Z.C. 인정 다트머스 시작 기금과 브 랑 쿠와 이즈-과학 원정대, ETH 쮜 리 히에 의해 관리에 대 한 사회에서 지원 합니다. 저자는 박사 래리 A. Taber, Benjamen A. Filas, Qiaohang Guo Yunfei 시 유용한 토론에 대 한 뿐만 아니라 익명 검토자 의견 감사합니다. 이 자료는 국립 과학 재단 대학원 연구 친교 그랜트 번호 아래에서 지 원하는 작업 기반 DGE-1313911입니다. 모든 의견, 결과, 결론 또는 권고가이 자료에서 표현은 저자 (들)의 고 반드시 국립 과학 재단의 의견을 반영 하지 않습니다.

1입니다. 조직 배양의 준비
<ol><li>문화 미디어에 대 한 기반으로 4.5 g/L 포도 당, 나트륨 중 탄산염, 그리고 L-글루타민 0.5 L 병 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM)의 사용 합니다.</li>
	<li>살 균 층 흐름 후드에서 DMEM의 0.5 l 항생제의 10 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>살 균 피 펫을 사용 하 여 살 균 50 mL 원뿔 튜브 DMEM 항생제 솔루션 50 mL 전송.</li>
	<li>살 균 후드에 0.5 L 병에서 나머지 DMEM 항생제 솔루션에 병아리 세럼 50 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>(라고도 약칭 병아리 문화 미디어 [CCM])-20 ° c.에 50 mL 원뿔 튜브 aliquots에 최종 솔루션 저장</li>
</ol>2. 달걀 부 화
<ol><li>섬세 한 사용을 70% 에탄올 수정된 특정 병원 체 자유로운 백색 레그 혼 닭 계란을 청소 정리 합니다. 계란 홀더에 세로 방향으로 정렬 합니다.</li>
	<li>37.5 ° C의 목표 온도 설정 하 고 48-55%에 습도 유지 하는 계란 부 화기를 켭니다. 습도 인큐베이터에 물 적절 한 양의 추가 하 여 제어 됩니다.</li>
	<li>HH11-13, 40-44 h 약을 알을 품 어.</li>
	<li>계란 살포 / 70% 에탄올으로 청소 하기 전에 약 15-30 분 동안 실내 온도에 냉각 하자.</li>
</ol>3. 풀 유리 모 세관
<ol><li>Micropipette 끌어당기는 사람에는 외부 직경 1.0 m m와 0.5 m m 내부 직경 10 cm 길이의 유리 모 세관 튜브를 탑재 합니다.</li>
	<li>열을 설정 하 고 각각 750와 400, 매개 변수를 당겨. 얇은 바늘으로 모 세관 튜브를 당겨 단추를 누릅니다.</li>
</ol>4. 필터 종이 캐리어 메서드
<ol><li>필터 종이에서 직경에서 대략 3 cm의 동그라미를 잘라.</li>
	<li>사각형 약 1cm를 잘라 2cm 구멍 구멍을 뚫는 사용 하 여 원형에서. 어떤 돌기 제거 또는 날카로운 모서리를 있는지 확인 하십시오.</li>
</ol>5. 배아 수확 및 준비
<ol><li>바닥에서 계란 균열, 당겨 떨어져 껍질 부드럽게 하 고 신중 하 게 150 m m x 15 mm 페 트리 접시에 내용을 입금. 태아 측이, 그들은 그들을 크래킹 하는 동안 incubated 했다 동일한 방향에서 계란을 계속 합니다.</li>
	<li>일회용 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 얇은 알 부 민을 제거 합니다.</li>
	<li>무뚝뚝한 끝난된 집게를 사용 하 여 노 른 자에서 두꺼운 알 부 민을 구분 합니다. 가볍게 무뚝뚝한 끝난된 집게와 노른자위의 상단 된다고 하 여 두꺼운 알 부 민 제거 되었습니다 확인 하십시오.</li>
	<li>뾰족한 집게를 사용 하 여 센터와 배아, 태아의 긴 축과 링의 긴 축에 일치 하는 필터 종이 반지 장소.</li>
	<li>가 위로 필터 종이 반지를 둘러싼 노 른 자를.</li>
	<li>노 른 자 먼저 렸 어디 사이트 쪽으로 비스듬한 방향에서 반지 및 노른자위에서 배아를 당겨.</li>
	<li>실내 온도 1 버퍼링 하는 인산 염 (PBS) x 두 순차 100 mm 요리에 배아를 린스.</li>
	<li>35 mm 페 트리 접시에 먼저 필터 종이 반지를 놓습니다. 다음 장소 배아 등 쪽을 필터 종이에 이미 35 mm 페 트리 접시에.</li>
	<li>장소 필터 종이 샌드위치 위에 스테인리스 반지. 태아 손상 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>각 페 트리 접시를 이전 준비 ccm 3 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>가볍게 태아와 멀리 VM을 필 링, (바로 위에 개) 앞쪽 끝에서 시작 및 notochord (그림 1A)를 진행 상단 가져온된 모 세관 바늘을 감추고 여 각 배아의 VM을 제거 합니다.</li>
	<li>(습도 유지)을 물 포화 섬세 한 작업 잎사귀 줄지어 했다 한 150 mm 접시에 8 35 mm 페 트리 접시를 놓습니다.</li>
