Name: the effect of the application of thyme essential oil on microbial load during meat drying
Uploaded: 2018-03-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
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이 작품은 열 대 AgriSciences의 학부의 내부 부여 기관에 의해 지원 되었다 (프로젝트 번호: 20175013)와 둘 다 생명 과학의 체코 대학에서 부여 CIGA 20182023.

1. 고기 준비
<ol><li>로컬 도살에서 쇠고기 (신선한 쇠고기 팔 뚝 femoris)의 짧은 허리를 얻을 하 고 실험실에 전송. 참고:이 좋습니다 주위 온도 (20-25 ° C)에서 쇠고기의 허리를 수송 하지 연금술 봉인된 봉투에 20 분 이상에 대 한.</li>
	<li>10 70% (v/v) 에탄올을 분사 하 여 근육 층 류 안전 캐비닛, 쇠고기 근육의 외부 표면 소독 세척 s 500 mL의 짜기 병을 사용 하 여. 근육 표면 1 c m2 당 에탄올의 0.025 g을 적용 합니다.</li>
	<li>Aseptically 근육 내부에 남아 있는 에탄올을 피하기 위해 칼으로 고기의 외부 표면을 제거 합니다. 근육의 표면 균일도 유지 하는 근육 내부 약 3 m m를 제거 합니다.</li>
	<li>패키지 봉인된 된 비닐 봉투에 근육 하 고 냉동 실에 그것을 전송.</li>
	<li>1 일-18 ° C에서 근육을 저장 합니다. 다음, 6 h 4 ° C에서 냉동된 근육 녹여. 참고: 녹고, 그것 것이 좋습니다 냉장고에 냉동 실에서 근육을 이동.</li>
	<li>층 류 안전 캐비닛, 각 근육 고기 커터 0.5 cm 두꺼운 조각으로 슬라이스. 다음, 칼으로 잘라 작은 5 × 2.5 c m로2 직사각형 샘플.</li>
	<li>비닐 봉지에 사각형 고기 샘플을 패키지 하 고 나중에 사용에 대 한-18 ° C에서 냉동 실에 보관.</li>
</ol>2. 표준화 된 Inoculum 및 층 류 안전 캐비닛에 접종 절차 준비
<ol><li>표준화 된 inoculum (1.5 × 108 CFU/mL)의 대장균 ATCC 25922 접종 고기 샘플을 준비 합니다.<ol>
<li>재고 inoculum의 준비를 위해 먼저 10 mL의 멸 균된 버퍼링 뮬러 힌 튼 국물 (BMHB)으로 pre-filled 15 mL 소독된 튜브에 동결 건조 된 세균성 문화 (공급 업체에 의해 제공) 분배. 37 ° c.에 24 h에 대 한이 정지를 육성<ol>
<li>다음과 같이 세균 재고 솔루션을 준비: 걸릴 약 0.1-0.2 mL 세균 현 탁 액 및 20 mL 유리병에 희석 폐쇄 고무 마 개와 함께 사전 멸 균된 BMHB의 15 mL 가득 알루미늄 캡. 37 ° c.에 24 h에 대 한이 정지를 육성</li>
			<li>냉장고 내부에 표준화 된 inoculum의 준비를 위한 4 ° C에서 저장 합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>재고 솔루션 (2.1.1 단계 참조) 전자 대장균 의 약 0.1-0.2 mL 세균 현 탁 액 및 15 mL 플라스틱에 희석 소독 튜브 미리 10 mL의 멸 균된 버퍼링 뮬러 힌 튼 국물 (BMHB)으로 가득. 24 h에 대 한 37 ° C에서 튜브를 품 어.</li>
		<li>표준화 inoculum (1.5 × 108 CFU/mL)의 준비를 위해 미리 멸 균된 BMHB의 10 mL 가득 15 mL 소독된 튜브에이 서 스 펜이 션의 작은 금액을 추가 합니다.</li>
		<li>철저 하 게 소용돌이 혼합물 및 측정 광학 밀도 (OD) 600에 의해 농도계32nm.</li>
		<li>단계 2.1.3-2.1.4 맥 팔 랜드 값 0.5 깨끗 한 BMHB의 가치에 비해 증가 표현 OD까지를 반복 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>접종 절차에 대 한 두 개의 다른 알루미늄 포 일 (20 cm x 30 cm), 컨트롤 샘플 및 접종된 고기 샘플에 대 한 두 번째에서에서 사각형 고기 샘플을 놓습니다.<ol>
<li>두 번째 알루미늄 호 일 동안 표면에 inoculum을 균등 하 게 배포 하 여 원시 사각형 고기 샘플 (이 1.2 × 108 CFU 고기 샘플 당에 해당) 선택한 긴장의 박테리아 정지의 800 µ L 접종.<ol>
<li>400 µ L 샘플의 1 개의 측에 플라스틱 하 고 부드럽게 표면에 살 균 셀 스프레더를 사용 하 여 확산. 샘플의 10 분 반복 반대편에 서 스 펜 션의 나머지 부분에 대 한 동일한 절차 동안 건조 하자.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 건조와 테오 응용 프로그램
<ol><li>건조 기를 층 류 안전 캐비닛에서 사각형 고기 샘플 포함 모두 알루미늄 포 일 전송: 각각의 알루미늄 호 일을 커버 하 고 다음 장소 건조 기 내부 샘플.</li>
	<li>표준 실험실 건조 기에 건조를 실시 합니다. 참고: 먼저, 55 ° c 오븐을 예 열 이 절차는 20 분 동안 지난 수 있습니다.<ol>
<li>건조 공기 상대 습도 값은 30-45%와 55 ℃에서 6 h에 대 한 제어 샘플을 건조. 참고: 건조 공기 상대 습도 값에 고기에서 액체의 증발 속도 따라 다릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>적용, 테오의 볼륨을 계산 하 고 드라이어 볼륨 (mL/L 공기) 당 테오의 볼륨으로 에센셜 오일의 농도 표현. 예를 들어 53 L (건조 기의 볼륨)에 테오의 1.5 mL의 복용량 0.028 mL/L의 농도에서 발생합니다. 대장균에 대 한 테오의 마이크를 결정, 1.5 mL (0.028 mL/L 공기), 1 mL (0.019 mL/L 공기), 0.75 mL (0.014 mL/L 공기)의 복용량을 사용 합니다.</li>
	<li>건조 하 고, 전에 테오의 응용 프로그램 (주요 복합 79%로 티)와 증기 담가 테오와 장소의 1.5 mL 복용량 필터 종이 (12 cm x 20 cm) 팬 앞 건조 기에.</li>
	<li>컨트롤 샘플 (3.1, 3.2 단계)에 대해서 동일한 절차를 사용 하 여 처리 하는 테오 고기 샘플을 건조. 참고: 건조 과정 끝과 샘플 제거 후 80 ° C에서 3 h 동안 오븐에 전환 하 고 오븐에서 에센셜 오일 잔류물을 청소 하기 위하여 100% 공기 환기에 공기 밸브 표시를 설정 합니다.</li>
</ol>4. 미생물 분석
<ol><li>박테리아와 고기 접종 하기 전에 어떤 혼합물에 대 한 고기 샘플을 검사 합니다. 점액의 모양과 어떤 강하고 매운 냄새의 탐지는 고기 부패의 지표. 텍스처는 칙칙한 느낌이 든다면, 박테리아는 고기 표면에 증식 하기 시작 했습니다 수 있습니다.</li>
	<li>접종 효율성 평가, 대장균 ATCC 25922의 존재에 대 한 원시 접종된 샘플을 테스트 하 고 건조 절차 전에 비 주사 제어 샘플 들을 비교 합니다. 이 위해:<ol>
<li>각 고기 샘플 (2 제어 샘플 및 2 접종된 샘플)을 씻어. 7-7.3에서 pH 범위 (w/v)를 1시 10분의 비율로 버퍼링된 펩 물 (8.5 g의 NaCl, 펩의 1 g, 인산 염 버퍼 식 염 수의 5 정제와 물 1 L에 폴 80의 1 g)로 소독된 플라스 크에 각 고기 샘플을 일시 중단 합니다. 실 온에서 10 분 동안 140 rpm에서 통을 사용 하 여 흔들. 참고: 즉시 접종 절차 후 세척입니다.</li>
		<li>조정 6 × 6 드롭 프로시저가 접시 첸, Nace, 어윈33 판 수 한 천 (PCA)와 MacConkey 한 천 (MCA)에 의해 요약 된 박테리아의 수를 평가 합니다. 참고: 6 × 6 드롭 메서드를 사용 하 여 국물 마이크로 희석 방법 10 직렬 희석 집중 하 고 더 경제적인 종래의 방법33, 에 비해 더 적은 노동은 멀티 채널 피 펫과 조사 샘플의 준비 34.</li>
		<li>대장균의 평가 대 한 6 × 6 드롭 판 절차에 의해 10 직렬 샘플 희석을 육성. 참고: 특히 대 한 방울-재배 사용 6 5 µ L, 6 × 6 드롭 메서드를 6 선택 멀티 채널 피 펫과 조사 샘플의 희석. 적절 하 게 건조 배양 접시에 방울은 agar에 신속 하 게 흡수 하 고 매우 편리 하 고 관리34는이 방법으로 설치 합니다.</li>
		<li>24 h에 대 한 37 ° C에서 배양 접시를 품 어. 섹션 5에에서 설명 된 대로 재배 기간 후 대장균 의 배양 접시 (CFU g-1 의 말린된 고기)에 식민지의 수를 평가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>건조, 후 두 접종된 말린된 샘플 고 그들 두 말린된 비 주사 제어 샘플을 비교 가능한 대장균, 각각. 이러한 4 개의 s더의 대장균 의 존재 여부를 확인 하려면 다음과 같이 각 고기 샘플의 사전 농축 과정을 수행:<ol>
<li>버퍼링 된 펩 물 소독된 플라스 크에 고기 샘플 각 중단 (참조 단계 4.2.1) 140 rpm에서 통을 사용 하 여 실 온에서 10 분 동안 흔들어. 다음 사전 농축 6 h 동안 37 ° C에서 각 플라스 크를 품 어.</li>
		<li>평가 및 박테리아의 경작, 4.2.4 4.2.2-단계에서 설명한 대로 동일한 절차를 따릅니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 결과 검토
<ol><li>부 화 완료 후 인큐베이터에서 배양 접시를 제거 하 고 다음과 같은 결과 검토:<ol>
<li>식민지의 총 수를 평가 하려면 PCA (흰 반점) 및 일반 대장균 mesophilic 호 기성 박테리아의 존재에 대 한 번호판을 검사 MCA에 식민지 (어두운 분홍색 빨간색). 병원 체 결 석 인 경우 두 agars 성장이 제시.</li>
