이 작품은 Novo Nordisk 기초 및 신경 성 질환의 국가 학회 및 치기, NINDS/NIH (M.N.) 지원 되었다. A.L.R.X. 및 S.H R은 각각 박사 친교와 Lundbeck 재단에서 박사 학위 장학금 받는 사람.

모든 절차와 동물 연구를 위한 유럽 지침 2010/63/EU에 따라 수행 했다 덴마크어 정부 환경 및 음식 (2015-15-0201-00535)에서 동물 실험 위원회에 의해 승인 했다.
1입니다. Cannulation 절차
<ol><li>정 준비 참고: 비 멸 균 장갑과 정을 만지지 마십시오.<ol>
<li>30 G 치과 바늘 바늘 홀더를 사용 하 여의 경사진된 금속 팁을 끊다.</li>
		<li>PE10의 30의 cm 길이에 경사진된 금속 팁 (약 0.3 cm)를 삽입 하 여는 정 준비 바늘 홀더를 사용 하 여 튜빙 (폴 리 에틸렌 튜브 0.024"OD 0.011" ID x) 실제 (126 m m NaCl, 2.5 m m KCl, 1.25 m m NaH2포4 가득 2mm MgSO4, 2mm CaCl2, 포도 당 10 m m, 26 m m NaHCO3; 산도 95% O2 , 5% CO2기름 때 7.4).</li>
		<li>30g 바늘 (30 G x ½"0.3 x 12) 장착 1 mL 주사기를 사용 하 여 실제와는 정을 플러시.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
외과 절차 참고: 만성 CM cannulation 수술에서 회복 하기 위해 동물을 수 있습니다. CM 주사는 정 맥 주입 다음 날 고, 중요 한 것은, 마 취 또는 깨어 동물에서 수행할 수 있습니다. 이 복구 수술 이므로, 절차 무 균 조건 하에서 실시 한다.<ol>
<li>마우스 (C57BL/6JRj, 남녀, 8 주) 무게와 마 취 제와 xylazine의 혼합물으로 anesthetize (100 mg/kg, 10mg/kg, 각각) 복 (i.p.) 주입을 통해. 필요한 경우 수술 중 마 취 제 (50 mg/kg)의 절반 복용량 마우스 redose. 또는, 만성 cannulation 대 1 L/min O2년경에 2.5-3 %isoflurane isoflurane 유도 챔버에 배치 하 여 마우스를 anesthetize. 이 경우에, 코 콘을 사용 하 여 수술에 걸쳐 1.5-2%에서 isoflurane 마 취를 유지.</li>
		<li>발가락 핀치 중단, 반사 때 호흡은 느리고 꾸준한 난방 패드 stereotaxic 프레임에 동물을 배치 합니다.</li>
		<li>안과 연 고를 적용 합니다. 필요할 때마다 수술 하는 동안 반복 합니다.</li>
		<li>머리와 목의 마우스를 면도 하십시오, 모피, 제거 하 고 알콜 면봉 및 액체 (0.5%) 또는 요오드 용액 (2%)와 두 번 다음 먼저 노출 된 피부를 소독. 살 균 두 번 더 반복 합니다. 참고: 면도 후 파편과 머리를 제거 하는 수술 드 레이프를 변경 합니다. 다음 살 균 필드를 보호 하기 위해 동물을 드러 워 진.</li>
		<li>만성 cannulation에 0.5-1 ml lidocaine/bupivacaine 관리 (1 mg/ml 및 0.25 mg/ml, 각각) 피하 (사우스 캐롤라이나) 절 개 사이트에. 수술 후 진통에 대 한 buprenorphine (0.05 mg/kg, 사우스 캐롤라이나)를 관리 합니다.</li>
		<li>Stereotaxic 프레임에 마우스를 수정. 고정, 어느 intraural를 확인 한 후 또는 광대 아치에 의해, 틸트 머리 약간 (그림 1E) 본문에 120 °의 각도 형성 있도록.</li>
		<li>목 근육-후 두도 머리 위에 바로 튀어나온 두개골의 일부를 찾을. Overlying 피부, 핀셋의 쌍을 사용 하 고는 중간에 따라 대략 1 cm의 피부는 아몬드 모양의 조각 잘라. 면봉을 사용 하거나 모든 결과 출혈을 제어 하는 스피어스 눈.</li>
		<li>기준점으로 후 두도 머리를 사용 하 여, 떨어져 표면 결합 조직 노출 아래 목 근육을 당겨.</li>
		<li>신중 하 게 절 개 사이트 이전 후부 축에서의 중간 아래로 집게를 실행 하 여는 중간에 근육을 구분 합니다. 각 손에 곡선된 집게의 쌍, 두개골의 아래쪽 중간에 팁을 가입 하 고 따로 근육을 당겨. 참고:이 위의 소 뇌 및 반투명 경 막 막 (그림 1B 및 1 C) 뒤에 아래, 모 수에 의해 제시 된 작은 역된 삼각형으로 표시 되는 CM를 표시 해야 합니다.</li>
		<li>수술 눈 창 또는 면 면봉을 사용 하 여 CM을 덮고 듀 럴 막 닦아.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
CM에는 정 맥의 삽입
	<ol>
<li>실제 채워진 주사기, 튜브의 끝부분에 부착 된 30g 바늘을 유지에서 정을 제거 합니다.</li>
		<li>소 주 물 가득 100 µ L 주사기 주사기 펌프에 연결 된 30 G 바늘을 연결 합니다.</li>
		<li>주사기 펌프의 원조로 공기 철수 여는 정에 약 1cm의 공기 방울이 삽입 합니다.</li>
