이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (81650110527, 81371400)와 키 기본 연구 프로그램의 중국 국가 (2013CB530900)에 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 신경 과학 (미국), 복 단 대학 (상하이, 중국) 윤리 위원회에 대 한 협회의 정책에 따라 수행 했다. 이 절차는 비 생존 수술입니다.
1입니다. CSF 컬렉션 장치 설치
<ol><li>유리 모 세관 당겨 (내경 0.75 m m, 외부 직경 1.0 m m) 같이 사용 하는 micropipette 끌어당기는 사람 (리 우 외. 10; 날카롭게 모 세관에에서 표시 됩니다 그림 1).</li>
	<li>장소는 날카롭게 유리 모 세관 홀더 micromanipulator (그림 1A)에 단단히 장착으로 모 세관.</li>
	<li>그 깨진된 팁의 내부 직경에 대 한 날카롭게 모 세관의 끝 해 현미경 직선 겸 휴식 10-20 µ m (그림 1C).</li>
	<li>모 세관 소유자의 다른 쪽 끝을 얇은 튜브와 주사기를 첨부 하 고 얇은 튜브 및 주사기 3 방향 밸브를 연결.</li>
	<li>3 방향 밸브를 열고 유리 모 세관 튜브에 긍정적인 압력 만들고 어떤 오염 물질을 추방 하는 모 세관 튜브를 통해 주사기에서 타격 공기를 주사기 플런지 이동 합니다.</li>
	<li>반복이 몇 번 표시 연결 다시 3 방향 밸브에 주사기를 연결 하 고 주사기를 그리기 여 ~ 100-200 µ L 주사기 3 방향 밸브 (그림 1B)와 함께 마지막 다시 연결 하기 전에.</li>
	<li>유리 모 세관 micromanipulator 마우스 해 부 동안 손상을 방지 하기 위해 측면으로 이동 합니다.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56774/56774fig1.jpg"> 그림 1입니다. 현미경, micromanipulator, 및 모 세관 설치. (A) 현미경과 연결 된 모 세관으로 micromanipulator 설치, (B)의 이미지를 가까이 뿐만 아니라 연결 된 주사기 및 3-방향 밸브를 엽니다 (그림 참조) 하거나 파이핑, 및 (C) 연속적인된 (오른쪽) (왼쪽) 깨진 모 세관 팁 CSF 컬렉션에 대 한 준비입니다. 0.75 m m의 내경, 외경의 1.0 m m. 모 세관의 끝을 해야, 일단 <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56774/56774fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
2. 마우스 해 부
<ol><li>마우스 anesthetize 참고:이 프로토콜, C57BL/6 및 아 밀 로이드 선구자 단백질/presenilin 1 (APP/PS1) 유전자 변형에 대 한 마우스 (알츠하이머병 마우스 모델)이 사용 되었고 4 %chloral 하이드 레이트 (dH20)에서 복을 통해 마우스 무게 10 µ L/g에와 취 사출입니다.</li>
	<li>완전히 마 취 때 마우스 취 적절 하 게 확인 합니다. 약간 뒷 다리 사지를 확장 하 고 발가락을 꼬 집 고 철수 응답에 대 한 보고 꼬집어, 발가락을 철수 응답 적절 한 마 취를 보장 하기 위해 수행 됩니다. 모든 4 개의 사지;를 곤란 하 게 하 여 확인 아무 반응입니다 마우스 제대로 마 취. 고 해 위 (그림 2A)를 사용 하 여 목의 아래쪽에 귀 사이 눈 위에서 마우스의 머리 뒤쪽 머리 손질. 또는, 또는 depilatory 크림 머리 제거에 도움을 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>마우스 어댑터를 사용 하 여 마우스의 머리를 보호 (에 아래로 지적 코를 가진 위로 머리 향하도록 뒤로 ~ 45 °, 그림 2A). 귀 바 귀와 마우스의 눈 사이 수정 하 고 조입니다. 머리 수 없습니다 이동 하 고 마우스의 머리에 부드럽게 밀어 어댑터에 단단히 확보 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>발가락 수술 절 개를 하기 전에 대 타를 철수 응답을 다시 확인 하 고 정기적으로 마 취의 수술 비행기를 그 후. 시각적으로 절차를 마 취의 비행기에 변화를 나타내는 동안 호흡 속도에 변화를 note. 깨끗 하 고 무 균 기술은이 짧은 생존 비 수술에 대 한 사용할 수 있습니다. 두개골의 기지는 근육의 단지 얇은 층으로 노출 될 때까지 피부와 근육의 첫 번째 레이어를 통해 잘라가 위를 사용 하 여 곡선된 겸 자. 참고: 마우스 피부를 통해 목의 뒷면에 걸쳐 고 귀와 마우스의 눈 사이 두개골의 중간 아래 피부를 잘라. 피부와 조직 수 다음 수 떨어져와 지역에 당겨 시스테 마그나.</li>
	<li>보기 해 현미경을 통해 신중 하 게 멀리 해 부 동안 마지막 집게를 사용 하 여 두개골의 기지에 근육의 층을 얇은 하 고 측면을 관심의 영역에서 근육의 이러한 레이어를 이동 합니다. 거기는 출혈 하는 경우 목화 꽃 봉 오리를 사용 하 여 제거 하 고 출혈을 멈추게 하는 데 도움이.</li>
	<li>경질 시스테 마그나에 노출 되 면 (삼각형 모양와 일반적으로 1-2 큰 혈관; 영역을 통해 실행 양쪽의 또는 혈관 사이 최적입니다 모 세관 삽입 및 CSF 컬렉션, 그림 2B), 젖은 사용 목화 꽃 봉 오리를 막 닦아 깨끗 하 고 마른 면봉을 사용 하 여 건조 한 지역.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56774/56774fig2.jpg"> 그림 2입니다. CSF 컬렉션에 대 한 모 세관 삽입의 대표 이미지와 함께 마우스 및 해 부 설치. 마우스 (A)와 CSF 추출에 대 한 준비의 설치는 해 부와 (B) 세부 시스테 마그나를 취재 해 부 마우스 경질의 이미지 (10 x 뷰)에 대 한 장소에 고정 머리를 면도 (점선된 화살표 표시는 지역을 통해 실행 하는 혈관 및 단단한 화살표 영역을 표시 모 세관 삽입에 대 한 최적의) 합니다. (C)의 상세한 이미지 (10 x 보기) 날카롭게 시스테 마그나, (D) 포인트는 모 세관 거의 구멍 도청 경질, 및 (E) 모 세관 팁에서 일부 저항 경질의 경질에 대 한 정렬 유리 모 세관의 끝 통해 수집 CSF를 경질. CSF는 투명 한 액체 유리 모 세관 (점선된 화살표)에서 수집 해야 합니다. 각 현미경 이미지의 오른쪽 하단에 모든 규모 막대 표시 100 µ m. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56774/56774fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
3. CSF 컬렉션 마 취 마우스에서
<ol><li>날카롭게 포인트에서 막 바로 뒤에 유리 모 세관 마우스 머리의 뒤에 정렬 한 ~ 30-45 ° 각도 (그림 2C).</li>
	<li>뛰어내리는 주사기를 한 번 또는 몇 번 하 고 주사기를 세우 ~ 100-200 µ L (되도록 아무 오염 물질 고 거기에 부정적인 압력 유리 모 세관).</li>
	<li>모 세관 이동 micromanipulator를 사용 하 여 저항을 볼 수 있는 때까지 막에 가까이 팁 하지만 (그림 2D) 그것을 puncturing 하지.</li>
	<li>일단 저항 모 세관의 팁과 막 본은, 부드럽게 노크 micromanipulator 컨트롤에 의해 멤브레인을 통해 모 세관 튜브를 누릅니다. 시스테 마그나에 모 세관 펑크의 날카로운된 포인트를 볼 수 있는 현미경을 사용 합니다. CSF 자동으로 그려야 모 세관 튜브로 일단 개통 구멍 되었습니다 (그림 2E).</li>
	<li>천천히 CSF를 수집을 모 세관을 둡니다. CSF 밖으로 그리기 중지 되었습니다, 그린 작은 금액을 주사기 천천히 (~ 50 µ L) CSF를 추출 하는 모 세관에서 더 부정적인 압력을 만들려고. 참고: 또는, 모 세관 수 부드럽게 그리고 천천히 오게 될 CSF 다시 모 세관으로 흐르는 것을 허용 하도록 잘 micromanipulator 컨트롤을 사용 하는 두뇌. 총 금액 ~ CSF의 10-15 µ L (~ 모 세관에 3-4 cm) 걸립니다 ~ 10-30 분 및 때때로 20 µ L 이상의 수집 될 수 있습니다. 절대적으로 필요 하지 않지만 CSF 수집 중 열 패드를 사용 하는 것이 좋습니다. CSF 컬렉션 실내 온도에서 수행 되었다 (~ 23 ° C).</li>
	<li>일단 원하는 CSF의 금액을 수집 (CSF를 끌어 중지) 닫습니다 3 방향 밸브를 이동 하 여 튜브를 닫습니다.</li>
	<li>주사기에 튜브에 연결에 밖으로 가십시오 그리고 열고 튜브 (모 세관, 튜브, 그리고 모 세관 외부 영역에서 평준화 압력을 만드는)를 닫습니다. 3-방향 밸브와 주사기를 다시 연결 하지만 주사기를 빠지게 하지 마십시오.</li>
	<li>부드럽게는 micromanipulator를 사용 하 여 마우스에서 유리 모 세관을 제거 합니다.</li>
	<li>유리의 날카로운된 지점에서 컬렉션 튜브 (protease 억제제 x 20의 1 µ L와 1.5 mL microtubes) 장소 모 세관.</li>
