Name: proliferation and differentiation of murine myeloid precursor 32d/g-csf-r cells
Uploaded: 2018-02-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Proliferation and Differentiation of Murine Myeloid Precursor 32D/G-CSF-R Cells at JoVE.com

저자는 교수 뤼트 Delwel 및 32D/G-CSF-R 셀 라인, 우리를 제공 하기 위한 교수가 보 Touw 및 Bosc23 셀 선 제공에 대 한 교수 다니엘 G. 되어 감사 합니다. 이 작품 MA j 체코 공화국 (GACR 15-03796S 및 GACR 17-02177S)의 그랜트의 교부 금에 의해 지원 되었다, MA-j, GA 영국 원정대 (프로젝트 번호 341015) 체코 과학 아카데미 (RVO 68378050)의 분자 유전학 연구소에서 지원 PD 프라하 찰스 대학교에서 MK, 하가 영국 원정대 (프로젝트 번호 1278217) 프라하에 있는 찰리 대학.

참고: 확장을 설명 하는 단계, 차별화, 및 32D/G-CSF-R 셀의 변환 되 게 됩니다 아래.
1입니다. 준비
<ol><li>미디어 준비
	<ol>
<li>문화 매체의 250 mL 준비: 10% 열 보충 (로스웰 파크 기념 연구소) RPMI 1640 매체 비활성화 FBS (태아 둔감 한 혈 청) 및 murine IL-3 (10 ng/mL).<ol>
<li>또는 집에서 만든 IL-3를 사용 하 여. 집에서 만든 IL 3 생산, IL-3 표현 벡터와 HEK293 세포 transduce 하 고 IL-3 표면에 뜨는22를 포함 하를 수집 합니다. 참고: 항생제, 페니실린 G 등 (100 IU/mL), 스 (100 µ g/mL), 및 gentamicin (40 µ g/mL), 달리 명시 하지 않는 한 프로토콜의 어떤 단계에서 세포 배양에 사용할 수 있습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>차별 매체의 50 mL를 준비: RPMI 1640 매체 보충 10 %FBS, 그리고 인간의 G-CSF (100 ng/mL). 참고: 모든 혈 청 일괄 지원 32D/G-CSF-R 세포의 분화 (중요). 실험 시작 전에 혈 청의 다른 배치를 테스트 합니다. 4 다른 일괄 처리를 테스트 하 고 최적의 32D/G-CSF-R 세포의 분화 능력에 따라 선택 하는 것이 좋습니다. 32D/G-CSF-R 차별화 프로토콜 아래를 참조 하십시오.</li>
		<li>냉동 매체의 10 mL를 준비: RPMI 1640 매체 보충 40 %FBS, 그리고 10 %DMSO (디 메 틸 sulfoxide).</li>
	</ol></li>
	<li>레트로 바이러스의 생산
	<ol>
<li>Bosc23 셀 (6 × 106) 16 cm 배양 접시의 단일 세포 현 탁 액을 접시 하 고 10 %FBS 문화의 confluency까지 도달 80% (24 시간)를 포함 하는 18 ml DMEM (Dulbecco의 수정이 글의 중간)의 육성. 참고: 셀 문화에 단층 및 하지 양식 수 풀에서 성장 해야 합니다. 셀 세은 (여기에 제시 된 프로토콜의 나머지 부분에 대 한 유효한) 다른 방법을 사용 하 여 수행할 수 있습니다. 샘플의 낮은 수의 경우 현미경 Bürker 챔버를 사용 하 여 수동 계산 것이 좋습니다. 이 경우에, Trypan blue를 사용 하 여 죽은 세포의 배제에 대 한. 셀 1:1 혼합 0.4 %Trypan 파랑 PBS에. 샘플의 많은 수의 계산을 수행 하려면 자동 셀 카운터를 사용할 수 있습니다.</li>
		<li>Retroviral 구문 (예: MSCV) 40 µ g, pCL 에코 (포장 벡터)23의 20 µ g, 페이 (polyethylenimine)의 80 µ l 감소-혈 청 매체 (예: Opti 메모리) (항생제) 없이 매체의 2 mL을 결합 합니다. 실 온 (RT)에서 20 분 동안이 혼합물을 품 어.</li>
		<li>신중 하 게 Bosc23 세포 매체 16 mL DMEM 2% 보완 대체 FBS. 미리 따뜻하게 사용 하기 전에 37 ° C에 매체. 참고:는 transfection 효율을 줄일 수 있습니다 그것 때문에, transfection, 동안 항생제를 사용 하지 마십시오.</li>
		<li>1.2.2에 혼합물을 추가 합니다. dropwise을 신중 하 게는 Bosc23 문화, 고 37 ° c.에 4 h에 대 한 품 어 미만 6 h 페이 독성 때문에 외피를 제한 합니다.</li>
		<li>부 화, 이후 18 ml Bosc23 매체 변경 사전 예 열 10% 포함 된 DMEM FBS, 37 ° c.에서 48 h에 대 한 셀을 육성 요리는 biosafety 수준 2 실험실에서 여기에,이 단계에서 계속 놓고 표준 안전 절차를 따르십시오.</li>
		<li>Bosc23 매체 (포함 ecotropic retroviral 입자) 50 mL 원뿔 튜브로 25 mL 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여 수집 및 4 ° c.에 저장 참고: (중요) Transfection 효율 높은 titer 바이러스 생산 90% 도달 한다.</li>
		<li>추가 18 mL 미리 따뜻하게 DMEM 10 %FBS Bosc23 세포와 24 h에 대 한 육성.</li>
		<li>1.2.6 단계를 반복 합니다. 참고: 일단 바이러스 무결성을 유지 하기 위해 동일한 온도 (4 ° C) 도달 하면 Retroviral supernatants 1.2.6 1.2.8에서 풀링된 수 있습니다.</li>
		<li>Bosc23 바이러스 supernatants 오염을 방지 하려면 스핀 4 ° c.에서 10 분 동안 1500 × g에서 수집 된 바이러스 Aliquot 바이러스, 동결 드라이 아이스 나 액체 질소를 사용 하 여 스냅 그리고-80 ° c.에 저장 그러나, 그 갓된 바이러스는 냉동된 주식 보다 감염 효율 측면에서 높은 품질의 note. 참고: (중요) 피하 반복적인 동결/녹고 바이러스, 때문에 그것은 바이러스 성 저하로 연결</li>
	</ol></li>
	<li>Lentivirus의 생산
	<ol>