		<li>주사기 펌프를 사용 하는 정으로 원하는 CSF 추적 프로그램의 12 μ 철회.</li>
		<li>CSF 트레이 서 튜브 적용 바늘 지배적인 손에 개최 곡선된 핀셋 한 켤레와 함께 근처 가득 정을 파악. 반대 측의 귀 바에 비 지배적인 손의 가운데 손가락을 휴식을 정에 대 한 휴식으로는 나중에 사용에 대 한 꾸준한.</li>
		<li>마우스 머리, CM, 경질을 통해 본 그 삼각형 측면으로 식별의 센터에 전달 기준으로 45 °의 각도 정을 삽입 합니다. 소 뇌 나 골 수의 어떤 침투를 하지 마십시오. 바늘만 1-2 m m, 즉 경사 전적으로 경질 아래 지점에의 깊이에 삽입 되었는지 확인 하십시오. 족집게는 정 들고 놓고 비 지배적인 손을 정 하자. 참고: 치과 바늘의 경사진된 끝 CM 취재 듀 럴 막 피어스 일부 세력의 응용 프로그램을 필요 합니다.</li>
		<li>필요한 경우 수술 눈 창 또는 면 면봉을 사용 하 여 침투 시 어떤 CSF 누출 떨어져 건조.</li>
		<li>정을 둘러싼 경 막 막에 cyanoacrylate 접착제의 2-3 방울을 드롭. 접착제는 접착제를 즉시 치료 가속기의 한 방울을 추가 합니다. 두개골과 치과 시멘트 (약 0.5 m g), cyanoacrylate 접착제 (3-5 방울)의 혼합물으로 바늘을 커버. 후 즉시 접착제 가속기 치료를 한 방울을 적용 합니다.</li>
		<li>만성 cannulation (대략 2-3 cm는 정 맥에 연결 된 떠나) 튜브를 잘라 고 튜브를 통해 CSF 누출을 방지 하 여 intracranial 압력 (ICP) 수준을 유지 하려면 수술 용접 함께 그것을 봉인.</li>
		<li>만성 cannulation에 대 한 관리 carprofen (5 mg/kg, 사우스 캐롤라이나)</li>
		<li>만성 cannulation 동물 완전히 마 취에서 회복 될 때까지 체온을 유지 하기 위해가 열 패드를 통해 그것을 유지 하는 것, 장에 마우스를 놓습니다. 참고: 동물 해야 될 단독에 보관 그들의 감 금 소는 정 그대로 남아 보장. 종이 타월 또는 다른 고체 기판에 마우스를 배치 하 여 코 침구의 명확한 인지 확인 합니다. 참고: 다음 날 때 동물 캐 뉼 러 삽입에 대 한 수행 수술에서 회복은, 그들은 주입 수 있습니다 CSF 추적기와 함께. 마 취 주입, 케 타 민/xylazine의 혼합물을 관리 (100 mg/kg, 10mg/kg, 각각; i.p.) 섹션 2에 설명 된 단계를 진행 하 고. 깨어 있는 동물에 주입, 섹션 3을 진행 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 마 취 동물에 급성 이식된 CM 정 통해 CSF 추적기의 주입
참고: 이전 섹션에서 8 단계 직후 마 취 동물에 급성 이식된 CM 정 통해 CSF 추적기의 주입을 위해 진행 CSF 추적 프로그램 삽입에 아래 설명 된 대로.
<ol><li>주사기 펌프를 사용 하 여 각각 5 µ L 또는 10 µ L의 총 볼륨의 결과 CM의 CSF 추적기 5 또는 10 분, 1 μ/분의 속도로 주입 시작. 주사의 끝에, CSF 추적 프로그램 그대로 정와 30 분 동안 뇌에 걸쳐 순환 수 있습니다.</li>
	<li>30 분 후 정 (바늘 팁에서 약 4 cm 거리)에 연결 하는 튜브를 잘라내어 수술 용접을 사용 하 여 끝 인감.</li>
	<li>깊은 마 취에서 잘린 여 동물을 안락사. 신속 하 게 뇌를 해 부 하 고 침수 4 %paraformaldehyde (PFA)에서 인산 염 버퍼 식 염 수에 희석 하 여 조직 수정 (PBS, 0.01M, pH 7.4) 4 ° c.에 하룻밤 (o/n)</li>
</ol>3. 깨어 있는 동물에서 만성 이식 CM 정 통해 CSF 추적기의 주입
<ol><li>주사기 펌프를 사용 하 여, 7 µ L 또는 원하는 CSF 추적 프로그램의 12 µ l 정 0.5 c m의 경사진된 치과 바늘 팁 PE10 배관의 대략 30 cm의 구성으로 철회 한다.</li>
	<li>부드럽게 동물을 제 지는 정 맥에 연결 된 배관의 대략 1 cm의 잘라.</li>
	<li>부드러운 접근 금지의 밑에 아직도 신속 하 게 이식 CM 정에 CSF 추적 프로그램으로 가득 정을 연결 합니다.</li>
	<li>주사기 펌프를 사용 하 여 CM의 CSF 추적기 1 µ L/분 주사 7 µ L의 속도로 주입을 시작 하거나 12 µ L, CSF의 최종 볼륨을 달성 하기 위해 따라서 이식된 정에 남아 있는 실제 보상 5 µ L 또는 10 µ L의 트레이 서를 주입 합니다. 주사의 끝에, CSF 추적 프로그램 그대로 정와 30 분 동안 뇌에 걸쳐 순환 수 있습니다. 주입 및 순환 기간 동안 튜브 계속 연결 되어 확인 하십시오.</li>
	<li>CSF 추적 순환 시간의 끝에, 잘린, 동물 마 취 깊이 확보 하 여 안락사를 진행 합니다. 신속 하 게 뇌를 해 부 하 고 침수 4 %paraformaldehyde (PFA)에서 인산 염 버퍼 식 염 수에 희석 하 여 조직 수정 (PBS, 0.01M, pH 7.4) 4 ° c.에 하룻밤 (o/n)</li>
</ol>