	<li>튜브를 열고 부드럽게 주사기 플런지: 모 세관 그리고 컬렉션 튜브에 CSF 흐른다 한다.</li>
	<li>수령 후, 신속 하 게 원심 (5 회전 펄스 미니 원심 분리기를 사용 하 여 최대 속도로 s) 컬렉션 튜브의 하단에 프로 테아 제 억제 물 샘플 혼합 CSF. 참고: CSF 견본 aliquoted 수-80 ° c.에 추가 분석을 위해 저장 하 고 마우스의 나머지는 뇌와 척수와 같은 다른 조직에 대 한 해 부 수 있습니다. 마우스가이 단계에서 아직도 살아 이며 따라서 혈액도 수집 될 수 있습니다, 필요한 경우.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Anoop, A., Singh, P. K., Jacob, R. S., Maji, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CSF+Biomarkers+for+Alzheimer's+Disease+Diagnosis.">CSF Biomarkers for Alzheimer's Disease Diagnosis.</a> Int. J. Alzheimers. Dis. 2010, 1-12 (2010).</li><li>Blennow, K., Hampel, H., Weiner, M., Zetterberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+and+plasma+biomarkers+in+Alzheimer+disease.">Cerebrospinal fluid and plasma biomarkers in Alzheimer disease.</a> Nat. Rev. Neurol. 6 (3), 131-144 (2010).</li><li>Schoonenboom, N. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+fluid+markers+for+differential+dementia+diagnosis+in+a+large+memory+clinic+cohort.">Cerebrospinal fluid markers for differential dementia diagnosis in a large memory clinic cohort.</a> Neurology. 78 (1), 47-54 (2012).</li><li>Molinuevo, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+use+of+cerebrospinal+fluid+biomarker+testing+for+Alzheimer's+disease+diagnosis:+A+consensus+paper+from+the+Alzheimer's+Biomarkers+Standardization+Initiative.">The clinical use of cerebrospinal fluid biomarker testing for Alzheimer's disease diagnosis: A consensus paper from the Alzheimer's Biomarkers Standardization Initiative.</a> Alzheimer's Dement. 10 (6), 808-817 (2014).</li><li>Fagan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CSF+biomarkers+of+Alzheimer's+disease:+impact+on+disease+concept,+diagnosis,+and+clinical+trial+design.">CSF biomarkers of Alzheimer's disease: impact on disease concept, diagnosis, and clinical trial design.</a> Adv. Geriatr. 2014, 1-14 (2014).</li><li>Ramautar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+profiling+of+mouse+cerebrospinal+fluid+by+sheathless+CE-MS.">Metabolic profiling of mouse cerebrospinal fluid by sheathless CE-MS.</a> Anal. Bioanal. Chem. 404 (10), 2895-2900 (2012).</li><li>Liu, L., Herukka, S., Minkeviciene, R., Vangreon, T., Tanila, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+observation+on+CSF+A&#946;42+levels+in+young+to+middle-aged+amyloid+precursor+protein/presenilin-1+doubly+transgenic+mice.">Longitudinal observation on CSF A&#946;42 levels in young to middle-aged amyloid precursor protein/presenilin-1 doubly transgenic mice.</a> Neurobiol. Dis. 17 (3), 516-523 (2004).</li><li>Schelle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+tau+increase+in+cerebrospinal+fluid+of+APP+transgenic+mice+suggests+downstream+effect+of+BACE1+inhibition.">Prevention of tau increase in cerebrospinal fluid of APP transgenic mice suggests downstream effect of BACE1 inhibition.</a> Alzheimer's Dement. , (2016).</li><li>You, J. -. S., Gelfanova, V., Knierman, M. D., Witzmann, F. A., Wang, M., Hale, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+blood+contamination+on+the+proteome+of+cerebrospinal+fluid.">The impact of blood contamination on the proteome of cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 5 (1), 290-296 (2005).</li><li>Liu, L., Duff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Technique+for+Serial+Collection+of+Cerebrospinal+Fluid+from+the+Cisterna+Magna+in+Mouse.">A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse.</a> J. Vis. Exp. (21), (2008).</li><li>Maia, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+amyloid-&#946;+and+Tau+in+the+cerebrospinal+fluid+of+transgenic+mice+overexpressing+amyloid+precursor+protein.">Changes in amyloid-&#946; and Tau in the cerebrospinal fluid of transgenic mice overexpressing amyloid precursor protein.</a> Sci. Transl. Med. 5 (194), 194re2 (2013).</li><li>Oshio, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+cerebrospinal+fluid+production+and+intracranial+pressure+in+mice+lacking+choroid+plexus+water+channel+Aquaporin-1.">Reduced cerebrospinal fluid production and intracranial pressure in mice lacking choroid plexus water channel Aquaporin-1.</a> FASEB J. , (2004).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜 설명 자세히 혈액 오염 최소화 및 CSF의 풍부한 컬렉션에 대 한 허용 CSF 컬렉션의 현재 방법10 에 향상 (평균 ~ 10-15 µ L를 얻을 수 있다) 쥐에서. 모 세관 끝을 깨는, 모 세관의 끝 해서는 안됩니다 (그럼 CSF 추출 됩니다 매우 느리게) 너무 작은 또는 너무 큰 (되지 않습니다 CSF 수집을 충분히 잘 하 고 조직 모 세관에서 제기 될 수 있다). 주의 해야 때 CSF 컬렉션에 대 한 영...