		<li>식민지를 계산 하 고 대장균 (CFU/g-1 의 말린된 고기) 존재의 양을 결정 합니다. 참고: 드롭 (그림 1) 당 30 이하의 식민지를 포함 하는 두 개의 연속 희석에 식민지 (N)의 수를 계산 합니다. 말린 고기 CFU/g-1 의 수 N 다음과35 로 결정 됩니다. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57054/57054eq1.jpg"> 어디, C 는 계산 하는 모든 상품에 식민지의 합계, v 는 드롭 (여기, 0.05 mL) 당 사용 하는 샘플 희석의 볼륨, n1 은 첫 번째 희석에서 사용 하는 상품의 수, n2 방울의 수는 두 번째 희석에서 사용 하 고 d 는 첫 번째 카운트 캡처된 희석을 나타냅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>생물학적 데이터를 분석 하려면 CFU g-1 를 기록 하 고 치료36의 주요 효과 대 한 그들을 분산 분석 (ANOVA)을 주제로 식민지의 수를 변환 합니다.<ol>
<li>여러 의미 비교36 Tukey 정직한 상당한 차이가 테스트 (Tukey HSD)를 수행 하 고 치료의 중요 한 차이점을 확인.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Eklund, M. W., Peterson, M. E., Poysky, F. T., Paranjpye, R. N., Pelroy, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+bacterial+pathogens+during+processing+of+cold-smoked+and+dried+salmon+strips.">Control of bacterial pathogens during processing of cold-smoked and dried salmon strips.</a> J. Food Prot. 67 (2), 347-351 (2004).</li><li>Mahmoud, B. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservative+effect+of+combined+treatment+with+electrolyzed+NaCl+solutions+and+essential+oil+compounds+on+carp+fillets+during+convectional+air-drying.">Preservative effect of combined treatment with electrolyzed NaCl solutions and essential oil compounds on carp fillets during convectional air-drying.</a> Int. J. Food Microbiol. 106 (3), 331-337 (2006).</li><li>Rahman, M. 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J. Food Microbiol. 94 (3), 223-253 (2004).</li><li>Ramanathan, L., Das, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+control+of+lipid+oxidation+in+ground+fish+by+some+polyphenolic+natural+products.">Studies on the control of lipid oxidation in ground fish by some polyphenolic natural products.</a> J. Agric. Food Chem. 40 (1), 17-21 (1992).</li><li>Yamazaki, K., Yamamoto, T., Kawai, Y., Inoue, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+antilisterial+activity+of+essential+oil+constituents+by+nisin+and+diglycerol+fatty+acid+ester.">Enhancement of antilisterial activity of essential oil constituents by nisin and diglycerol fatty acid ester.</a> Food Microbiol. 21 (3), 283-289 (2004).</li><li>Garc&#237;a-D&#237;ez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+activity+of+essential+oils+from+herbs+and+spices+used+on+meat+products+against+food+borne+pathogens.">Synergistic activity of essential oils from herbs and spices used on meat products against food borne pathogens.</a> Nat. Prod. Commun. 12 (2), 281-286 (2017).</li><li>Hussein Hamdy Roby, M., Atef Sarhan, M., Abdel-Hamed Selim, K., Ibrahim Khalel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+antioxidant+activity,+total+phenols+and+phenolic+compounds+in+thyme+(Thymus+vulgaris+L.),+sage+(Salvia+officinalis+L.),+and+marjoram+(Origanum+majorana+L.)+extracts.">Evaluation of antioxidant activity, total phenols and phenolic compounds in thyme (Thymus vulgaris L.), sage (Salvia officinalis L.), and marjoram (Origanum majorana L.) extracts.</a> Ind. Crops Prod. 43, 827-831 (2013).</li><li>Gouveia, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Antimicrobial+Effect+of+Essential+Oils+Against+Listeria+monocytogenes+in+Sous+vide+Cook-Chill+Beef+during+Storage.">The Antimicrobial Effect of Essential Oils Against Listeria monocytogenes in Sous vide Cook-Chill Beef during Storage.</a> J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).</li><li>Chen, C., Nace, G., Irwin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+6+x+6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni,+Listeria+monocytogenes,+and+Escherichia+coli.">A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> J. Microbiol. Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li><li>Herigstad, B., Hamilton, M., Heersink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+optimize+the+drop+plate+method+for+enumerating+bacteria.">How to optimize the drop plate method for enumerating bacteria.</a> J. Microbiol. Methods. 44 (2), 121-129 (2001).</li><li>. Practical food microbiology Available from: <a target="_blank" href="https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019">https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019</a> (2003)</li><li>Smith-Palmer, A., Stewart, J., Fyfe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+properties+of+plant+essential+oils+and+essences+against+five+important+food-borne+pathogens.">Antimicrobial properties of plant essential oils and essences against five important food-borne pathogens.</a> Lett. Appl. Microbiol. 26 (2), 118-122 (1998).</li><li>Burt, S. a., Reinders, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+of+selected+plant+essential+oils+against+Escherichia+coli+O157:H7.">Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli O157:H7.</a> Lett. Appl. Microbiol. 36 (3), 162-167 (2003).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이전 연구는 음식 관련 질병을 일으키는 미생물 건조10생존을 보이고 있다. 그것은 따라서 식품 안전을 보장 하기 위해서 건조 하기 전에 방부 제를 적용 하는 데 필요한입니다. 이 연구에서 우리는 테오를 사용 하 여에 집중 한다. 이유는 두 가지 이다: 먼저, 개선 식품 품질16; 대체 첨가물으로 천연 제품을 사용 하는 소비자에서 수요는 둘째, 이전 연구 OEO 고기 ...

