-DMAV in cultured human lung cells.</a> J. Toxicol. 2011, (2011).</li><li>An, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+dimethyldithioarsinic+acid+in+a+simulated+landfill+leachate+in+relation+to+hydrosulfide+concentration.">Formation of dimethyldithioarsinic acid in a simulated landfill leachate in relation to hydrosulfide concentration.</a> Environ. Geochem. Health. 38, 255-263 (2016).</li><li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arsenic+speciation+in+the+blood+of+arsenite-treated+F344+rats.">Arsenic speciation in the blood of arsenite-treated F344 rats.</a> Chem. Res. Toxicol. 26, 952-962 (2013).</li><li>Alava, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HPLC-ICP-MS+method+development+to+monitor+arsenic+speciation+changes+by+human+gut+microbiota.">HPLC-ICP-MS method development to monitor arsenic speciation changes by human gut microbiota.</a> Biomed. Chromatogr. 26, 524-533 (2012).</li><li>Kurosawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+metabolic+activation+associated+with+glutathione+in+dimethylmonoarsinic+acid+(DMMTAV)-induced+toxicity+obtained+from+in+vitro+reaction+of+DMMTAV+with+glutathione.">A novel metabolic activation associated with glutathione in dimethylmonoarsinic acid (DMMTAV)-induced toxicity obtained from in vitro reaction of DMMTAV with glutathione.</a> J. trace Elem. Med. Biol. 33, 87-94 (2016).</li></ol>

저자는 공개 없다.

개발된 프로토콜은 중요 한 단계는 이전 연구1,,34,,815 생략 또는 약식, 수 있다 이끌어 어려움 또는 중 오류를 명확히 DMMTAV 및 DMDTAV 합성. 화학 시 약의 합성에 대 한 N2를 사용 하 여 준비 DMMTAV 는 산화에 민감한1,5,-이온된 수 (단계 1.1.1-1.1.3) DMAV 의 가능한 지체를 방지 하기 위해 제거 thiolation 그리고 DMMTAV의 산화. 이 프로토콜을 사용 하 여 준비 DMMTAV 92%의 순도 했다. DMDTAV 추출 방법 참조 기능 실리 카 기반 C18 열 추출 암모늄 아세테이트 또는 인산 염 버퍼 솔루션 eluent,3,4,,78 으로 와 참조 연구3,,48에 설명 되지 않은 사용, 열 구획에 따라서 준비 DMDTAV 변화의 순도. 반면, 개발 된 프로토콜 (단계 2.2.1)에서 일회용 SPE의 사용 허용 88%의 추출 순수한 DMDTAV. DMDTAV crystallizing의 이전 방법 반면만 동결 절차20를 참조 하는 또한,이 프로토콜, 간단한 N2 장갑 안쪽의 분위기 속에서 추출한 DMDTAV 솔루션의 건조에 상자 (2.2.3 단계) 생산 crystalized dimethyldithioarsinate의 백색 잔류물.
합성된 DMMTAV 및 DMDTAV 의 신원 확인은 이상적인 표준 화학을 결정 하기 위한 중요 한 단계입니다. 이전에16 이 프로토콜을 긍정적인 이온 모드에서 m/z 155에서 주요 조각 기반 작업과 부정적인 이온 모드에서 m/z 169로 합성 DMMTAV 와 DMDTAV, ESI MS 분석에 의해 발견 되었습니다. 각각. 후자의 조각 [채널3]2AsS(=S) S 관찰 했다]- (즉, [M-H]-), 이전 결과5,,1720,22와 좋은 계약에 , As(=S)(OH) + H m/z 155에 조각 [채널3]2에 할당 된]+ (즉, [M + H]+), 다시,와 동의 참조13,14, 17,19,,2124. ESI MS 분석 유일한 인증 방법으로 사용할 수 없습니다, 이후 DMMTAV 및 HPLC ICP MS에 의해 얻은 DMDTAV 재고 솔루션의 chromatograms에서 주요 봉우리 했다 그에 비해 보고 리 외. 17 (그림 1). DMAIII 중간 DMMTAV 형성1,7,,825의 초기 단계에서 생산으로 알려져 있다, 비록 그것은 전시 사라지고 낮은 안정성 70 분19 내 고 따라서이 절차는 (그림 1)에 의해 감지 되지 않습니다.
이 연구의 또 다른 목표는 DMMTAV 및 DMDTAV 재고 솔루션 적은 불순물으로 황화 산화물 변환 방지 하 고 따라서 더 큰 안정성18달성에 대 한 저장 조건 제안 했다. 저장 조건 여기 사용 (즉, 어둠 속에서 4 ˚C) 허용 주요 종족으로 합성된 DMMTAV DMDTAV 의 보존 재고 솔루션 (그림 2)에서 4 주 동안 관찰 없이 과감 한 분해 13 주 후에. 비록 용 매 pH (즉, 이온된 수의) 기본10 및 HS- 또는 H2 등 화학적 시 약에서 발생 하는 초과 황 종의 존재로 인해 저장 동안 종의 변화에 영향을 미칠 수 있습니다 S, 포함 된 종 (그림 2)의 중요 한 변화 없이 중립 pH를 유지 하는 재고 솔루션. 따라서, 재고 솔루션 양적 종 형성 분석에 앞서 13 주 동안 어둠 속에서 4 ˚C에 저장 될 수 있었다.
이 연구에서 DMMTAV 및 DMDTAV 1,,34,,815 합성의 참조 어 금 니 비율 섞는 방법 안정적인 DMMTAV 생산 하도록 수정 되었습니다. 및 DMDTAV HPLC ICP MS 정량 분석에 대 한 재고 솔루션. 중요 한 단계 세부 사항, 화학 시 약 준비, 추출, 결정 화 단계, 뿐만 아니라 DMMTAV 와 DMDTAV, 저장 조건 등의 부족으로 인해 재고 솔루션 수정 하 고 최적화 했다. 따라서,이 프로토콜을 사용 하 여 준비 재고 솔루션 환경 모니터링 목적을 위해 충분히 DMMTAV 및 DMDTAV 의 정량 분석에 대 한 적용 됩니다.