<ol>
	<li>Xie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+Drives+Metabolite+Clearance+from+the+Adult+Brain.">Sleep Drives Metabolite Clearance from the Adult Brain.</a> Science. , 373-377 (2013).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+paravascular+pathway+facilitates+CSF+flow+through+the+brain+parenchyma+and+the+clearance+of+interstitial+solutes,+including+amyloid+&#946;.">A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid &#946;.</a> Sci. Transl. Med. 4, 147ra111 (2012).</li><li>Jessen, N. A., Munk, A. S. 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Res. 40, 2583-2599 (2015).</li><li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. , (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J. Exp. Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Kress, B. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impairment+of+paravascular+clearance+pathways+in+the+aging+brain.">Impairment of paravascular clearance pathways in the aging brain.</a> Ann. Neurol. 76, 845-861 (2014).</li><li>Plog, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomarkers+of+Traumatic+Injury+Are+Transported+from+Brain+to+Blood+via+the+Glymphatic+System.">Biomarkers of Traumatic Injury Are Transported from Brain to Blood via the Glymphatic System.</a> J. Neurosci. 35, 518-526 (2015).</li><li>Jiang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impairment+of+glymphatic+system+after+diabetes.">Impairment of glymphatic system after diabetes.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. , (2016).</li><li>Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+glymphatic+fluid+transport+in+a+mouse+model+of+Alzheimer's+disease.">Suppression of glymphatic fluid transport in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Neurobiol. Dis. 93, 215-225 (2016).</li><li>Ore&#353;kovi&#263;, D., Klarica, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+formation+of+cerebrospinal+fluid:+Nearly+a+hundred+years+of+interpretations+and+misinterpretations.">The formation of cerebrospinal fluid: Nearly a hundred years of interpretations and misinterpretations.</a> Brain Res. Rev. 64, 241-262 (2010).</li><li>Dusart, I., Schwab, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secondary+Cell+Death+and+the+Inflammatory+Reaction+After+Dorsal+Hemisection+of+the+Rat+Spinal+Cord.">Secondary Cell Death and the Inflammatory Reaction After Dorsal Hemisection of the Rat Spinal Cord.</a> Eur. J. Neurosci. 6, 712-724 (1994).</li><li>Eide, K., Eidsvaag, V. A., Nagelhus, E. A., Hansson, H. -. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+astrogliosis+and+increased+perivascular+aquaporin-4+in+idiopathic+intracranial+hypertension.">Cortical astrogliosis and increased perivascular aquaporin-4 in idiopathic intracranial hypertension.</a> Brain Res. , (2016).</li><li>Pullen, R. G., DePasquale, M., Cserr, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+flow+of+cerebrospinal+fluid+into+brain+in+response+to+acute+hyperosmolality.">Bulk flow of cerebrospinal fluid into brain in response to acute hyperosmolality.</a> Am. J. Physiol. 253, F538-F545 (1987).</li><li>Ichimura, T., Fraser, P. A., Cserr, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+extracellular+tracers+in+perivascular+spaces+of+the+rat+brain.">Distribution of extracellular tracers in perivascular spaces of the rat brain.</a> Brain Res. 545, 103-113 (1991).</li><li>Iliff, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-wide+pathway+for+waste+clearance+captured+by+contrast-enhanced+MRI.">Brain-wide pathway for waste clearance captured by contrast-enhanced MRI.</a> J. Clin. Invest. 123, 1299-1309 (2013).</li><li>Ratner, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal-mass-transfer-based+estimation+of+glymphatic+transport+in+living+brain.">Optimal-mass-transfer-based estimation of glymphatic transport in living brain.</a> Proc. SPIE--the Int. Soc. Opt. Eng. 9413, (2015).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+Body+Posture+on+Brain+Glymphatic+Transport.">The Effect of Body Posture on Brain Glymphatic Transport.</a> J. Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li><li>Nouri, S., Sharif, M. R., Sahba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+ferric+chloride+on+superficial+bleeding.">The effect of ferric chloride on superficial bleeding.</a> Trauma Mon. 20, e18042 (2015).</li></ol>

저자는 공개 없다.

우리는 시스테 마그나 cannulation (CMc), CSF 구획에 레이블이 분자를 제공 하는 간단한 방법을 제공 합니다에 대 한 자세한 절차를 설명 하는 프로토콜을 제시 했습니다. CMc는 CSF 역동성, vivo에서 그리고 vivo, 전 다른 이미징 형식 또는 조직학을 사용 하 여 다음 시각화 수 있습니다.
CMc 기술의 주요 장점 중 하나는 craniotomy를 뇌를 노출 하지 않고도 거미 막 밑 공간에 ?...