CSF 분석 신경 과학 연구에 대 한 귀중 한 체액 이다. CSF는 주로, (아니 붉은 혈액 세포와만 몇 백혈구) 몇 셀을 포함 하 고는 거의 단백질-무료. 그것 하나는 체액의 중앙 신경 시스템 (CNS)와 가까이 접촉에서 이며 전달할 수 많은 전해질 밖으로 두뇌 및 척수 주변 시스템을. 인간에서는, CSF 샘플 수집 질병 진단에 도움이 될 수 있습니다 또는 임상 시험에서 연구 목적, 척추 수돗물 (또는 요 추 찔린)으로 사소한, 침략 적 절차: CSF 액체가에 직접 액세스 하지 않고 CNS에 변화를 반영할 수 있다 조직입니다. 따라서, 병원, 연구 목적을 위해 최근 몇 년 동안에서 CSF 샘플 Alzheimer의 질병, 다른 치 매1,2,3같은 신경 퇴행 성 질환의 환자에서 얻이 되었습니다. 많은 잠재적으로 클리닉2,3에서 질병 진단에 도움이 CSF 샘플을 사용 하 여 개발 된 바이오 마커 분석 실험을 확인 하 고 있습니다. 그러나, 구체적으로 진단 질병4,5일관성, 민감한 결과를 이러한 분석의 신뢰성에 많은 논쟁이 있다. 그래서, 큰 감도와 특이성 신경 퇴행 성 질환을 진단 하는 표준 기술을 생산에 도움이 더 나은 분석 및 목표, CSF에서 찾을 수 있습니다, 개발에 대 한 중대 한 필요가 있다. 질병에서 인간 CSF 샘플의 잠재적인 중요성 때문 신경 과학 연구에 설치류에서 CSF의 컬렉션의 관심 이기도합니다.
마우스 생물학과 의학 연구에 중요 한 동물 고 잠재적 치료 화합물 및 인간 임상 시험 전에 개념 증명 연구의 테스트에 대 한 허용 한다. 그러나, 쥐에서 어렵습니다 작은 동물, 뇌의 친밀감 때문에 CSF 샘플을 얻기 위해 생쥐에서 CSF 컬렉션의 일반적인 방법은 시스테 마그나, 소 뇌 수 질 oblongata의 등 쪽 표면 사이 개통을 통해 그것을 얻을 하는 것입니다. 어려움으로이 지역에 해 부 어렵다 CSF 샘플을 수집 하 고 혈관, 혈액 세포에서 오염의 위험이 증가에 가까운 근접에서 발생 합니다. 이러한 어려움 때문에 대부분 연구자만 분석 (일반적으로 5-7 µ L로 명시 된)에 대 한 CSF의 작은 금액을 가져올 수 있습니다 및 혈액 세포에 의해 CSF 견본의 오염 분석6,,78 에 대 한 주요 관심사는 , 9. 혈액 오염 결과 보이지 않게 수 고 하지 진정으로 CNS의 상태를 반영. 쥐에서 수집 된 일반적인 금액으로 충분 한 측정 (또는 3 중) 제한 된 샘플 수집 연구를 충격 하는 또한, 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA)을 사용 하 여. 따라서, CSF 샘플 충분 한 샘플을 여러 분석 실험을 실행 하기 위해 여러 마우스에서 일반적으로 풀링됩니다. 풍부한에 대 한 프로토콜을 개발, 쥐에서 CSF의 오염의 컬렉션은 크게 원하는 하 고 설치류를 사용 하 여 신경 과학 연구를 개선에 도움이 될 것입니다.
이 프로토콜, 풍부한 기술 (평균 10-15 µ L) 마 취 쥐에서 CSF의 컬렉션 자세히 설명 하 고 피10에서 오염을 최소화 하기 위해 CSF 컬렉션의 현재 알려진된 방법에 향상. CSF 컬렉션에 대 한 강력한 프로토콜 CSF 기반 바이오 마커 분석, 질병 진단에 도움이 CNS에 영향을 미치는 질병의 기반이 되는 메커니즘을 연구 개선 하는 데 사용 수의 개발에 도움이 됩니다.