건조 식품을 보존 하기 위해 전통적인 방법으로는 고 대부터 사용 되었습니다. 요즘, 식품 보존1,2,3에 대 한 효과적인 방법으로 건조에 관심이 있다. 다양 한 특수 처리 된 고기를 만들기 위해 사용 됩니다. 가장 잘 알려진 중 하나입니다 육 포입니다.
경화 및 낮은 물 활동에 건조를 기반으로 하는 육 포, 고기 보존에 대 한 가장 오래 된 방법 중 하나 및 그러므로 그것의 수명을4확장 하. 요즘, 보존된 치유 고기는 여전히 매우 인기 있는 육 포, 어디 식품 안전, 맛, 질감은 필수품입니다. 육 포 준비 고기, 쇠고기, 돼지고기, 닭고기, 또는 게임5를 포함 하 여 거의 모든 종류에 사용할 수 있습니다 그리고 마른 스트립에 고기를도 마와 건조 필요 합니다. 일반적으로, 치료 솔루션 또는 흡연에 고기 marinating 사용 됩니다 건조 함께 주고 육 포의 특징적인 맛6.
진정으로 보존 식품을 건조의 광대 한 관심에도 불구 하 고 제대로 말린된 고기에서 대장균 , 식중독 발생의 위험이 중요 하 고 제어할 수 필요 합니다. 일부 연구 대장균 O157:H7, 부적절 한 열 처리 집 건조 하는 동안에와 특히 식중독 위장염 발발을 보고 있다. 비슷한 경우에도 상업적으로 육 포7,,89준비 생겼다. 레빈 외. 10 식중독 미생물 적당 한 건조 조건 (약 60 ° C) 상업 육 포 생산자에 의해 사용을 살아남을 수 있다고 제안 했다. E. 콜라이 O157:H7는 1990 년대의 한가운데에 음식 관련 질병의 발생 지상 말린 고기 제품6,11에 기인 했다. 흥미롭게도, 모든 이전 경우에서 주요 위험 비 culturable (VBNC)만 가능한 것으로 인식 하는 세균성 병원 체에 의해 발생 합니다. 온도 변화 또는 기아 등 다양 한 스트레스에서 대장균 세포 VBNC 상태12,13로 알려진 특정 상태를 입력할 수 있습니다. VBNC 셀 다음 적당 한 조건에 노출에 의해 culturable 셀에 다시 회복 될 수 있습니다 그리고 식중독 오염14,15인해 인간의 건강을 위협 하는 존재. 즉, 고기 제품을 건조 후 즉시 사용 하는 경우 안전 하다. 그러나, 증가 습도 등 부적 절 한 스토리지의 경우 병원 균 및 미생물 성장의 재 활성화의 높은 위험이 있다.
건조와 마리 네 이드 방법 외 첨가물 대신 천연 제품을 사용 하 여 식품 품질16,17개선에 소비자 로부터 높은 수요가 있다. 고전적인 합성 방부 제18,19,,2021대신 고기에 대 한 자연 식품 첨가제의 응용 프로그램에 특별 한 관심이 되었습니다. 비록 고기를 건조 할 때 에센셜 오일의 사용에 충분 한 실험적 증거의 부족이 있다,이 분야의 초기 연구는 이미 긍정적인 결과22,23보여 줍니다.
중세 시대부터 사람들이 그들의 항균, 살 충 용, 그리고 날짜인 chracteristics24,,2526에 대 한 에센셜 오일 화합물 (EOCs) 인식 했다. 오늘, EOCs 천연 생리 활성 화합물의 가장 중요 한 그룹 중 하나의 일부입니다. 다른 EOCs 중 티는 가장 잘 알려진 중 하나입니다. 그것은 테오23의 85% 이상 구성 됩니다. 이 페 놀은 음식에 추가 될 때 미생물 및 화학 저하를 방지 합니다. 또한 항균 속성 다른 천연 방부 제2,,2728,29,30와 함께에서 향상 될 수 있습니다. 요즘, 백 리 향 (Thymus vulgaris), 꿀풀과 가족에 속하는 허브 매우 효과적 고기 방부 제31뿐만 아니라 맛 내기 요원으로 인정을 받고 있다. 가르시아-Díez 외에의해 연구. 육류 제품에 30 테오 다른 에센셜 오일에 비해 foodborne 병원 체에 대 한 광범위 한 금지 패턴 표시 발견. 따라서, 말린된 고기 값을 증가 하 고 건조 과정에서 에센셜 오일을 적용 하 여 음식 관련 질병의 위험을 줄일 수 있는 기회가입니다.
이 프로토콜에서 우리 고기 건조 동안 테오 적용의 새로운 방법을 제시, 챔버는 건조에 직접 증기 형태로 구체적으로 그것을 사용 하 여. 평가, 우리는 원시 사람에 비해 치료 샘플에서 병원 성 박테리아의 부재를 확인 하려면 마이크를 사용 합니다. 예비 결과이 방법은 합성 방부 제에 대 한 매우 효과적인 대안 그리고 그것은 크게 말린된 고기 미생물 부하 감소를 보여준다.

