이 연구는 즐겼다 C. 볼 칸 (뎁-1457690)에 국립 과학 재단에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

다음 프로토콜은 듀크 대학 연구 윤리 위원회에 의해 설립 된 윤리 지침과 일치.
1. 조직 준비와 초파리 melanogaster 번데기의 개발 준비
<ol><li>첫째, 얼마나 많은 파리 해 부 할 것입니다 확인 합니다. RT-PCR 및 RNAseq, prepupal, 8 h APF, 40 h APF, 및 성인 단계에서 필요한는 개인에서 100-200 더듬이 디스크와 안테나를 수집 합니다. Immunohistochemistry, 10-20 개인을 해 부.</li>
	<li>해 부 패드와 집게, 물티슈를 사용 하 여 70%를 포함 하 여 모든 물자를 청소 EtOH. 해 부 물자는 RNA 추출에 사용할 수, RNase neutralizers와 모든 것을 깨끗이 nuclease 무료 사용 하는 모든 솔루션을 경우 diethyl pyrocarbonate (DEPC) 물 처리. 참고:이 프로토콜은 해에 대 한 유리 대신 실리콘 해 부 패드 사용합니다. 실리콘 패드 초 미세 집게를 친절 하 고 신속 하 고 높은 품질의 해를 홍보.</li>
	<li>0 h APF/prepupal 단계에서 번데기를 수집 합니다.<ol>
<li>가장 정확한 준비 되도록 30 분 1 시간 간격에서 애벌레를 모니터링 합니다. 참고: 적당히 붐비는 병에서 방황 하 고 세 번째 탈피 애벌레 몇 시간 pupate 가능성이 것입니다.</li>
		<li>일단 애벌레 움직이지 되 고 매우 가벼운 (거의 흰색) 색된 번데기 케이스에 의해 포위 된다는 작은 2-페 트리 접시에 촉촉한 필터 종이 그들을 전송.</li>
		<li>1-2 h, 때때로 모니터링, 확인, 및 prepupae 전송에 대 한 계속. 참고: 또는 모든 pupae의 병을 취소 하 고 2 시간에 대 한 개발에 애벌레를 허용. 모든 pupae 수집 후 2 h 0-2 h APF 범위 안에 있을 것입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>즉시 prepupal 더듬이 디스크 0 h APF 무대에 대 한 해 부 3.1 단계로 이동 합니다. prepupa 세 수 하는 경우, 접시에 그들을 수집, 접시 커버와 건조, 억제 하기 위해 가장자리 주위 파라핀 영화 놓고 25 ° c.에 페 트리 접시를 놓고 참고: 번데기 이제 일수로 하 세 수 있습니다.</li>
	<li>2 h 범위에서 수집 하는 번데기에 대 한 번데기 하지 할 수 있도록 원하는 나이 보다는 더 적은 2 시간에 대 한 prepupae을 나이 없 더군요.</li>
	<li>아주 작고 연약한 조직으로 초 미세 집게 (Dumont 55)를 사용 합니다.</li>
</ol>2. 조직 준비 및 다른 초파리 종에서 번데기의 개발 준비
<ol><li>다른 초파리 종의 번데기 개발의 길이 확인 하려면 샘플 최적의 온도에서 prepupae은 관찰 날짜를 기록, 신선한 유리병으로 그들을 정렬 놓고 성인 기에 prepupa에서 일 수를 기록 합니다.</li>
	<li>시간 번데기 개발에 대 한 비-melanogaster 종 melanogaster의 비율을 기록 합니다. Melanogaster 준비에 대 한 비-melanogaster 종 나이에 시간 수를 사용 하는 시간의 수에 의해 개발 시간의 비율을 곱하면 됩니다.</li>
</ol>3. D. melanogaster 번데기 더듬이 디스크의 해 부
참고: 모든 노화 시간 및 해 부 프로토콜 설명에 대 한 초파리 melanogaster. 위에서 설명한 대로 다른 모든 종족에 대 한 종의 발달 시간 포인트에 따라 노화 프로토콜의 필요 있을 것입니다.
<ol><li>번데기 더듬이 디스크 해에 대 한 50-100 0-2 h 또는 주걱을 사용 하 여 6-8 h 오래 된 번데기를 수집 하 고 해 부 패드에 그들을 배치.</li>
	<li>무료 1.5 mL microfuge 200 µ L 피 펫을 사용 하 여 튜브와 튜브를 얼음 위에 RNase에 RNA 격리 솔루션의 150 µ L 플라스틱.</li>
	<li>1 x PBS (인산 염 버퍼 식 염 수, nuclease 무료)의 150-200 µ L에 번데기를 해 부. 해 부 패드에 PBS (방울 당 150-200 µ L)의 여러 방울을 배치 합니다.</li>
	<li>해 부 패드에서 PBS 방울 x 1 중에서 해 부 수를 0-2 h 또는 세 6-8 h 번데기 (한 번데기 드롭 당)을 놓습니다. 한 손에 집게를 사용 하 여 신체를 안정.</li>
	<li>0-2 h pupae를 사용 하 여 다른 손에 잡고 집게에는 prepupa의 가장 앞쪽 부분 (입 고리)를 세 고 두뇌와 앞쪽 번데기 케이스에 부착 된 imaginal 디스크를 밖으로 당겨.</li>
	<li>8 h APF pupae에 대 한 먼저 부드럽게 껍질 번데기, 시체를 둘러싸는 막 자루 내 머리를 노출의 가장 앞쪽 분기에서 번데기 케이스에서. 참고: 몸,이 단계에서 처럼 보인다 악화 애벌레.</li>
	<li>목 관절에서 머리를 제거 합니다. 참고: 이렇게 하면 더듬이 디스크 손실 되지 것입니다이 단계에는 주로 뇌의 시 돌출부에 연결 되어.</li>
	<li>두뇌와 imaginal 디스크 조직을 다른 1x PBS 방울 집게 또는 20 µ L 피 펫을 사용 하 여 전송.</li>