<table><tbody><tr><td>Chloral hydrate (used as anesthetic)</td><td>Sinopharm Chemicals Reagen Co. Ltd.</td><td>30037517</td><td>CAS number 302-17-0.</td></tr><tr><td>Dissecting scissors</td><td>66 vision technology</td><td>54002</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting curved forceps</td><td>66 vision technology</td><td>53072</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting straight forceps</td><td>66 vision technology</td><td>53070</td><td></td></tr><tr><td>Mouse adapter (with ear bars)</td><td>Made in-house.</td><td>N/A</td><td>Similar equipment available from World Precision Instruments.</td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Meiji Labax</td><td>Model 15381</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>World Precision Instruments</td><td>M3301</td><td></td></tr><tr><td>Magnetic base for micromanipulator</td><td>Kanetec</td><td>MB-K</td><td></td></tr><tr><td>Glass capillaries</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B100-4</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instruments</td><td>Model P-1000</td><td></td></tr><tr><td>Syringes (1ml)</td><td>Tansoole</td><td>02024692</td><td>For 1ml.</td></tr><tr><td>Microtubes (1.5ml)</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Protease inhibitor Cocktail Set III EDTA-free</td><td>Calbiochem</td><td>539134</td><td></td></tr><tr><td>Human A&amp;beta;42 ELISA kit</td><td>Invitrogen</td><td>KHB3441</td><td></td></tr><tr><td>Piping (teflon tubing)</td><td>World Precision Instruments</td><td>MMP-KIT</td><td>Obtained from a microinjection kit and attached to the capillary holder and syringe.</td></tr><tr><td>Mini centrifuge</td><td>Tiangen Biotech</td><td>OSE-MC8</td><td></td></tr><tr><td>Cotton buds</td><td>Obtained from any household store/pharmacy.</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