때문에 dimethylarsinic 산 (DMAV) 급성 독성 및 메 틸 화 및 섭취1,2시 thiolation 인 genotoxicity 입증 되었습니다, 비소 thiolation의 대사 경로 되어 집중적으로 공부 하는 생체 외에서 그리고 vivo에서3,4 도 환경 미디어 (예: 매 립 지 침 출 수)5,6. 모두 감소 하 고 생활에 DMAV 의 thiolated 아날로그 세포, 예를 들어, dimethylarsinous 산 (DMAIII), dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV), 및 dimethyldithioarsinic 산 (이전 연구 발견 DMDTAV)7,,89, dimethylated thioarsenicals DMMTAV 무기 또는 유기 arsenicals10알려진 다른 것 보다 더 큰 독성을 전시 등으로. 매우 독성 thioarsenicals의 풍부한이 있다 심각한 환경 영향, 그들은 인간과 매우 sulfidic 조건11환경에 위험을 초래할 수 있기 때문. 그러나, DMMTAV DMDTAV (트랜스) 형성 및 환경 미디어에 그들의 운명을의 메커니즘은 여전히 추가 연구가 필요합니다. 따라서, thioarsenicals의 정량 분석 DMMTAV 및 DMDTAV의 환경에 미치는 영향의 이해를 개선 하기 위해 필요 합니다.
DMMTAV 및 DMDTAV 의 기준은 다른 종으로 종 변환의 높은 위험 때문에 이전 연구를 복제 하 여 얻기 어려운 표준 화학 물질은 정량 분석에 대 한 주요 요구 사항, 그리고 unstandardized 합성 절차12. 또한, 참조 하는 방법 제한이 표준 화학 물질 합성 및 정량 분석에 실질적인 어려움을 이어질 수 있습니다. DMMTAV 및 DMDTAV 는 일반적으로 특정 어 금 니 비율1 또는 버블링 H2S4 의 DMAV 13,14의솔루션을 통해 가스 그래서 DMAV, 나2S, 그리고 H2를 혼합 하 여 준비 됩니다. 버블링 메서드 기능 대체 황 H2S 가스는 매우 독성 하 고 미숙한 사용자에 대 한 제어 하기 어려운의 직접적인 공급을 사용 하 여 산소의. 반대로, 위의 혼합 방법1, DMMTAV 및 환경 sudies5,DMDTAV 6,12, 질적 분석을 위해 널리 이용 되는 thiolation의 특징 DMAV H2S4 와 DMMTAV 및 DMDTAV,으로 대상 화학 물질을 생산 하는 화학 량 론 제어 쉽게 수 있도록 생산 하 고 직접에 비해 너무 나2S와 H2를 혼합 하 여 생성 된 사용 하 여 H2S 가스의.
일부 발생할 수 있습니다 그들의 중요 한 실험 단계에서이 연구 전시 한계에 언급 된 방법 절차1,3,4,,815 혼합 참조 실험적 오류입니다. 예를 들어 특정 용 매 (즉, 이온을 제거 된 물) 준비 및 추출의 세부 사항 및 합성된 arsenicals의 결정 화-약식 또는 충분 한 세부 사항에 설명 되지 않은. 이러한 분산 및 절차 단계에 대 한 제한 된 정보 thioarsenicals 및 신뢰할 수 없는 정량화 분석의 일관성 형성으로 이어질 수 있습니다. 따라서, 본 개발 수정된 프로토콜 DMMTAV 및 DMDTAV 재고 솔루션 양적 종 분리 분석의 종합을 설명 합니다.