	<li>광 엽에서 뇌에 연결 된 눈 더듬이 디스크를 식별 합니다. 집게를 사용 하 여, 두뇌와 번데기 케이스에서 눈 더듬이 디스크를 분리 합니다. PBS 방울 집게 또는 20 µ L 피 펫을 사용 하 여 x 새 1에 그것을 전송. 참고: prepupal 눈 더듬이 디스크는 평평한 조직 이다. 그러나, 8 h pupae로 눈 디스크는 회전 컵 더듬이 디스크는 중앙 뇌 앞쪽에 앉아.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 눈과 더듬이 디스크 사이의 연결의 사이트에서 조직을 잘라. 20 µ L 피 펫을 사용 하 여 부드럽게 RNA 격리 솔루션 시 약으로 해 부 조직을 전송. 가능한 금액 pipetting으로 전송 하는 액체의 양을 최소화 합니다.</li>
	<li>모든 pupae 해 부 될 때까지 반복 합니다.</li>
</ol>4. D. melanogaster 중반-번데기 및 성인 안테나의 해 부
참고: 40 h APF, 대부분의 변 태 완료 되 면, 그리고 성인 구조, 명백한 되고있다 하지만 여전히 흰색 하 고 표현할 수 있다. 이 개발 시간이 시점에서 성인 안테나는 그것의 마지막 모양 아직 여전히 투명은 고 몇을 제외한 후 각 수용 체의 대부분 식 시작 하지 않았습니다.
<ol><li>번데기 더듬이 해에 대 한 1 단계에서 설명한 대로 50-100 prepupae를 수집 하 고 40 h 25 ° c.에 대 한 그들을 나이</li>
	<li>피펫으로 150 µ L RNase 무료 1.5 mL microcentrifuge에 RNA 격리 솔루션의 200 µ L 피펫으로 사용 하 여 튜브와 튜브를 얼음 위에.</li>
	<li>해 부 패드에서 PBS 방울 x 1의 하나로 해 부에 번데기를 놓습니다. 한 손에 집게를 사용 하 여 신체를 안정. 번데기는 시체를 둘러싸는 막 자루 내 머리를 노출의 가장 앞쪽 분기에서 번데기 케이스 벗기다 집게를 사용 하 여 다른 손에서 부드럽게.</li>
	<li>집게를 사용 하 여, 조심 스럽게 잘라 번데기 시체의 나머지 부분에서 머리 집게의 1 세트를 가진 시체를 벗는 머리 목에 집게의 또 다른 세트와 함께 공동 하 여. 부드럽게 PBS 방울 집게를 사용 하 여 다른 1x로 머리를 전송 합니다. 머리 (뇌, 등)를 분명 막 개발 초파리 머리를 포위 하는 데 사용의 내용을 밖으로 청소를 위아래로 플라스틱. 참고: 40-50 h APF, 안테나 막의 앞쪽 대부분 섹션에 연결 됩니다. 그들은 머리의 내용을 pipetting으로 지워집니다 때 해 부에 대 한 명백한 될 것입니다.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 막에서 번데기 안테나를 분리 합니다. 3에서 안테나의 2nd 세그먼트를 분리rd 3rd 세그먼트만 후 각 수용 체 신경 세포를 들어설 예정으로 단편 관절에서 슬라이스를 집게를 사용 하 여.</li>
	<li>20 µ L 피 펫을 사용 하 여 부드럽게 RNA 격리 솔루션 시 약으로 해 부 조직을 전송. 가능한 금액 pipetting으로 전송 하는 액체의 양을 최소화 합니다. 모든 pupae 해 부 될 때까지 반복 합니다.</li>
	<li>성인 더듬이 해 약 50 성인 수집 및 주 후 일수로 대 한 그들을 나이. 참고: 후 각 수용 체 유전자의 표현과 다른 유전자 일수로 후 주 피크. 어른은 생물학으로 관련 유전자 검출 임계값 이상 상승 낮은 풍부 증명서를 위해 1 주일에 대 한 세.</li>
	<li>RNA 추출에 대 한 그들은 CO2 패드에 아직도 살아 있는 동안 파리의 해 부. RNase 억제제와 CO2 패드를 취급 합니다. Confocal 영상에 대 한 해 부 해 부 패드 PBS 또는 PBS + 0.2% x 1에서에 파리 트리톤.</li>
	<li>첫째, 성인 절 개 범위에서 CO2 역 패드에 잘 넣어. 신체를 안정 시키기 위해 한 손에 집게를 사용 하 여 CO2 역 패드, 다른 한편에서 포 셉을 사용 하 여 두 번째에서 세 번째 더듬이 세그먼트 밖으로 부드럽게 당겨/핀치에.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 액체에 직접 안테나를 배치 하는 RNA 격리 솔루션에 안테나를 전송 합니다. 모든 성인 해 부 될 때까지 반복 합니다. 주: 안테나 RNA 격리 솔루션에 잠긴 것을 확인 하십시오. 안테나는 튜브의 측면에 갇혀 될 수 있습니다. 이 RNA 품질 및 수량 감소는 RNA의 증가 저하가 될 수 있습니다.</li>
	<li>직접 RNA 추출을 진행 하거나 장기 저장을 위한-80 ° C에서 튜브를 놓습니다.</li>
</ol>5. RNA 격리 해 부 조직에서
<ol><li>-80 ° C 저장소에서 모든 샘플을 제거 하 고 얼음에 녹여.</li>
	<li>짧게 스핀 (5-6 s, ~ 6000 x g) 튜브의 하단에 있는 자료를 수집 하는 각 샘플.</li>
	<li>10는 압력가 플라스틱 유 봉과 전기 모터를 사용 하 여 각 샘플을 갈아 얼음에 s.</li>
	<li>5.2와 5.3 4 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>RNA 추출 상용 키트를 사용 하 고 최적의 생산량에 대 한 제조 업체의 프로토콜을 다음을 수행 합니다.</li>
	<li>QRT-PCR 상용 시 약 및 제조 업체의 프로토콜에 따라 관심의 유전자에 대 한 특정 뇌관을 사용 하 여 수행 합니다.<ol>