	<li>장소 sealable 비닐 봉지에 150 mm 페 트리 접시 다음 95% O2 , 5% CO2를 이루어져 있는 가스 혼합물으로 가방을 채우십시오.</li>
	<li>가방을 봉인 하 고 37.5 ° C 인큐베이터에 배치.</li>
	<li>HH15-HH16 (그림 1B)까지 추가 27 h에 대 한 태아를 품 어.</li>
</ol>6. 유도 표면 장력
<ol><li>인큐베이터에서 배아를 제거 하 고 그들의 이미지를 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 시스템을 사용 하 여. 신경 관 (NT) (그림 2)의 비틀림 각도를 사용 하 여 10 월</li>
	<li>가벼운 현미경에 배아를 전송 하 고 10 배 확대에서 시각화. 200 microliter 피 펫을 사용 하 여 점진적으로 배양 접시에서 미디어의 0.2 mL를 제거.</li>
	<li>태아에는 미디어에 어 인터페이스의 효과 관찰 하는 각 간격에서 명시 이미지를 가져가 라.</li>
	<li>태아에 걸쳐 표면 장력 비틀림 (그림 1C) 유도 될 때까지 미디어를 제거 합니다.</li>
	<li>배아 배아를 제어 하는 비교에 대 한 최종 비틀림 각도 설정 하려면 다시 한번 OCT 시스템을 사용 하 여 이미지.  참고: 밝은 필드 이미지 해 현미경을 사용 하 여 인수 했다. 광학 일관성 단층 촬영 시스템 연결 된 현미경으로 살아있는 배아의 단면 이미지 스택을 얻으려고 사용 되었다. 이미지 3 x 10 m m x 3 m m3 검색 도메인에서 얻은 다음 이미징 소프트웨어에서 처리. 마지막으로, 실제 모델 이미지는 디지털 싱글 렌즈 리 플렉스 카메라와 함께 찍은 사진.</li>
</ol>7. 표면 장력/VM 세력의 물리적 모델링
<ol><li>상업적인 모델링 소프트웨어 (그림 3A) HH14-17 사이의 배아 유사한 단순화 된 3D 형상을 개발 합니다.</li>
	<li>상업적인 3D 컴퓨터 그래픽 소프트웨어에서 3D 형상의 부정적인 형 디자인.</li>
	<li>3D 프린터 로드 1.75 m m 아크릴로 니트 릴 부 타 디 엔 스틸 렌 필 라 멘 트 3D 사용 하 여 인쇄 stereolithographic (.stl) 형태로 설계 된 금형.</li>
	<li>캐스팅 금형, 실리콘 고무 탄성 중합체 부품 A와 같은 부분에 B를 혼합 하 고 즉시; 금형에 혼합물을 부 어 12 h (그림 3B)에 대 한 실 온에서 치료 주조 금형을 설정 합니다.</li>
	<li>비틀림을 시각화 하는 등 측면에서 NT 따라 배아의 실제 모델을 표시 합니다.</li>
	<li>VM 또는 표면 장력 (그림 3D)의 모방을 3 차원 물리 모델에 적용 하는 힘을 복제 하는 coverslip를 사용 합니다.</li>
	<li>물리적 모델의 측면 길이가 엄밀한 전선의 시리즈를 삽입 합니다. 후는 coverslip 뇌 모델에 외부의 힘을 미치는, 전선 될 위치에 따라 각도에서 기운 다. 각 와이어 (그림 3E)의 원래 길이에 의해 arctan 예상된 길이의 회전 각도 결정 합니다.</li>
</ol>8. 심장 루프의 방향 변경
<ol><li>3.1 및 3.2 가져온된 모 세관 튜브를 단계를 따릅니다.</li>
	<li>5.1 5.10 태아 준비를 통해 단계를 따릅니다.</li>
	<li>집게의 쌍을 사용 하 여 태아 복 부-사이드 업 되도록 필터 종이 플립.</li>
	<li>가져온된 모 세관 튜브를 사용 하 여 splanchnopleure (SPL) 막에 슬릿 오픈 컷.</li>
	<li>모 세관 튜브를 사용 하 여 왼쪽을 오른쪽에서 마음을 밀어 기계적인 힘을 발휘 하.</li>
	<li>5.12 5.15 비틀림의 변화를 관찰 하는 것을 통해의 단계를 따릅니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Taber, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanics+of+Growth,+Remodeling,+and+Morphogenesis.">Biomechanics of Growth, Remodeling, and Morphogenesis.</a> Appl. Mech. Rev. 48, 487-545 (1995).</li><li>Wyczalkowski, M. A., Chen, Z., Filas, B. A., Varner, V. D., Taber, L. 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Brain Res. 141, 101-107 (2003).</li><li>Zhu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerberus+regulates+left-right+asymmetry+of+the+embryonic+head+and+heart.">Cerberus regulates left-right asymmetry of the embryonic head and heart.</a> Curr. Biol. 9, 931-938 (1999).</li></ol>