<table><tbody><tr><td>Meat cutter</td><td>Kalorik</td><td>KP 3530</td><td>from Miami Gardens, FL, USA</td></tr><tr><td>Laminar safety cabinet</td><td>Faster s.r.l</td><td></td><td>from Italy</td></tr><tr><td>Squeeze bottle of 500 mL</td><td>Merci</td><td>632 524 325 025</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Standard laboratory drier UFE 400</td><td>Memmert</td><td>DE 66812464</td><td>from Germany</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>BT 120</td><td>N/A</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Refrigerator and Freezer</td><td>Bosch</td><td>KGN34VW20G</td><td>from DE</td></tr><tr><td>Densitometer</td><td>Biosan</td><td>220 000 050 122</td><td>Latvia; supplier Merci, CZ</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Escherichia coli&lt;/em&gt; ATCC 25922</td><td>Oxoid</td><td>CL7050</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Chromservis</td><td>22008013</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Sterilized plastic tubes 15 mL</td><td>Gama</td><td>331 000 020 115</td><td>from CZ, supplier Merci</td></tr><tr><td>20 mL injection vial</td><td>Healthy vial</td><td>hvft169</td><td>from China</td></tr><tr><td>20 mm sterile butyl rubber stopper</td><td>Merci</td><td>22008013</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>20 mm aluminum cap</td><td>Healthy vial</td><td>N/A</td><td>from China</td></tr><tr><td>Thyme essential oil</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W306509</td><td>from St Louis, MO, USA</td></tr><tr><td>Mueller Hinton Broth</td><td>Oxoid</td><td>CM0337</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Penta</td><td>16610-31000</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Oxoid</td><td>LP0034</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Polysorbate 80 (Tween 80)</td><td>Roth</td><td>T 13502</td><td>from DE, supplier P-lab</td></tr><tr><td>Shaker SHO-1D</td><td>Verkon</td><td>DH.WSR04020</td><td>from CZ,&amp;nbsp; 10 - 300 rpm. 350 x 350 mm with a platform for flasks</td></tr><tr><td>Ethanol 70%</td><td>Bioferm</td><td>N/A</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>MacConkey Agar</td><td>Oxoid</td><td>CM007</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Plate Count Agar</td><td>Oxoid</td><td>CM0325</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>Merci</td><td>480 622 080 040</td><td>from CZ</td></tr><tr><td>Erlenmeyer flasks 250 mL</td><td>Simax</td><td>610 002 122 636</td><td>from CZ; supplier Merci CZ</td></tr><tr><td>Multichannel pipette</td><td>Socorex</td><td>S852820</td><td>from Switzerland; supplier P lab, CZ</td></tr><tr><td>Microtiter plate</td><td>Gamma</td><td>V400916</td><td>CZ</td></tr><tr><td>Microlitre pipette 100-1000 &amp;mu;L</td><td>Eppendorf</td><td>333 120 000 062</td><td>from Germany; supplier Merci, CZ</td></tr></tbody></table>