<li>다음과 같은 조건을 사용 하 여 모든 PCR 반응을 수행: 10 분 동안 95 ° C 변성 뒤 15 95 ° C의 40 주기 s, 55 ° C 30에 대 한 s, 그리고 60 ° C 30에 대 한 s. 참고: 딥 및 dpr 유전자를 위해 뇌관 쌍 표 1에 나열 된 및 Hueston CE 외 에 후 각 수용 체 유전자를 위한 뇌관 나열 8.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 번데기 더듬이 디스크와 Immunohistochemistry에 대 한 안테나의 고정
참고: 시간이 같은 금액에 대 한 조직 고정 되도록 10-20 개인 배치 조직 수정 했다. 샘플 조직의 무결성을 최대화 하기 위해 정착 액에 그들을 전송 하기 전에 PBT (세제 PBS)에 체류 하는 시간을 최소화 합니다.
<ol><li>수집 해 부 더듬이 디스크 또는 0.2%의 200 µ L을 포함 하는 200 µ L PCR 튜브에 번데기 안테나 조직의 무결성을 유지 하 고 200 µ L PCR의 벽에 튀어나와에서 샘플을 피하기 위해 얼음에 PBT 튜브는 불완전 한 고정으로 이어질 것입니다 합니다. 참고: 번데기 안테나 및 더듬이 디스크 어려울 수 있습니다 그들은 꽤 반투명으로 보고입니다. 그것은 조직의 모든 손실을 방지 하기 위해 모든 세척 단계에 대 한 절 개 범위를 사용 하는 것이 좋습니다. 또는, 96-잘 Terasaki 플레이트 고정에 대 한 사용 하 고 최고의 조직을 추적 얼룩 있을 수 있습니다.</li>
	<li>4%의 약 200 µ L에 번데기에서 수정 해 부 더듬이 디스크와 더듬이 샘플 PFA (Paraformaldehyde) 실 온에서 30 분. 이 고 후속 단계를 제대로 믹스 솔루션에서 샘플을 nutator에 샘플 튜브를 유지. 6.7 단계로 진행입니다.</li>
	<li>성인 안테나에 대 한 전체 머리를 처음 해 부하 고 4%의 약 200 µ L에서 수정 PFA (paraformaldehyde) 실 온에서 1 h.</li>
	<li>씻어 0.2%의 200 µ L 3 x PBT 10 분. 인큐베이션 기간 동안에 nutator 샘플을 유지.</li>
	<li>고정 헤드에서 두 번째 더듬이 세그먼트의 미세한 절 개에 대 한 해 부 현미경을 다시 이동 합니다. 집게를 사용 하 여 머리를 안정, 두 번째에서 세 번째 더듬이 세그먼트 밖으로 부드럽게 당겨/핀치.</li>
	<li>4%의 약 200 µ L로 해 부 제 3 더듬이 세그먼트를 전송 PFA (paraformaldehyde) 실 온에서 30 분 동안 그들을 수정 하 고.</li>
	<li>씻어 0.2%의 200 µ L 3 x PBT 10 분. 인큐베이션 기간 동안에 nutator 샘플을 유지.</li>
	<li>4 ° C에서 샘플을 저장 하거나 전체 마운트 immunohistochemistry 직접 계속. 참고: 얼룩의 효율성 항 체 사용 되 고 변경할 수 있습니다. 이 메서드는 풍부한 단백질 태그 덜 적합 또는 약한 항 체 이어야 한다. 그러나, 때때로, 그것은 프로토콜 (정체성 또는 정착 액의 금액 또는 고정 시간)의 최적화가 필요할 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Barish, S., Volkan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+olfactory+receptor+neuron+specification+in+Drosophila.">Mechanisms of olfactory receptor neuron specification in Drosophila.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 4 (6), 609-621 (2015).</li><li>Pan, J. W., Volkan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+development+and+evolution+of+the+insect+olfactory+system.">Mechanisms of development and evolution of the insect olfactory system.</a> Cell and Developmental Biology. 2, 130 (2013).</li><li>Ramdya, P., Benton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+olfactory+systems+on+the+fly.">Evolving olfactory systems on the fly.</a> Trends in Genetics. 26 (7), 307-316 (2010).</li><li>Bellen, H. J., Tong, C., Tsuda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=100+years+of+Drosophila+research+and+its+impact+on+vertebrate+neuroscience:+a+history+lesson+for+the+future.">100 years of Drosophila research and its impact on vertebrate neuroscience: a history lesson for the future.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11 (7), 514-522 (2010).</li><li>Knecht, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+combinations+of+variant+ionotropic+glutamate+receptors+mediate+thermosensation+and+hygrosensation+in+Drosophila.">Distinct combinations of variant ionotropic glutamate receptors mediate thermosensation and hygrosensation in Drosophila.