<table><tbody><tr><td>Cacodylic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20835-10G-F</td><td></td></tr><tr><td>Sodium sulfide nonahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2006-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sulfuric acid 96%</td><td>J.T.Baker</td><td>0000011478</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium acetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7262-500G</td><td></td></tr><tr><td>Formic acid 98%</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd.</td><td>066-00461</td><td></td></tr><tr><td>Diethyl ether (Extra Pure)</td><td>Junsei Chemical</td><td>33475-0380</td><td></td></tr><tr><td>Adapter cap for 60 mL Bond Elut catridges</td><td>Agilent Technologies</td><td>12131004</td><td>Syringe type of SPE</td></tr><tr><td>Bond Elut C18 cartridge</td><td>Agilent Technologies</td><td>14256031</td><td>Syringe type of SPE</td></tr><tr><td>HyPURITY C-18</td><td>Thermo Scientific</td><td>22105-254630</td><td>5 um, 125 x 4.6 mm</td></tr><tr><td>Glovebox</td><td>Chungae-chun, Rep. of Korea</td><td></td><td>Customized&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC</td><td>Agilent Technologies</td><td>DEAB600252, DEACH00245</td><td></td></tr><tr><td>Agilent Technologies 7700 Series ICP-MS</td><td>Agilent Technologies</td><td>JP12031510</td><td></td></tr><tr><td>Finnigan LCQ Deca XP MAX Mass Spectrometer System</td><td>Thermo Electron Corporation</td><td>LDM10627</td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of dmmtav and dmdtav using dmav for environmental applications: synthesis, purification, and confirmation

Dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV) 등 Dimethylated thioarsenicals 및 dimethyldithioarsinic 산 (VDMDTA), dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation의 대사 경로 의해 생산, 최근 되었습니다. 환경 뿐만 아니라 인간 장기에서 발견. DMMTAV 및 DMDTAV dimethylated thioarsenicals 및 환경 미디어에서 그들의 안정성의 생태 효과 결정 하기 위해 측정할 수 있습니다. 이 화합물에 대 한 합성 방법은 표준화 된, 이전의 연구 도전 복제 만들기입니다. 또한, 스토리지 기술, 종 변환 없이 화합물의 스토리지를 포함 하 여에 대 한 정보의 부족이 이다. 또한, 합성 방법에 대 한 제한 된 정보만 사용할 수 있기 때문에, 표준 화학 물질 합성 및 정량 분석 실험 어려움이 있을 수 있습니다. 여기에 소개 하는 프로토콜 dimethylated thioarsenicals, DMMTAV 및 DMDTAV, 실질적으로 수정 된 합성 방법을 제공 하 고 고성능 액체를 사용 하 여 종 분리 분석의 정량화에 도움이 될 것입니다. 유도 결합된 플라즈마 질량 분석 (HPLC-ICP-MS)와 함께에서 착 색 인쇄기. 이 절차의 실험 단계 화학 시 약, 여과 방법, 및 스토리지의 준비에 집중 하 여 수정 되었습니다.