저자는 관심 없음 충돌 선언합니다.

반면 물리적 현상 morphogenesis26,27,,2829,30, 특정 기계 메커니즘과 함께 기계 조정에에서 중요 한 역할 및 분자 메커니즘, 크게 미개척 남아 있습니다. 그것은 복 부 굴곡와 원시적인 뇌의 우 비틀림 초기 배아 morphogenesis18,31,<su...

현대 개발 생물학 연구는 주로 분자 유전학1,2,,34,,56 의 관점에서 이해 개발에 초점을 맞추고합니다 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13. 현상과 morphogenesis에서 중심 역할을 담당할 또는 생물의 생성 형성14,15,,1617; 알려져 있다 그러나, 개발의 특정 기계적 메커니즘 크게 unstudied 남아 있다. 복 부 굴곡 및 원시 뇌 관 후 햄버거 해밀턴 무대 11 (HH 11)18 배아 모양에 기여 하는 두 가지 주요 프로세스의 우 비틀림19,20을 변경 합니다. 특히, 배아 두뇌에 비틀림 개발 기본 물리적 메커니즘 불완전 하 게 이해 남아 있습니다.
병아리 태아에 배아 비틀림 개발에 왼쪽 오른쪽 (L R) 비대칭의 초기 전체적 이벤트 중 하나입니다. L-R 비대칭의 과정을 교란 하는 경우 사이트 inversus, 이성질체또는 heterotaxia 같은 출생 결함21을발생 합니다. 여기 선물이 전 비켜 실험22,23 물리적 모델링 초기 미 발달 두뇌 개발 하는 동안 기계적인 힘의 특성을 결합 하는 프로토콜. 제시 하는 방법의 목표는 기계적인 힘 두뇌와 초기 개발12동안 비틀림의 정도 영향을 주는 요인에 대 한 책임을 식별 하는입니다. Vitelline 막 (VM) 태아의 등 쪽을 구속 하는 실험 관찰을 바탕으로, 우리는 VM 개발 두뇌의 비틀림을 유도 하는 데 필요한 힘을 제공 한다는 가설. 따라서,이 방법에서는, 두뇌 염력에 효과를 뇌 영역을 커버 하는 VM의 일부를 제거 했습니다. 또한, 액체의 표면 장력을 적용 하는 방법은 VM의 기계적 역할을 확인 하 고 이전 수행 하지 않았다면 뇌 염력에 필요한 힘의 견적을 제공 하 사용 되었다. 배아 morphogenesis 동안 힘을 측정 하는 것은 어려운 작업입니다. 특히, 선구적인 연구 Campàs와 동료24 삽입 된 microdroplets를 사용 하 여 셀룰러 스트레스 척도를 새로운 방법을 개발. 그럼에도 불구 하 고,이 방법 세포 수준, 그러므로 힘에서 조직 또는 유기 체 수준 프로브 적용 되지 않습니다에서 세력을 측정을 수 있었습니다. 이 문서에 소개 된 프로토콜은 부분적으로이 갭을 채우기 위해 개발 되었다.