</a> eLife. 5, 44-60 (2016).</li><li>Enjin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humidity+sensing+in+Drosophila.">Humidity sensing in Drosophila.</a> Current Biology. 26 (10), 1352-1358 (2016).</li><li>Li, Q., Barish, S., Okuwa, S., Volkan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+endogenous+rotund+expression+and+function+in+developing+Drosophila.+olfactory+system+using+CRISPR-Cas9-mediated+protein+tagging.">Examination of endogenous rotund expression and function in developing Drosophila. olfactory system using CRISPR-Cas9-mediated protein tagging.</a> G3: Genes|Genomes|Genetics. 5 (12), 2809-2816 (2015).</li><li>Hueston, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+modulatory+proteins+and+olfactory+receptor+signaling+in+the+refinement+and+maintenance+of+fruitless+expression+in+olfactory+receptor+neurons.">Chromatin modulatory proteins and olfactory receptor signaling in the refinement and maintenance of fruitless expression in olfactory receptor neurons.</a> PLoS Biology. 14 (4), 1002443 (2016).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+rules+of+precursor+specification+underlying+olfactory+neuron+diversity.">Combinatorial rules of precursor specification underlying olfactory neuron diversity.</a> Current Biology. 23 (24), 2481-2490 (2013).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functionally+conserved+gene+regulatory+network+module+governing+olfactory+neuron+diversity.">A functionally conserved gene regulatory network module governing olfactory neuron diversity.</a> PLoS Genetics. 12 (1), 1005780 (2016).</li><li>Pan, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+transcriptional+parallelism+and+variation+in+the+developing+olfactory+system+of+Drosophila+species.">Patterns of transcriptional parallelism and variation in the developing olfactory system of Drosophila species.</a> Scientific Reports. 7 (1), 8804 (2017).</li><li>Pan, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+behavioral+and+transcriptional+variation+underlying+CO2+sensory+neuron+function+and+development+in+Drosophila.">Comparative analysis of behavioral and transcriptional variation underlying CO2 sensory neuron function and development in Drosophila.</a> Fly. 11 (4), 239-252 (2017).</li><li>Stern, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+transgenic+reagents+for+Drosophila+simulans,+D.+mauritiana,+D.+yakuba,+D.+santomea,+and+D.+virilis.">Genetic and transgenic reagents for Drosophila simulans, D. mauritiana, D. yakuba, D. santomea, and D. virilis.</a> G3: Genes|Genomes|Genetics. 7 (4), 1339-1347 (2017).</li></ol>

