이 방법은 이러한 모델과 관련된 것을 줄이는 방법과 재현성을 개선하는 방법과 같은 실험적인 스트로크 필드의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 일반적인 경동맥을 통해 재관류를 허용하고, 따라서 동물 마다 해부학적으로 다를 수 있는 윌리스원에 의존하지 않으며, 따라서 실험결과 측정에서 보인 가변성에 기여할 수 있다는 것입니다. 이 방법의 시각적 데모는 CCA 선박 수리 단계가 수리 후 CCA가 완전히 특허가 되도록 실란트를 사용할 때 관련된 기술적 어려움으로 인해 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다.
시작하려면 테스트 프로토콜에 따라 마우스를 준비하고 마취합니다. 그런 다음 15번 메스 블레이드를 사용하여 노출된 복부 목에 1.5cm 중간선 절개를 합니다. 무딘 해부 기술을 사용하여 침샘을 옆으로 부드럽게 후퇴하여 기관지를 노출시킵니다.
그런 다음 일반적인 경동맥 또는 CCA를 주변 조직과 증기 신경으로부터 자유롭게 해부합니다. 그 후, CCA 아래에 불용성 6-0 봉합사의 두 개의 작은 부분을 전달하고, CCA에 등쪽, 복부를 골간 신경에 전달한다. 한 실크 넥타이를 외과 의사에게 가까이 끌어서 CCA 주위에 느슨하게 묶습니다.
그런 다음 두 번째 실크 넥타이를 내부 및 외부 경동맥의 양면으로 느슨하게 묶습니다. 다음으로, 분할이 막히지 않도록 하는 황실 넥타이 바로 위에 미세 혈관 클립을 적용합니다. 마이크로 정맥 가위를 사용하여 CCA에 작은 구멍을 만듭니다.
7-0 실리콘 코팅 마이크로 필라멘트를 CCA에 삽입하고 마이크로 혈관 클립쪽으로 진행합니다. 그런 다음 말단 넥타이를 조여 필라멘트를 제자리에 고정시하십시오. 그리고 클립 홀더를 사용하여 미세 혈관 클립을 제거합니다.
다음으로 필라멘트를 내부 경동맥 또는 ICA로 전진시키세요. 필라멘트 헤드가 말단 넥타이를 통과하면 넥타이를 더 단단히 당겨 혈액 손실을 방지하십시오. 말단 실크 넥타이를 사용하여 CCA를 마우스 몸의 바깥쪽으로 들어 올리고 당기고 필라멘트를 굴곡으로 조종하여 pterygopalatine 동맥 또는 PPA의 개구부를 지나게 합니다.
필라멘트가 제자리에 있으면 단단 실크 넥타이를 더 조여 고정하십시오. MCAO 기간이 끝나면 흰색 필라멘트 헤드가 명확하게 보일 때까지 필라멘트를 철회합니다. 그런 다음 혈관에서 필라멘트 머리를 대부분의 방법으로 제거하기에 충분한 말단 CCA 넥타이를 느슨하게합니다.
다음으로, 완전히 용기에서 필라멘트 머리를 제거합니다. 그 후, 마이크로혈관 클립을 수평 위치에 놓고, CCA 분기를 향해, 그리고 탈구 넥타이 옆에 놓는다. 그런 다음 근위 CCA 넥타이 아래에 다른 클립을 외과 의사쪽으로 놓습니다.
두몬트 5 포스프를 사용하여 실크 타이를 모두 제거하십시오. 멸균 면 봉오리를 사용하여 부위를 건조시다. 그런 다음 피브리노겐과 트롬빈 실란트 용액을 1개와 2개를 멸균 페트리 접시에 넣습니다.
마이크로 정맥 가위와 무딘 해부 기술을 사용하여, 흉골 균증 근육의 얇은 복부 조각을 얻을. 그런 다음 Dumont 5 집게를 사용하여 티슈 패드를 가져 와서 피브리노겐과 트롬빈 실란트 용액을 고르게 혼합하십시오. 여기서 조직 패드가 CCA 절개를 덮을 만큼 충분히 큰지 확인하는 것이 중요합니다.
그리고 두 가지 솔루션에 걸쳐 혼합되면 지나치게 응고되고 접착력이 떨어지는 것을 방지하기 위해 절개 위에 즉시 배치해야합니다. 두 가지 솔루션 사이에 혼합되면 조직 패드를 CCA 절개로 제거합니다. 티슈 패드를 중간 압력으로 절개에 평평하게 놓고 집게를 엽니다.
조직 패드를 제자리에 잡으면서 황실 미세 혈관 클립을 신속하게 제거합니다. 다음으로, 조직 패드의 압력을 천천히 완화하여 절개 부위 아래에 혈액이 흐르도록 합니다. 이제 근위 미세 혈관 클립에서 압력을 천천히 부드럽게 방출한 다음 완전히 제거합니다.
상단 클립을 제거하면 소량의 혈액이 실란트를 활성화할 수 있습니다. 해발 클립의 꾸준한 릴리스는 절개 부위에서 점진적인 압력 증가를 허용하고, 더 활성화하고, 실패한 수리를 방지하는 데 도움이 됩니다. 마지막으로, 선박이 밀봉되면, 풀릴 수있는 6-0 봉합사로 상처를 봉합합니다.
이 프로토콜에서, 중간 뇌동맥 폐색, 또는 MCAO는, 24명의 성인 남성 마우스에 수행되었다. ECA 결찰의 회피와 진통제의 추가는 MCAO 이후 48 시간에서 감소 된 체중 감소를 향해 추세를 보였다. 필라멘트 제거 후 5 분, 지역 대뇌 혈류는 MCA의 뇌 영역에서 크게 증가.
관류는 CCA 선박 수리 후 MCA 영토에 관류가 증가하면서 선박 수리까지 유지되었습니다. 이것은 CCA 수리가 윌리스 만의 원에 의존하는 것과 비교하여 허혈성 영토에 증가한 혈액 관류를 허용했다는 것을 건의합니다. T2 가중 MRI는 MCAO 후 48시간 후에 코어 LV를 결정하는 데 총 LV 및 DTI 스캔을 결정하기 위해 사용되었다.
이 두 그룹 사이에는 큰 차이가 없었다. 흥미롭게도 CCA 수리 그룹에서 총 및 코어 LV의 변동성이 크게 감소했습니다. 우리의 분석은 일반적인 CCA ligated 절차에 비해 CCA 수리를 사용하여 MCAO에 따라 LV에 있는 30% 감소를 보여주기 위하여 처리 단 당 더 적은 동물이 요구될 것이라는 점을 보여주었습니다.
이 절차를 시도하는 동안, 조직 팩이 CCA 절개를 커버하기에 충분한 크기의지 확인하는 것이 중요합니다. 또한, 속도는 CCA에 패드를 배치하기 전에 실란트 과잉 응고를 방지하기 위해 중요합니다.