뇌 척추 액체 (CSF) 심 실 시스템 전체와는 해부학 정의 공간에서 연속체에 심, 두뇌 및 척수를 둘러싸는 거미 막 밑 공간에 따라 중앙 신경 시스템 (CNS)를 목욕. CSF의 주요 기능 중 하나는 대사와 뇌 실질에서 용액의 클리어런스에 대 한 경로 제공 것입니다. 클리어런스는 최근에 발견 된 glymphatic 시스템1, 뇌 주변 림프 시스템에 아날로그를 통해 촉진 된다. 여기, 우리가 설명 하 고 시스테 마그나 cannulation (CMc), CSF에 분자의 직접 배달 하는 최소 침 습 방법을 토론. CMc는 glymphatic 함수를 공부 하는 주요 방법입니다. CSF 역학 연구 및 혈관 주위 공간에 따라 뇌 실질에 비 혈액 뇌 장벽 (BBB) 침투성 분자의 빠르고, 뇌 전체 배달 또한, CMc의 적용할 수도 있습니다.
CMc는 시스테 마그나 (CM)의 CSF 가득한 공간으로 레이블이 지정 된 추적 분자 또는 마약을 제공 하는 CNS 통해 CSF 운동 역학의 생리 적 원리를 이용 한다. 분자는 CM. 분자 다음 CSF 대량 흐름 paravascular 공간1를 통해 뇌 실질에 의해 실행 된다 atlanto-후 두 경 막 막 덮 음에 이식 정 맥을 통해 주입 됩니다. CMc를 통해 주입 하는 추적 프로그램 또는 대비 에이전트 뇌 실질 입력 레이블된 분자의 강도 레벨을 측정 하 여 CSF 운동 및 glymphatic 유입의 평가 허용 CSF의 움직임을 다음과 같습니다. CMc 다른 이미징 기술로 epifluorescence, 2-광자 현미경 검사 법, 자기 공명 영상 (MRI)와 호환 됩니다. 또한,이 평가 될 수 있다 vivo에서 또는 비보 전을 수행. 중요 한 것은, CMc에서 마 취 또는 자연 수 면 중 뿐만 아니라 깨어 있는, 자유롭게 움직이는 동물에 glymphatic 시스템의 시각화 할 수 있습니다.
CMc 기술은 유체 역학, CSF에서의 다양 한 측면을 공부 하는 이용 될 수 있다 하지만 glymphatic 시스템을 공부 하는 데 특히 유용 것을 입증 했다. Glymphatic 활동 astrocytic 관 포장 endfeet의 막에 닿는 aquaporin-4 (AQP-4) 물 채널을 통해 periarterial 공간에서 CSF의 대류 흐름을 드라이브. 대류 흐름 CSF와 뇌 실질 내의 간 질 성 액체 (ISF)의 교환 수 있습니다. CSF/ISF 신진 대사 폐기물 및 용액을 포함 하는 perivenous 공간2,3를 통해 뇌 실질에서 다음 제거 됩니다. 궁극적으로, CSF/ISF 최근 설명된 듀 럴 림프 혈관4,5를 통해 주변에 도달합니다. Glymphatic 시스템은 아 밀 로이드 β2와 같은 유해한 폐기물 대사 산물의 정리를 위한 중요 한 보였다. 또한, glymphatic 클리어런스 장애인 당뇨병8 및9알 츠 하이 머 병 동물 모델에서 노화6, 외상 성 뇌 부상7, 후에 이다. 특히, glymphatic 활동은 종속, 또는 깨어1에 비해 마 취 중 상당히 높은 활동을 보여주는 상태. 실제로, 젊은 마 취 동물 가장 높은 glymphatic 활동을 전시 한다. 따라서, glymphatic 활동의 실험 부 량이 건강과 질병에서의 역할을 공부 하는 경우 중요 합니다.
여러 연구 결과 CSF 역동성 및 뇌 실질에 중간 액체로 (ISF)의 교환 언급. 그러나, 레이블이 분자 전달 되는 메서드는 오히려 침략, 트리거링 뇌 실질 손상 intracranial 압력 (ICP)에 변화 (참조10검토). 몇 가지 예는 intraventricular 또는 intraparenchymal 주사 craniotomy 또는 한 버의 시추를 포함 두개골에 구멍. 이러한 절차 변경 ICP, 따라서 glymphatic 함수2방해 하 보였다. 또한, 이러한 침략 방법 astrogliosis을 유발 하 고 뇌 실질 손상 된 지역 및 그 주변11,12AQP-4 immunoreactivity를 증가. 이다, AQP-4 glymphatic 시스템의 핵심 요소는, CMc는 그것의 연구에 대 한 선택의 방법입니다. 더 많은 침략 적 절차에 비해 CMc의 주요 이점은, ICP 변경 및 astrogliosis, 각각 피하는 그대로 두개골과 뇌 실질의 유지 이다. 따라서, 다른 이미징 도구와 함께에서 CMc glymphatic 시스템 뿐 아니라 역학을 공부 하는 가능성의 광범위 및 신경 질환의 동물 모델에서 뿐만 아니라 항상성, 유체 흐름의 메커니즘에 대 한 열립니다.
시스테 마그나 cannulation (CMc) 절차는 뇌 척추 액체 (CSF)에 간단 하 고 직접 액세스할 수 있습니다. 다른 분자 (예: 형광 추적기, MRI 조 영제) 주입 하 여는 실험 CSF 구획 내의 그들의 움직임을 추적 하 고 glymphatic 시스템의 활동을 평가할 수 있습니다. 다음 프로토콜 모두 급성 CMc를, 수술, 그리고 동물이 나중 주입에 대 한 수술에서 복구 하는 정 만성 이식 직후 주사에 대해 설명 합니다. 급성과 만성 이식의 가장 중요 한 차이점은 만성 이식 깨어 쥐에 glymphatic 활동의 연구에 대 한 수 있습니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1153">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">SOPIRA Carpule 30G 0.3 x 12mm</td>
			<td style="width:245px;">Kulzer</td>
			<td style="width:257px;">AA001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Polyethylene Tubing 0.024&#8221; OD x 0.011&#8221; ID</td>
			<td style="width:245px;">Scandidact</td>
			<td>PE10-CL-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30G x &#189;&#8221; 0.3 x 12 mm Luer-Lock</td>
			<td style="width:245px;">Chirana T. Injecta</td>
			<td>CHINS01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:22px;width:485px;">Chlorhexidine 0.5% (chlorhexidine digluconate)</td>
			<td style="width:245px;">Meda AS</td>
			<td style="width:257px;">no catalogue number, see link in comments</td>
			<td>http://www.meda.dk/behandlingsomrader/desinfektion/desinfektion-af-hud/klorhexidin-sprit-medic-05/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alcohol Swab 70% Isopropyl Alcohol 30 x 60mm</td>
			<td>Vitrex Medical A/S</td>
			<td>520213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Viskoese Oejendraeber Ophtha</td>
			<td>Ophtha</td>
			<td>145250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:485px;">Wooden applicator, Double cotton bud (&#216; appr. 4 - 5 mm, length appr. 12 mm)</td>
			<td style="width:245px;">Heinz Herenz</td>
			<td style="width:257px;">1032018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eye spears</td>
			<td>Medicom</td>
			<td>A18005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ferric chloride 10% solution</td>
			<td style="width:245px;">Algeos</td>
			<td style="width:257px;">NV0382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Kimtech Science Precision Wipes Tissue Wipers</td>
			<td style="width:245px;">Kimberly Clark Professional</td>
			<td style="width:257px;">05511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Loctite Super Glue Precision 5g</td>
			<td style="width:245px;">Loctite</td>
			<td style="width:257px;">no catalogue number, see link in comments</td>
			<td>http://www.loctite-consumer.dk/da/produkter/superglue-liquid.html&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insta-Set CA Accelerator</td>
			<td style="width:245px;">Bob Smith Industries</td>
			<td style="width:257px;">BSI-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dental Cement Powder</td>
			<td style="width:245px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:257px;">525000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical weld&#160;</td>
			<td style="width:245px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:257px;">INS750391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:485px;">Hamilton syringe GASTIGHT&#174; , 1700 series, 1710TLL, volume 100 &#956;L, PTFE Luer lock</td>
			<td>Hamilton syringes</td>
			<td style="width:257px;">1710TLL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">LEGATO 130 Syringe pump</td>
			<td style="width:245px;">KD Scientific</td>
			<td style="width:257px;">788130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Paraformaldehyde powder, 95%</td>
			<td style="width:245px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:257px;">158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Phosphate buffered saline (PBS; 0.01M; pH 7.4)</td>
			<td style="width:245px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:257px;">P3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Ovalbumin, Alexa Fluor 647 Conjugate</td>
			<td style="width:245px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:257px;">O34784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:485px;"> 
			DAPI (diamidino-2-phenylindole) Solution (1 mg/mL)</td>
			<td style="width:245px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:257px;">62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Dextran, Fluorescein, 3000 MW, Anionic</td>
			<td style="width:245px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:257px;">D3305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">E-Z Anesthesia EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:245px;">E-Z Systems</td>
			<td>EZ-7000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Attane Isofluran 1000 mg/g</td>
			<td style="width:245px;">ScanVet</td>
			<td>55226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Euthanimal 200mg/mL (sodium pentobarbital)</td>
			<td style="width:245px;">ScanVet</td>
			<td style="width:257px;">545349</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Ketaminol Vet 100 mg/mL (ketamine)</td>
			<td>Intervet International BV</td>
			<td style="width:257px;">511519</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:485px;">Rompin Vet 20 mg/mL (xylazin)</td>
			<td style="width:245px;">KVP Pharma + Veterin&#228;r Produkte GmbH</td>
			<td style="width:257px;">148999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Xylocain 20 mg/mL (lidocain)</td>
			<td style="width:245px;">AstraZeneca</td>
			<td style="width:257px;">158543</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Marcain 2.5 mg/mL (bupivacain)</td>
			<td style="width:245px;">AstraZeneca</td>
			<td style="width:257px;">123918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:485px;">Bupaq Vet 0.3 mg/mL (buprenorphine)</td>
			<td style="width:245px;">Richter Pharma AG</td>
			<td style="width:257px;">185159&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cannula implantation into the cisterna magna of rodents