<li>플레이트 HEK293T (인간 미 발달 신장 293T) 셀 (6 × 106) 16 cm 배양 접시의 단일 세포 현 탁 액 그리고 18 mL 10 %FBS 문화의 confluency까지 도달 80% (24 시간)를 포함 된 DMEM의 육성. 참고: 셀 문화에 단층 및 하지 양식 수 풀에서 성장 해야 합니다.</li>
		<li>15 µ g lentiviral 구문 (예: pGhU6), 플라스 미드 pCMVdR8.74 (개 그/폴, 12 µ g에 대 한 인코딩) 포장의 결합 및 pMD2.VSVG (1.4 µ g VSV G에 대 한 인코딩), 85.2 µ L 페이, 그리고 감소-혈 청 (항생제) 없이 매체의 2 mL. 실시간에서 20 분 동안이 혼합물을 품 어</li>
		<li>신중 하 게 2% 보완 DMEM의 16 mL HEK293T 매체를 바꿉니다 FBS. 미리 따뜻하게 사용 하기 전에 37 ° C에 매체. Transfection 효율을 줄일 수 있습니다 그것 때문에, transfection, 동안 항생제를 사용 하지 마십시오.</li>
		<li>신중 하 게 HEK293T 세포 배양에 1.3.2에 혼합물을 삭제 하 고 37 ° c.에 4 h에 대 한 품 어 페이 독성을 방지 하기 위해 6 h 이내에 부 화 기간을 제한 합니다.</li>
		<li>변경 매체 18 mL를 미리 예 열 DMEM 10% FBS 37 ° c.에서 48 h에 대 한 셀을 육성 요리는 biosafety 수준 2 실험실에서 여기에,이 단계에서 계속 놓고 표준 안전 절차를 따르십시오.</li>
		<li>HEK293T 매체 (포함 amphotropic lentiviral 입자) 50 mL 원뿔 튜브로 25 mL 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여 수집 하 고 4 ° c.에 그것을 저장합니다 참고: (중요) Transfection 효율 높은 titer 바이러스 생산 90% 도달 한다.</li>
		<li>신중 하 게 추가 미리 따뜻하게 DMEM의 18 mL 10% FBS HEK293T 셀에. 37 ° c.에 24 시간 배양</li>
		<li>1.3.6 단계를 반복 합니다. 참고: 일단 바이러스 무결성을 유지 하기 위해 동일한 온도 (4 ° C) 도달 하면 Lentiviral supernatants 1.3.6 1.3.8에서 풀링된 수 있습니다.</li>
		<li>HEK293T 세포와 바이러스 상쾌한의 오염을 방지 하려면 스핀 4 ° c.에서 10 분 동안 1500 × g에서 수집 된 바이러스 Aliquot 바이러스, 동결 드라이 아이스 나 액체 질소를 사용 하 여 스냅 그리고-80 ° c.에 그것을 저장합니다 그러나, 알 갓 바이러스 준비 냉동된 주식 보다 감염 효율 측면에서 높은 품질의. 참고: (중요) 피하 반복적인 동결/녹고 바이러스, 때문에 그것은 바이러스 성 저하로 연결</li>
	</ol></li>
	<li>GFP 기자를 포함 하는 바이러스의 적정
	<ol>
<li>씨앗 DMEM의 300 µ L에 1 × 105 NIH/3T3 세포 10% FBS 24-잘 접시에 잘 당. 7 웰 스 한 바이러스 titer에 채택 될 것입니다.</li>
		<li>37 ° C에서 바이러스를 해 동 하 고 추가 1, 5, 10, 50, 100 그리고 500 µ L 바이러스 NIH/3T3 문화. 추가 하지 마십시오 어떤 바이러스 부정적인 제어에 잘. 37 ° c.에서 48 h에 대 한 바이러스의 세포 배양</li>
		<li>NIH/3T3 세포의 트립 신/EDTA (ethylenediaminetetraacetic 산) 30 µ L를 사용 하 여 수확 (0.25 %Trypsin, PBS에 0.01 %EDTA) FACS (형광 활성화 된 세포 분류) 튜브에 250 µ L PBS에 셀을 배치 하 고.</li>
		<li>각 샘플24cytometry 여 GFP+ 세포의 주파수를 결정 합니다. Hoechst 33258 같은 생존 염료의 추가 의해 죽은 세포를 제외 합니다.</li>
		<li>GFP+ (도금된 셀 수와 GFP+ 세포의 비율에 따라), 세포의 총 숫자를 계산 하 고 바이러스 감염에 대 한 사용의 볼륨에 대 한 플롯. 참고: 감염의 (중요) 효율 도달 고원 큰 바이러스 성 복용량 적용 됩니다 때. 따라서, 그것은 효율성 선형 범위 (예를 들어 표 1에 표시 된)에서 발생 하는 어떤 감염에 바이러스 농도에 따라 titer를 추정 하는 것이 중요. GFP+ 셀 수 주어진된 바이러스 볼륨에서 기능 바이러스 성 입자 (TU-단위 변환)의 수를 나타냅니다. ML 당 투 수를 다시 계산.</li>
	</ol></li>
	<li>Puromycin 기자를 포함 하는 바이러스의 적정
	<ol>
<li>시드 3 ml DMEM의 5 × 104 NIH/3T3 세포 10% FBS 6 잘 플레이트;에 잘 당 6 우물 titer 1 바이러스를 사용 합니다. 37 ° c.에 하룻밤 문화</li>
		<li>표 2에 표시 된 대로 다음 날 바이러스 희석. 바이러스, 희석을 사용 하 여 미리 따뜻하게 DMEM 10 %FBS. 와 동 하지 마십시오.</li>
		<li>NIH/3T3 세포에서 문화 매체를 제거 하 고 희석된 바이러스의 1 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>37 ° c.에서 밤새 품 어</li>
		<li>부드럽게 바꿉니다 바이러스 포함 된 매체 미리 따뜻하게 DMEM의 2 mL 10 %FBS, 고 37 ° c.에서 밤새 품 어</li>
		<li>부드럽게 NIH/3T3 매체를 바꿉니다 미리 따뜻하게 DMEM 10 %FBS 포함 puromycin (2 µ g/mL)의 2 mL.</li>
		<li>37 ° C 그리고 puromycin 매 3 일을 신중 하 게 새로 고침 매체 또는 중간 노란색에 문화.</li>
		<li>감염 후 10-12 일, 각 우물에서 매체를 발음 하 고 PBS로 부드럽게 씻어.</li>
		<li>크리스탈 바이올렛 솔루션 (20% 에탄올과 dH2O 0.5% 크리스탈 바이올렛)의 1 mL와 stain RT, 2 분 하 고 신중 하 게 PBS와 두 번 씻어.</li>
		<li>각 잘 (X4 확대) 현미경에 파란색 식민지를 계산 합니다. 아니 식민지 부정적인 제어에 잘 관찰 해야.</li>
		<li>TU/mL 희석 요인 고려의 총 숫자를 계산 합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>2. 확장 및 32D/G-CSF-R 셀의 유지 보수