<table><tbody><tr><td>Fertilized Specific pathogen-free White Leghorn chicken eggs</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optical Coherent Tomography Microscope</td><td>Thorlabs</td><td>GAN220C1</td><td></td></tr><tr><td>Silicone elastomer</td><td>Smooth-On, Inc.</td><td>EcoFlex 00-50</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Leica</td><td>MZ8</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Modified Eagle&amp;rsquo;s Medium (DMEM)</td><td>Lonza</td><td>12-604F</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics</td><td>Sigma</td><td>P4083</td><td></td></tr><tr><td>Chick serum</td><td>Sigma</td><td>C5405</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette puller</td><td>Sutter Instrument</td><td>Model P-30</td><td></td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>Whatman</td><td>5202-110</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Comsol MultiPhysics</td><td>Comsol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3D computer graphics software</td><td>Rhino 5</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscope attached with OCT</td><td>Nikon&amp;nbsp;</td><td>FN1</td><td></td></tr><tr><td>Digital single-lens reflex camera</td><td>EOS&amp;nbsp;</td><td>Rebel T3i</td><td></td></tr></tbody></table>

probing the roles of physical forces in early chick embryonic morphogenesis

배아 개발은 전통적으로 바이오 유전자의 관점에서 하지만 morphogenesis에서 역학의 기본적인 중요성은 점점 더 인식 되 고. 특히,는 미 발달 병아리 마음과 뇌 관, 그들은 개발 형태학 상 변화를 받아야, 총리 후보자 morphogenesis 물리적 힘의 역할을 연구 중입니다. 진보적인 복 부 굽 힘과 관 미 발달 병아리 두뇌의 우 비틀림 기관 수준 좌우 비대칭 병아리 배아 개발에서의 초기 단계에서 발생. Vitelline 막 (VM) 태아의 등 쪽을 구속 하 고 개발 두뇌의 비틀림을 유도 하는 데 필요한 힘 제공에 연루 되어 있다. 여기 새로운 전 비켜 실험의 조합을 뇌 비틀림의 메커니즘을 식별 하기 위해 모델링 물리적 선물이. 햄버거-해밀턴 단계에서 11, 배아는 수확 하 고 교양 비켜 ex (미디어에서). VM 이후에 가져온된 모 세관 튜브를 사용 하 여 제거 됩니다. 액체의 레벨을 제어 하 고 액체 공기 인터페이스에 배아를 쓰는, VM의 기계적 역할을 대체 하는 미디어의 액체 표면 장력을 사용할 수 있습니다. 미세 실험 또한 뇌 비틀림의 카이랄성에 결과 변화를 찾을 수 심장의 위치 변경을 수행 했다. 이 프로토콜에서 결과 morphogenesis 운전 역학의 기본적인 역할을 설명 합니다.

이 연구에서는 HH11에서 배아의 VM 흉부 굴곡을 앞쪽 끝에서 제거 되었습니다. 배아 10 월 시스템에 의해 몇 군데 있었다. 이 단계에서 뇌 관의 비틀림 하지 (그림 1A)를 시작 했다. HH15-16에는 알을 품 되 고, 후 그들의 VM 제거와 배아 감소 뇌 튜브 비틀림, 약 35도 (그림 1B) 약 90도의 비틀림을 전시 하는 배아를 제어에 비해 전시. 미디...