the effect of the application of thyme essential oil on microbial load during meat drying

고기는 보존과 안전은 중요 한 육 포, 음식 식사의 준비에 사용 되는 고 단백 식사입니다. 식품 안전 보장을 하 고기 및 육류 제품의 수명 연장, 합성 또는 천연 방부 제를 사용 하 여 컨트롤에 적용 된 고 식중독 박테리아를 제거. 고기에 대 한 자연 식품 첨가제의 응용 프로그램에 관심이 점점 증가 했다. 미생물, 대장균, 등 고기 및 육류 제품, foodborne 병을 일으키는 오염. 따라서, 그것은 고기 보존 프로세스를 개선 하는 데 필요한입니다. 그러나, 고기는 건조 되 고 때 에센셜 오일의 사용은 하지 깊이 연구 되었습니다. 이와 관련, 말린된 고기 값을 증가 하 고 건조 과정에서 에센셜 오일을 적용 하 여 음식 관련 질병의 위험을 줄일 수 있는 기회가입니다. 이 프로토콜에서 우리 고기 건조, 건조 챔버에 직접 증기 형태로 특히 동안 백 리 향 에센셜 오일을 (테오) 적용의 새로운 방법을 제시. 평가, 우리는 원시 샘플에 비해 치료 샘플에서 해로운 박테리아의 수를 검색 하기 위해 최소 억제 농도 (MIC)를 사용 합니다. 예비 결과이 방법은 합성 방부 제를 가능한 대체 옵션 그리고 그것은 크게 말린된 고기 미생물 부하 감소를 보여준다.

우리 먼저 이전 개발 했다이 방법은 식품 안전을 강화 하 고 말린된 고기 값을 증가에 오 레가 노 에센셜 오일 (OEO)를 사용 하 여. 일반적으로, 이전 실험 E. 콜라이 생존 전략으로 서 건조 하는 동안 VBNC 상태로는 보였다. 이 끝나면 건조22culturable 박테리아 없음 이었다고 하는 사실에 의해 증명 됩니다. 따라서, 6 h에 대 한 사전 농축 과정은 긴장의 계...

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The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

고기 건조 하는 동안 미생물 부하에 백 리 향 에센셜 오일의 응용 프로그램의 효과

육류 제품을 오염 하는 대장균 등 미생물 발생 foodborne 병. 고기 건조 과정에서 에센셜 오일의 사용 깊이 공부 하지 했다. 여기, 우리는 고기에 말린 고기에서 미생물 부하를 줄이기 위해 건조 하는 동안 하는 백 리 향 에센셜 오일 적용의 새로운 방법을 제시.