<ol><li>32D/G-CSF-R 셀이 고정 되어 있으면 한 약 수 1 분 동안 37 ° C 물 욕조에 세포를 해 동 하 고 10% 보충 미리 따뜻하게 RPMI 1640 매체의 10 mL에 직접 유리병에서 세포를 부 어 15 mL 튜브에서 FBS. 튜브 3 시간 및 400 × g.에 아래로 셀 스핀 반전 상쾌한을 제거 하 고 0.3 × 106 셀/mL의 농도에서 IL-3 포함 문화 매체에 셀 resuspend.</li>
	<li>최적의 세포 성장 농도 0.25-0.5 × 106 셀/mL. 0.1-0.2 × 10의 농도에 그들을 데리고 2 일 마다 셀 분할6 셀/mL. 참고: (중요) 32D/G-CSF-R 셀 부분적으로 그들의 능력을 1 × 106 셀/mL 이상의 농도에 성장 하는 경우를 차별화 하를 잃을 수 있습니다. 따라서, 그것은 매우 시간에 32D/G-CSF-R 셀을 분할 하는 것이 중요입니다.</li>
	<li>필요에 따라 동결 하 고 오랜 기간-80 ° C에 또는 액체 질소에 대 한 셀 aliquots를 저장 합니다. 3 × 106 셀 아래로 회전 시키십시오, 상쾌한, 제거 하 고 냉동 매체의 1 mL에 resuspend. 튜브-80 ° c.에는 냉동 컨테이너에 배치 장기 저장을 위해 액체 질소를 셀 위치를 변경할.</li>
</ol>3. 32D/G-CSF-R 셀의 변환
<ol><li>0.3 × 106 셀/mL의 농도에서 6 잘 플레이트에 플레이트 32D/G-CSF-R 셀.</li>
	<li>10과 40 사이 나 (감염의 다양성)에 도달 하는 바이러스의 적절 한 금액을 추가 합니다. 참고: 높은 MOI는 GFP+ 세포의 증가 비율으로 관심사의 유전자의 표현의 상부에서 발생 합니다. 10;의 나와 셀 0.3 × 106 감염 예: 3 × 106 화 32D/G-CSF-R 셀에 추가 해야 합니다.</li>
	<li>최종 농도 8 µ g/mL에 polybrene를 추가 하 고 37 ° c.에 6 h에 대 한 품 어 또는 스핀 접종 절차: 스윙 양동이 터를 사용 하 여 자란 접시에 30 ° C에서 90 분 동안 1200 × g에서 원심 고 37 ° c.에 3 h에 대 한 품 어</li>
	<li>수집 셀, 15 mL 튜브에 전송 하 고 5 분 (4 ° C) 450 × g에서 회전.</li>
	<li>상쾌한, 수송과 세포 배양의 6 ml에서 resuspend, T25 세포 배양 플라스 크, 고 37 ° c.에서 문화에</li>
	<li>48 h 후, 세포를 수확 하 고 5 분 (4 ° C) 450 × g에서 그들을 회전. 폐기는 상쾌한.</li>
	<li>GFP 기자 경우: 500 µ L 흐름 cytometry 정렬을 사용 하 여 PBS 및 정렬 GFP+ 셀의 셀 배치. Puromycin 기자 벡터를 포함 하는 경우: puromycin의 2 µ g/mL를 포함 하는 배양 세포 에서도.</li>
	<li>추가 분석 및 실험에 대 한 필요에 따라 셀을 확장 합니다. 참고: (선택 사항) Transduced 셀 미디어-80 ° C에서 냉동 컨테이너에서에 냉동 고 추가 액체 질소에 저장 될 수 있습니다.</li>
</ol>4. 32D/G-CSF-R 세포 확산 분석 결과
<ol><li>확산 속도 0.2 × 106 세포 배양의 1ml에 평가 하 고 37 ° c.에서 밤새 품 어를</li>
	<li>셀의 수를 계산 하는 다음 날 고 문화 매체를 사용 하 여 0.2 × 106 셀/mL의 농도에 다시 그들을 희석. 37 ° c.에서 밤새 품 어 세포 농도 및 표 3를 사용 하 여 매일 문화에 적용 하는 희석의 기록을 유지.</li>
	<li>로 확산 평가 하는 데 필요한 많은 일에 대 한 4.2 단계를 반복 합니다. 참고: 확산 분석 실험의 길이 관심사의 유전자의 영향에 따라 달라 집니다. 강한 형의 경우 8-9 일 (참조 그림 3A)는 상당한 효과 관찰 하기에 충분 한 수 있습니다. 그러나, 가벼운 표현 형의 경우 오랜 시간 필요할 수 있습니다.</li>
	<li>표 3에 표시 된 대로 확산 곡선을 함으로써 세포 성장을 평가 합니다.</li>
</ol>5. 32D/G-CSF-R 세포 감 별 법 분석 결과
<ol><li>0.2 × 106 32D/G-CSF-R 세포 cytokines 없이 RPMI 매체와 두 번 씻는 다. 참고: 문화 G-CSF의 추가 하기 전에 세척 단계 중요 하다, 때문에 잔여 일 3의 존재는 차별화를 억제 수 있습니다.</li>
	<li>1 mL 차별화 매체 (100 ng/mL G-CSF 포함)는 24 잘/접시 셀 농도 0.2 × 106 셀/mL (0 일)의 결과에 셀을 배치 합니다. 37 ° c.에 하룻밤 문화</li>
	<li>셀/mL (1.2.1 단계) 위에 표시 된의 수를 계산 합니다.</li>
	<li>Cytospin 2-5 × 104 셀 (76 X 26 mm) 유리 슬라이드에 20 × g에서 필요한 어댑터와 원심 분리기를 사용 하 여.</li>
	<li>24 잘/접시 (1 일)에 0.2 × 105 셀/mL의 농도에서 차별화 매체와 플레이트 셀을 새로 고칩니다. 오래 된 접시를 삭제 하 고 날 새로운 플레이트 5.6 단계를 진행.</li>
	<li>2 ~ 7 일에 5.3-5.5 단계를 반복 합니다. 단계 4에서에서 설명한 G-CSF의 세포 증식을 평가 합니다. 참고: (중요) 차별화, 동안 세포 증식 속도가 느려집니다, 따라서 G-CSF의 3 ~ 4 일 후 그것은 높은 농도에 문화 세포에 적절 한.</li>
	<li>셀 형태에 따라 32D/G-CSF-R 세포의 분화 상태를 평가 합니다.<ol>
<li>RT 5 분에 대 한 메탄올에 5.4 단계에서 셀을 수정 하 고 건조를 슬라이드를 둡니다. 참고: 하루 0 ~ 7에서에서 슬라이드에 RT, 저장 고 동시에 고정 될 수 있습니다. 마찬가지로, 그들은 또한 보관할 수 있습니다 RT에 고정 후 오랜 동안.</li>
		<li>5 월-그 룬 발트 Giemsa 얼룩 다음 제조 업체의 프로토콜을 사용 하 여 셀을 얼룩.</li>
		<li>확대 X40 및 현미경을 사용 하 여 얼룩진된 셀을 시각화.</li>
		<li>계량 수 폭발, 판매인 차별화 된 세포와 성숙한 granulocytes 설명 그림을 사용 하 여 그림 1 과 표 4에 설명.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