저자는 공개 없다.

이 프로토콜은 실험실 초파리 에 걸쳐이 프로그램의 비교 분석으로 초파리 의 후 각 조직 개발에서 유전과 transcriptional 프로그램을 식별 하는 데 관심이 대 한 유용한 리소스 종입니다. 다른 발달 단계에서 시스템 수준 transcriptional 프로필 미래 연구를 위한 뇌관으로 필요한 경우 특히 유용 합니다. 여기에 설명 된 프로토콜 단계 및 개발에 사용 될 터미널 차별화를 모방 하는 사전에서...

발달 신경 생물학, 시스템 신경 과학으로 신경 생리학, 행동 연구, 그리고 행동 진화1,2,3, 초파리 의 후 각 시스템은 널리 사용 되는 시스템 4. 초파리 의 후 각 조직 집 수압 및 온도 감각 신경1,,56외 휘발성 화학 신호를 감지 하는 후 각 수용 체 신경 (ORNs). 이 원고의 전반적인 목표는 무대 초파리 종의 번데기 및 성인 후 각 조직 개발 해 부 하는 방법을 보여 줍니다. 이 기술에 대 한 근거 또한 vivo에서 조직 기술 라벨 샘플 RNAseq 등 정량적 RT-PCR, 주변 후 각 시스템의 분자 및 발달 분석에 대 한 다른 번데기 단계에서 생성 하는 . 이 기술은 특정 세포 유형에 대 한 모든 유전자 변형 시 약 하지 않은 비-초파리 melanogaster 종 개발 성인 후 각 시스템에 transcriptional 프로필의 역학을 식별 하기 위해 특히 유용할 수 있습니다. 표시 하 고 분석입니다. 이 원고, 더듬이 디스크와 번데기 및 성인 초파리 종에서 안테나를 해 부하는 방법을 보여 줍니다. 첫째, 우리 개발 준비 및 종의 노화에 대 한 puparium 형성 (APF, 흰색 pupae 또는 prepupae)의 0 h 초파리 를 식별 하는 방법을 보여 줍니다. 다음, 우리에 게 보여 더듬이 디스크와 제 3 더듬이 세그먼트; 해 부 특히, 눈 디스크 및 RNAseq 또는 RT PCRs에 필요한 조직 순도 대 한 두 번째 더듬이 세그먼트에서 그들을 분리 하는 방법. 미리 무늬 더듬이 디스크 (prepupae)에 해당 하는 단계 D. melanogaster 약이 프로토콜에서 설명에서 일어나는 더듬이에서 선택 디스크 (8 h APF), ORNs (40 h APF)에 대 한 터미널 차별화의 시작 하 고 성인 안테나입니다. 마지막으로, 우리 성인 안테나 메서드를 사용 하 여 고립에서 그리고 vivo에서 immunohistochemistry 양적 RT-PCR에 대 한 예제는 줄. 이 메서드는 RNA/DNA 분석 및 immunohistochemistry 초파리 종에서 주변 후 각 조직 개발에 대 한 샘플을 생성 하기 위해 사용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>10X Phosphate-buffered Saline</td><td>Gibco</td><td>70011-044</td><td>Dilute to 1X in RNase free water</td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2 &lt;/sub&gt;tank</td><td>Air Gas</td><td>CD R200</td><td></td></tr><tr><td>Two sharp forceps (Dumont #55)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596-026</td><td>RNA isolation solutions</td></tr><tr><td>Dissecting Microscope</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small bucket with ice</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P20 and P200 micropipettes and tips</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.7 mL Microfuge tubes</td><td></td><td></td><td>Purchase nuclease free for best results</td></tr><tr><td>0.2 mL PCR tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde powder</td><td>Polysciences</td><td>380</td><td></td></tr><tr><td>10% Triton X-100</td><td>Teknova</td><td>T1105</td><td>Dilute to 0.2% v/v in 1X PBS</td></tr><tr><td>2&quot; petri dishes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>55mm filter paper</td><td>Whatman</td><td>1001-055</td><td>Wet with water and place in a petri dish to keep pupae moist</td></tr><tr><td>25 C incubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>deionized H2O</td><td></td><td></td><td>Purchase nuclease free or treat with DEPC</td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td><td>Dow Corning</td><td></td><td>to be used for making dissection pads from Terizaki plate covers.</td></tr><tr><td>MicroWell Mini Trays with lids</td><td>Nunc</td><td>438733</td><td>Lids can be used to make silicone dissection pads</td></tr><tr><td>Rabbit anti-GFP antibody</td><td>MBL international corpor</td><td>PM005</td><td>primary antibody</td></tr><tr><td>Mouse anti RAT CD2</td><td>AbD seroTec</td><td>MCA154RHDL</td><td>primary antibody</td></tr><tr><td>ADL195 (anti lamin, mouse)</td><td>Dev studies hydoma ban</td><td>ADL195-s</td><td>primary antibody</td></tr><tr><td>Alexa Fluor&amp;reg; 488 goat anti-rabbit IgG (H+L)</td><td>invitrogen</td><td>A11008</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Cy3 Goat Anti-Mouse IgG</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-166-003</td><td>Secondary antibody</td></tr><tr><td>Triton X-100, Protein Grade Detergent, 10% Solution, Sterile-Filtered</td><td>CALBIOCHEM</td><td>648463</td><td>detergent</td></tr><tr><td>Lab Rotator</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td>Rotator</td></tr><tr><td>Nuclease Free Water</td><td>Growcells.com</td><td>NUPW-0125</td><td>Water</td></tr><tr><td>Light-Duty Tissue Wipers</td><td>VWR</td><td>82003-822</td><td>For cleaning dissection supplies</td></tr><tr><td>Superscript II</td><td>invitrogen</td><td>18064014</td><td>Reverse Transcriptase&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>QIAshredder (50)</td><td>RNA extraction</td><td>QIAGEN</td><td>79654</td></tr><tr><td>Oligo(dT)12-18 Primer</td><td>RT</td><td>life technologies</td><td>18418012</td></tr><tr><td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (50)</td><td>RNA extraction</td><td>QIAGEN</td><td>74204</td></tr><tr><td>FASTSTART UNIV SG MASTER (5 ML)(500 RXN)</td><td>qPCR</td><td>Roche</td><td>04913850001</td></tr><tr><td>FASTSTART ESSENTIAL GREEN DNA MASTER&amp;nbsp;</td><td>qPCR</td><td>Roche</td><td>06402712001</td></tr><tr><td>LIGHTCYCLER 480 - MULTIWELL PLATE 96</td><td>qPCR</td><td>Roche</td><td>04729692001</td></tr><tr><td>NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix</td><td>qPCR</td><td>NEB</td><td>M0541S</td></tr></tbody></table>

preparing developing peripheral olfactory tissue for molecular and immunohistochemical analysis in drosophila

초파리 의 후 각 시스템 발달 신경 생물학, 시스템 신경 과학으로 신경 생리학, 행동과 행동 진화에 널리 사용 되는 시스템이입니다. 초파리 의 후 각 조직 집 수압 및 온도 감각 신경 이외에 휘발성 화학 신호를 감지 하는 후 각 수용 체 신경 (ORNs). 이 프로토콜에서 우리는 성인 초파리 종의 주변 후 각 조직 개발의 해 부를 설명 합니다. 우리는 처음 무대 초파리 애벌레, 중순에 번데기 단계와 성인에서 안테나의 해 부에 의해 따라 초기 번데기 단계에서 더듬이 디스크의 해 부를 이어서 나이 하는 방법을 설명 합니다. 우리는 또한 어디 준비 qRT-PCR, RNAseq, 또는 immunohistochemistry RNA 추출 등 분자 기법에 활용할 수 있는 방법을 보여줍니다. 이러한 방법은 적용할 수 있습니다 또한 다른 초파리 종 종의 번데기 개발 시간, 결정 하 고 각 단계는 적절 한 노화에 대 한 계산 됩니다.