an improved method for collection of cerebrospinal fluid from anesthetized mice

뇌 척추 액체 (CSF) 분석 신경 과학 연구에 대 한 귀중 한 체액 이다. 그것은 중앙 신 경계와 가까운 접촉에서 체액 중 하나입니다 하 고 따라서,이 조직에 직접 액세스 하지 않고 뇌 또는 척수의 병 상태를 분석에 사용할 수 있습니다. 그러나, 쥐 혈관의 친밀감 때문 시스테 마그나에서 얻기 어렵다,이 종종 샘플 오염. 마우스에 CSF 컬렉션에 대 한 지역에 해 부도 어렵습니다 그리고 종종 작은 샘플 (5-7 µ L의 최대 또는 더 적은) 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜은 자세하게에서 혈액 오염 최소화 (평균 10-15 µ L를 수집할 수 있습니다)에 CSF의 풍부한 컬렉션에 대 한 허용 하는 컬렉션의 현재 방법에 향상 하는 기술을 설명 합니다. 이 기술은 그것 CSF 추출 하는 동안 모든 조직에 영향을 하지 않습니다 마우스에서 조직 컬렉션에 대 한 다른 해 부 방법으로 사용할 수 있습니다. 따라서, 뇌와 척수가이 기법으로 영향을 받지 않습니다 하 고 그대로 유지. 큰 CSF 샘플 수집 및 순수성, 더 많은 분석이 더 액체 보조 신경 과학 연구에 사용할 수와 더 나은 두뇌 및 척수에 영향을 미치는 질병을 이해.

(그림 1 및 그림 2) 여기에 설명 된 절차를 사용 하 여, 모 세관에 즉시 수집 CSF 클리어 (그림 2E), 분홍색 또는 빨간색 이어야 한다. 액체는 모 세관에서 수집에 붉은 가미에 분홍색 경우 혈액으로 오염이 했다.
CSF 샘플의 응용 프로그램의 예를 들어가이 방법으로...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice at JoVE.com

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

이 프로토콜에는 혈액에서 오염 없이와 뇌 척추 액체 (CSF)의 풍부한 컬렉션에 대 한 향상 된 기술을 설명합니다. 큰 샘플 수집 및 순수성, 더 많은 분석 두뇌 및 척수에 영향을 질병의 우리의 이해를 추가 CSF를 사용 하 여 수행할 수 있습니다.