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

the-effect-application-thyme-essential-oil-on-microbial-load-during

Research

JoVE Journal

Environment

9.2K 조회수.  Czech University of Life Sciences Prague. 육류 제품을 오염 하는 대장균 등 미생물 발생 foodborne 병. 고기 건조 과정에서 에센셜 오일의 사용 깊이 공부 하지 했다. 여기, 우리는 고기에 말린 고기에서 미생물 부하를 줄이기 위해 건조 하는 동안 하는 백 리 향 에센셜 오일 적용의 새로운 방법을 제시.

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Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) mass spectrometry. The heterogeneity of ion signals is a severe problem in MALDI, which results in poor data reproducibility and makes MALDI unsuitable for quantitative analysis. By regulating sample plate temperature during sample preparation, thermal-induced hydrodynamic flows inside droplets of sample solution are able to reduce the heterogeneity problem. A room-temperature sample preparation chamber equipped with a temperature-regulated copper base block that holds MALDI sample plates facilitates precise control of the sample drying condition. After drying of sample droplets, the temperature of sample plates is returned to room temperature and removed from the chamber for subsequent mass spectrometric analysis. The areas of samples are examined with MALDI-imaging mass spectrometry to obtain the spatial distribution of all components in the sample. In comparison with the conventional dried-droplet method that prepares samples under ambient conditions without temperature control, the samples prepared with the method demonstrated herein show significantly better spatial distribution and signal intensity. According to observations using carbohydrate and peptide samples, decreasing substrate temperature while maintaining the surroundings at ambient temperature during the drying process can effectively reduce the heterogeneity of ion signals. This method is generally applicable to various combinations of samples and matrices.

A protocol for reducing spatial heterogeneities of ion signals in MALDI mass spectrometry by regulating substrate temperature during sample drying processes is demonstrated.

양적 응용 프로그램에 대한 균일 MALDI 시료의 제조

This protocol demonstrates a simple sample preparation to reduce spatial heterogeneity in ion signals during matrix-assisted laser desorption/ionization ...

연구

생화학

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) drug-resistant strains threatens to derail current disease control efforts. Thus, there is an urgent need to develop drugs and vaccines that are more effective than those currently available. The genome of M. tuberculosis has been known for more than 10 years, yet there are important gaps in our knowledge of gene function and essentiality. Many studies have since used gene expression analysis at both the transcriptomic and proteomic levels to determine the effects of drugs, oxidants, and growth conditions on the global patterns of gene expression. Ultimately, the final response of these changes is reflected in the metabolic composition of the bacterium including a few thousand small molecular weight chemicals. Comparing the metabolic profiles of wild type and mutant strains, either untreated or treated with a particular drug, can effectively allow target identification and may lead to the development of novel inhibitors with anti-tubercular activity. Likewise, the effects of two or more conditions on the metabolome can also be assessed. Nuclear magnetic resonance (NMR) is a powerful technology that is used to identify and quantify metabolic intermediates. In this protocol, procedures for the preparation of M. tuberculosis cell extracts for NMR metabolomic analysis are described. Cell cultures are grown under appropriate conditions and required Biosafety Level 3 containment,1 harvested, and subjected to mechanical lysis while maintaining cold temperatures to maximize preservation of metabolites. Cell lysates are recovered, filtered sterilized, and stored at ultra-low temperatures. Aliquots from these cell extracts are plated on Middlebrook 7H9 agar for colony-forming units to verify absence of viable cells. Upon two months of incubation at 37 &deg;C, if no viable colonies are observed, samples are removed from the containment facility for downstream processing. Extracts are lyophilized, resuspended in deuterated buffer and injected in the NMR instrument, capturing spectroscopic data that is then subjected to statistical analysis. The procedures described can be applied for both one-dimensional (1D) 1H NMR and two-dimensional (2D) 1H-13C NMR analyses. This methodology provides more reliable small molecular weight metabolite identification and more reliable and sensitive quantitative analyses of cell extract metabolic compositions than chromatographic methods. Variations of the procedure described following the cell lysis step can also be adapted for parallel proteomic analysis.

Sample Preparation of Mycobacterium tuberculosis Extracts for Nuclear Magnetic Resonance Metabolomic Studies

The metabolomic profile of Mycobacterium tuberculosis is determined after growth in broth cultures. Conditions can be varied to test the effects of nutritional supplements, oxidants, and anti-tuberculosis agents on the metabolic profile of this microorganism. Procedure for extract preparation is applicable for both 1D 1H and 2D 1H-13C NMR analyses.

의 샘플 준비<em&gt; Mycobacterium 결핵</em핵 자기 공명 Metabolomic의 연구&gt; 압축을 풉니 다

Mycobacterium tuberculosis is a major cause of mortality in human beings on a global scale. The emergence of both multi- (MDR) and extensively-(XDR) ...

면역학 및 감염병학

Measuring Volatile and Non-volatile Antifungal Activity of Biocontrol Products

The protocol described is based on a plug-transfer technique that allows accurate determination of microorganism quantities and their developmental stages. A specified number of spores are spread on an agar plate. This agar plate is incubated for a defined period to allow the fungi to reach the expected developmental stage, except for spores where incubation is not required. Agar plugs covered by spores, hyphae, or mycelium are next withdrawn and transferred onto agar media containing the antifungal compound to be tested either placed at a distance from the fungi or in contact. This method is applicable to test both liquid extracts and solid samples (powders). It is particularly well suited for quantifying the relative contributions of volatile and non-volatile agents in bioactive mixtures and for determining their effects, specifically on spores, early hyphae, and mycelium.
The method is highly relevant for the characterization of the antifungal activity of biocontrol products, notably plant-derived products. Indeed, for plant treatment, the results can be used to guide the choice of mode of application and to establish the trigger thresholds.