시스테 마그나 cannulation (CMc) 두개골 또는 뇌 실질에 요원 손상 없이 뇌 척추 액체 (CSF)에 직접 액세스할 수 있게 하는 간단한 절차 이다. 마 취 설치류, 목 근육의 무딘 해 부에 의해 dura mater의 노출 시스테 마그나 (CM)에 정 맥의 삽입을 허용합니다. 구성 좋은 비스듬한 바늘 또는 모 세관, 붕 정 주사기에 폴 리 에틸렌 (PE) 관을 통해 붙어 있다. 주사기 펌프를 사용 하 여, 분자 수 다음 주입 제어 속도에서 거미 막 밑 공간으로 연속은 CM에 직접. 거미 막 밑 공간에서 우리 중간 액체로 (ISF) 용 질 교환 발생 관통 arterioles, 주위 혈관 주위 공간으로 대류 흐름에 의해 CSF 플럭스를 추적할 수 있습니다. CMc 수행할 수 있습니다 수술 직후 급성 주사 또는 마 취 또는 깨어 나중 주입으로 만성 이식 설치류를 자유롭게 이동. Epifluorescence, 2-광자 현미경 검사 법, 그리고 삽입 된 분자의 physico-화학 특성에 따라 자기 공명 영상 (MRI), 뇌 실질에 추적 프로그램 배포의 정량을 수행할 수 있습니다. 따라서, 다양 한 이미징 기술 함께에서 CMc glymphatic 시스템 및 CSF 역동성 및 기능 평가 위한 강력한 도구를 제공합니다. 또한, CMc 신호 분자와 달리 혈액 뇌 장벽 (BBB)를 교차 하지 수 대사 기판의 빠르고, 뇌 전체 배달에 대 한 도관으로 활용할 수 있습니다.