실험적인 모델의 연구의 주요 문제 중 하나입니다. 기본 인간과 동물 세포 가장 생물학적으로 관련 데이터를 생산으로, 이러한 모델 윤리적 우려를 포함할 수 있습니다 고은 종종 비싼 및 정교한 분리/배양 절차와 관련 된. 1 차 셀 숫자에 제한 됩니다 그리고 유전자 조작 하기 어렵다. 또한, 1 차 셀 데이터 해석29을 복잡 하 게 수 있습니다 다양 한 세포 유형의 구성 유형이 다른 ?...

조 혈 줄기 및 조상 인구 유기 체 세포 (호 중구, 호 산 구는, basophils, 및 monocytes) 골수성 계보에서를 포함 하 여 성숙한 셀의 큰 범위를 제공 합니다. Myelopoiesis, 조 혈 줄기 세포에서 골수성 세포의 생산을 구동 하는 과정 이라고 변화 하는 요구에 대 한 응답에서 골수성 세포로 성숙의 적절 한 생산 이며 스트레스와 유기 체의 적절 한 대처에 대 한 전제 조건 조건, 감염 등 혈액 손실입니다. 성숙한 골수성 세포의 부족 한 생산 병원 체, 감소 된 혈액 응고, 및 다른 생명을 위협 조건1,2를 발생할 수 있습니다. 또한, 골수성 혈통 개발에서 변경 관련 혈액 악성 종양, 급성 골수성 백혈병 (AML)3등 된 수도 있습니다. Myelopoiesis 변경 결함 세포 표면 수용 체4, 녹음 방송 요인5, 변경된 식에에서 장애 신호 경로6, 변이 형성의 결과로 같은 다양 한 이유로 인해 발생할 수 있습니다 / 7oncogenes 또는 종양 억제기 유전자8의 비활성화의 활성화.
다양 한 방법은 골수성 개발, 연구 하 고이 과정에서 특정 유전자 변경의 영향을 평가 개발 되었습니다. Myelopoiesis를 공부 하는 데 사용 하는 일반적인 방식 기본 세포와 유전자 변형 쥐를 포함 한다. 이러한 모델 생물학 관련 데이터의 수집을 허용, 하지만 그들은 특정 제한이 있다. 일차 전지를 사용 하 여 셀의 수를 제한 및 변경 유전자 발현 및 후속 생물 학적 또는 생화학 분석 가능성을 축소 하는 문화의 제한 기간 발생 합니다. 유전자 변형 쥐 비용이 고 생물 칭의의 합리적인 학위 필요. 또한, vivo에서 모델 작업 지정된 된 프로세스에 관심사의 유전자의 역할을 이해 복잡성의 정도 추가 합니다. 따라서, 이러한 제한을 우회 하는 대체 접근 필요 합니다. 셀 라인 명백한 이점이 있다: (1) 그들은 생 화 확 및 생물 학적 연구에 대 한 충분 한 자료를 생성 수 무제한 확산 능력을가지고, (2) 그들은 (최저, 녹아웃, 유전자 조작에 취약 overexpression), (3) 비용은 상대적으로 낮은, 그리고 (4) 그들은 생물 학적 단순화 특정 실험적인 접근에 필요한 정도의 허용.
부모의 일 3 (인터 루 킨-3) 종속 32D 셀 라인에서 친구 murine 백혈병 바이러스9C3H/HeJ 마우스 골 수 세포의 감염에 의해 Greenberger와 동료에 의해 1983 년에 설립 되었다. 여러 32D 클론 문학에서 설명 했다: cl-239, cl-310및 cl 1011. 32D cl-3 셀 IL 3에 증식 하 여 치료 granulocyte-콜로 니 자극 인자 (G-CSF)10시 neutrophilic 차별화를 받아야 표시 했다. 그와 반대로, 32D cl-10의 세포, IL-3 의존 하면서 원래 했다 하지 차별화 G-CSF 치료에 대 한 응답. 1995 년에 박사가 보 Touw의 그룹 retrovirally이 수용 체11의 기능적으로 중요 한 영역을 식별 하기 위해 야생 종류와 돌연변이 형태의 G-CSF 수용 체 (G-CSF-R) 32D cl-10 셀을 불리고. 이 연구 결과 마찬가지로 IL 3에 의존, 32D/G-CSF-R 세포의 생성 하지만 IL-3 G-CSF의 교체 후 6 ~ 10 일 이내 셀 격 증 하 고 irreversibly 성숙한 호 중구로 차별화를 중지 합니다. 이러한 속성 32D cl-3 및 2 개의 잘 정의 된 성장과 감 별 법 요인-일 3 G-CSF로 변조 수 murine neutrophilic 차별화의 32D/G-CSF-R 셀 단순화 된 모델을 확인 합니다. 지난 십년 동안 여러 그룹 사용 32D/G-CSF-R 셀 확산에 특정 유전자의 역할 및 문화12,13,,1415 에 골수성 세포의 분화 연구 , 16, 그리고 G-CSF 신호17,18공부 하. 중요 한 것은,이 셀 라인을 사용 하 여 얻은 결과 기본 세포와 유전자 변형 마우스16,19,,2021얻은 데이터와 상관 된다. 따라서, 우리가 널리 사용 하 고 잘 설립 모델, 32D/G-CSF-R 셀 골수성 차별화 병행이이 문제를 해결 하는 다른 접근에 사용 될 수 있는 연구에 귀중 한 시스템 대표 믿습니다.
여기, 상세한 프로토콜 32D/G-CSF-R 셀 라인의 처리를 설명 하는 커버 확장, 차별화, 및 확산의 평가 및 이러한 셀의 제공 됩니다. 32D/G-CSF-R 세포의 유전 수정에 대 한 자세한 정보를 retroviral 또는 lentiviral 변환 뿐만 아니라 바이러스 적정에 대 한 프로토콜에 의해 제공 됩니다. 또한, 32D/G-CSF-R 세포의 잠재적인 응용 프로그램을 보여 주는 몇 가지 대표적인 결과 제공 됩니다.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 powder medium</td><td>Merck, Kenilworth, NJ, USA</td><td>T 121-10</td><td>without NaHCO3, with L-glutamine</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td><td>15028</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td><td>31985-047</td><td>L-Glutamine, Phenol Red</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>PAA Laboratories (GE Healthcare,Chicago, IL, USA)</td><td>MT35011CV</td><td>For differentiation of 32D/G-CSF-R cells</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA</td><td>10270</td><td>Used for culturing HEK293T, NIH3T3, BOSC23 cells</td></tr><tr><td>Penicillin</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>P3032</td><td></td></tr><tr><td>Streptomycin</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>S9137</td><td>Streptomycin sulfate salt powder</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>G1914</td><td></td></tr><tr><td>murine IL-3</td><td>PeproTech, Rocky Hill, NJ, USA</td><td>213-13</td><td></td></tr><tr><td>human G-CSF</td><td>PeproTech, Rocky Hill, NJ, USA</td><td>300-23</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylenimine</td><td>Polyscience, Warrington, PA, USA</td><td>23966</td><td>Linear, MW 25,000 (PEI 25000)</td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>H9268</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>VWR Chemicals, Radnor, PA, USA</td><td>0458</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Crystal violet</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>C0775</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>T6146</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich (Merck, Kenilworth, NJ, USA)</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>May-Gr&amp;uuml;nwald Giemsa</td><td>DiaPath, Martinengo, BG, Italy</td><td>10802</td><td></td></tr></tbody></table>