We describe a modified agar-based method designed to quantify the antifungal effects of plant-derived products. Both volatile and non-volatile contributions to the antifungal activity can be assessed through this protocol. In addition, efficacy against fungi can be measured at key developmental stages in a single experimental setup.

바이오 제어 제품의 휘발성 및 비휘발성 항진균 활성 측정

The protocol described is based on a plug-transfer technique that allows accurate determination of microorganism quantities and their developmental ...

환경과학

Investigation of Microbial Cooperation via Imaging Mass Spectrometry Analysis of Bacterial Colonies Grown on Agar and in Tissue During Infection

Understanding the metabolic consequences of microbial interactions that occur during infection presents a unique challenge to the field of biomedical imaging. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) imaging mass spectrometry represents a label-free, in situ imaging modality capable of generating spatial maps for a wide variety of metabolites. While thinly sectioned tissue samples are now routinely analyzed via this technology, imaging mass spectrometry analyses of non-traditional substrates, such as bacterial colonies commonly grown on agar in microbiology research, remain challenging due to the high water content and uneven topography of these samples. This paper demonstrates a sample preparation workflow to allow for imaging mass spectrometry analyses of these sample types. This process is exemplified using bacterial co-culture macrocolonies of two gastrointestinal pathogens: Clostridioides difficile and Enterococcus faecalis. Studying microbial interactions in this well-defined agar environment is also shown to complement tissue studies aimed at understanding microbial metabolic cooperation between these two pathogenic organisms in mouse models of infection. Imaging mass spectrometry analyses of the amino acid metabolites arginine and ornithine are presented as representative data. This method is broadly applicable to other analytes, microbial pathogens or diseases, and tissue types where a spatial measure of cellular or tissue biochemistry is desired.

Investigation of Microbial Cooperation via Imaging Mass Spectrometry Analysis of Bacterial Colonies Grown on Agar and in Tissue During Infection

A novel sample preparation method is demonstrated for the analysis of agar-based, bacterial macrocolonies via matrix-assisted laser desorption/ionization imaging mass spectrometry.

감염 중 한천 및 조직에서 자란 박테리아 집락의 이미징 질량 분석 분석을 통한 미생물 협력 조사

Understanding the metabolic consequences of microbial interactions that occur during infection presents a unique challenge to the field of biomedical ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

개에서 구취 관리를위한 건강 기능 식품의 치료 효과

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

의학

Metabolic Profiling to Determine Bactericidal or Bacteriostatic Effects of New Natural Products using Isothermal Microcalorimetry

Due to the global threat of rising antimicrobial resistance, novel antibiotics are urgently needed. We investigate natural products from Myxobacteria as an&#160;innovative source of such new compounds. One bottleneck in the process is typically the elucidation of their mode-of-action. We recently established isothermal microcalorimetry as part of a routine profiling pipeline. This technology allows for investigating the effect of antibiotic exposure on the total bacterial metabolic response, including processes that are decoupled from biomass formation. Importantly, bacteriostatic and bactericidal effects are easily distinguishable without any user intervention during the measurements. However, isothermal microcalorimetry is a rather new approach and applying this method to different bacterial species usually requires pre-evaluation of suitable measurement conditions. There are some reference thermograms available of certain bacteria, greatly facilitating interpretation of results. As the pool of reference data is steadily growing, we expect the methodology to have increasing impact in the future and expect it to allow for in-depth fingerprint analyses enabling the differentiation of antibiotic classes.

The elucidation of the mode-of-action of a novel antibiotic is a challenging task in the drug discovery process. The goal of the method described here is the application of isothermal microcalorimetry using calScreener in antibacterial profiling to provide additional insight into drug-microbe interactions.

이더말 미세칼로리메트리를 사용하여 새로운 천연 제품의 박테리시달 또는 박테리오정성 효과를 결정하는 대사 프로파일링

Due to the global threat of rising antimicrobial resistance, novel antibiotics are urgently needed. We investigate natural products from Myxobacteria as ...

생체공학

Formulations for Freeze-drying of Bacteria and Their Influence on Cell Survival

Cellular water can be removed to reversibly inactivate microorganisms to facilitate storage. One such method of removal is freeze-drying, which is considered a gentle dehydration method. To facilitate cell survival during drying, the cells are often formulated beforehand. The formulation forms a matrix that embeds the cells and protects them from various harmful stresses imposed on the cells during freezing and drying. We present here a general method to evaluate the survival rate of cells after freeze-drying and we illustrate it by comparing the results obtained with four different formulations: the disaccharide sucrose, the sucrose derived polymer Ficoll PM400, and the respective polysaccharides hydroxyethyl cellulose (HEC) and hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC), on two strains of bacteria, P. putida KT2440 and A. chlorophenolicus A6. In this work we illustrate how to prepare formulations for freeze-drying and how to investigate the mechanisms of cell survival after rehydration by characterizing the formulation using of differential scanning calorimetry (DSC), surface tension measurements, X-ray analysis, and electron microscopy and relating those data to survival rates. The polymers were chosen to get a monomeric structure of the respective polysaccharide resembling sucrose to a varying degrees. Using this method setup we showed that polymers can support cell survival as effectively as disaccharides if certain physical properties of the formulation are controlled1.

Freeze-drying is often an easy and convenient way to obtain dry products of viable bacterial cells. An issue of the process is cell survival. We detail here a procedure to investigate how cell survival during freeze-drying is influenced by the properties of the formulation used.