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Probing the Roles of Physical Forces in Early Chick Embryonic Morphogenesis

초기 여자 배아 Morphogenesis 물리적 힘의 역할을 프로 빙

여기, 우리는 일련의 새로운 전 비켜 실험 및 초기 여자 배아 뇌 비틀림 동안 morphogenesis의 역학을 공부에 대 한 물리적 모델링 접근법을 소개 하는 프로토콜을 제시.

Embryonic development is traditionally studied from the perspective of biomolecular genetics, but the fundamental importance of mechanics in morphogenesis ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

7.2K 조회수.  Dartmouth College. 여기, 우리는 일련의 새로운 전 비켜 실험 및 초기 여자 배아 뇌 비틀림 동안 morphogenesis의 역학을 공부에 대 한 물리적 모델링 접근법을 소개 하는 프로토콜을 제시.

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Grafting of Beads into Developing Chicken Embryo Limbs to Identify Signal Transduction Pathways Affecting Gene Expression

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression and activation of signal transduction pathways. This technique allows the delivery of signaling molecules at precisely defined developmental stages for specific times. After this embryos can be harvested and gene expression examined, for example by in situ hybridization, or activation of signal transduction pathways observed with immunostaining.
In this video heparin beads soaked in FGF18 or AG 1-X2 beads soaked in U0126, a MEK inhibitor, are grafted into the limb bud in ovo. This shows that FGF18 induces expression of MyoD and ERK phosphorylation and both endogenous and FGF18 induced MyoD expression is inhibited by U0126. Beads soaked in a retinoic acid antagonist can potentiate premature MyoD induction by FGF18.
This approach can be used with a wide range of different growth factors and inhibitors and is easily adapted to other tissues in the developing embryo.

By grafting beads soaked in growth factors or specific inhibitors of signaling pathways into developing embryos it is possible to directly test their effects in vivo. In this protocol beads are grafted into the limb bud to determine the effects of these molecules on gene expression and signal transduction.

유전자 발현에 영향을 미치는 신호 전달 진학을 확인하기 위해 닭 배아 사지 개발에 구슬의 접목

Using chicken embryos it is possible to test directly the effects of either growth factors or specific inhibitors of signaling pathways on gene expression ...

연구

발생학

Application of Impermeable Barriers Combined with Candidate Factor Soaked Beads to Study Inductive Signals in the Chick

The chick embryo provides a superb vertebrate model that can be used to dissect developmental questions in a direct way. Its accessibility and robustness following surgical intervention are key experimental strengths. Mica plates were the first barriers used to prevent chick limb bud initiation1. Protocols that use aluminum foil as an impermeable barrier to wing bud or leg bud induction and or initiation are described. We combine this technique with bead placement lateral to the barrier to exogenously supply candidate endogenous factors that have been blocked by the barrier. The results are analyzed using in situ hybridization of subsequent gene expression. Our main focus is on the role of retinoic acid signaling in the induction and later initiation of the chick embryo fore and hindlimb. We use BMS 493 (an inverse agonist of retinoic acid receptors (RAR)) soaked beads implanted in the lateral plate mesoderm (LPM) to mimic the effect of a barrier placed between the somites (a source of retinoic acid (RA)) and the LPM from which limb buds grow. Modified versions of these protocols could also be used to address other questions on the origin and timing of inductive cues. Provided the region of the chick embryo is accessible at the relevant developmental stage, a barrier could be placed between the two tissues and consequent changes in development studied. Examples may be found in the developing brain, axis extension and in organ development, such as liver or kidney induction.

Protocols using impermeable barriers to block induction events between tissues of the main body axis and flank in the chick embryo required for limb formation are described. Beads soaked in candidate inductive signals are used to overcome the effect of barrier placement and analysis of gene expression confirms this.

후보 인자 젖 구슬과 결합하여 불 침투성 장벽의 응용 프로그램은 병아리에서 유도 신호를 공부하기

The chick embryo provides a superb vertebrate model that can be used to dissect developmental questions in a direct way. Its accessibility and robustness ...