DMMTAV 실수로 DMAIII 합성 방법19준비 되었습니다, 합성된 DMMTAV 및 DMDTAV 의 확인 이므로 합성 및 추출 및 이상적인 표준 결정에 대 한 중요 한 단계 화학 재료입니다. 합성된 화학 물질 피크의 DMMTAV (MW 154 g·mol-1) 및 DMDTAV (MW 170 g·mol-1) 질량 대 전 비 (m/z) 분무 이온화 질량의 포지티브 또는 네거티브 이온 모드를 사용 하 여 확인할 수 있습니다. 실시간으로 주사를 통해 분석기 (ESI-MS). M/z 의 기준 값은 표 119에 나열 됩니다. 주요 봉우리 HPLC-ICP-양 그림 1을 사용 하 여 참조 데이터의 보존 기간 (RT)의 종 분리 분석 결과 비교 하 여 DMMTAV 및 DMDTAV 의 성공적인 합성의 추가 검증 실시 는 eluent는 C18 액체 크로마토그래피 (LC)으로 5 mM 포 름 산의 1.0 mL·min-1 을 사용 하 여 중요 하 고 작은 봉우리, DMAV 및 DMMTAV (그림 1a) 또는 DMDTAV (그림 1b)의 유사한 RT를 보여줍니다 열이17에 설명 된 대로입니다. 유의 하십시오 주요 봉우리의 RT는 LC 열 사용 경 음악 및 eluent 조건에 따라 다를 수 있습니다. 하지만이 프로토콜 제안 4 ˚C 합성 DMMTAV 및 DMDTA 를 유지 하는 어둠 속에서의 저장 조건 종 DMMTAV 및 DMDTAV 의 재고 솔루션에 포함 된 모든 분석 전에 시험 되어야 한다 V 와 함께, 분석 (그림 2)의 13 주 동안 각각 2.2%와 5.8% 변환.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56603/56603fig1.jpg"> 그림 1: HPLC-ICP-MS 크로마 합성된 DMMTAV 와 DMDTAV. 1: DMAV, 2: DMDTAV및 3: DMMTAV 3.8 분, 5.9 분, 그리고 각 a: DMMTAV 의 재고 솔루션 및 b: DMDTAV, 8.0 분 들은 리 외 에 의해 보고에 대응 했다 주요 봉우리로 측정 되었다 201017에 ICP-MS의 기 악 조건 1550 V RF 전력 50 µ L 주입 볼륨을 했다. C18 열 eluent17으로 5 mM 포 름 산으로 사용 되었다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56603/56603fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56603/56603fig2.jpg"> 그림 2: 안정성 DMMTAV 와 어둠 속에서 4 ˚C에서 DMDTAV . 13 주에 대 한 재고 솔루션 DMMTAV (a) 및 DMDTAV (b)의 각 종 배급으로의 비율 변화. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56603/56603fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>합성된 재고 솔루션</td>
			<td>이온 모드</td>
			<td>조각</td>
			<td>m/z</td>
			<td>참조</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="7">DMMTAV</td>
			<td rowspan="4">긍정적인</td>
			<td>[Me2As (SH) 오] +</td>
			<td>155</td>
			<td>13,14,19,17,21,24</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Me2As (OH) 2] +</td>
			<td>139</td>
			<td>19,17</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Me2AsS] +</td>
			<td>137</td>
			<td>13,19,17,24</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Me2As (S) SAsMe2] +</td>
			<td>275</td>
			<td>13</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">네거티브</td>
			<td>[Me2AsOS]-</td>
			<td>153</td>
			<td>17,5,23</td>
		</tr>
<tr>
<td>[MeAsSO]-</td>
			<td>138</td>
			<td>17,5</td>
		</tr>
<tr>
<td>[AsSO]-</td>
			<td>123</td>
			<td>17,5</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="6">DMDTAV</td>
			<td rowspan="3">긍정적인</td>
			<td>[Me2As (SH) 2] +</td>
			<td>171</td>
			<td>19,17</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Me2As (SH) 오] +</td>
			<td>155</td>
			<td>19</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Me2AsS] +</td>
			<td>137</td>
			<td>19,17</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">네거티브</td>
			<td>[Me2AsS2]-</td>
			<td>169</td>
			<td>20,17,5,22</td>
		</tr>
<tr>
<td>[MeAsS2]-</td>
			<td>154</td>
			<td>20,17,5</td>
		</tr>
<tr>
<td>[AsS2]-</td>
			<td>139</td>
			<td>17,5,22</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: ESI-미스의 긍정 및 부정적인 이온 모드에 제안한 합성된 DMMTAV DMDTAV및 작은 조각 이온의 구조 DMMTAV, DMDTAV및 작은 조각 m/z ESI MS에 의해 측정의 목록 문학5,13,,1417,19에서에서 재현 했다 ,20,,2122,,2324. 참고 m/z 봉우리 기 악 조건 및 재고 솔루션의 매트릭스와 다를 수 있습니다.

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Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

DMMTAV 및 환경 응용 프로그램에 대 한 DMAV 를 사용 하 여 DMDTAV 의 준비: 합성, 정화, 및 확인

이 문서에서는 dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV)에 대 한 수정된 실험 프로토콜 제공 및 dimethyldithioarsinic 산 (DMDTAV) 합성을 유도 하는 DMAV의 혼합을 통해 dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation , 나2S, 그리고 H2이렇게4. 수정된 프로토콜 합성 단계 정량 분석에서 실험 오류 발생 수의 한계를 극복 함으로써 실험 지침을 제공 합니다.

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

preparation-dmmtav-dmdtav-using-dmav-for-environmental-applications

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Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

5.5K 조회수.  Korea Basic Science Institute, Seoul Center. 이 문서에서는 dimethylmonothioarsinic 산 (DMMTAV)에 대 한 수정된 실험 프로토콜 제공 및 dimethyldithioarsinic 산 (DMDTAV) 합성을 유도 하는 DMAV의 혼합을 통해 dimethylarsinic 산 (DMAV) thiolation , 나2S, 그리고 H2이렇게4. 수정된 프로토콜 합성 단계 정량 분석에서 실험 오류 발생 수의 한계를 극복 함으로써 실험 지침을 제...

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Controlling the Size, Shape and Stability of Supramolecular Polymers in Water