마 취 쥐에서 척수의 컬렉션에 대 한 개선된 방법

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

an-improved-method-for-collection-cerebrospinal-fluid-from

Research

JoVE Journal

Neuroscience

61.7K 조회수.  University of Chinese Academy of Sciences, Chinese Academy of Science. 이 프로토콜에는 혈액에서 오염 없이와 뇌 척추 액체 (CSF)의 풍부한 컬렉션에 대 한 향상 된 기술을 설명합니다. 큰 샘플 수집 및 순수성, 더 많은 분석 두뇌 및 척수에 영향을 질병의 우리의 이해를 추가 CSF를 사용 하 여 수행할 수 있습니다.

비디오: An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse 

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease that is pathologically characterized by extracellular deposition of &#946;-amyloid peptide (A&#946;) and intraneuronal accumulation of hyperphosphorylated tau protein. Because cerebrospinal fluid (CSF) is in direct contact with the extracellular space of the brain, it provides a reflection of the biochemical changes in the brain in response to pathological processes. CSF from AD patients shows a decrease in the 42 amino-acid form of A&#946; (A&#946;42), and increases in total tau and hyperphosphorylated tau, though the mechanisms responsible for these changes are still not fully understood. Transgenic (Tg) mouse models of AD provide an excellent opportunity to investigate how and why A&#946; or tau levels in CSF change as the disease progresses. Here, we demonstrate a refined cisterna magna puncture technique for CSF sampling from the mouse. This extremely gentle sampling technique allows serial CSF samples to be obtained from the same mouse at 2-3 month intervals which greatly minimizes the confounding effect of between-mouse variability in A&#946; or tau levels, making it possible to detect subtle alterations over time. In combination with A&#946; and tau ELISA, this technique will be useful for studies designed to investigate the relationship between the levels of CSF A&#946;42 and tau, and their metabolism in the brain in AD mouse models. Studies in Tg mice could provide important validation as to the potential of CSF A&#946; or tau levels to be used as biological markers for monitoring disease progression, and to monitor the effect of therapeutic interventions. As the mice can be sacrificed and the brains can be examined for biochemical or histological changes, the mechanisms underlying the CSF changes can be better assessed. These data are likely to be informative for interpretation of human AD CSF changes.

A Technique for Serial Collection of Cerebrospinal Fluid from the Cisterna Magna in Mouse

Transgenic (Tg) mouse models of AD provide an excellent opportunity to investigate how and why A&#946; or tau levels in CSF change as the disease progresses in human patients. Here, we demonstrate a refined cisterna magna puncture technique for serial CSF sampling from the mouse.

Cisterna 마그나 마우스에서 뇌척수의 직렬 그룹에 대한 기술

Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease that is pathologically characterized by extracellular deposition of &#946;-amyloid ...

연구

생물학

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF differentiates from the amniotic fluid upon closure of the anterior neural tube. CSF volume then increases over subsequent days as the neuroepithelial progenitor cells lining the ventricles and the choroid plexus generate CSF. The embryonic CSF contacts the apical, ventricular surface of the neural stem cells of the developing brain and spinal cord. CSF provides crucial fluid pressure for the expansion of the developing brain and distributes important growth promoting factors to neural progenitor cells in a temporally-specific manner. To investigate the function of the CSF, it is important to isolate pure samples of embryonic CSF without contamination from blood or the developing telencephalic tissue. Here, we describe a technique to isolate relatively pure samples of ventricular embryonic CSF that can be used for a wide range of experimental assays including mass spectrometry, protein electrophoresis, and cell and primary explant culture. We demonstrate how to dissect and culture cortical explants on porous polycarbonate membranes in order to grow developing cortical tissue with reduced volumes of media or CSF. With this method, experiments can be performed using CSF from varying ages or conditions to investigate the biological activity of the CSF proteome on target cells.

The ventricular cerebrospinal fluid (CSF) bathes the neuroepithelial and cerebral cortical progenitor cells during early brain development in the embryo. Here we describe the method developed to isolate ventricular CSF from rodent embryos of different ages in order to investigate its biological function. In addition, we demonstrate our cerebral cortical explant dissection and culture technique that allows for explant growth with minimal volumes of culture medium or CSF.