세포 생존에 박테리아와 그 영향의 동결 건조 공법

Cellular water can be removed to reversibly inactivate microorganisms to facilitate storage. One such method of removal is freeze-drying, which is ...

생물학

A Tuberculosis Molecular Bacterial Load Assay (TB-MBLA)

Tuberculosis is caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), a pathogen classified by the United Nations (UN) as a dangerous category B biological substance. For the sake of the workers&#8217; safety, handling of all samples presumed to carry Mtb must be conducted in a containment level (CL) 3 laboratory. The TB molecular bacterial load assay (TB-MBLA) test is a reverse transcriptase quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) test that quantifies Mtb bacillary load using primers and dual-labelled probes for 16S rRNA. We describe the use of heat inactivation to render TB samples noninfectious while preserving RNA for the TB-MBLA. A 1 mL aliquot of the sputum sample in tightly closed 15 mL centrifuge tubes is boiled for 20 min at either 80 &#176;C, 85 &#176;C, or 95 &#176;C to inactivate Mtb bacilli. Cultivation of the heat inactivated and control (live) samples for 42 days confirmed the death of TB. The inactivated sample is then spiked with 100 &#181;L of the extraction control and RNA is extracted following the standard RNA isolation procedure. No growth was observed in the cultures of heat treated samples. The isolated RNA is subjected to real-time RT-qPCR, which amplifies a specific target in the Mtb 16S rRNA gene, yielding results in the form of quantification cycles (Cq). A standard curve is used to translate Cq into bacterial load, or estimated colony forming units per mL (eCFU/mL). There is an inverse relationship between Cq and the bacterial load of a sample. The limitation is that heat inactivation lyses some cells, exposing the RNA to RNases that cause a loss of &#60;1 log10eCFU/mL (i.e., &#60;10 CFU/mL). Further studies will determine the proportion of very low burden patients that cause false negative results due to heat inactivation.

A Tuberculosis Molecular Bacterial Load Assay TB-MBLA

We describe a tuberculosis molecular bacterial load assay test performed after heat inactivation of sputum. Heat inactivation renders sputum samples noninfectious and obviates the need for containment level 3 laboratories for tuberculosis molecular tests.

결핵 분자 세균 부하 분석 (TB-MBLA)

Tuberculosis is caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), a pathogen classified by the United Nations (UN) as a dangerous category B biological ...

Nano-Herbal-Coated Fabrics의 항균 효능

An Antimicrobial Fabric Using Nano-Herbal Encapsulation of Essential Oils

Lab coats are widely used in biohazard laboratories and healthcare facilities as protective garments to prevent direct exposure to pathogens, spills, and burns. These cotton-based protective coats provide ideal conditions for microbial growth and attachment sites due to their porous nature, moisture-holding capacity, and retention of warmth from the user&#39;s body. Several studies have demonstrated the survival of pathogenic bacteria on hospital garments and lab coats, acting as vectors of microbial transmission.
A common approach to fix these problems is the application of antimicrobial agents in textile finishing, but concerns have been raised due to the toxicity and environmental effects of many synthetic chemicals. The ongoing pandemic has also opened a window for the investigation of effective antimicrobials and eco-friendly and toxic-free formulations. This study uses two natural bioactive compounds, carvacrol and thymol, encapsulated in chitosan nanoparticles, which guarantee effective protection against four human pathogens with up to a 4-log reduction (99.99%). These pathogens are frequently detected in lab coats used in biohazard laboratories.
The treated fabrics also resisted up to 10 wash cycles with 90% microbial reduction, which is sufficient for the intended use. We made modifications to the existing standard fabric tests to better represent the typical scenarios of lab coat usage. These refinements allow for a more accurate evaluation of the effectiveness of antimicrobial lab coats and for the simulation of the fate of any accidental microbial spills that must be neutralized within a short time. Further studies are recommended to investigate the accumulation of pathogens over time on antimicrobial lab coats compared to regular protective coats.

저자 스포트라이트: 에센셜 오일의 나노 허브 캡슐화를 사용한 항균 직물  

Antimicrobial lab coats prevent the cross-contamination of pathogen accumulation and accidental bio-spills. Here, we describe the protocol for developing a skin-friendly antimicrobial fabric using nano-herbal encapsulation and modified standard tests to precisely evaluate the efficacy and suitability for typical usage of the lab coat.

에센셜 오일의 나노 허브 캡슐화를 이용한 항균 직물

Lab coats are widely used in biohazard laboratories and healthcare facilities as protective garments to prevent direct exposure to pathogens, spills, and ...

고기 건조 하는 동안 미생물 부하에 백 리 향 에센셜 오일의 응용 프로그램의 효과

요약

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양적 응용 프로그램에 대한 균일 MALDI 시료의 제조

의 샘플 준비

바이오 제어 제품의 휘발성 및 비휘발성 항진균 활성 측정

감염 중 한천 및 조직에서 자란 박테리아 집락의 이미징 질량 분석 분석을 통한 미생물 협력 조사

개에서 구취 관리를위한 건강 기능 식품의 치료 효과

이더말 미세칼로리메트리를 사용하여 새로운 천연 제품의 박테리시달 또는 박테리오정성 효과를 결정하는 대사 프로파일링

세포 생존에 박테리아와 그 영향의 동결 건조 공법

결핵 분자 세균 부하 분석 (TB-MBLA)

에센셜 오일의 나노 허브 캡슐화를 이용한 항균 직물

에센셜 오일의 나노 허브 캡슐화를 이용한 항균 직물