For aqueous based supramolecular polymers, the simultaneous control over shape, size and stability is very difficult1. At the same time, the ability to do so is highly important in view of a number of applications in functional soft matter including electronics, biomedical engineering, and sensors. In the past, successful strategies to control the size and shape of supramolecular polymers typically focused on the use of templates2,3, end cappers4 or selective solvent techniques5. 
Here we disclose a strategy based on self-assembling discotic amphiphiles that leads to the control over stack length and shape of ordered, chiral columnar aggregates. By balancing electrostatic repulsive interactions on the hydrophilic rim and attractive non-covalent forces within the hydrophobic core of the polymerizing building block, we manage to create small and discrete spherical objects6,7. Increasing the salt concentration to screen the charges induces a sphere-to-rod transition. Intriguingly, this transition is expressed in an increase of cooperativity in the temperature-dependent self-assembly mechanism, and more stable aggregates are obtained. 
For our study we select a benzene-1,3,5-tricarboxamide (BTA) core connected to a hydrophilic metal chelate via a hydrophobic, fluorinated L-phenylalanine based spacer (Scheme 1). The metal chelate selected is a Gd(III)-DTPA complex that contains two overall remaining charges per complex and necessarily two counter ions. The one-dimensional growth of the aggregate is directed by &pi;-&pi; stacking and intermolecular hydrogen bonding. However, the electrostatic, repulsive forces that arise from the charges on the Gd(III)-DTPA complex start limiting the one-dimensional growth of the BTA-based discotic once a certain size is reached. At millimolar concentrations the formed aggregate has a spherical shape and a diameter of around 5 nm as inferred from 1H-NMR spectroscopy, small angle X-ray scattering, and cryogenic transmission electron microscopy (cryo-TEM). The strength of the electrostatic repulsive interactions between molecules can be reduced by increasing the salt concentration of the buffered solutions. This screening of the charges induces a transition from spherical aggregates into elongated rods with a length &gt; 25 nm. Cryo-TEM allows to visualise the changes in shape and size. In addition, CD spectroscopy permits to derive the mechanistic details of the self-assembly processes before and after the addition of salt. Importantly, the cooperativity -a key feature that dictates the physical properties of the produced supramolecular polymers- increases dramatically upon screening the electrostatic interactions. This increase in cooperativity results in a significant increase in the molecular weight of the formed supramolecular polymers in water.

The goal of this experiment is to determine and control the size, shape and stability of self-assembled discotic amphiphiles in water. For aqueous based supramolecular polymers such level of control is very difficult. We apply a strategy using both repulsive and attractive interactions. The experimental techniques applied to characterize this system are broadly applicable.

물에 Supramolecular 폴리머의 크기, 모양과 안정성을 제어

For aqueous based supramolecular polymers, the simultaneous control over shape, size and stability is very difficult1. At the same time, the ability to do ...

연구

공학

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Physical interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane protein complexes and in dynamic processes such as transmembrane (TM) signaling and regulation of cell-surface protein levels. Understanding the structural features driving the association of particular sequences requires sophisticated biophysical and biochemical analyses of TM peptide complexes. However, the extreme hydrophobicity of TM domains makes them very difficult to manipulate using standard peptide chemistry techniques, and production of suitable study material often proves prohibitively challenging. Identifying conditions under which peptides can adopt stable helical conformations and form complexes spontaneously adds a further level of difficulty. Here we present a procedure for the production of homo- or hetero-dimeric TM peptide complexes from materials that are expressed in E. coli, thus allowing incorporation of stable isotope labels for nuclear magnetic resonance (NMR) or non-natural amino acids for other applications relatively inexpensively. The key innovation in this method is that TM complexes are produced and purified as covalently associated (disulfide-crosslinked) assemblies that can form stable, stoichiometric and homogeneous structures when reconstituted into detergent, lipid or other membrane-mimetic materials. We also present carefully optimized procedures for expression and purification that are equally applicable whether producing single TM domains or crosslinked complexes and provide advice for adapting these methods to new TM sequences.

Biophysical and biochemical studies of interactions among membrane-embedded protein domains face many technical challenges, the first of which is obtaining appropriate study material. This article describes a protocol for producing and purifying disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes that are suitable for structural analysis by solution nuclear magnetic resonance (NMR) and other analytical applications.

구조 연구 생산 이황화 - 안정화 Transmembrane의 펩타이드 단지

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

화학

Compact Quantum Dots for Single-molecule Imaging

Single-molecule imaging is an important tool for understanding the mechanisms of biomolecular function and for visualizing the spatial and temporal heterogeneity of molecular behaviors that underlie cellular biology 1-4. To image an individual molecule of interest, it is typically conjugated to a fluorescent tag (dye, protein, bead, or quantum dot) and observed with epifluorescence or total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy. While dyes and fluorescent proteins have been the mainstay of fluorescence imaging for decades, their fluorescence is unstable under high photon fluxes necessary to observe individual molecules, yielding only a few seconds of observation before complete loss of signal. Latex beads and dye-labeled beads provide improved signal stability but at the expense of drastically larger hydrodynamic size, which can deleteriously alter the diffusion and behavior of the molecule under study.
Quantum dots (QDs) offer a balance between these two problematic regimes. These nanoparticles are composed of semiconductor materials and can be engineered with a hydrodynamically compact size with exceptional resistance to photodegradation 5. Thus in recent years QDs have been instrumental in enabling long-term observation of complex macromolecular behavior on the single molecule level. However these particles have still been found to exhibit impaired diffusion in crowded molecular environments such as the cellular cytoplasm and the neuronal synaptic cleft, where their sizes are still too large 4,6,7.
Recently we have engineered the cores and surface coatings of QDs for minimized hydrodynamic size, while balancing offsets to colloidal stability, photostability, brightness, and nonspecific binding that have hindered the utility of compact QDs in the past 8,9. The goal of this article is to demonstrate the synthesis, modification, and characterization of these optimized nanocrystals, composed of an alloyed HgxCd1-xSe core coated with an insulating CdyZn1-yS shell, further coated with a multidentate polymer ligand modified with short polyethylene glycol (PEG) chains (Figure 1). Compared with conventional CdSe nanocrystals, HgxCd1-xSe alloys offer greater quantum yields of fluorescence, fluorescence at red and near-infrared wavelengths for enhanced signal-to-noise in cells, and excitation at non-cytotoxic visible wavelengths. Multidentate polymer coatings bind to the nanocrystal surface in a closed and flat conformation to minimize hydrodynamic size, and PEG neutralizes the surface charge to minimize nonspecific binding to cells and biomolecules. The end result is a brightly fluorescent nanocrystal with emission between 550-800 nm and a total hydrodynamic size near 12 nm. This is in the same size range as many soluble globular proteins in cells, and substantially smaller than conventional PEGylated QDs (25-35 nm).