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ideal tool for studying  gene expression in brain, neural tube, somite and heart primordia formation. This video demonstrates the different steps in 2-color whole mount in situ hybridization; First, the embryo is dissected from the egg and fixed in paraformaldehyde. Second, the embryo is processed for prehybridization. The embryo is then hybridized with two different probes, one coupled to DIG, and one coupled to FITC.  Following overnight hybridization, the embryo is incubated with DIG coupled antibody. Color reaction for DIG substrate is performed, and the region of interest appears blue. The embryo is then incubated with FITC coupled antibody. The embryo is processed for color reaction with FITC, and the region of interest appears red. Finally, the embryo is fixed and processed for phtograph and sectioning. A troubleshooting guide is also presented.

This video demonstrates 2-color whole mount in situ hybridization, a method by which the spatial and temporal expression pattern of 2 different genes can be visualized in young chick embryos. This method was originally introduced by David Wilkinson, Domingos Henrique, Phil Ingham and David Ish -Horowicz.

조기 칙 태아의 현장 하이브리드화에서 더블 전체 산

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

생물학

Assay for Neural Induction in the Chick Embryo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ideal tool for studying the formation and initial patterning of the nervous system. This video demonstrates how to graft organizer tissue into a host, a method by which Hensen s node (the organizer in the chick embryo) is grafted to a host competent ectoderm. The organizer graft instructs overlying na ve tissue to adopt a neural fate via neural inducing signals. This mechanism is referred to as neural induction, and constitutes the initial step in the formation of brain and spinal cord in amniotes. This method is essentially used for the characterization of putative neural inducing molecules in chick. This video demonstrates the different steps in the assay for neural induction; First, the donnor embryo is explanted and pinned on a dish. Then, the host embryo is prepared for New culture. The graft is excised and transplanted to the host area pellucida margin. The host is cultured for 18-22 hrs. The assembly is fixed and processed for further applications (e.g. in situ hybridization). This method was originally devised by Waddington 1,2 and Gallera 3,4.

Neural induction is the first step in the formation of the brain. It is a mechanism by which Hensen's node (organizer), instructs adjacent tissue to adopt a neural fate, i.e. to give rise to the nervous system. This video demonstrates an assay for neural induction in chick embryo.

칙의 배아에서 신경 유도에 대한 분석

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ideal for experimentation. Currently, the study of these developmental pathways in the chicken embryo is conducted by applying inhibitors and drugs at localized sites and at low concentrations using a variety of methods. In vitro tissue&#160;culturing is a technique that enables the study of tissues separated from the host organism, while simultaneously bypassing many of the physical limitations present when working with whole embryos, such as the susceptibility of embryos to high doses of potentially lethal chemicals. Here, we present an organotypic culturing protocol for culturing the embryonic chicken half head in vitro, which presents new opportunities for the examination of developmental processes beyond the currently established methods.

Here, we present an organotypic culturing protocol to grow embryonic chicken organs in vitro. Using this method, the development of embryonic chicken tissue can be studied, while maintaining a high degree of control over the culture environment.

Organotypic 문화 메서드 배아 치킨 조직 개발 연구를

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...

Chicken Recombinant Limbs Assay to Understand Morphogenesis, Patterning, and Early Steps in Cell Differentiation

Cell differentiation is the fine-tuned process of cell commitment leading to the formation of different specialized cell types during the establishment of developing tissues and organs. This process is actively maintained in adulthood. Cell differentiation is an ongoing process during the development and homeostasis of organs. Understanding the early steps of cell differentiation is essential to know other complex processes such as morphogenesis. Thus, recombinant chicken limbs are an experimental model that allows the study of cell differentiation and pattern generation under embryonic patterning signals. This experimental model imitates an in vivo environment; it assembles reaggregated cells into an ectodermal cover obtained from an early limb bud. Later, ectoderms are transferred and implanted in a chick embryo receptor to allow its development. This assay was mainly used to evaluate mesodermal limb bud cells; however, it can be applied to other stem or progenitor cells from other organisms.

Recombinant limbs are a powerful experimental model that allows for studying the process of cell differentiation and the generation of patterns under the influence of embryonic signals. This protocol presents a detailed method for generating recombinant limbs with chicken limb-mesodermal cells, adaptable to other cell types obtained from different organisms.