해 부 개발 후 각 조직의 RNA 추출 뒤에 RT-PCR 유전자 발현을 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. 또는 immunohistochemistry 프로토콜을 통해 식이 패턴, 그리고 하위 세포질 유전자의 지역화를 확인 하기 위해 취할 수 있습니다. 관심입니다. 이 섹션에서 우리는 어느 프로토콜에서 대표적인 결과 제시. 그림 1 은 대표적인 양적 RT-PCR 야생-타입 성인 안테나에...

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Preparing Developing Peripheral Olfactory Tissue for Molecular and Immunohistochemical Analysis in Drosophila

여기, 우리는 무대와 초파리 종에서 후 각 조직 개발 해 부 프로토콜을 제시. 있으 나 해 부 조직 immunohistochemistry 또는 제자리에서 같은 비보에 분석 뿐만 아니라 양적 RT-PCR (반전 전사-연쇄 반응) 또는 시퀀싱 (RNAseq), RNA와 같은 분자 분석에 대 한 나중에 사용할 수 있습니다. 교 잡입니다.

주변 후 각 조직에 대 한 개발 준비 분자와 초파리 의 Immunohistochemical 분석

The olfactory system of Drosophila is a widely used system in developmental neurobiology, systems neuroscience, as well as neurophysiology, behavior, and ...

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Preparing Developing Peripheral Olfactory Tissue for Molecular and Immunohistochemical Analysis in Drosophila

5.7K 조회수.  Duke University. 여기, 우리는 무대와 초파리 종에서 후 각 조직 개발 해 부 프로토콜을 제시. 있으 나 해 부 조직 immunohistochemistry 또는 제자리에서 같은 비보에 분석 뿐만 아니라 양적 RT-PCR (반전 전사-연쇄 반응) 또는 시퀀싱 (RNAseq), RNA와 같은 분자 분석에 대 한 나중에 사용할 수 있습니다. 교 잡입니다.

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Application of MultiColor FlpOut Technique to Study High Resolution Single Cell Morphologies and Cell Interactions of Glia in Drosophila

Cells display different morphologies and complex anatomical relationships. How do cells interact with their neighbors? Do the interactions differ between cell types or even within a given type? What kinds of spatial rules do they follow? The answers to such fundamental questions in vivo have been hampered so far by a lack of tools for high resolution single cell labeling. Here, a detailed protocol to target single cells with a MultiColor FlpOut (MCFO) technique is provided. This method relies on three differently tagged reporters (HA, FLAG and V5) under UAS control that are kept silent by a transcriptional terminator flanked by two FRT sites (FRT-stop-FRT). A heat shock pulse induces the expression of a heat shock-induced Flp recombinase, which randomly removes the FRT-stop-FRT cassettes in individual cells: expression occurs only in cells that also express a GAL4 driver. This leads to an array of differently colored cells of a given cell type that allows the visualization of individual cell morphologies at high resolution. As an example, the MCFO technique can be combined with specific glial GAL4 drivers to visualize the morphologies of the different glial subtypes in the adult Drosophila brain.

Application of MultiColor FlpOut Technique to Study High Resolution Single Cell Morphologies and Cell Interactions of Glia in Drosophila

Cells display different morphologies and establish a variety of interactions with their neighbors. This protocol describes how to reveal the morphology of single cells and to investigate cell-cell interaction by using the well-established Gal4/UAS expression system.

높은 해상도 단일 셀 형태학 초파리 에서 명과의 세포 상호 작용을 공부 하 고 다 색 FlpOut 기술의 응용

Cells display different morphologies and complex anatomical relationships. How do cells interact with their neighbors? Do the interactions differ between ...

연구

행동분석학

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response to&#160;growth and reproduction. In insects, the larval prothoracic gland (PG) and the adult female ovary play essential roles in biosynthesizing the principal steroid hormones called ecdysteroids. These ecdysteroidogenic organs are innervated from the nervous system, through&#160;which the timing of biosynthesis is affected by environmental cues. Here we describe a protocol for visualizing ecdysteroidogenic organs and their interactive organs in larvae and adults of the fruit fly Drosophila melanogaster, which provides a suitable model system for studying steroid hormone biosynthesis and its regulatory mechanism. Skillful dissection allows us to maintain the positions of ecdysteroidogenic organs and their interactive organs including the brain, the ventral nerve cord, and other tissues. Immunostaining with antibodies against ecdysteroidogenic enzymes, along with transgenic fluorescence proteins driven by tissue-specific promoters, are available to label ecdysteroidogenic cells. Moreover, the innervations of the ecdysteroidogenic organs can also be labeled by specific antibodies or a collection of GAL4 drivers in various types of neurons. Therefore, the ecdysteroidogenic organs and their neuronal connections can be&#160;visualized simultaneously&#160;by immunostaining and transgenic techniques. Finally, we describe how to visualize germline stem cells, whose proliferation and maintenance are controlled by ecdysteroids. This method contributes to comprehensive understanding of steroid hormone biosynthesis and its neuronal regulatory mechanism.

Protocols for Visualizing Steroidogenic Organs and Their Interactive Organs with Immunostaining in the Fruit Fly Drosophila melanogaster

We describe a protocol for dissection, fixation, and immunostaining of steroidogenic organs in Drosophila larvae and adult females to study steroid hormone biosynthesis and its regulatory mechanism. In addition to steroidogenic organs, we visualize the innervation of steroidogenic organs as well as steroidogenic target cells such as germline stem cells.