proliferation and differentiation of murine myeloid precursor 32d/g-csf-r cells

조 혈 줄기와 조상 세포 생물학의 이해 재생 의학 및 혈액 병 리 치료에 대 한 중요 한 의미를 갖는다. 가장 관련성이 높은 데이터를 취득 될 수 있다 vivo에서 모델 또는 기본 문화권을 사용 하 여에 불구 하 고 조 혈 줄기와 조상 세포의 낮은 풍부 상당히 그들의 조사에 대 한 적합 한 기술을 풀을 제한 합니다. 따라서, 세포의 사용 검사 또는 큰 휴대 번호를 필요로 하는 분석의 성능에 대 한 생물학 자료의 충분 한 생산을 수 있습니다. 여기 자세한 설명, 판독, 및 myelopoiesis 및 neutrophilic 분화에 관련 된 프로세스의 조사를 위해 사용 되는 확산 및 감 별 법 분석 실험의 해석 하는 것이 선물이. 이러한 실험 32D/G-CSF-R cytokine 종속 murine 골수성 세포 선, IL-3의 확산 및 G-CSF 차별화 능력을 보유 하 고 사용 합니다. 32D/G-CSF-R 셀을 처리 하기 위한 프로토콜 최적화 제공 하며 주요 함정 및 기술된 분석 및 예상된 결과 손상 시킬 수 있는 단점에 대해. 또한,이 문서 lentiviral retroviral 생산, 적정, 및 32D/G-CSF-R 셀의 변환에 대 한 프로토콜을 포함합니다. 이 세포의 유전자 조작 기본 조 혈 줄기와 조상 세포 또는 vivo에서 모델 결과 보완할 수 있는 기능과 분자 연구를 성공적으로 수행을 채택 될 수 있다 설명 합니다.

