물 유지와 울트라입니다 미세 칩을 사용 하 여 라이브 꼬마 선 충 의 동원 정지

이 프로토콜의 한 가지 장점은 웜 시트를 처리하기 쉽다는 것입니다. 시트에는 건조를 방지하고 살아있는 동물에게 미세 빔 조사를 수행하고 여러 행동 검사를 수행하고 장기 관찰할 수 있는 기능이 있습니다. 이 웜 시트의 미세 유체 채널이 열려 있어 동물을 쉽게 수집할 수 있습니다.

이러한 웜 시트는 반복적으로 사용할 수 있으므로 더 경제적입니다. 우리가 이 기술을 개발할 때, 우리는 현미경의 밑에 마이크로빔을 가진 동물의 단지 부분을 조사하고 싶었습니다. 그래서 우리는 동물을 들고 할 수있는 명확하고 매우 얇은 칩이 필요했습니다.

먼저 얇고 투명한 시트를 바닥에 놓아 바닥에 덮는 필름으로 사용하십시오. 웜 시트를 하단 커버 필름에 플랫 핀셋으로 부드럽게 배치합니다. 6센티미터, 비처리 페트리 접시의 표면에 버퍼 용액의 적어도 세 방울을 놓습니다.

그런 다음 문화 접시에서 플라티나 피커가있는 성인 C.elegans를 선택하십시오. 플라티나 피커와 함께 물방울로 동물을 옮기고 동물이 완충소에서 수영하여 박테리아를 제거합니다. 동물을 두 개의 별도 물방울로 씻고 다른 물방울에 동물을 헹구십시오.

다음으로 버퍼 용액의 액적액을 웜 시트 표면에 놓습니다. 완충액에서 세척된 동물을 제거하고 웜 시트의 액적으로 옮겨 넣습니다. 플랫 핀셋을 사용하여 PS 커버 필름을 웜 시트 위에 놓고 시트의 한쪽 끝에서 다른 쪽 끝까지 채널을 부드럽게 누릅니다.

또는 동물을 물방울에 떨어뜨리고 커버 필름으로 부드럽게 밀봉하기 때문에 물방울이 채널 내의 동물과 함께 덮개와 웜 시트 사이에 퍼집니다. 1-2배 배율로 현미경으로 움직임을 확인하여 동물이 살아 있는지 확인합니다. 동물의 위치를 기록하고 특히 각 동물이 동봉된 채널의 수와 채널의 각 동물의 위치를 구체적으로 기록합니다.

고정 동물을 수집하려면 플랫 핀셋을 사용하여 웜 시트에서 커버 필름을 제거한 다음 10-15 마이크로리터의 완충액을 동물을 둘러싸는 미세 유체 채널 중 하나에 떨어뜨립니다. 스테레오 현미경에서, 그들은 회전하기 시작으로 동물을 관찰. 그런 다음 플라티나 피커를 사용하여 수영 동물을 집어 분석 접시로 옮기십시오.

이전에 설명한 대로 동물을 둘러싸은 후에, 밀가루 현미경으로 동물에 형광 반점을 관찰하십시오. 그런 다음 화상 수집을 사용하여 칼슘 이온 파 전파를 이미지하여 동적 활동을 관찰합니다. 사용된 웜 시트를 6센티미터 페트리 접시에 놓고 약 100마이크로리터의 멸균 된 초순수물을 시트에 놓습니다.

장갑을 낀 손가락을 사용하여 시트 표면에 물을 퍼뜨리고 오염 물질을 씻어 내보도록 하십시오. 다음으로 일회용 물티슈를 사용하여 웜 시트에서 수분을 제거합니다. 페트리 접시에 70%에탄올의 5밀리리터를 분배하고 장갑을 낀 손가락을 사용하여 에탄올을 웜 시트 위로 퍼뜨리습니다.

마지막으로 시트가 건조한 후 시트를 멸균 페트리 접시에 놓고 덮습니다. 이 프로토콜을 사용하여 다른 커버 필름의 적합성을 조사했습니다. PS 필름을 가진 미세유체 채널에 동봉된 대조군 동물과 동물 사이 운동성에 있는 유의한 다름이 없었습니다.

대조적으로, 커버 유리 밑에 동봉된 동물에서 운동성이 현저하게 감소되었습니다. 애완 동물 필름으로 둘러싸인 동물의 운동성도 크게 감소했습니다. 미세 유체 채널의 밀봉을 위해 커버 필름을 신중하게 선택하는 것이 중요합니다.

이 프로토콜을 사용하여 온칩 고정 후 3시간 동안 동물의 운동 분석서를 통해 다양한 커버 필름의 적합성을 평가했습니다. 이 기술을 사용하여, 우리는 마이크로 빔 조사를위한 초박형 습식 칩을 개발하기위한 것입니다. 그러나 이러한 웜 시트는 이미 원래 응용 프로그램을 넘어 이미징 및 행동 검사를 위해 사용되었습니다.