치킨 재조합 사지 분석은 모르포겐, 패터닝 및 세포 분화의 초기 단계를 이해하기 위한

Cell differentiation is the fine-tuned process of cell commitment leading to the formation of different specialized cell types during the establishment of ...

Analysis of Cell Differentiation, Morphogenesis, and Patterning During Chicken Embryogenesis Using the Soaked-Bead Assay

A multitude of genetic programs is activated during embryonic development that orchestrates cell differentiation to generate an astounding diversity of somatic cells, tissues, and organs. The precise activation of these genetic programs is regulated by morphogens, diffusible molecules that direct cell fate at different thresholds. Understanding how genetic activation coordinates morphogenesis requires the study of local interactions triggered by morphogens during development. The use of beads soaked in proteins or drugs implanted into distinct regions of the embryo enables studying the role of specific molecules in the establishment of digits and other developmental processes. This experimental technique provides information on the control of cell induction, cell fate, and pattern formation. Thus, this soaked bead assay is an extremely powerful and valuable experimental tool applicable to other embryonic models.

The soaked bead assay involves targeted delivery of test reagent at any developmental time point to study the regulation of cell differentiation and morphogenesis. A detailed protocol, applicable to any experimental animal model, for preparing three different types of soaked beads and implanting these in the interdigit of a chicken embryo is presented.

Soaked-Bead Assay를 사용한 닭 배아 발생 동안의 세포 분화, Morphogenesis, 및 패터닝 분석

A multitude of genetic programs is activated during embryonic development that orchestrates cell differentiation to generate an astounding diversity of ...

조류 배아 피부 이식 배양 프로토콜에 대한 종합적인 검토

Using Avian Skin Explants to Study Tissue Patterning and Organogenesis

The developing avian skin during embryogenesis is a unique model that can provide valuable insights into tissue patterning. Here three variations on skin explant cultures to examine different aspects of skin development are described. First, ex vivo organ cultures and manipulations offer researchers opportunities to observe and study the development of feather buds directly. Skin explant culture can grow for 7 days enabling direct analysis of cellular behavior and 4D imaging at intervals during this growth period. This also allows for physical and molecular manipulations of culture conditions to visualize tissue response. For example, growth factor-coated beads can be applied locally to induce changes in feather patterning in a limited area. Alternatively, viral transduction can be delivered globally in the culture media to up or downregulate gene expression. Second, the skin recombination protocol allows researchers to investigate tissue interactions between the epidermis and mesenchyme that are derived from different skin regions, different life stages, or different species. This affords an opportunity to test the time window in which the epithelium is competent to respond to signals and its ability to form different skin appendages in response to signals from different mesenchymal sources. Third, skin reconstitution using dissociated dermal cells overlaid with intact epithelium resets skin development and enables the study of the initial processes of periodic patterning. This approach also enhances our ability to manipulate gene expression among the dissociated cells before creating the reconstituted skin explant. This paper provides the three culture protocols and exemplary experiments to demonstrate their utility.

저자 스포트라이트: 현재 실험적인 조류 피부 이식 방법론에 대한 통찰력

Here we describe protocols for three types of avian embryonic skin explant cultures that can be used to examine tissue interactions, 4D imaging timelapse movie (3D plus time), global or local perturbation of molecular function, and systems biology characterization.

조직 패터닝 및 유기 형성을 연구하기 위해 조류 피부 이식물을 사용합니다.

The developing avian skin during embryogenesis is a unique model that can provide valuable insights into tissue patterning. Here three variations on skin ...

초기 여자 배아 Morphogenesis 물리적 힘의 역할을 프로 빙

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치킨 재조합 사지 분석은 모르포겐, 패터닝 및 세포 분화의 초기 단계를 이해하기 위한

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조직 패터닝 및 유기 형성을 연구하기 위해 조류 피부 이식물을 사용합니다.

조직 패터닝 및 유기 형성을 연구하기 위해 조류 피부 이식물을 사용합니다.

조직 패터닝 및 유기 형성을 연구하기 위해 조류 피부 이식물을 사용합니다.