확산 및 32D/G-CSF-R 세포의 분화
32D/G-CSF-R 프로 증식 및 프로 차별화 조건 하에서 세포의 확산을 평가, 32D/G-CSF-R 셀 IL 3, G-CSF, 각각 포함 된 미디어에서 경작 했다. IL-3 포함 매체 (10 ng/mL)에 경작 하는 세포 (그림 2A) 약 24 시간 모든 분할 관찰 되었다. G-CSF (100 ng/mL) 확산 점차적으로 감속 하 고 4 일 (<strong class="xfig"...

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Proliferation and Differentiation of Murine Myeloid Precursor 32D/G-CSF-R Cells

여기 자세한 위한 프로토콜 murine 골수성 전조 32D/G-CSF-R 셀 라인 경작, 수행 하는 바이러스 성 감염, 확산 및 감 별 법 분석 실험 수행 되 게 됩니다. 이 셀 줄은 골수성 세포 개발, 골수성 세포 성장 및 neutrophilic 분화의 유전자의 역할을 공부 하 고 적합 합니다.

확산 및 Murine 골수성 전조 32D/G-CSF-R의 셀

Understanding of the hematopoietic stem and progenitor cell biology has important implications for regenerative medicine and the treatment of ...

proliferation-differentiation-murine-myeloid-precursor-32dg-csf-r

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

9.9K 조회수.  Institute of Molecular Genetics of the ASCR. 여기 자세한 위한 프로토콜 murine 골수성 전조 32D/G-CSF-R 셀 라인 경작, 수행 하는 바이러스 성 감염, 확산 및 감 별 법 분석 실험 수행 되 게 됩니다. 이 셀 줄은 골수성 세포 개발, 골수성 세포 성장 및 neutrophilic 분화의 유전자의 역할을 공부 하 고 적합 합니다.

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A Detailed Protocol for Characterizing the Murine C1498 Cell Line and its Associated Leukemia Mouse Model

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of acute leukemia. However, the nature of this disease has not been well documented in the literature. Here, we provide a technical protocol for characterizing C1498 cells in vitro and for determining the nature of the induced leukemia in vivo. The first part of this procedure is focused on determining the hematopoietic lineage and the stage of differentiation of cultured C1498 cells. To achieve this, multi-parametric flow cytometric staining is used to detect hematopoietic cell markers. Immunofluorescence microscopy, cytochemistry and a May-Gr&#252;nwald Giemsa staining are then performed to assess the expression of myeloperoxidase, the activity of esterases and cellular morphology, respectively. The second part of this protocol is dedicated to describing the leukemia disease that is induced in vivo. The latter can be achieved by determining the frequencies of leukemic and inherent cells in the blood, hematopoietic organs (e.g., bone marrow and spleen) and non-lymphoid tissues (e.g., the liver and lungs) using specific staining and flow cytometry analyses. The nature of the leukemia is then confirmed using May-Gr&#252;nwald Giemsa staining and staining for specific esterases in the bone marrow. Here, we present the results that were obtained using this protocol in age-matched C1498- and PBS-injected mice.

This manuscript provides a technical procedure that can be used to characterize C1498 cell cultures in vitro and the acute leukemia induced in mice after their injection. Phenotypic and functional analyses are performed using flow cytometry, immunofluorescence microscopy, cytochemistry and May-Gr&#252;nwald Giemsa staining.

쥐 C1498 세포주와 관련 백혈병 마우스 모델을 특성화에 대한 자세한 프로토콜

The intravenous injection of C1498 cells into syngeneic or congenic mice has been performed since 1941. These injections result in the development of ...

연구

암 연구학

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to infection. Because these are the most potent antigen presenting cells, DCs are being increasingly used as a vaccine vector to study the induction of antigen-specific immune responses. In this video, we demonstrate the procedure for harvesting tibias and femurs from a donor mouse, processing the bone marrow and differentiating DCs in vitro. The properties of DCs change following stimulation: immature dendritic cells are potent phagocytes, whereas mature DCs are capable of antigen presentation and interaction with CD4+ and CD8+ T cells. This change in functional activity corresponds with the upregulation of cell surface markers and cytokine production. Many agents can be used to mature DCs, including cytokines and toll-like receptor ligands. In this video, we demonstrate flow cytometric comparisons of expression of two co-stimulatory molecules, CD86 and CD40, and the cytokine, IL-12, following overnight stimulation with CpG or mock treatment. After differentiation, DCs can be further manipulated for use as a vaccine vector or to generate antigen-specific immune responses by in vitro pulsing using peptides or proteins, or transduced using recombinant viral vectors. 

This video demonstrates the procedure for differentiating myeloid dendritic cells from mouse bone marrow. Isolation of mouse tibia and femur, and processing of bone marrow are demonstrated. Pictures demonstrating cell morphology before and after differentiation, and figures depicting cell phenotype and IL-12 production following maturation using CpG are shown.

골수 엽 성의 전구 물질에서 골수양 돌기 세포의 문화

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to ...