We describe the preparation of colloidal quantum dots with minimized hydrodynamic size for single-molecule fluorescence imaging. Compared to conventional quantum dots, these nanoparticles are similar in size to globular proteins and are optimized for single-molecule brightness, stability against photodegradation, and resistance to nonspecific binding to proteins and cells.

단일 분자 이미징을위한 소형 양자 점

Single-molecule imaging is an important tool for  understanding the mechanisms of biomolecular function and for visualizing the  spatial and temporal ...

Biochemical Measurement of Neonatal Hypoxia

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to cause/exacerbate well documented neonatal disorders including neurological impairment 1-3. Decreased adenosine triphosphate production occurs due to a lack of oxidative phosphorylation. To compensate for this energy deprived state molecules containing high energy phosphate bonds are degraded 2. This leads to increased levels of adenosine which is subsequently degraded to inosine, hypoxanthine, xanthine, and finally to uric acid. The final two steps in this degradation process are performed by xanthine oxidoreductase. This enzyme exists in the form of xanthine dehydrogenase under normoxic conditions but is converted to xanthine oxidase (XO) under hypoxia-reperfusion circumstances 4, 5. Unlike xanthine dehydrogenase, XO generates hydrogen peroxide as a byproduct of purine degradation 4, 6. This hydrogen peroxide in combination with other reactive oxygen species (ROS) produced during hypoxia, oxidizes uric acid to form allantoin and reacts with lipid membranes to generate malondialdehyde (MDA) 7-9. Most mammals, humans exempted, possess the enzyme uricase, which converts uric acid to allantoin. In humans, however, allantoin can only be formed by ROS-mediated oxidation of uric acid. Because of this, allantoin is considered to be a marker of oxidative stress in humans, but not in the mammals that have uricase.
We describe methods employing high pressure liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography mass spectrometry (GCMS) to measure biochemical markers of neonatal hypoxia ischemia. Human blood is used for most tests. Animal blood may also be used while recognizing the potential for uricase-generated allantoin. Purine metabolites were linked to hypoxia as early as 1963 and the reliability of hypoxanthine, xanthine, and uric acid as biochemical indicators of neonatal hypoxia was validated by several investigators 10-13. The HPLC method used for the quantification of purine compounds is fast, reliable, and reproducible. The GC/MS method used for the quantification of allantoin, a relatively new marker of oxidative stress, was adapted from Gruber et al 7. This method avoids certain artifacts and requires low volumes of sample. Methods used for synthesis of MMDA were described elsewhere 14, 15. GC/MS based quantification of MDA was adapted from Paroni et al. and Cighetti et al. 16, 17. Xanthine oxidase activity was measured by HPLC by quantifying the conversion of pterin to isoxanthopterin 18. This approach proved to be sufficiently sensitive and reproducible.

A method is described to measure biochemical markers of neonatal hypoxia-ischemia. The approach utilizes high pressure liquid chromatography (HPLC) and Gas Chromatography Mass Spectrometry (GC/MS).

신생아 Hypoxia의 생화 학적 측정

Neonatal hypoxia ischemia is characterized by inadequate blood perfusion of a tissue or a systemic lack of oxygen. This condition is thought to ...

의학

Preparation and In Vitro Characterization of Dendrimer-based Contrast Agents for Magnetic Resonance Imaging

Paramagnetic complexes of gadolinium(III) with acyclic or macrocyclic chelates are the most commonly used contrast agents (CAs) for magnetic resonance imaging (MRI). Their purpose is to enhance the relaxation rate of water protons in tissue, thus increasing the MR image contrast and the specificity of the MRI measurements. Current clinically approved contrast agents are low molecular weight molecules that are rapidly cleared from the body. The use of dendrimers as carriers of paramagnetic chelators can play an important role in the future development of more efficient MRI contrast agents. Specifically, the increase in local concentration of the paramagnetic species results in a higher signal contrast. Furthermore, this CA provides a longer tissue retention time due to its high molecular weight and size. Here, we demonstrate a convenient procedure for the preparation of macromolecular MRI contrast agents based on poly(amidoamine) (PAMAM) dendrimers with monomacrocyclic DOTA-type chelators (DOTA &#8211; 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate). The chelating unit was appended by exploiting the reactivity of the isothiocyanate (NCS) group towards the amine surface groups of the PAMAM dendrimer to form thiourea bridges. Dendrimeric products were purified and analyzed by means of nuclear magnetic resonance spectroscopy, mass spectrometry, and elemental analysis. Finally, high resolution MR images were recorded and the signal contrasts obtained from the prepared dendrimeric and the commercially available monomeric agents were compared.