과일 플라이의 면역 염색과 Steroidogenic 기관 및 그들의 상호 작용하는 장기를 시각화하기위한 프로토콜<em&gt; 노랑 초파리</em

In multicellular organisms, a small group of cells is endowed with a specialized function in their biogenic activity, inducing a systemic response ...

발생학

Immunohistological Labeling of Microtubules in Sensory Neuron Dendrites, Tracheae, and Muscles in the Drosophila Larva Body Wall

To understand how differences in complex cell shapes are achieved, it is important to accurately follow microtubule organization. The Drosophila larval body wall contains several cell types that are models to study cell and tissue morphogenesis. For example tracheae are used to examine tube morphogenesis1, and the dendritic arborization (DA) sensory neurons of the Drosophila larva have become a primary system for the elucidation of general and neuron-class-specific mechanisms of dendritic differentiation2-5 and degeneration6.
The shape of dendrite branches can vary significantly between neuron classes, and even among different branches of a single neuron7,8. Genetic studies in DA neurons suggest that differential cytoskeletal organization can underlie morphological differences in dendritic branch shape4,9-11. We provide a robust immunological labeling method to assay in vivo microtubule organization in DA sensory neuron dendrite arbor (Figures 1, 2, Movie 1). This protocol illustrates the dissection and immunostaining of first instar larva, a stage when active sensory neuron dendrite outgrowth and branching organization is occurring 12,13.
In addition to staining sensory neurons, this method achieves robust labeling of microtubule organization in muscles (Movies 2, 3), trachea (Figure 3, Movie 3), and other body wall tissues. It is valuable for investigators wishing to analyze microtubule organization in situ in the body wall when investigating mechanisms that control tissue and cell shape.

Immunohistological Labeling of Microtubules in Sensory Neuron Dendrites, Tracheae, and Muscles in the Drosophila Larva Body Wall

To understand how complex cell shapes, such as neuronal dendrites, are achieved during development, it is important to be able to accurately assay microtubule organization. Here we describe a robust immunohistological labeling method to examine microtubule organization of dendritic arborization neuron sensory dendrites, trachea, muscle, and other Drosophila larva body wall tissues.

Immunohistological 감각 신경 세포의 Dendrites에 Microtubules의 라벨링, Tracheae, 그리고 근육에 Drosophila 유충 바디 벽

To understand how differences in complex cell shapes are achieved, it is important to accurately follow microtubule organization. The Drosophila larval ...

신경과학

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a reliable protocol for the dissection of the delicate Drosophila pupal retina. Our surgical approach utilizes readily-available microdissection tools to open pupae and precisely extract eye-brain complexes. These can be fixed, subjected to immunohistochemistry, and retinas then mounted onto microscope slides and imaged if the goal is to detect cellular or subcellular structures. Alternatively, unfixed retinas can be isolated from brain tissue, lysed in appropriate buffers and utilized for protein gel electrophoresis or mRNA extraction (to assess protein or gene expression, respectively). Significant practice and patience may be required to master the microdissection protocol described, but once mastered, the protocol enables relatively quick isolation of mainly undamaged retinas.

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

This paper presents a surgical method for dissecting Drosophila pupal retinas along with protocols for the processing of tissue for immunohistochemistry, western analysis, and RNA-extraction.&#160;

Immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 격리에 대 한 초파리 번데기 망막의 해 부

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this information to the brain. As such, determining how olfactory information is transferred to the brain, modifying both perception and behavior, merits investigation. Interestingly, there is emerging evidence that cellular transduction and transcriptional factors are involved in the diversification of olfactory receptor neuron. Here we provide a robust whole mount immunological labeling method to assay in vivo olfactory receptor neuron organization. Using this method, we identified all olfactory receptor neurons with anti-ELAV antibody, a known pan-neural marker and Or49a-mCD8::GFP, an olfactory receptor neuron specifically expressed in Nba neuron using anti-GFP antibody.

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling<em&gt; 초파리</em&gt; 안테나

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a plethora of mutant strains and technical tricks have been developed to allow sophisticated questions to be asked and answered in a reasonable amount of time. Fundamental insight into the interplay of components of all known major signaling pathways has been obtained in forward and reverse genetic Drosophila studies. The fly eye has proven to be exceptionally well suited for mutational analysis, since, under laboratory conditions, flies can survive without functional eyes. Furthermore, the surface of the insect eye is composed of some 800 individual unit eyes (facets or ommatidia) that form a regular, smooth surface when looked at under a dissecting microscope. Thus, it is easy to see whether a mutation might affect eye development or growth by externally looking for the loss of the smooth surface ('rough eye' phenotype; Fig. 1) or overall eye size, respectively (for examples of screens based on external eye morphology see e.g.1). Subsequent detailed analyses of eye phenotypes require fixation, plastic embedding and thin-sectioning of adult eyes.
The Drosophila eye develops from the so-called eye imaginal disc, a bag of epithelial cells that proliferate and differentiate during larval and pupal stages (for review see e.g. 2). Each ommatidium consists of 20 cells, including eight photoreceptors (PR or R-cells; Fig. 2), four lens-secreting cone cells, pigment cells ('hexagon' around R-cell cluster) and a bristle. The photoreceptors of each ommatidium, most easily identified by their light sensitive organelles, the rhabdomeres, are organized in a trapezoid made up of the six "outer" (R1-6) and two "inner" photoreceptors (R7/8; R8 [Fig. 2] is underneath R7 and thus only seen in sections from deeper areas of the eye). The trapezoid of each facet is precisely aligned with those of its neighbors and the overall anteroposterior and dorsoventral axes of the eye (Fig. 3A). In particular, the ommatidia of the dorsal and ventral (black and red arrows, respectively) halves of the eye are mirror images of each other and correspond to two chiral forms established during planar cell polarity signaling (for review see e.g. 3).
The method to generate semi-thin eye sections (such as those presented in Fig. 3) described here is slightly modified from the one originally described by Tomlinson and Ready4. It allows the morphological analysis of all cells except for the transparent cone cells. In addition, the pigment of R-cells (blue arrowheads in Fig. 2 and 3) can be used as a cell-autonomous marker for the genotype of a R-cell, thus genetic requirements of genes in a subset of R-cells can readily be determined5,6.

