이 인간의 혈액-뇌 인터페이스 모델은 신경 시스템으로 분자의 전송을 공부에 유용. 미생물을 연구하는 것 뿐만 아니라 감염된 뇌통증 종양에 도달합니다. 이 혈액 뇌 장벽 또는 BBB 모델에 미니 뇌를 추가하면 BBB가 뇌에서 행동하는 원인이되는 병원체와 분자의 연구를 할 수 있습니다.
절차를 가장 많이 하는 플로리안 바카오, 내 실험실에 대 한 박사 과정 학생. BBB 미니 뇌 폴리에스테르 막 배양 삽입 장치를 설정하려면, 삽입 농도 불완전한 내피 세포 배지당 제4 세포에 5배 10으로 세포를 희석시키고 12웰 플레이트에 삽입된 각 폴리에스테르 막 배양배소에 적절한 양의 세포를 첨가한다. 그런 다음, 세포가 100%의 합류에 도달할 때까지 인서트와 세포 배양 배양 인큐베이터를 배치합니다.
12 개의 웰 플레이트를 1 밀리리터의 폴리 D-lysine로 실내 온도에서 4 시간 동안 잘 잡습니다. 하룻밤 사이에 라미닌 1 밀리리터가 뒤따랐습니다. 라미닌을 내피 세포 배지의 1밀리리터로 교체하여 5%의 태아 소 혈청 또는 FBS로 보충합니다.
이 곳을 인큐베이터에 1시간 동안 배치합니다. 미니 곡물을 준비하려면 CHME 클론 5 개의 세포에서 인간 뉴런 성상 세포를 부드럽게 시험합니다. 세포 펠릿을 완전한 내피 세포 배지와 연결합니다.
5구째 에 3.6배 10회 에서 5구신경및 성상세포는 0.4배 10배로 계산한 후, 5차 CHME 클론 5세포에 12개의 웰 플레이트가 있다. 그리고 12 웰 플레이트를 시드. BBB 미니 뇌를 구성하기 24 시딩 후 24 시간 신선한 완전한 내피 세포 배지로 사용 된 매체를 대체하고 대뇌 마이크로 혈관 내피 세포 코팅 폴리 에스테르 막 배양을 미니 뇌 세포 에 걸쳐 전달한다.
그런 다음 BBB많은 뇌 장치를 인큐베이터에 넣습니다. BBB 미니 뇌 내피성 투과성을 검증하려면 새로운 12 웰 플레이트에 잘 당 1.5 밀리리터의 수송 버퍼를 추가합니다. 그리고 각 필터를 거꾸로 뒤집어 내피 세포 장벽에 영향을 주지 않고 배지를 조심스럽게 제거합니다.
각 필터를 수송 버퍼 채워진 플레이트의 한 웰에 넣고 각각의 우물에 0.5 밀리리터의 루시퍼 옐로우를 추가합니다. 그런 다음 10 분 동안 인큐베이터에 플레이트를 넣고 필터를 12 웰 플레이트로 채워진 새로운 운송 버퍼로 옮킨다. 입증 된 바와 같이 BBB 많은 뇌 장치를 설정 한 후, 황열병 바이러스희석의 프랑스 신경 영양 바이러스 균주의 3500 플랫폼 단위와 2 % FPS 내피 세포 매체의 50 마이크로 리터를 추가, 매우 신중하게, 발광 구획의 상단에.
2%FBS 내피 세포 배지의 50 마이크로리터로 대조군 BBB 미니 뇌를 바이러스 없이 접종한다. 그런 다음 바이러스가 24 시간 동안 인큐베이터에 많은 뇌 장치를 노출 배치합니다. 다음 날, 내피 세포 투과성 및 동반자를 결정하기 위해 인서트를 제거하고 입증된 것과 마찬가지로.
중간 구획에서 바이러스 티터를 결정하기 위해 각 우물에서 샘플 1 밀리리터를 저장합니다. 아블루미날 구획에 발광 구획이 누출되는 것을 피하기 위해 부드럽게 삽입할 수 있습니다. 혈액 뇌 장벽을 가로 질러 생체 분자를 대상으로 하는 뉴런의 수송을 연구하려면, 인서츠에 관심있는 생체 분자를 추가하고 세포 배양 인큐베이터에 플레이트를 반환합니다.
24시간 후에 원격으로 삽입하고 내피 투과성을 결정합니다. 그런 다음 미니 뇌 내에서 관심있는 생체 분자의 존재를 검출하기위한 적절한 항체로 많은 뇌 세포를 얼룩지게합니다. 인간 뇌성 마이크로 혈관 내피 세포는 그들의 생물학적 기능에 대한 주요 관련 단백질인 rececptoers, Efflux 수송기 또는 수송기의 모든 하위 집합을 표현합니다.
황열병 바이러스의 일부 프랑스 신경 열대 바이러스 균주는 24 시간에 혈액 뇌 장벽을 교차 할 수 있습니다. 바이러스는 그 때 두뇌 세포 안쪽에 바이러스의 곱셈에 의해 다음 이틀 동안 증폭합니다. 또한, 특정 바이러스 성 바이오마커의 발현은 이 신경 침습성 바이러스 집단이 미니 뇌 세포에 직렬로 통과되고 바이러스 부하와 엄격하게 상관관계가 있을 때 자극된다.
분자 신경 태그 Neurovita를 관통 하는 구획 세포의 한계에 추가 된 후 혈액 뇌 장벽을 교차 하 고 인간의 신경 세포를 대상으로 할 수 있습니다. 세포 관통 분자 신경 태그 델타 neurovita 내 피 세포 장벽을 교차, 하지만 덜 효율적으로 인간의 뉴런을 대상으로. 작은 중간 구획에 추가 된 후, 세포 관통 분자 Neuro-Tag Neurovita 혈액 뇌 장벽을 교차 하 고 인간의 신경 세포의 축 하를 재생할 수 있습니다., 상처 후.
신경타구 신경비타 델타의 비활성 형태인 신경꼬리를 관통하는 세포와는 대조적입니다. 축 하 스크래치 세포 침투 분자 신경 태그 Neurovita 후 적용 하는 경우 상처받은 뉴런의 신경 보호 및 x 구역 재생을 트리거합니다. 엄격하게 관행의 좋은 이익을 위해.
I 세포 구절을 과도하게 사용하지 마십시오. 중간 및 영역의 일부 유사성을 유지하고 마이코 플라즈마의 부재를 확인하려고합니다. 미니 뇌와 약물 사이의 상호 작용은 관심의 미생물이 화학화 성적 증명서에 의해 더 연구 될 수있다 또는 기술이라고 고전적인 생물학.