쥐 또는 쥐 stereotaxic 프레임에서의 고정, 시 후 두도 머리 지역 목 근육은 퉁 명 스럽게 시스테 마그나 (CM)을 폭로 해 부. CM의 삼각형 구조는 소 뇌의 꼬리 부분과 모 (그림 1A-1 C) 사이 쉽게 인식 된다. 정은 부드럽게 atlanto 후 두 막 (그림 1D)를 관통 하 여 1-2 m m은 CM에 삽입 됩니다. 경질 막 힘든 구조 이며는 캐 뉼 러 ?...

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Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

여기는 시스테 마그나 cannulation (CMc), 뇌 척추 액체 (CSF)에 추적기, 기판 및 신호 분자를 제공 하는 최소 침 습 방법을 수행 하는 프로토콜에 설명 합니다. 다른 이미지 형식으로 결합, CMc glymphatic 시스템 및 CSF 역학 평가 뿐만 아니라 다양 한 화합물의 두뇌 전체 배달 수 있습니다.

Cisterna magna cannulation (CMc) is a straightforward procedure that enables direct access to the cerebrospinal fluid (CSF) without operative damage to ...

cannula-implantation-into-the-cisterna-magna-of-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

43.8K 조회수.  University of Copenhagen. 여기는 시스테 마그나 cannulation (CMc), 뇌 척추 액체 (CSF)에 추적기, 기판 및 신호 분자를 제공 하는 최소 침 습 방법을 수행 하는 프로토콜에 설명 합니다. 다른 이미지 형식으로 결합, CMc glymphatic 시스템 및 CSF 역학 평가 뿐만 아니라 다양 한 화합물의 두뇌 전체 배달 수 있습니다.

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Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external environment and easily accessible in every living individual. As a result, this tissue is unique for anyone aiming to identify molecular anomalies in the pathological brain or isolate adult stem cells for cell therapy. 
Molecular abnormalities in brain diseases are often studied using nervous tissue samples collected post-mortem. However, this material has numerous limitations. In contrast, the olfactory mucosa is readily accessible and can be biopsied safely without any loss of sense of smell1. Accordingly, the olfactory mucosa provides an "open window" in the adult human through which one can study developmental (e.g. autism, schizophrenia)2-4 or neurodegenerative (e.g. Parkinson, Alzheimer) diseases4,5. Olfactory mucosa can be used for either comparative molecular studies4,6 or in vitro experiments on neurogenesis3,7.
The olfactory epithelium is also a nervous tissue that produces new neurons every day to replace those that are damaged by pollution, bacterial of viral infections. This permanent neurogenesis is sustained by progenitors but also stem cells residing within both compartments of the mucosa, namely the neuroepithelium and the underlying lamina propria8-10. We recently developed a method to purify the adult stem cells located in the lamina propria and, after having demonstrated that they are closely related to bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC), we named them olfactory ecto-mesenchymal stem cells (OE-MSC)11.
Interestingly, when compared to BM-MSCs, OE-MSCs display a high proliferation rate, an elevated clonogenicity and an inclination to differentiate into neural cells. We took advantage of these characteristics to perform studies dedicated to unveil new candidate genes in schizophrenia and Parkinson's disease4. We and others have also shown that OE-MSCs are promising candidates for cell therapy, after a spinal cord trauma12,13, a cochlear damage14 or in an animal models of Parkinson's disease15 or amnesia16.
In this study, we present methods to biopsy olfactory mucosa in rats and humans. After collection, the lamina propria is enzymatically separated from the epithelium and stem cells are purified using an enzymatic or a non-enzymatic method. Purified olfactory stem cells can then be either grown in large numbers and banked in liquid nitrogen or induced to form spheres or differentiated into neural cells. These stem cells can also be used for comparative omics (genomic, transcriptomic, epigenomic, proteomic) studies.

We describe here a method for biopsying olfactory mucosa from rat and human nasal cavities. These biopsies can be used for either identifying molecular anomalies in brain diseases or isolating multipotent adult stem cells that can be utilized for cell transplantation in animal models of brain trauma/disease.

설치류 또는 인간의 네이절 강한 줄기 세포를 분리

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

연구

신경과학

Preparing Undercut Model of Posttraumatic Epileptogenesis in Rodents

Partially isolated cortex ("undercut") is an animal model of posttraumatic epileptogenesis. The surgical procedure involves cutting through the sensorimotor cortex and the underneath white matter (undercut) so that a specific region of the cerebral cortex is largely isolated from the neighboring cortex and subcortical regions1-3. After a latency of two or more weeks following the surgery, epileptiform discharges can be recorded in brain slices from rodents1; and electrical or behavior seizures can be observed in vivo from other species such as cat and monkey4-6. This well established animal model is efficient to generate and mimics several important characteristics of traumatic brain injury. However, it is technically challenging attempting to make precise cortical lesions in the small rodent brain with a free hand. Based on the procedure initially established in Dr. David Prince's lab at the Stanford University1, here we present an improved technique to perform a surgery for the preparation of this model in mice and rats. We demonstrate how to make a simple surgical device and use it to gain a better control of cutting depth and angle to generate more precise and consistent results. The device is easy to make, and the procedure is quick to learn. The generation of this animal model provides an efficient system for study on the mechanisms of posttraumatic epileptogenesis.