Preparation and In Vitro Characterization of Dendrimer-based Contrast Agents for Magnetic Resonance Imaging

This protocol describes the preparation and characterization of a dendrimeric magnetic resonance imaging (MRI) contrast agent that carries cyclen-based macrocyclic chelates coordinating paramagnetic gadolinium ions. In a series of MRI experiments in vitro, this agent produced an amplified MRI signal when compared to the commercially available monomeric analogue.

준비 및<em&gt; 체외</em&gt; 자기 공명 영상에 대한 덴드리머 기반 대조 대리인의 특성

Paramagnetic complexes of gadolinium(III) with acyclic or macrocyclic chelates are the most commonly used contrast agents (CAs) for magnetic resonance ...

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and cost savings through the &#34;scaling out&#34; strategy as opposed to the traditional &#34;scaling up&#34;. Herein, we report the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid in both batch and flow modes. To effectively transfer the reaction from batch to flow mode, it is essential to first conduct the reaction in batch. As a consequence, the reaction of diphenyldiazomethane was first studied in batch as a function of temperature, reaction time, and concentration to obtain kinetic information and process parameters. The glass flow reactor set-up is described and combines two types of reaction modules with &#34;mixing&#34; and &#34;linear&#34; microstructures. Finally, the reaction of diphenyldiazomethane with p-nitrobenzoic acid was successfully conducted in the flow reactor, with up to 95% conversion of the diphenyldiazomethane in 11 min. This proof of concept reaction aims to provide insight for scientists to consider flow technology&#39;s competitiveness, sustainability, and versatility in their research.

Continuous Flow Chemistry: Reaction of Diphenyldiazomethane with p-Nitrobenzoic Acid

Flow chemistry carries environmental and economic advantages by leveraging superior mixing, heat transfer and cost benefits. Herein, we provide a blueprint to transfer chemical processes from batch to flow mode. The reaction of diphenyldiazomethane (DDM) with p-nitrobenzoic acid, conducted in batch and flow, was chosen for proof of concept.

P-Nitrobenzoic 산 Diphenyldiazomethane의 연속 흐름 화학: 반응

Continuous flow technology has been identified as instrumental for its environmental and economic advantages leveraging superior mixing, heat transfer and ...

Fabricating Reactive Surfaces with Brush-like and Crosslinked Films of Azlactone-Functionalized Block Co-Polymers

In this paper, fabrication methods that generate novel surfaces using the azlactone-based block co-polymer, poly (glycidyl methacrylate)-block-poly (vinyl dimethyl azlactone) (PGMA-b-PVDMA), are presented. Due to the high reactivity of azlactone groups towards amine, thiol, and hydroxyl groups, PGMA-b-PVDMA surfaces can be modified with secondary molecules to create chemically or biologically functionalized interfaces for a variety of applications. Previous reports of patterned PGMA-b-PVDMA interfaces have used traditional top-down patterning techniques that generate non-uniform films and poorly controlled background chemistries. Here, we describe customized patterning techniques that enable precise deposition of highly uniform PGMA-b-PVDMA films in backgrounds that are chemically inert or that have biomolecule-repellent properties. Importantly, these methods are designed to deposit PGMA-b-PVDMA films in a manner that completely preserves azlactone functionality through each processing step. Patterned films show well-controlled thicknesses that correspond to polymer brushes (~90 nm) or to highly crosslinked structures (~1-10 &#956;m). Brush patterns are generated using either the parylene lift-off or interface directed assembly methods described and are useful for precise modulation of overall chemical surface reactivity by adjusting either the PGMA-b-PVDMA pattern density or the length of the VDMA block. In contrast, the thick, crosslinked PGMA-b-PVDMA patterns are obtained using a customized micro-contact printing technique and offer the benefit of higher loading or capture of secondary material due to higher surface area to volume ratios. Detailed experimental steps, critical film characterizations, and trouble-shooting guides for each fabrication method are discussed.

Surface fabrication methods for patterned deposition of nanometer thick brushes or micron thick, crosslinked films of an azlactone block co-polymer are reported. Critical experimental steps, representative results, and limitations of each method are discussed. These methods are useful for creating functional interfaces with tailored physical features and tunable surface reactivity.

브러쉬 모양의 반응 표면 날조 및 Azlactone 기능성된 블록 공동 고분자의 가교 된 영화

In this paper, fabrication methods that generate novel surfaces using the azlactone-based block co-polymer, poly (glycidyl methacrylate)-block-poly (vinyl ...