해부하는 뇌 두피 Explants와 함께 사용하기위한 쥐 태아의 뇌척수의 절연

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

신경과학

Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to the skull or the brain parenchyma. In anesthetized rodents, the exposure of the dura mater by blunt dissection of the neck muscles allows the insertion of a cannula into the cisterna magna (CM). The cannula, composed either by a fine beveled needle or borosilicate capillary, is attached via a polyethylene (PE) tube to a syringe. Using a syringe pump, molecules can then be injected at controlled rates directly into the CM, which is continuous with the subarachnoid space. From the subarachnoid space, we can trace CSF fluxes by convective flow into the perivascular space around penetrating arterioles, where solute exchange with the interstitial fluid (ISF) occurs. CMc can be performed for acute injections immediately following the surgery, or for chronic implantation, with later injection in anesthetized or awake, freely moving rodents. Quantitation of tracer distribution in the brain parenchyma can be performed by epifluorescence, 2-photon microscopy, and magnetic resonance imaging (MRI), depending on the physico-chemical properties of the injected molecules. Thus, CMc in conjunction with various imaging techniques offers a powerful tool for assessment of the glymphatic system and CSF dynamics and function. Furthermore, CMc can be utilized as a conduit for fast, brain-wide delivery of signaling molecules and metabolic substrates that could not otherwise cross the blood brain barrier (BBB).

Here we describe a protocol to perform cisterna magna cannulation (CMc), a minimally invasive way to deliver tracers, substrates and signaling molecules into the cerebrospinal fluid (CSF). Combined with different imaging modalities, CMc enables glymphatic system and CSF dynamics assessment, as well as brain-wide delivery of various compounds.

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and magnetic resonance imaging (MRI) have enabled in vivo quantification of CSF flow but they are limited by reduced imaging volumes and low spatial resolution, respectively. Recent work has found that CSF enters the brain parenchyma through a network of perivascular spaces surrounding the pial and penetrating arteries of the rodent cortex. This perivascular entry of CSF is a primary driver of the glymphatic system, a pathway implicated in the clearance of toxic metabolic solutes (e.g., amyloid-&#946;). Here, we illustrate a new macroscopic imaging technique that allows real-time, mesoscopic imaging of fluorescent CSF tracers through the intact skull of live mice. This minimally-invasive method facilitates a multitude of experimental designs and enables single or repeated testing of CSF dynamics. Macroscopes have high spatial and temporal resolution and their large gantry and working distance allow for imaging while performing tasks on behavioral devices. This imaging approach has been validated using two-photon imaging and fluorescence measurements obtained from this technique strongly correlate with ex vivo fluorescence and quantification of radio-labeled tracers. In this protocol, we describe how transcranial macroscopic imaging can be used to evaluate glymphatic transport in live mice, offering an accessible alternative to more costly imaging modalities.

Transcranial optical imaging allows wide-field imaging of cerebrospinal fluid transport in the cortex of live mice through an intact skull.

형광 매크로법을 사용하여 그대로 마우스 두개골을 통해 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...

Quantitative Measurement of Intrathecally Synthesized Proteins in Mice

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the CSF protein composition delivers crucial information in basic neuroscience research as well as neurological diseases. One caveat is that proteins measured in CSF may derive from both intrathecal synthesis and transudation from serum, and protein analysis of CSF can only determine the sum of these two components. To discriminate between protein transudation from the blood and intrathecally produced proteins in animal models as well as in humans, CSF protein profiling measurements using conventional protein analysis tools must include the calculation of the albumin CSF/serum quotient (Qalbumin), a marker of the integrity of the blood-brain interface (BBI), and the protein index (Qprotein/Qalbumin), an estimate of intrathecal protein synthesis. This protocol illustrates the entire procedure, from CSF and blood collection to quotients and indices calculations, for the quantitative measurement of intrathecal protein synthesis and BBI impairment in mouse models of neurological disorders.

Elevated spinal fluid protein levels can either be the result of diffusion of plasma protein across an altered blood-brain barrier or intrathecal synthesis. An optimized testing protocol is presented in this article that helps to discriminate both cases and provides quantitative measurements of intrathecally synthesized proteins.

쥐의 경내 합성 단백질의 정량적 측정

Cerebrospinal fluid (CSF), a fluid found in the brain and the spinal cord, is of great importance to both basic and clinical science. The analysis of the ...

Intraventricular Drug Delivery and Sampling for Pharmacokinetics and Pharmacodynamics Study

Although the blood-brain barrier (BBB) protects the brain from foreign entities, it also prevents some therapeutics from crossing into the central nervous system (CNS) to ameliorate diseases or infections. Drugs are administered directly into the CNS in animals and humans to circumvent the BBB. The present protocol describes a unique way of treating brain infections through intraventricular delivery of antibiotics, i.e., polymyxins, the last-line antibiotics to treat multi-drug resistant Gram-negative bacteria. A straightforward stereotaxic surgery protocol was developed to implant a guide cannula reaching into the lateral ventricle in rats. After a recovery period of 24 h, rats can be injected consciously and repeatedly through a cannula that is fitted to the guide. Injections can be delivered manually as a bolus or infusion using a microinjection pump to obtain a slow and controlled flow rate. The intraventricular injection was successfully confirmed with Evans Blue dye. Cerebrospinal fluid (CSF) can be drained, and the brain and other organs can be collected. This approach is highly amenable for studies involving drug delivery to the CNS and subsequent assessment of pharmacokinetic and pharmacodynamic activity.