Preparation of Adult Drosophila Eyes for Thin Sectioning and Microscopic Analysis

A standard approach to prepare adult Drosophila eyes for semi-thin sectioning and light microscopic analysis is presented here. The protocol can be used for gross morphological analysis of eye defects, or with the indicated adjustments can be used to determine genetic requirements of genes in specific cell types of the eye (e.g. clonal analysis of photoreceptors) or for electron microscopic analysis.

성인의 준비 Drosophila</em씬 Sectioning 및 현미경 분석을위한> 눈

Drosophila has long been used as model system to study development, mainly due to the ease with which it is genetically tractable. Over the years, a ...

생물학

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, oviposition, and mating. Myriad chemicals of varying volatilities have been identified as natural odorants that activate insect Olfactory Receptor Neurons (ORNs). However, studying the olfactory responses to low-volatility odorants has been hampered by an inability to effectively present such stimuli using conventional odor-delivery methods. Here, we describe a procedure that permits the effective presentation of low-volatility odorants for in vivo Single-Sensillum Recording (SSR). By minimizing the distance between the odor source and the target tissue, this method allows for the application of biologically salient but hitherto inaccessible odorants, including palmitoleic acid, a stimulatory pheromone with a demonstrated effect on ORNs involved in courtship and mating behavior1. Our procedure thus affords a new avenue to assay a host of low-volatility odorants for the study of insect olfaction and pheromone communication.

Electrophysiological Recording from Drosophila Trichoid Sensilla in Response to Odorants of Low Volatility

The overall goal of this protocol is to demonstrate how to present odorants of low volatility for single-sensillum recording from Drosophila olfactory receptor neurons that respond to long-chain cuticular pheromones.

에서 전기 생리 학적 기록<em&gt; Drosophila</em&gt; 낮은 휘발성의 냄새에 반응하는 Trichoid Sensilla

Insects rely on their sense of smell to guide a wide range of behaviors that are critical for their survival, such as food-seeking, predator avoidance, ...

<meta charset="utf8"></head><body>후각 경험 유도 시냅스 리모델링(Olfactory Experience-Induced Synaptic Remodeling in Drosophila's Juvenile Brain)

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period

Early-life olfactory sensory experience induces dramatic synaptic glomeruli remodeling in the Drosophila juvenile brain, which is experientially dose-dependent, temporally restricted, and transiently reversible only in a short, well-defined critical period. The directionality of brain circuit synaptic connectivity remodeling is determined by the specific odorant acting on the respondent receptor class of olfactory sensory neurons. In general, each neuron class expresses only a single odorant receptor and innervates a single olfactory synaptic glomerulus. In the Drosophila genetic model, the full array of olfactory glomeruli has been precisely mapped by odorant responsiveness and behavioral output. Ethyl butyrate (EB) odorant activates Or42a receptor neurons innervating the VM7 glomerulus. During the early-life critical period, EB experience drives dose-dependent synapse elimination in the Or42a olfactory sensory neurons. Timed periods of dosed EB odorant exposure allow investigation of experience-dependent circuit connectivity pruning in juvenile brain. Confocal microscopy imaging of antennal lobe synaptic glomeruli is done with Or42a receptor-driven transgenic markers that provide quantification of synapse number and innervation volume. The sophisticated Drosophila genetic toolkit enables the systematic dissection of the cellular and molecular mechanisms mediating brain circuit remodeling.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: Exploring Glial Influence in Experience-Dependent Synaptic Pruning During Critical Periods

We describe here methods for inducing and analyzing olfactory experience-dependent remodeling of antennal lobe synaptic glomeruli in the Drosophila juvenile brain.

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

주변 후 각 조직에 대 한 개발 준비 분자와 초파리 의 Immunohistochemical 분석

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과일 플라이의 면역 염색과 Steroidogenic 기관 및 그들의 상호 작용하는 장기를 시각화하기위한 프로토콜

Immunohistological 감각 신경 세포의 Dendrites에 Microtubules의 라벨링, Tracheae, 그리고 근육에 Drosophila 유충 바디 벽

Immunohistochemistry, 서쪽 분석 및 RNA 격리에 대 한 초파리 번데기 망막의 해 부

에있는 후각 수용체 뉴런의 전체 마운트 Immunolabeling

성인의 준비 Drosophila 눈

에서 전기 생리 학적 기록

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)

Experience-Dependent Remodeling of Juvenile Brain Olfactory Sensory Neuron Synaptic Connectivity in an Early-Life Critical Period(어린 뇌 후각 감각 뉴런 시냅스 연결성의 경험 의존적 리모델링)