Exploring the Arginine Methylome by Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy

Protein-bound arginine is commonly methylated in many proteins and regulates their function by altering the physicochemical properties, their interaction with other molecules, including other proteins or nucleic acids. This work presents an easily implementable protocol for quantifying arginine and its derivatives, including asymmetric and symmetric dimethylarginine (ADMA and SDMA, respectively) and monomethyl arginine (MMA). Following protein isolation from biological body fluids, tissues, or cell lysates, a simple method for homogenization, precipitation of proteins, and protein hydrolysis is described. Since the hydrolysates contain many other components, such as other amino acids, lipids, and nucleic acids, a purification step using solid-phase extraction (SPE) is essential. SPE can either be performed manually using centrifuges or a pipetting robot. The sensitivity for ADMA using the current protocol is about 100 nmol/L. The upper limit of detection for arginine is 3 mmol/L due to SPE saturation. In summary, this protocol describes a robust method, which spans from biological sample preparation to NMR-based detection, providing valuable hints and pitfalls for successful work when studying the arginine methylome.

The present protocol describes the preparation and quantitative measurement of free and protein-bound arginine and methyl-arginines by 1H-NMR spectroscopy.

핵자기공명분광법에 의한 아르기닌 메틸롬 탐구

Protein-bound arginine is commonly methylated in many proteins and regulates their function by altering the physicochemical properties, their interaction ...

암 연구학

Evaluation of Oxidative Stress in Biological Samples Using the Thiobarbituric Acid Reactive Substances Assay

Despite its limited analytical specificity and ruggedness, the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay has been widely used as a generic metric of lipid peroxidation in biological fluids. It is often considered a good indicator of the levels of oxidative stress within a biological sample, provided that the sample has been properly handled and stored. The assay involves the reaction of lipid peroxidation products, primarily malondialdehyde (MDA), with thiobarbituric acid (TBA), which leads to the formation of MDA-TBA2 adducts called TBARS. TBARS yields a red-pink color that can be measured spectrophotometrically at 532 nm. The TBARS assay is performed under acidic conditions (pH = 4) and at 95 &#176;C. Pure MDA is unstable, but these conditions allow the release of MDA from MDA bis(dimethyl acetal), which is used as the analytical standard in this method. The TBARS assay is a straightforward method that can be completed in about 2 h. Preparation of assay reagents are described in detail here. Budget-conscious researchers can use these reagents for multiple experiments at a low cost rather than buying an expensive TBARS assay kit that only permits construction of a single standard curve (and thus can only be used for one experiment). The applicability of this TBARS assay is shown in human serum, low density lipoproteins, and cell lysates. The assay is consistent and reproducible, and limits of detection of 1.1 &#956;M can be reached. Recommendations for the use and interpretation of the spectrophotometric TBARS assay are provided.

The goal of the thiobarbituric acid reactive substances assay is to assess oxidative stress in biological samples by measuring the production of lipid peroxidation products, primarily malondialdehyde, using visible wavelength spectrophotometry at 532 nm. The method described here can be applied to human serum, cell lysates, and low density lipoproteins.

티오바르비투릭 산 반응성 물질 분석체를 이용한 생물학적 시료의 산화 스트레스 평가

Despite its limited analytical specificity and ruggedness, the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay has been widely used as a generic ...

Headspace GC-MS를 이용한 동물 유래 의약품의 트리메틸아민 검출

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the poor compliance of clinical patients. Trimethylamine (TMA) is one of the key fishy odor components in animal-derived medicine. It is difficult to identify TMA accurately using the existing detection method due to the increased pressure in the headspace vial caused by the rapid acid-base reaction after the addition of lye, which causes TMA to escape from the headspace vial, stalling the research progress of the fishy odor of animal-derived medicine. In this study, we proposed a controlled detection method that introduced a paraffin layer as an isolation layer between acid and lye. The rate of TMA production could be effectively controlled by slowly liquefying the paraffin layer through thermostatic furnace heating. This method showed satisfactory linearity, precision experiments, and recoveries with good reproducibility and high sensitivity. It provided technical support for the deodorization of animal-derived medicine.

저자 스포트라이트: 헤드스페이스 가스 크로마토그래피-탠덤 사중극자 질량 분석법을 이용한 동물 유래 의학에서 트리메틸아민 검출을 위한 개선된 기법  

Here, a headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) method suitable for the determination of trimethylamine (TMA) in animal-derived medicines is described. The protocol includes sample pretreatment, headspace treatment, analysis conditions, methodological validation, and the determination of TMA in animal-derived medicines.

헤드스페이스 가스 크로마토그래피-탠덤 사중극자 질량분석법에 의한 동물 유래 의학의 트리메틸아민 검출을 위한 개선된 기술

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

DMMTA^V 및 환경 응용 프로그램에 대 한 DMA^V 를 사용 하 여 DMDTA^V 의 준비: 합성, 정화, 및 확인

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