<meta charset="utf8"></head><body>약동학 및 약력학 연구를 위한 뇌실 내 약물 전달 및 샘플링

Delivery of therapeutics directly into the central nervous system is one way of circumventing the blood-brain barrier. The present protocol demonstrates intracerebroventricular injection for subsequent collection of cerebrospinal fluid and bodily organs. This facilitates the investigation of drug pharmacokinetics and pharmacodynamics in animal models for developing new treatments.

약동학 및 약력학 연구를 위한 뇌실 내 약물 전달 및 샘플링

Although the blood-brain barrier (BBB) protects the brain from foreign entities, it also prevents some therapeutics from crossing into the central nervous ...

Mapping Cerebral Blood Flow and Electrical Fields: Electrode Placement in Mice(대뇌 혈류와 전기장 매핑: 생쥐의 전극 배치)

Placement of Extracranial Stimulating Electrodes and Measurement of Cerebral Blood Flow and Intracranial Electrical Fields in Anesthetized Mice

The detection of cerebral blood flow (CBF) responses to various forms of neuronal activation is critical for understanding dynamic brain function and variations in the substrate supply to the brain. This paper describes a protocol for measuring CBF responses to transcranial alternating current stimulation (tACS). Dose-response curves are estimated both from the CBF change occurring with tACS (mA) and from the intracranial electric field (mV/mm). We estimate the intracranial electrical field based on the different amplitudes measured by glass microelectrodes within each side of the brain. In this paper, we describe the experimental setup, which involves using either bilateral laser Doppler (LD) probes or laser speckle imaging (LSI) to measure the CBF; as a result, this setup requires anesthesia for the electrode placement and stability. We present a correlation between the CBF response and the current as a function of age, showing a significantly larger response at higher currents (1.5 mA and 2.0 mA) in young control animals (12-14 weeks) compared to older animals (28-32 weeks) (p &lt; 0.005 difference). We also demonstrate a significant CBF response at electrical field strengths &lt;5 mV/mm, which is an important consideration for eventual human studies. These CBF responses are also strongly influenced by the use of anesthesia compared to awake animals, the respiration control (i.e., intubated vs. spontaneous breathing), systemic factors (i.e., CO2), and local conduction within the blood vessels, which is mediated by pericytes and endothelial cells. Likewise, more detailed imaging/recording techniques may limit the field size from the entire brain to only a small region. We describe the use of extracranial electrodes for applying tACS stimulation, including both homemade and commercial electrode designs for rodents, the concurrent measurement of the CBF and intracranial electrical field using bilateral glass DC recording electrodes, and the imaging approaches. We are currently applying these techniques to implement a closed-loop format for augmenting the CBF in animal models of Alzheimer's disease and stroke.

저자 스포트라이트: 알츠하이머 모델에서 대뇌 혈류를 개선하기 위한 자극 기반 접근법 

We describe a protocol for assessing dose-response curves for extracranial stimulation in terms of brain electrical field measurements and a relevant biomarker-cerebral blood flow. Since this protocol involves invasive electrode placement into the brain, general anesthesia is needed, with spontaneous breathing preferred rather than controlled respirations.

두개외 자극 전극의 배치 및 마취된 마우스의 대뇌 혈류 및 두개내 전기장 측정

The detection of cerebral blood flow (CBF) responses to various forms of neuronal activation is critical for understanding dynamic brain function and ...

마 취 쥐에서 척수의 컬렉션에 대 한 개선된 방법

요약

더 많은 비디오 탐색

이 비디오의 챕터

Cisterna 마그나 마우스에서 뇌척수의 직렬 그룹에 대한 기술

해부하는 뇌 두피 Explants와 함께 사용하기위한 쥐 태아의 뇌척수의 절연

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

형광 매크로법을 사용하여 그대로 마우스 두개골을 통해 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징

쥐의 경내 합성 단백질의 정량적 측정

약동학 및 약력학 연구를 위한 뇌실 내 약물 전달 및 샘플링

약동학 및 약력학 연구를 위한 뇌실 내 약물 전달 및 샘플링

두개외 자극 전극의 배치 및 마취된 마우스의 대뇌 혈류 및 두개내 전기장 측정

두개외 자극 전극의 배치 및 마취된 마우스의 대뇌 혈류 및 두개내 전기장 측정

두개외 자극 전극의 배치 및 마취된 마우스의 대뇌 혈류 및 두개내 전기장 측정