Partially isolated cortex (&#x201C;undercut&#x201D;) is an efficient animal model of posttraumatic epileptogenesis. Here we demonstrate how to make a novel surgical device and use it to make more precise and consistent lesions to generate this model.

설치류에서 외상후 Epileptogenesis의 아래 부분을 잘라냄 모델 준비

Partially isolated cortex ("undercut") is an animal model of posttraumatic epileptogenesis. The surgical procedure involves cutting through the ...

A Fully Automated and Highly Versatile System for Testing Multi-cognitive Functions and Recording Neuronal Activities in Rodents

We have developed a fully automated system for operant behavior testing and neuronal activity recording by which multiple cognitive brain functions can be investigated in a single task sequence. The unique feature of this system is a custom-made, acoustically transparent chamber that eliminates many of the issues associated with auditory cue control in most commercially available chambers. The ease with which operant devices can be added or replaced makes this system quite versatile, allowing for the implementation of a variety of auditory, visual, and olfactory behavioral tasks. Automation of the system allows fine temporal (10 ms) control and precise time-stamping of each event in a predesigned behavioral sequence. When combined with a multi-channel electrophysiology recording system, multiple cognitive brain functions, such as motivation, attention, decision-making, patience, and rewards, can be examined sequentially or independently.

In this report, we present a fully automated and highly versatile system capable of simultaneously testing multi-cognitive behaviors and recording neuronal activities for rodents.

여러인지 기능을 테스트 및 설치류에의 연결 활동을 녹음하기위한 완전 자동화된 고도 다목적 시스템

We have developed a fully automated system for operant behavior testing and neuronal activity recording by which multiple cognitive brain functions can be ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain in adulthood and during development. Although most in vivo approaches use a craniotomy to study brain regions located on the dorsal side, brainstem regions such as the pons, located on the ventral side remain relatively understudied. The main goal of this protocol is to facilitate access to ventral brainstem structures so that they can be studied in vivo using electrophysiological and imaging methods. This approach allows study of structural changes in long-range axons, patterns of electrical activity in single and ensembles of cells, and changes in blood brain barrier permeability in neonate animals. Although this protocol has been used mostly to study the auditory brainstem in neonate rats, it can easily be adapted for studies in other rodent species such as neonate mice, adult rodents and other brainstem regions.

A surgical method is described to expose the ventral skull in neonate rats. Using this approach it is possible to open a craniotomy to perform acute electrophysiology and two-photon microscopy experiments in the brainstem of anesthetized pups.

신생아 설치류의 복부 두개골에 개두를 확인하는 방법

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the over-production of amyloid-beta and the deposition of amyloid-beta plaques in brain regions of the afflicted individuals. Throughout the years scientists have generated numerous Alzheimer&#8217;s disease mouse models that attempt to replicate the amyloid-beta pathology. Unfortunately, the mouse models only selectively mimic the disease features. Neuronal death, a prominent effect in the brains of Alzheimer&#8217;s disease patients, is noticeably lacking in these mice. Hence, we and others have employed a method of directly infusing soluble oligomeric species of amyloid-beta - forms of amyloid-beta that have been proven to be most toxic to neurons - stereotaxically into the brain. In this report we utilize male C57BL/6J mice to document this surgical technique of increasing amyloid-beta levels in a select brain region. The infusion target is the dentate gyrus of the hippocampus because this brain structure, along with the basal forebrain that is connected by the cholinergic circuit, represents one of the areas of degeneration in the disease. The results of elevating amyloid-beta in the dentate gyrus via stereotaxic infusion reveal increases in neuron loss in the dentate gyrus within 1 week, while there is a concomitant increase in cell death and cholinergic neuron loss in the vertical limb of the diagonal band of Broca of the basal forebrain. These effects are observed up to 2 weeks. Our data suggests that the current amyloid-beta infusion model provides an alternative mouse model to address region specific neuron death in a short-term basis. The advantage of this model is that amyloid-beta can be elevated in a spatial and temporal manner.

Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

마우스 해마에 올리고머 아밀로이드 - 베타의 정위 주입

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Microelectrode Guided Implantation of Electrodes into the Subthalamic Nucleus of Rats for Long-term Deep Brain Stimulation

Deep brain stimulation (DBS) is a widely used and effective therapy for several neurologic disorders, such as idiopathic Parkinson&#8217;s disease, dystonia or tremor. DBS is based on the delivery of electrical stimuli to specific deep anatomic structures of the central nervous system. However, the mechanisms underlying the effect of DBS remain enigmatic. This has led to an interest in investigating the impact of DBS in animal models, especially in rats. As DBS is a long-term therapy, research should be focused on molecular-genetic changes of neural circuits that occur several weeks after DBS. Long-term DBS in rats is challenging because the rats move around in their cage, which causes problems in keeping in place the wire leading from the head of the animal to the stimulator. Furthermore, target structures for stimulation in the rat brain are small and therefore electrodes cannot easily be placed at the required position. Thus, a set-up for long-lasting stimulation of rats using platinum/iridium electrodes with an impedance of about 1 M&#937; was developed for this study. An electrode with these specifications allows for not only adequate stimulation but also recording of deep brain structures to identify the target area for DBS. In our set-up, an electrode with a plug for the wire was embedded in dental cement with four anchoring screws secured onto the skull. The wire from the plug to the stimulator was protected by a stainless-steel spring. A swivel was connected to the circuit to prevent the wire from becoming tangled. Overall, this stimulation set-up offers a high degree of free mobility for the rat and enables the head plug, as well as the wire connection between the plug and the stimulator, to retain long-lasting strength.