생물학

Hypoxic Preconditioning of Marrow-derived Progenitor Cells As a Source for the Generation of Mature Schwann Cells

This manuscript describes a means to enrich for neural progenitors from the marrow stromal cell (MSC) population and thereafter to direct them to the mature Schwann cell fate. We subjected rat and human MSCs to transient hypoxic conditions (1% oxygen for 16 h) followed by expansion as neurospheres upon low-attachment substratum with epidermal growth factor (EGF)/basic fibroblast growth factor (bFGF) supplementation. Neurospheres were seeded onto poly-D-lysine/laminin-coated tissue culture plastic and cultured in a gliogenic cocktail containing &#946;-Heregulin, bFGF, and platelet-derived growth factor (PDGF) to generate Schwann cell-like cells (SCLCs). SCLCs were directed to fate commitment via coculture for 2 weeks with purified dorsal root ganglia (DRG) neurons obtained from E14-15 pregnant Sprague Dawley rats. Mature Schwann cells demonstrate persistence in S100&#946;/p75 expression and can form myelin segments. Cells generated in this manner have potential applications in autologous cell transplantation following spinal cord injury, as well as in disease modeling.

Marrow stromal cells (MSCs) with neural potential exist within the bone marrow. Our protocol enriches this population of cells via hypoxic preconditioning and thereafter directs them to become mature Schwann cells.

성숙한 슈반 세포 생성을위한 골수 유래 선조 세포의 저산소 전처리

This manuscript describes a means to enrich for neural progenitors from the marrow stromal cell (MSC) population and thereafter to direct them to the ...

발생학

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine induced differentiation of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells to the four myeloid lineage cells. CD34+ cells are isolated from human umbilical cord blood and co-cultured with MS-5 stromal cells in the presence of cytokines. Immunophenotypic characterization of the stem and progenitor cells, and the differentiated myeloid lineage cells are described. Using this protocol, CD34+ cells may be incubated with small molecules or transduced with lentiviruses to express myeloid disease mutations to investigate their impact on myeloid differentiation.

Pan-myeloid Differentiation of Human Cord Blood Derived CD34+ Hematopoietic Stem and Progenitor Cells

Here, we present a protocol for immunophenotypic characterization and cytokine induced differentiation of cord blood derived CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells to the four myeloid lineages. The applications of this protocol include investigations on the effect of myeloid disease mutations or small molecules on myeloid differentiation of the CD34+ cells.

인간 코드 혈액 유래 CD34+ 조혈 줄기 및 전구 세포의 범골수성 분화

Ex vivo differentiation of human hematopoietic stem cells is a widely used model for studying hematopoiesis. The protocol described here is for cytokine ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. However, they are difficult to isolate in sufficient numbers to study them in detail, therefore, in vitro models have been developed. In vitro cultures of bone marrow-derived macrophages and dendritic cells are well-established and valuable methods for immunological studies. Here, a method for culturing and identifying both DCs and macrophages from a single culture of primary mouse bone marrow cells using the cytokine granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is described. This protocol is based on the established procedure first developed by Lutz et al. in 1999 for bone marrow-derived DCs. The culture is heterogeneous, and MHCII and fluoresceinated hyaluronan (FL-HA) are used to distinguish macrophages from immature and mature DCs. These GM-CSF derived macrophages provide a convenient source of in vitro derived macrophages that closely resemble alveolar macrophages in both phenotype and function.

Bone marrow cells cultured with granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) generate a heterogeneous culture containing macrophages and dendritic cells (DCs). This method highlights using MHCII and hyaluronan (HA) binding to differentiate macrophages from the DCs in the GM-CSF culture. Macrophages in this culture have many similarities to alveolar macrophages.

마우스 골수에서 생성 및 GM-CSF의 식별 파생 폐포와 같은 대 식세포와 수지상 세포

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

면역학 및 감염병학

Generation of Large Numbers of Myeloid Progenitors and Dendritic Cell Precursors from Murine Bone Marrow Using a Novel Cell Sorting Strategy

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have recently been recognized to be more heterogeneous than previously appreciated. These cultures routinely contain moDC as well monocyte-derived macrophages (moMac), and even some less developed cells such as monocytes. The goal of this protocol is to provide a consistent method for identification and separation of the many cell types present in these cultures as they develop, so that their specific functions may be further investigated. The sorting strategy presented here separates cells first into four populations based on expression of Ly6C and CD115, both of which are expressed transiently by cells as they develop in GM-CSF-driven culture. These four populations include Common myeloid progenitors or CMP (Ly6C-, CD115-), granulocyte/macrophage progenitors or GMP (Ly6C+, CD115-), monocytes (Ly6C+, CD115+), and monocyte-derived macrophages or moMac (Ly6C-, CD115+). CD11c is also added to the sorting strategy to distinguish two populations within the Ly6C-, CD115- population: CMP (CD11c-) and moDC (CD11c+). Finally, two populations may be further distinguished within the Ly6C-, CD115+ population based on the level of MHC class II expression. MoMacs express lower levels of MHC class II, while a monocyte-derived DC precursor (moDP) expresses higher MHC class II. This method allows for the reliable isolation of several developmentally distinct populations in numbers sufficient for a variety of functional and developmental analyses. We highlight one such functional readout, the differential responses of these cell types to stimulation with Pathogen-Associated Molecular Patterns (PAMPs).

Here we provide a method for identifying and isolating large numbers of GM-CSF driven myeloid cells using high speed cell sorting. Five distinct populations (Common myeloid progenitors, granulocyte/macrophage progenitors, monocytes, monocyte-derived macrophages, and monocyte-derived DCs) can be identified based on Ly6C and CD115 expression.

골수성 창시자 및 정렬 전략 소설 셀을 사용 하 여 Murine 골에서 수지상 세포 선구자의 큰 숫자의 생성

Cultures of monocyte-derived dendritic cells (moDC) generated from mouse bone marrow using Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF) have ...

Identification and Isolation of Oligopotent and Lineage-committed Myeloid Progenitors from Mouse Bone Marrow

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for hematological and immunological analyses. For example, studies of the cellular and molecular properties of myeloid progenitor populations can reveal mechanisms underlying leukemic transformation, or demonstrate how the immune system responds to pathogen exposure. Previously described flow cytometry strategies for myeloid progenitor identification have enabled significant advances in many fields, but the fractions they identify are very heterogeneous. The most commonly used gating strategies define bone marrow fractions that are enriched for the desired populations, but also contain large numbers of &#34;contaminating&#34; progenitors. Our recent studies have resolved much of this heterogeneity, and the protocol we present here permits the isolation of 6 subpopulations of oligopotent and lineage-committed myeloid progenitors from 2 previously described bone marrow fractions. The protocol describes 3 stages: 1) isolation of bone marrow cells, 2) enrichment for hematopoietic progenitors by magnetic-activated cell sorting (lineage depletion by MACS), and 3) identification of myeloid progenitor subsets by flow cytometry (including fluorescence-activated cell sorting, FACS, if desired). This approach permits progenitor quantification and isolation for a variety of in vitro and in vivo applications, and has already yielded novel insight into pathways and mechanisms of neutrophil, monocyte, and DC differentiation.

We demonstrate how to identify and isolate 6 subsets of myeloid progenitors from murine bone marrow using a combination of magnetic and fluorescence sorting (MACS and FACS). This protocol can be used for in vitro culture assays (methylcellulose or liquid cultures), in vivo adoptive transfer experiments, and RNA/protein analyses.

식별 및 Oligopotent 및 계보 커밋된 골수성 창시자 마우스 골 수에서 격리

Myeloid progenitors that yield neutrophils, monocytes and dendritic cells (DCs) can be identified in and isolated from the bone marrow of mice for ...

Development and Functional Characterization of Murine Tolerogenic Dendritic Cells

The immune system operates by maintaining a tight balance between coordinating responses against foreign antigens and maintaining an unresponsive state against self-antigens as well as antigens derived from commensal organisms. The disruption of this immune homeostasis can lead to chronic inflammation and to the development of autoimmunity. Dendritic cells (DCs) are the professional antigen-presenting cells of the innate immune system involved in activating na&#239;ve T cells to initiate immune responses against foreign antigens. However, DCs can also be differentiated into TolDCs that act to maintain and promote T cell tolerance and to suppress effector cells contributing to the development of either autoimmune or chronic inflammation conditions. The recent advancement in our understanding of TolDCs suggests that DC tolerance can be achieved by modulating their differentiation conditions. This phenomenon has led to tremendous growth in developing TolDC therapies for numerous immune disorders caused due to break in immune tolerance. Successful studies in preclinical autoimmunity murine models have further validated the immunotherapeutic utility of TolDCs in the treatment of autoimmune disorders. Today, TolDCs have become a promising immunotherapeutic tool in the clinic for reinstating immune tolerance in various immune disorders by targeting pathogenic autoimmune responses while leaving protective immunity intact. Although an array of strategies has been proposed by multiple labs to induce TolDCs, there is no consistency in characterizing the cellular and functional phenotype of these cells. This protocol provides a step-by-step guide for the development of bone marrow-derived DCs in large numbers, a unique method used to differentiate them into TolDCs with a synthetic triterpenoid 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic acid-difluoro-propyl-amide (CDDO-DFPA), and the techniques used to confirm their phenotype, including analyses of essential molecular signatures of TolDCs. Finally, we show a method to assess TolDC function by testing their immunosuppressive response in vitro and in vivo in a preclinical model of multiple sclerosis.

Here, we present a protocol to develop and characterize tolerogenic dendritic cells (TolDCs) and evaluate their immunotherapeutic utility.

개발 및 Murine Tolerogenic 수지상 세포의 기능적 특성

The immune system operates by maintaining a tight balance between coordinating responses against foreign antigens and maintaining an unresponsive state ...

의학

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation of an adaptive immune response. Experimental work with these cells is rather challenging. Their abundance in organs and tissues is relatively low. As a result, they cannot be isolated in large numbers. They are also difficult to transfect with cDNA constructs. In the murine model, these problems can be partially overcome by in vitro differentiation from bone marrow progenitors in the presence of M-CSF for macrophages or GM-CSF for dendritic cells. In this way, it is possible to obtain large amounts of these cells from very few animals. Moreover, bone marrow progenitors can be transduced with retroviral vectors carrying cDNA constructs during early stages of cultivation prior to their differentiation into bone marrow derived dendritic cells and macrophages. Thus, retroviral transduction followed by differentiation in vitro can be used to express various cDNA constructs in these cells. The ability to express ectopic proteins substantially extends the range of experiments that can be performed on these cells, including live cell imaging of fluorescent proteins, tandem purifications for interactome analyses, structure-function analyses, monitoring of cellular functions with biosensors and many others. In this article, we describe a detailed protocol for retroviral transduction of murine bone marrow derived dendritic cells and macrophages with vectors coding for fluorescently-tagged proteins. On the example of two adaptor proteins, OPAL1 and PSTPIP2, we demonstrate its practical application in flow cytometry and microscopy. We also discuss the advantages and limitations of this approach.

In this article, we provide a detailed protocol for the expression of fluorescent fusion proteins in murine bone marrow derived dendritic cells and macrophages. The method is based on the transduction of bone marrow progenitors with retroviral constructs followed by differentiation into macrophages and dendritic cells in vitro.

Murine 골 수 유래 수지상 세포와 대 식 세포에 형광 성 융해 단백질의 표정

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Activation of Mouse Bone Marrow-Derived Macrophages in Response to Antibodies

Source: Kozicky, L. et al., <a href="https://app.jove.com/v/56689">Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation.</a> J. Vis. Exp. (2017)
In this video, we demonstrate the activation of bone marrow-derived macrophages in response to bacterial lipopolysaccharide and intravenous immunoglobulin.

항체에 반응하는 마우스 골수 유래 대식세포의 활성화(Activation of mouse bone marrow-derived macrophages in response to antibos)

Source: Kozicky, L. et al., Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation. J. Vis. Exp. (2017)
In ...