A method for implanting electrodes into the subthalamic nucleus (STN) of rats is described. Better localization of the STN was achieved by using a microrecording system. Furthermore, a stimulation set-up is presented that is characterized by long-lasting connections between the head of the animal and the stimulator.

미세 전극은 장기 깊은 뇌 자극 쥐의 Subthalamic 핵에 전극의 주입을 가이드

Deep brain stimulation (DBS) is a widely used and effective therapy for several neurologic disorders, such as idiopathic Parkinson&#8217;s disease, ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may result in damage to the spinal cord caused by the dissection process. Here, we show how the spinal cord can be extruded using hydraulic pressure. Handling time is significantly reduced to only a few minutes, likely decreasing protein damage. The low risk of damage to the spinal cord tissue improves subsequent immunohistochemical analysis. By performing hydraulic spinal cord extrusion instead of traditional laminectomy, the rodents can further be used for DRG isolation, thereby lowering the number of animals and allowing analysis across tissues from the same rodent. We demonstrate a consistent method to identify and isolate the DRGs according to their localization relative to the costae. It is, however, important to adjust this method to the particular animal used, as the number of spinal cord segments, both thoracic and lumbar, may vary according to animal type and strain. In addition, we illustrate further processing examples of the isolated tissues.

Here, we present a protocol for hydraulic extrusion of the spinal cord as well as identification and isolation of specific dorsal root ganglia (DRGs) in the same rodent. Compared to standard spinal cord isolation methods, this method is significantly faster and reduces the risk of tissue damage.

설치류의 등쪽 뿌리 신경절의 척수 및 절연의 유압 압출

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Operant Protocols for Assessing the Cost-benefit Analysis During Reinforced Decision Making by Rodents

Reinforcement-guided decision making is the ability to choose between competing courses of action based on the relative value of the benefits and their consequences. This process is integral to the normal human behavior and has been shown to be disrupted by neurological and psychiatric disorders such as addiction, schizophrenia, and depression. Rodents have long been used to uncover the neurobiology of human cognition. To this end, several behavioral tasks have been developed; however, most are non-automated and are labor-intensive. The recent development of the open-source microcontroller has enabled researchers to automate operant-based tasks for assessing a variety of cognitive tasks, standardizing the stimulus presentation, improving the data recording and consequently, improving the research output. Here, we describe an automated delay-based reinforcement-guided decision-making task, using an operant T-maze controlled by custom-written software programs. Using these decision-making tasks, we show the changes in the local field potential activities in the anterior cingulate cortex of a rat whilst it performs a delay-based cost-and-benefit decision-making task.

A cost-benefit analysis is a weighing-scale approach that the brain performs during the course of decision making. Here, we propose a protocol to train rats on an operant-based decision-making paradigm where rats choose higher rewards at the expense of waiting for 15 s to receive them.

설치류에 의해 강화 결정 시 비용-이익 분석을 평가 하기 위한 작동 프로토콜

Reinforcement-guided decision making is the ability to choose between competing courses of action based on the relative value of the benefits and their ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated digital vaporizer is utilized to achieve a stable plane of anesthesia at a low-flow rate of isoflurane. A single vertebral spine is removed, and a commercially available cover-glass is overlaid on a thin agarose bed. A 3D-printed plastic backplate is then affixed to the adjacent vertebral spines using tissue adhesive and dental cement. A stabilization platform is used to reduce motion artifact from respiration and heartbeat. This rapid and clamp-free method is well-suited for acute multi-photon fluorescence microscopy. Representative data are included for an application of this technique to two-photon microscopy of the spinal cord vasculature in transgenic mice expressing eGFP:Claudin-5 &#8212; a tight junction protein.

This protocol describes implantation of a glass window onto the spinal cord of a mouse to facilitate visualization by intravital microscopy.

마우스에 있는 Laminectomy 및 척수 창 이식

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in neurocognitive disorders. Despite the popularization of prepulse inhibition (PPI) in recent years, many current protocols promote using a percent of control measure, thereby precluding the assessment of temporal processing. The present study used cross-modal PPI and gap prepulse inhibition (gap-PPI) to demonstrate the benefits of employing a range of interstimulus intervals (ISIs) to delineate effects of sensory modality, psychostimulant exposure, and age. Assessment of sensory modality, psychostimulant exposure, and age reveals the utility of an approach varying the interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function, including increases (sharper curve inflections) or decreases (flattening of the response amplitude curve) in startle amplitude. Additionally, shifts in peak response inhibition, suggestive of a differential sensitivity to the manipulation of ISI, are often revealed. Thus, the systematic manipulation of ISI affords a critical opportunity to evaluate temporal processing, which may reveal the underlying neural mechanisms involved in neurocognitive disorders.

Temporal processing, a preattentive process, may underlie deficits in higher-level cognitive processes, including attention, commonly observed in neurocognitive disorders. Using prepulse inhibition as an exemplar paradigm, we present a protocol for manipulating interstimulus interval (ISI) to establish the shape of the ISI function to provide an assessment of temporal processing.